不同儲(chǔ)存時(shí)間血液制備洗滌紅細(xì)胞效果分析

黃春柳

（惠州市中心血站，廣東 惠州 516003）

臨床使用的紅細(xì)胞制品中，較常用的是洗滌紅細(xì)胞，即使用等滲溶液洗滌懸浮紅細(xì)胞或全血，經(jīng)過(guò)3～6次洗滌，將部分非紅細(xì)胞及大部分血漿成分有效去除后制備的血液制品。洗滌紅細(xì)胞主要用于腎功能不全、血漿蛋白過(guò)敏以及有非溶血性發(fā)熱反應(yīng)患者的輸血治療，所以洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量會(huì)對(duì)臨床用血安全造成嚴(yán)重影響[1]。有研究證實(shí)，紅細(xì)胞離體后，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的不斷延長(zhǎng)，會(huì)出現(xiàn)一定的儲(chǔ)存損傷[2]，但目前《全血及成分血質(zhì)量要求》[3]中，僅對(duì)用于制備洗滌紅細(xì)胞的全血保存期做出明確規(guī)定，對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞的血液儲(chǔ)存時(shí)間沒(méi)有要求。基于此，本研究就血液儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)洗滌紅細(xì)胞制備效果造成的影響做如下分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究所用血液樣本均選自2018年1—11月惠州市中心血站采用ACD-B方保養(yǎng)液采集的全血制備的400 mL懸浮紅細(xì)胞血液樣本，并依據(jù)保存時(shí)間進(jìn)行分組。將保存時(shí)間＜7 d的樣本設(shè)為甲組，7～14 d的設(shè)為乙組，15～21 d的設(shè)為丙組，在每組樣本中各隨機(jī)選取35例。懸浮紅細(xì)胞袋無(wú)破損、滲流，血液外觀無(wú)異常，且均在有效期內(nèi)。

1.2 方法

研究所用的材料與儀器：一次性使用塑料血袋（北京安通醫(yī)療器械有限公司），四聯(lián)袋0.9%氯化鈉溶液（蘭州偉慈制藥有限責(zé)任公司），血漿游離血紅蛋白試劑盒、腦脊液與尿蛋白測(cè)定試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供。

iChem-530全自動(dòng)生化分析儀（深圳市庫(kù)貝爾生物科技有限公司）、GF45全自動(dòng)血液成分分離機(jī)（遼陽(yáng)友聯(lián)制藥機(jī)械有限公司）、FA2204B分析天平（鄭州萬(wàn)博儀器設(shè)備有限公司）、DT5-6離心機(jī)（北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司）、HH-S3三用恒溫水浴箱（上海梅香儀器有限公司）、LBY-BX激光衍射紅細(xì)胞變形儀（北京普利生儀器有限公司）。

洗滌紅細(xì)胞制備：將洗滌溶液聯(lián)袋分別標(biāo)記為1、2、3、4號(hào)，將1、2號(hào)溶液擠進(jìn)3、4號(hào)袋中，排空1、2號(hào)袋備用，并使用無(wú)菌接合機(jī)將洗滌溶液聯(lián)袋與待洗滌紅細(xì)胞懸液袋相連，將100 mL洗滌溶液移至紅細(xì)胞袋內(nèi)，夾閉導(dǎo)管，搖勻后，以3 500 r/min的速度離心5 min，之后置分漿夾內(nèi)，提取上清液后移至空袋，再次將150 mL洗滌溶液加入紅細(xì)胞袋中，使其與紅細(xì)胞組織充分融合，夾閉導(dǎo)管。經(jīng)過(guò)3次離心、洗滌后，加入適量0.9%氯化鈉溶液，充分搖勻，經(jīng)熱合斷離后裝入專用配血管，留樣檢測(cè)。每組樣本均在洗滌1 h后，對(duì)其紅細(xì)胞回收率，白細(xì)胞及血漿蛋白清除率，洗滌紅細(xì)胞容量，血紅蛋白、上清蛋白質(zhì)含量，溶血率，洗滌前后紅細(xì)胞變形指數(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

