• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    姜黃素調(diào)節(jié)Na/K-ATPase/Src信號通路保護LLC-PK1細胞缺氧復(fù)氧損傷

    2021-08-31 03:30:00翟兵中張麗婧陳建國胡志航胡文力樓敏涵曲雪峰
    食品科學(xué) 2021年15期
    關(guān)鍵詞:復(fù)氧姜黃構(gòu)型

    翟兵中,張麗婧,劉 臻,陳建國,胡志航,梅 松,胡文力,樓敏涵,王 茵,曲雪峰*

    (杭州醫(yī)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院,浙江 杭州 310013)

    缺血性心臟病是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致死亡的重要病因之一[1]。在圍手術(shù)期,心肌缺血和心肌梗死等心臟病并發(fā)癥是導(dǎo)致患者術(shù)后發(fā)病和死亡的主要原因。心臟早期再灌注是限制梗死面積的有效方法,但再灌注本身能夠誘導(dǎo)心肌凋亡,即心肌缺血再灌注損傷[2]。缺血再灌注損傷的發(fā)病機制尚未完全闡明,之前的研究發(fā)現(xiàn),在缺血再灌注損傷發(fā)生的最初幾分鐘內(nèi),會產(chǎn)生一系列的氧化應(yīng)激反應(yīng),通過不同的機制最終導(dǎo)致心肌損傷和心肌細胞死亡。心肌缺血再灌注損傷在世界范圍內(nèi)都是一個有待解決的難題,目前尚無有效的治療方法[3]。

    Na/K-ATPase是一種跨膜蛋白,通過偶聯(lián)腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)水解運輸鈉離子和鉀離子進出細胞,從而建立并維持細胞膜內(nèi)外的離子濃度梯度。Na/K-ATPase除了發(fā)揮離子通道作用,以維持細胞內(nèi)外液滲透壓穩(wěn)定外,還具有信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能[4-7]。 Na/K-ATPase信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)具有放大活性氧(reactive oxygen species,ROS)產(chǎn)生的作用。強心苷類物質(zhì)與Na/K-ATPase結(jié)合[8-9]后,可以使Na/K-ATPase由E1構(gòu)型轉(zhuǎn)變?yōu)镋2構(gòu)型,從而增加類固醇受體輔助活化因子(steroid receptor coactivator,Src)活性,并激活Src下游信號通路細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,Erk)1/2,產(chǎn)生大量ROS[10-11]。Cui Χiaoyu等[7]的研究證明,ROS可以使Na/K-ATPase轉(zhuǎn)變?yōu)镋2構(gòu)型,激活信號通路中的Src和Erk1/2,并觸發(fā)信號級聯(lián)產(chǎn)生大量ROS,增加的ROS進一步激活Na/K-ATPase/Src信號通路,形成Na/K-ATPase/Src/Erk1/2/ROS放大環(huán)路。這一過程可能與缺血再灌注等一些疾病的發(fā)生有著密切聯(lián)系。

    姜黃素是從植物姜黃的根莖中分離出來的一種重要的多酚類生物活性成分,具有抗炎、抗細胞凋亡、抗細胞增殖、抗氧化等作用。目前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn),姜黃素對心肌缺血再灌注損傷、心肌梗死、高血壓、糖尿病心肌病等具有保護作用[12],但是在以往研究中,關(guān)于姜黃素對缺血再灌注損傷的保護作用機理主要集中于姜黃素的抗凋亡和抗炎作用,對其他作用機制尚不明確。本研究在細胞水平通過細胞缺氧復(fù)氧模型損傷模擬細胞氧化應(yīng)激損傷,利用富含Na/K-ATPase的豬腎上皮細胞LLCPK1細胞探索Na/K-ATPase/Src信號通路在缺氧復(fù)氧損傷中的作用,探究姜黃素減輕細胞缺氧復(fù)氧損傷的可能作用機制。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    豬腎上皮LLC-PK1細胞由南京凱基生物發(fā)展有限 公司提供。

    Na/K-ATPase、ATP、姜黃素、烏苯苷、上樣緩沖液 美國Sigma公司;胎牛血清 加拿大維森特公司;胰酶-乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA) 美國Gibco公司;磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS) 杭州 吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司;BIOMOL?Green Reagent磷酸鹽顯色試劑盒 日本關(guān)東化學(xué)株式會社;Erk抗體、p-Erk抗體 美國Cell Signaling公司; Src抗體 美國Santa公司;p-Src抗體 美國Invitrogen公司;甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH) 杭州賢至生物科技有限公司;熒光二抗 美國Abcam公司; 乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力、噻唑藍(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒 江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司;M199培養(yǎng)液 美國Gibco公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    SW-CJ-1 FD型單人單面凈化工作臺 蘇州凈化設(shè)備有限公司;BB150 CO2培養(yǎng)箱 美國Thermo Scientific 公司;5417R低溫高速離心機 德國Eppendorf公司;DK-S22型電熱恒溫水浴鍋 上海精宏實驗設(shè)備有限公司;Spectra Max M4多功能酶標(biāo)儀 美國Molecular Devices公司;雙色紅外激光成像系統(tǒng)掃描儀 美國 Li-Cor公司。