血紅蛋白與白細(xì)胞比容由全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行檢測(cè)，與洗滌后血液重量進(jìn)行對(duì)比，計(jì)算血容量；洗滌紅細(xì)胞容量=（洗滌后重量-空袋重量）/血液比重；紅細(xì)胞回收率=洗滌后紅細(xì)胞濃度/洗滌前紅細(xì)胞濃度×100%；血漿蛋白清除率=（{1-血細(xì)胞比容）×洗滌前血漿蛋白含量}×100%；白細(xì)胞清除率=（{1-血細(xì)胞比容）×洗滌前白細(xì)胞含量}×100%；溶血率=（{1-血細(xì)胞比容）×血漿}/總血紅蛋白濃度×100%；上清蛋白質(zhì)含量=上清蛋白質(zhì)濃度×容量×10-5；血紅蛋白含量=血紅蛋白濃度（g/L）×容量×103。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 3組洗滌紅細(xì)胞回收率、溶血率、血漿蛋白及白細(xì)胞清除率比較

3組洗滌紅細(xì)胞回收率、血漿蛋白清除率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與丙組相比，甲、乙組白細(xì)胞清除率較高、溶血率較低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 3組洗滌紅細(xì)胞回收率、溶血率、血漿蛋白及白細(xì)胞清除率比較（±s，%）

表1 3組洗滌紅細(xì)胞回收率、溶血率、血漿蛋白及白細(xì)胞清除率比較（±s，%）

組別 血漿蛋白清除率99.12±0.53 99.08±0.87 99.01±0.46 0.261 0.771甲組乙組丙組F值P值35 35 35 n 紅細(xì)胞回收率83.06±3.12 82.97±5.26 84.11±4.73 0.706 0.496白細(xì)胞清除率89.41±2.87 88.02±3.46 86.54±3.12 7.223 0.001溶血率0.11±0.05 0.12±0.07 0.18±0.10 8.649 0.001

2.2 3組洗滌紅細(xì)胞容量、血紅蛋白及上清蛋白質(zhì)含量比較

比較3組洗滌紅細(xì)胞容量、血紅蛋白及上清蛋白質(zhì)含量，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 3組洗滌紅細(xì)胞容量、血紅蛋白及上清蛋白質(zhì)含量比較（±s）

表2 3組洗滌紅細(xì)胞容量、血紅蛋白及上清蛋白質(zhì)含量比較（±s）

組別 洗滌紅細(xì)胞容量（mL）249.83±8.32 248.72±9.05 248.91±8.14 0.170 0.844 n甲組乙組丙組F值P值35 35 35血紅蛋白含量（g）49.04±7.87 49.00±7.96 48.54±7.53 0.045 0.956上清蛋白質(zhì)含量（g）0.25±0.17 0.27±0.16 0.33±0.15 2.364 0.099

2.3 3組洗滌前后紅細(xì)胞變形指數(shù)比較

甲、乙組洗滌后紅細(xì)胞變形指數(shù)與洗滌前相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；丙組洗滌后紅細(xì)胞變形指數(shù)低于洗滌前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；3組洗滌前紅細(xì)胞變形指數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而洗滌后紅細(xì)胞變形指數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 3組洗滌前后紅細(xì)胞變形指數(shù)比較（±s）

表3 3組洗滌前后紅細(xì)胞變形指數(shù)比較（±s）

時(shí)間n F值P值洗滌前洗滌后35 35 2.100 19.091 0.128 0.001 t值P值甲組0.42±0.03 0.41±0.02 1.641 0.105乙組0.40±0.04 0.39±0.03 1.183 0.241丙組0.41±0.05 0.37±0.03 4.058 0.001

3 討論

輸血是臨床經(jīng)常使用的治療方案，而洗滌紅細(xì)胞是常用的紅細(xì)胞制品，在治療因血漿蛋白、非溶血性發(fā)熱反應(yīng)引起的過(guò)敏反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[4]。使用0.9%氯化鈉溶液洗滌懸浮紅細(xì)胞，可清除大部分白細(xì)胞、血小板以及血漿成分，應(yīng)用于有特殊輸血要求的患者，避免出現(xiàn)過(guò)敏、非溶血性高熱等，保障臨床輸血安全。新國(guó)標(biāo)對(duì)成品洗滌紅細(xì)胞的上清蛋白質(zhì)及血紅蛋白含量做出明確規(guī)定，并增加了溶血率低于0.8%的要求，但沒(méi)有規(guī)定血液儲(chǔ)存時(shí)間。有研究證實(shí)，用于制備洗滌紅細(xì)胞的血液在保存過(guò)程中，受多因素影響會(huì)使紅細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的保存受損[5-6]，并且產(chǎn)生潛在有害物質(zhì)，對(duì)血液質(zhì)量造成影響，進(jìn)而給臨床用血安全帶來(lái)隱患[7]。