    1.3 方法

    1.3.1 Na/K-ATPase活力測定

    用比色法測定Na/K-ATPase活力。向EP管中加入20 mmol/L Tris-HCl(pH 7.2)、1 mmol/L MgCl2、100 mmol/L NaCl、20 mmol/L KCl、1 mmol/L EDTATris各50 μL混勻,再加入不同濃度(0、0.01、0.1、1、10 μmol/L)姜黃素50 μL,以加等體積1 mmol/L烏本苷作為陰性對照,每管加入Na/K-ATPase 2 μg,于37 ℃孵育10 min后,加入50 μL 20 mmol/L ATP開始反應(yīng)。37 ℃再次孵育10 min后加入1 mL預(yù)冷8%三氯乙酸溶液終止 反應(yīng),并將其置于冰上,反應(yīng)生成的磷酸用磷酸鹽顯色試劑盒測定。用酶標(biāo)儀于620 nm波長處測定OD值,不同組別磷酸生成量利用各組測得OD值根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出。以每小時每毫克Na/K-ATPase分解ATP產(chǎn)生1 μmol無機磷的量為一個酶活力單位。Na/K-ATPase活力按式(1)計算。

    式中:1/6為反應(yīng)時間/h;0.002為Na/K-ATPase質(zhì)量/mg。

    1.3.2 Na/K-ATPase構(gòu)型分析

    向EP管中加入20 mmol/L Tris-HCl(pH 7.2)、1 mmol/L MgCl2、NaCl/KCl混合液(含100 mmol/L NaCl、20 mmol/L KCl)、1 mmol/L EDTA-Tris各50 μL混勻,每管加入2 μg Na/K-ATPase、10 μmol/L姜黃素50 μL、不同濃度(0.01、0.02、0.04、0.1、0.3、1、10 μmol/L)Na/K-ATPase活力抑制劑釩酸鈉50 μL,作為實驗組;以加入50 μL 1 mmol/L烏本苷為陰性對照組,僅添加釩酸鈉、不添加姜黃素為空白組。然后,加入50 μL 20 mmol/L ATP溶液于37 ℃反應(yīng)10 min,然后加入質(zhì)量分數(shù)8%三氯乙酸終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀于620 nm波長處測定OD值。烏本苷敏感Na/K-ATPase活力按式(2)計算,根據(jù)其分析姜黃素對Na/K-ATPase構(gòu)型的影響。

    1.3.3 LLC-PK1細胞培養(yǎng)和缺氧復(fù)氧損傷處理

    將LLC-PK1細胞用含10%胎牛血清和雙抗(青霉素和鏈霉素各100 U/mL)的M199培養(yǎng)液于37 ℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待細胞貼壁生長至70%~80%融合進行實驗[13]。細胞經(jīng)無血清M199培養(yǎng)基饑餓過夜,培養(yǎng)12 h后LLC-PK1細胞經(jīng)姜黃素+烏本苷或姜黃素預(yù)保護1 h后缺氧1 h復(fù)氧3 h不同處理。缺氧復(fù)氧模型為細胞置于5% CO2、95% N2的濕化環(huán)境中1 h,然后更換為含10%胎牛血清的M199培養(yǎng)基,并置于5% CO2、95%空氣的環(huán)境中復(fù)氧3 h。

    1.3.4 MTT法測定H2O2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激LLC-PK1細胞活力

    利用MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒測定細胞活力。LLC-PK1細胞以1×104個/孔接種于96 孔板中,置于37 ℃、5% CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后,經(jīng)10 μmol/L 姜黃素預(yù)保護1 h,然后分別加入50、100、200、400、500 μmol/L H2O2作用24 h后,每孔內(nèi)加入15 μL 5 mg/mL的MTT溶液,37 ℃處理4 h。棄去培養(yǎng)液,每孔加200 μL二甲基亞砜,將96 孔板置于搖床上室溫慢搖10 min,使形成的深紫色晶體完全溶解,用酶標(biāo)儀于490 nm波長處測定OD值。以加姜黃素、無細胞的完全培養(yǎng)基為空白組,不加H2O2其余處理相同為陰性對照組,每組6 個復(fù)孔。細胞存活率按式(3)計算。

    1.3.5 LDH活力測定

    LLC-PK1細胞以1×104個/孔接種于96 孔板中,置于37 ℃、5% CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后,經(jīng)10 μmol/L姜黃素預(yù)保護1 h后,缺氧1 h、復(fù)氧3 h處理,5 000 r/min離心10 min,收集細胞上清液。以未經(jīng)缺氧復(fù)氧處理的細胞為對照組,按試劑盒檢測上清液中LDH活力,以每升上清液于37 ℃與反應(yīng)基質(zhì)作用15 min反應(yīng)體系中產(chǎn)生 1 μmol丙酮酸為一個酶活力單位,單位為U/L。

    1.3.6 蛋白免疫印記分析

    細胞于10 μmol/L姜黃素溶液中分別暴露15、30 min和60 min。棄去細胞培養(yǎng)液,用PBS沖洗2 次,靜置2 min,吸棄殘留液體,重復(fù)吸取2 次,盡可能將液體全部吸出(全程冰上操作)。配制細胞裂解液(V(RIPA裂解液)∶m(100×磷酸酶抑制劑)∶m(100×蛋白酶抑制劑)=100∶1∶1)。每瓶細胞加入300 μL上述細胞裂解液,用細胞刮刀將培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞充分刮下至1.5 mL EP管中,用細胞超聲破碎儀超聲10 s,提取細胞中總蛋白。4 ℃、13 500 r/min離心15 min,取上清液用于后續(xù)實驗。利用BCA法測定蛋白濃度。上樣量80 μg,計算體積后將各組用RIPA裂解液補至相同體積,加入5×十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)上樣緩沖液,將處理好的蛋白樣品100 ℃加熱5 min使蛋白變性。蛋白經(jīng)10% SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,再轉(zhuǎn)移至硝化纖維膜上,5%脫脂牛奶封閉,加入Src、p-Src、Erk、p-Erk以及GAPDH等抗體作為一抗,4 ℃孵育過夜,含0.05% Tween-20的PBS清洗3 次,每次10 min,加入二抗(兔源性多克隆1∶10 000),室溫避光孵育1 h。掃描儀掃描薄膜,用Odyssey 4.0軟件分析條帶灰度,以GAPDH作內(nèi)參,計算各蛋白相對表達水平。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    采用SPSS 26.0軟件處理實驗數(shù)據(jù),結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組間比較用Student’s檢驗,多組間比較用單因素方差分析,P<0.05認為有顯著差異。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 姜黃素對Na/K-ATPase活力的影響

    已有研究表明姜黃素可調(diào)節(jié)跨膜P型ATPase活力[7]。 由圖1可知,與對照組(0 μmol/L)相比,0.1、1、10 μmol/L姜黃素可以顯著降低Na/K-ATPase活力 (P<0.05、P<0.01、P<0.001),且呈劑量依賴性。姜黃素濃度為10 μmol/L時,Na/K-ATPase活力降低至對照組的69%。

    圖1 姜黃素對Na/K-ATPase活力的影響Fig.1 Effect of curcumin concentration on Na/K-ATPase activity

    2.2 姜黃素對Na/K-ATPase構(gòu)型的影響

    研究表明,10 μmol/L姜黃素能夠有效抑制馬來酸誘導(dǎo)的LLC-PK1細胞氧化應(yīng)激損傷[14],同時也可以通過調(diào)控Notch信號通路減輕心肌細胞缺氧復(fù)氧導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷[15]。因此,本實驗選擇10 μmol/L的姜黃素進行后續(xù)研究。Na/K-ATPase存在E1和E2兩種構(gòu)型,可以通過E1和E2構(gòu)型間的轉(zhuǎn)換來調(diào)節(jié)Na/K-ATPase/Src/Erk1/2信號通路。釩酸鹽不能與E1構(gòu)型結(jié)合,但能與E2構(gòu)型結(jié)合,釩酸鈉與Na/K-ATPase結(jié)合使其穩(wěn)定在E2狀態(tài)并由此抑制Na/K-ATPase活性。由圖2可知,釩酸鈉呈劑量依賴性降低Na/K-ATPase活力。而釩酸鈉與姜黃素(10 μmol/L)共同處理可部分恢復(fù)Na/K-ATPase活力,表明Na/K-ATPase處于E2構(gòu)型過度累積的狀態(tài)時,姜黃素可使Na/K-ATPase從E2構(gòu)型向E1構(gòu)型轉(zhuǎn)換,因此,姜黃素具有一定的雙向調(diào)節(jié)功能。

    圖2 Na/K-ATPase抑制劑存在時姜黃素對Na/K-ATPase活力的影響Fig.2 Effect of curcumin concentration on Na/K-ATPase activity in the presence of Na/K-ATPase inhibitors