3.1 儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)洗滌紅細(xì)胞制備質(zhì)量的影響

本研究結(jié)果顯示，甲、乙組白細(xì)胞清除率高于丙組，溶血率低于丙組（P＜0.05），而3組血漿蛋白清除率、洗滌紅細(xì)胞回收率、洗滌紅細(xì)胞容量、血紅蛋白及上清蛋白質(zhì)含量無(wú)明顯差異（P＞0.05）。由此表明，原料血儲(chǔ)存時(shí)間越長(zhǎng)，制備的洗滌紅細(xì)胞溶血率越高，白細(xì)胞清除率越低。分析原因可能是紅細(xì)胞脆性會(huì)隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，在制備過(guò)程中，因機(jī)械碰撞而遭到破壞，并且紅細(xì)胞滲透壓在去除保養(yǎng)液以及原血漿后，也容易發(fā)生改變，進(jìn)而出現(xiàn)溶血現(xiàn)象[8]。血液在儲(chǔ)存過(guò)程中，紅細(xì)胞不可避免地會(huì)出現(xiàn)儲(chǔ)存損傷，產(chǎn)生棘形紅細(xì)胞，使紅細(xì)胞囊泡化，壽命相應(yīng)縮短，影響其運(yùn)輸與釋放氧的能力，影響制備質(zhì)量[9]。相關(guān)研究表明，儲(chǔ)存時(shí)間在10 d內(nèi)的紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整，且生理功能正常，細(xì)胞膜承受離心壓力的能力較強(qiáng)，不易在離心過(guò)程中受到損傷。為了保證洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量，應(yīng)使用14 d的庫(kù)存血制備洗滌紅細(xì)胞，同時(shí)在制備過(guò)程中，嚴(yán)格按照要求操作，重視操作的規(guī)范性，保證制備的洗滌紅細(xì)胞與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)相符。

3.2 儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)洗滌紅細(xì)胞變形指數(shù)的影響

本研究結(jié)果顯示，甲、乙組洗滌前紅細(xì)胞變形指數(shù)與洗滌后相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05），丙組洗滌后紅細(xì)胞變形指數(shù)低于洗滌前（P＜0.05）；3組洗滌前紅細(xì)胞變形指數(shù)無(wú)顯著性差異（P＞0.05），而洗滌后紅細(xì)胞變形指數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明紅細(xì)胞變形能力會(huì)隨原料血儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低?？赡苁且?yàn)榧t細(xì)胞具有變形性，庫(kù)存血的流變特征會(huì)因儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)而受到影響，尤其是紅細(xì)胞的聚集性以及變形性，所以導(dǎo)致紅細(xì)胞變形性降低，進(jìn)而影響其運(yùn)氧能力，降低洗滌紅細(xì)胞制備質(zhì)量。而紅細(xì)胞變形性的降低，也會(huì)導(dǎo)致洗滌紅細(xì)胞在經(jīng)過(guò)毛細(xì)血管時(shí)遭到破壞，降低輸血治療效果，甚至對(duì)患者的凝血機(jī)能造成影響[10]。

紅細(xì)胞變形程度對(duì)紅細(xì)胞制品質(zhì)量產(chǎn)生影響，可能與血液儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)、制備過(guò)程中紅細(xì)胞受損有關(guān)。為了保障臨床治療效果，應(yīng)保證制備洗滌紅細(xì)胞的庫(kù)存血儲(chǔ)存時(shí)間在14 d內(nèi)。

綜上所述，原料血儲(chǔ)存時(shí)間可影響洗滌紅細(xì)胞制備質(zhì)量，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，溶血率升高，紅細(xì)胞變形能力降低，建議使用儲(chǔ)存時(shí)間在14 d內(nèi)的血液制備洗滌紅細(xì)胞，以保障臨床輸血安全與治療效果。