    2.3 姜黃素對Na/K-ATPase/Src/Erk1/2信號通路的調(diào)節(jié)作用

    LLC-PK1細胞中Na/K-ATPase表達豐富,常被用于Na/K-ATPase/Src/Erk1/2信號通路研究。通過測定Src(Y418位點)和Erk1/2磷酸化水平,分析LLC-PK1細胞暴露于姜黃素后Na/K-ATPase/Src/Erk1/2信號通路中Src和Erk1/2活性變化,以未處理的正常細胞為對照組。由圖3A、B可知,與未經(jīng)姜黃素預(yù)處理的對照組(0 min)相比,LLC-PK1細胞于10 μmol/L姜黃素溶液中暴露15、30 min和60 min后,Src和Erk1/2磷酸化水平均顯著升高(P<0.05),且沒有明顯的時間效應(yīng)。有研究表明,烏本苷可誘導(dǎo)Na/K-ATPase/Src/Erk1/2信號通路激活[7]。由圖3C、D可知,姜黃素顯著抑制了烏本苷誘導(dǎo)的Src和Erk1/2磷酸化水平升高(P<0.05)。以上結(jié)果表明,姜黃素可能對Na/K-ATPase/Src/Erk1/2信號通路可能具有雙向調(diào)節(jié)作用,即姜黃素單獨存在時可激活Na/K-ATPase/Src/Erk1/2信號通路,而該通路被過度激活時,姜黃素抑制Na/K-ATPase/Src/Erk1/2信號通路活化。

    圖3 姜黃素對Na/K-ATPase/Src/Erk1/2信號通路中Src和 Erk1/2磷酸化水平的調(diào)節(jié)作用Fig.3 Curcumin regulated the phosphorylation of Src and Erk1/2 proteins in the Na/K-ATPase/Src/Erk1/2 signaling pathway

    2.4 姜黃素對H2O2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激LLC-PK1細胞存活率的影響

    在細胞缺氧復(fù)氧時將產(chǎn)生大量ROS,誘導(dǎo)氧化應(yīng)激損傷,本實驗利用H2O2模擬氧化應(yīng)激損傷。由圖4可知,不同濃度H2O2作用LLC-PK1細胞24 h后,H2O2以劑量依賴的方式降低細胞活力,而經(jīng)10 μmol/L姜黃素預(yù)保護1 h,可明顯提高H2O2誘導(dǎo)的細胞存活率降低,表明姜黃素對H2O2誘導(dǎo)產(chǎn)生的氧化應(yīng)激損傷具有保護作用。

    圖4 姜黃素對H2O2誘導(dǎo)氧化應(yīng)激LLC-PK1細胞存活率的影響Fig.4 Effect of curcumin on cell viability of H2O2-induced LLC-PK1 cells

    2.5 姜黃素對LLC-PK1細胞缺氧復(fù)氧損傷的保護作用

    LDH是存在于動植物細胞質(zhì)中的氧化還原酶,其在細胞中穩(wěn)定表達,是機體能量代謝中一種重要的酶。當(dāng)機體組織器官病變時,其組織內(nèi)源性LDH活力發(fā)生改變,因此,可作為細胞毒性指標(biāo),常被用于評價組織和細胞的受損情況。由圖5可知,與對照組正常細胞相比,缺氧復(fù)氧組LLC-PK1細胞釋放LDH的量明顯增多,細胞上清液中LDH活力高度顯著增大(P<0.001),而姜黃素預(yù)保護組缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的LDH釋放量增多明顯被抑制,與缺氧復(fù)氧組相比差異極顯著(P<0.01)。表明姜黃素能夠保護缺氧復(fù)氧處理導(dǎo)致的細胞受損。

    圖5 姜黃素對缺氧復(fù)氧損傷LLC-PK1細胞中LDH活力的影響Fig.5 Effect of curcumin on extracellular LDH activity of LLC-PK1 cells subjected to H/R

    2.6 姜黃素保護LLC-PK1細胞氧化應(yīng)激損傷的可能機制

    研究發(fā)現(xiàn),ROS可以激活Na/K-ATPase/Src/Erk信號通路,并進一步促進ROS產(chǎn)生,擴大氧化損傷[16-17]。在細胞缺氧復(fù)氧過程中會產(chǎn)生大量的ROS(包括H2O2)。Cui Χiaoyu等[7]研究發(fā)現(xiàn)H2O2具有類似烏苯苷的作用,通過結(jié)合Na/K-ATPase E2構(gòu)型抑制Na/K-ATPase活性并激活Src蛋白。由圖6A可知,與對照組(未經(jīng)缺氧復(fù)氧處理的細胞)相比,在細胞缺氧復(fù)氧過程中,Src蛋白磷酸化水平顯著增加,而姜黃素預(yù)保護能夠顯著降低缺氧復(fù)氧導(dǎo)致的Src磷酸化水平升高(P<0.05)。由圖6B可知,與對照組相比,缺氧復(fù)氧過程使磷酸化Erk1/2蛋白表達水平顯著增加,而姜黃素預(yù)處理抑制了缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的Erk磷酸化水平升高(P<0.05)。以上結(jié)果表明,姜黃素可能是通過影響Na/K-ATPase/Src/Erk信號通路的活化保護LLC-PK1細胞免受缺氧復(fù)氧損傷。

    圖6 姜黃素對缺氧復(fù)氧損傷LLC-PK1細胞中Src(A)、 Erk1/2磷酸化(B)的影響Fig.6 Effect of curcumin on phosphorylation levels of Src (A) and Erk1/2 (B) in LLC-PK1 cells subjected to hypoxia/reoxygenation

    3 討 論

    臨床和營養(yǎng)流行病學(xué)研究表明,長期攝入多酚類物質(zhì)姜黃素可以預(yù)防心血管疾病并降低引發(fā)心血管疾病的病理因素[18]。自發(fā)性高血壓大鼠口服姜黃素12 周 能明顯降低心臟左室中結(jié)締組織生長因子、III型膠原蛋白、纖連蛋白的表達,并上調(diào)過氧化物酶體增殖物激活受體γ活性,從而緩解高血壓引起的心肌纖維化[19]。心肌梗死過程中產(chǎn)生大量的氧自由基,誘導(dǎo)心肌細胞凋亡和炎癥反應(yīng),損傷心臟組織[20-21],姜黃素的抗氧化功效可以減少體內(nèi)產(chǎn)生的氧自由基,產(chǎn)生抗凋亡作用,抵抗心肌梗死誘導(dǎo)的心臟功能失調(diào)[22]。對豬冠狀動脈血管內(nèi)皮功能障礙的研究顯示,姜黃素可以阻礙同型半胱氨酸誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴血管舒張功能障礙,降低內(nèi)皮型一氧化氮合酶水平,并減少超氧陰離子自由基的產(chǎn)生,從而緩解血管內(nèi)皮功能失調(diào)[23]。這些功效表明,以姜黃素作為日常膳食的主要成分有助于預(yù)防心血管疾病的發(fā)生。

    姜黃素的心臟保護作用可能在于其可以直接影響多種酶。已有研究表明,姜黃素可以調(diào)節(jié)P型ATPase活性。姜黃素通過抑制肌漿網(wǎng)上Ca2+-ATPase可以緩解膽囊纖維化[24-25]。Na/K-ATPase是維持心肌細胞內(nèi)外離子濃度和心臟功能的重要酶[26],研究發(fā)現(xiàn)姜黃素可以與Na/K-ATPase發(fā)生直接的相互作用,因此姜黃素可能作為Na/K-ATPase的重要受體之一而發(fā)揮作用。本研究發(fā)現(xiàn)在Na/K-ATPase活性篩選反應(yīng)體系中,姜黃素能明顯抑制Na/K-ATPase活性,且表現(xiàn)出劑量依賴性。而當(dāng)有Na/K-ATPase活性抑制劑釩酸鈉存在時,姜黃素能促使Na/K-ATPase由E2構(gòu)型向E1構(gòu)型轉(zhuǎn)變。表明姜黃素對Na/K-ATPase活性具有雙向調(diào)節(jié)作用,是Na/K-ATPase的不完全促進劑。

    心臟缺氧復(fù)氧過程中會產(chǎn)生大量ROS,其中的H2O2具有與烏本苷類似的作用,可抑制Na/K-ATPase活性,激活Na/K-ATPase/Src信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,進一步作用線粒體產(chǎn)生ROS[27-29]。本研究發(fā)現(xiàn),姜黃素作為Na/K-ATPase不完全促進劑,對缺氧復(fù)氧過程導(dǎo)致的Na/K-ATPase/Src受體復(fù)合物的過度激活具有保護作用,即缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)Na/K-ATPase/Src/Erk信號通路活化,使Src和Erk1/2磷酸化水平升高,而在該受體復(fù)合物被過度激活時,姜黃素則可以抑制其激活,從而發(fā)揮保護細胞損傷的作用[30]。

    因此,本研究通過分析姜黃素對缺血再灌注引起的細胞損傷的保護作用以及姜黃素對細胞中Na/K-ATPase/Src信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響,闡明姜黃素作為不完全促進劑,通過調(diào)節(jié)Na/K-ATPase/Src/受體復(fù)合物活性保護細胞免受損傷。為評估姜黃素在治療心血管疾病相關(guān)的營養(yǎng)膳食中的潛在效用、開發(fā)姜黃粗提物及其他姜黃中的有效化合物成分作為營養(yǎng)膳食提供了依據(jù)。

    猜你喜歡
    復(fù)氧姜黃構(gòu)型
    活血解毒方對缺氧/復(fù)氧所致心肌細胞凋亡的影響
    分子和離子立體構(gòu)型的判定
    Curcumin in The Treatment of in Animals Myocardial ischemia reperfusion: A Systematic review and Meta-analysis
    Wnt/β-catenin通路在腎衰康灌腸液抑制HK-2細胞缺氧/復(fù)氧損傷的作用
    中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:11:46
    姜黃提取物二氧化硅固體分散體的制備與表征
    中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:19:43
    姜黃素對人胃癌AGS細胞自噬流的作用
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:37
    航天器受迫繞飛構(gòu)型設(shè)計與控制
    靈芝多糖肽對培養(yǎng)乳大鼠心肌細胞缺氧復(fù)氧損傷的保護作用
    姜黃素與p38MAPK的研究進展
    遙感衛(wèi)星平臺與載荷一體化構(gòu)型
    欧美另类一区| 美女内射精品一级片tv| 精品人妻熟女av久视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产成人精品福利久久| 久久久亚洲精品成人影院| 99久久中文字幕三级久久日本| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久久性生活片| 99久久精品一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 国产极品天堂在线| 国产一区亚洲一区在线观看| av卡一久久| 久久精品夜色国产| 久热久热在线精品观看| 国产在线一区二区三区精| 亚洲精品国产av蜜桃| 51国产日韩欧美| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产人妻一区二区三区在| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲av成人精品一区久久| 中文字幕av在线有码专区| 免费大片黄手机在线观看| .国产精品久久| 日韩成人伦理影院| kizo精华| 欧美日本视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 在线天堂最新版资源| 久久久亚洲精品成人影院| 美女大奶头视频| 日韩伦理黄色片| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲av男天堂| 亚洲国产av新网站| 免费电影在线观看免费观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 日韩一区二区三区影片| 久久久久久久久久成人| 91av网一区二区| 听说在线观看完整版免费高清| 精品欧美国产一区二区三| 高清在线视频一区二区三区| 黄色配什么色好看| 国产一区二区在线观看日韩| 国产精品精品国产色婷婷| 五月天丁香电影| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 久久久久国产网址| 欧美bdsm另类| 好男人视频免费观看在线| 91精品国产九色| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产精品国产三级专区第一集| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| av国产久精品久网站免费入址| 国产v大片淫在线免费观看| 人妻一区二区av| 精品人妻偷拍中文字幕| 一级二级三级毛片免费看| 在线免费十八禁| 中文字幕久久专区| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲欧洲日产国产| 国产乱来视频区| 亚洲精品一二三| 午夜日本视频在线| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产视频内射| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产真实伦视频高清在线观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 午夜激情福利司机影院| 亚洲,欧美,日韩| 久久99蜜桃精品久久| 激情 狠狠 欧美| 在线免费观看不下载黄p国产| 日韩一区二区视频免费看| av在线蜜桃| 国产成人免费观看mmmm| 久久久久久久午夜电影| 日韩电影二区| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久精品久久久久久久性| 人妻少妇偷人精品九色| 最近手机中文字幕大全| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲综合色惰| 欧美另类一区| 色播亚洲综合网| 久久精品夜色国产| 亚洲精品国产av蜜桃| 精品久久久噜噜| 午夜免费观看性视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产在线男女| 天天一区二区日本电影三级| 日本-黄色视频高清免费观看| 黄片无遮挡物在线观看| 日韩精品青青久久久久久| av播播在线观看一区| 亚洲av男天堂| 天美传媒精品一区二区| 久久99热6这里只有精品| 日日啪夜夜爽| 免费看不卡的av| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲av免费高清在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 国精品久久久久久国模美| 嫩草影院新地址| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 亚洲怡红院男人天堂| 美女黄网站色视频| 国产成人福利小说| 日本一二三区视频观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产成人精品婷婷| 性色avwww在线观看| 如何舔出高潮| 岛国毛片在线播放| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| av在线播放精品| 一级av片app| 国产免费又黄又爽又色| 在线a可以看的网站| 亚洲成人精品中文字幕电影| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产成人精品婷婷| av国产久精品久网站免费入址| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲无线观看免费| 我的女老师完整版在线观看| 韩国av在线不卡| 天天一区二区日本电影三级| 在线免费观看的www视频| 成人av在线播放网站| 尾随美女入室| 一级毛片 在线播放| 亚洲人与动物交配视频| 国产探花极品一区二区| 国产亚洲91精品色在线| 国产一级毛片在线| 成人毛片60女人毛片免费| 18禁在线播放成人免费| videos熟女内射| 国产永久视频网站| 天天躁日日操中文字幕| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲怡红院男人天堂| 在线 av 中文字幕| 成人一区二区视频在线观看| 日本黄大片高清| 国产黄片美女视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 熟女人妻精品中文字幕| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲色图av天堂| 亚洲精品成人久久久久久| 国产高清有码在线观看视频| 免费看日本二区| 日韩国内少妇激情av| 亚洲成人中文字幕在线播放| 69av精品久久久久久| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 久久久久久国产a免费观看| 麻豆乱淫一区二区| 精品熟女少妇av免费看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 中文字幕亚洲精品专区| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲国产精品成人综合色| 99热这里只有精品一区| 三级经典国产精品| 97在线视频观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 欧美日韩在线观看h| 国产免费一级a男人的天堂| 欧美日韩在线观看h| 国产爱豆传媒在线观看| 男人舔奶头视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久成人免费电影| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 国产精品爽爽va在线观看网站| 一级av片app| 亚洲欧美日韩东京热| 日韩三级伦理在线观看| 99热全是精品| 国产精品.久久久| 少妇的逼好多水| 少妇人妻精品综合一区二区| 欧美xxⅹ黑人| 一个人观看的视频www高清免费观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 精品久久久久久久末码| 国产淫片久久久久久久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 精品久久久久久久久av| 成人国产麻豆网| 波多野结衣巨乳人妻| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 身体一侧抽搐| 国产成人免费观看mmmm| 最后的刺客免费高清国语| 日本黄色片子视频| 国产在线一区二区三区精| 美女被艹到高潮喷水动态| 大陆偷拍与自拍| 日韩av在线免费看完整版不卡| 精品久久久久久久久亚洲| 一级片'在线观看视频| 国产精品久久视频播放| 男插女下体视频免费在线播放| 超碰97精品在线观看| 欧美高清性xxxxhd video| 日日啪夜夜爽| 国产色爽女视频免费观看| 看免费成人av毛片| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品一及| 在线 av 中文字幕| 日本熟妇午夜| 床上黄色一级片| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 精品久久久久久久久av| 欧美 日韩 精品 国产| 国产黄片美女视频| 超碰av人人做人人爽久久| 别揉我奶头 嗯啊视频| 网址你懂的国产日韩在线| 日韩三级伦理在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美三级亚洲精品| 国产黄片视频在线免费观看| 国产成人精品一,二区| 欧美bdsm另类| 午夜爱爱视频在线播放| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 超碰av人人做人人爽久久| 如何舔出高潮| 亚洲自拍偷在线| 嫩草影院入口| 麻豆成人av视频| 99热网站在线观看| 一级黄片播放器| 日本-黄色视频高清免费观看| 97在线视频观看| 麻豆乱淫一区二区| 日本免费在线观看一区| 欧美一区二区亚洲| 国产成人午夜福利电影在线观看| 99热网站在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日本-黄色视频高清免费观看| 综合色av麻豆| 国产淫语在线视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 午夜福利视频1000在线观看| 欧美激情国产日韩精品一区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品国产三级国产专区5o| 伦理电影大哥的女人| 国产高清国产精品国产三级 | 日韩强制内射视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 日韩一本色道免费dvd| 欧美激情在线99| 国产成人a区在线观看| 国产老妇女一区| 国产亚洲最大av| 久久久久久久大尺度免费视频| av福利片在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 中文字幕免费在线视频6| 国产午夜福利久久久久久| 青春草亚洲视频在线观看| 国产成人a区在线观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 色播亚洲综合网| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲精品影视一区二区三区av| 人妻一区二区av| 亚洲av.av天堂| 简卡轻食公司| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 91久久精品电影网| 色吧在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 三级经典国产精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 能在线免费看毛片的网站| 国产 一区 欧美 日韩| 日韩欧美 国产精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 少妇的逼水好多| 日韩制服骚丝袜av| 国产乱人偷精品视频| 中文字幕av成人在线电影| 好男人在线观看高清免费视频| 久久久久国产网址| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久久久久久久中文| 国产av不卡久久| 亚洲人成网站在线播| 国产精品综合久久久久久久免费| 午夜精品在线福利| 看十八女毛片水多多多| 国产一区亚洲一区在线观看| 51国产日韩欧美| 在线a可以看的网站| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 2018国产大陆天天弄谢| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 大话2 男鬼变身卡| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 午夜福利在线观看吧| 亚洲精品一区蜜桃| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产免费视频播放在线视频 | 日韩精品青青久久久久久| 亚洲高清免费不卡视频| 日韩国内少妇激情av| 男女国产视频网站| 久久久久网色| 精品一区二区三卡| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 久久草成人影院| 亚洲最大成人中文| 国产免费一级a男人的天堂| 真实男女啪啪啪动态图| 高清视频免费观看一区二区 | 亚洲真实伦在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 性插视频无遮挡在线免费观看| 天堂俺去俺来也www色官网 | 极品教师在线视频| 看黄色毛片网站| 亚洲精品,欧美精品| 偷拍熟女少妇极品色| 日本黄色片子视频| 黄色一级大片看看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 可以在线观看毛片的网站| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲精品成人av观看孕妇| 人体艺术视频欧美日本| 性插视频无遮挡在线免费观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久久精品94久久精品| 丝袜喷水一区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 三级毛片av免费| 成年女人看的毛片在线观看| 成人午夜高清在线视频| 国产成人一区二区在线| 欧美精品国产亚洲| 中文字幕久久专区| 亚洲美女视频黄频| 韩国高清视频一区二区三区| 国产乱人视频| 午夜福利视频1000在线观看| 在线天堂最新版资源| 国产高清有码在线观看视频| 尾随美女入室| 亚洲内射少妇av| 亚洲精品一区蜜桃| 精品人妻偷拍中文字幕| 精品欧美国产一区二区三| 色5月婷婷丁香| 偷拍熟女少妇极品色| 免费人成在线观看视频色| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美极品一区二区三区四区| 婷婷六月久久综合丁香| 男人狂女人下面高潮的视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲成人久久爱视频| 精品不卡国产一区二区三区| 国产免费视频播放在线视频 | 嫩草影院新地址| 可以在线观看毛片的网站| 久久久久久久久久黄片| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲精品视频女| 天堂俺去俺来也www色官网 | 国产一区二区亚洲精品在线观看| 看黄色毛片网站| 国产成人福利小说| 日韩电影二区| av播播在线观看一区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 欧美激情久久久久久爽电影| 人人妻人人澡欧美一区二区| av一本久久久久| 成人亚洲精品av一区二区| 老司机影院毛片| 亚洲精品色激情综合| 久久精品国产亚洲av天美| 日本色播在线视频| 亚洲人成网站在线播| 亚洲精品成人久久久久久| 国产久久久一区二区三区| 久久精品国产自在天天线| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲欧洲国产日韩| 国产色爽女视频免费观看| 99热网站在线观看| 国产色婷婷99| 亚洲国产欧美在线一区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 精品久久久久久成人av| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美+日韩+精品| 春色校园在线视频观看| 亚洲在线自拍视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美高清成人免费视频www| 五月玫瑰六月丁香| 国产久久久一区二区三区| 国产av在哪里看| 久久午夜福利片| 网址你懂的国产日韩在线| 久久人人爽人人爽人人片va| 婷婷色av中文字幕| 一个人看的www免费观看视频| 久久久久久国产a免费观看| av国产久精品久网站免费入址| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 日韩欧美精品v在线| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲成人av在线免费| 我要看日韩黄色一级片| 国产在线一区二区三区精| 最近中文字幕2019免费版| 91久久精品国产一区二区三区| 国产精品伦人一区二区| 色网站视频免费| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 成人综合一区亚洲| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 91精品一卡2卡3卡4卡| 丰满乱子伦码专区| 亚洲在线观看片| 嫩草影院精品99| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲欧洲日产国产| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲精品久久午夜乱码| 色综合色国产| 午夜老司机福利剧场| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久久久久久久大av| 久久人人爽人人片av| 夫妻性生交免费视频一级片| 高清av免费在线| 精品久久久久久成人av| 亚洲欧美精品自产自拍| 视频中文字幕在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产一区二区三区av在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久99热6这里只有精品| 日本黄大片高清| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产色爽女视频免费观看| 成年女人看的毛片在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 免费黄频网站在线观看国产| 国产黄色免费在线视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲综合色惰| 亚洲一区高清亚洲精品| 永久网站在线| 高清欧美精品videossex| 亚洲电影在线观看av| 好男人视频免费观看在线| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产不卡一卡二| 免费在线观看成人毛片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产亚洲91精品色在线| 韩国高清视频一区二区三区| 久久精品人妻少妇| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产69精品久久久久777片| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 一级av片app| 国产 亚洲一区二区三区 | 欧美极品一区二区三区四区| 精品久久久久久久久亚洲| 午夜精品一区二区三区免费看| 一级a做视频免费观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲精品亚洲一区二区| 干丝袜人妻中文字幕| 国产精品久久久久久久久免| 国产免费一级a男人的天堂| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 精品一区二区三区人妻视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 伊人久久国产一区二区| 国产爱豆传媒在线观看| 久久久精品94久久精品| 午夜免费激情av| 九草在线视频观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产片特级美女逼逼视频| 久久久a久久爽久久v久久| 日韩一本色道免费dvd| 国产av国产精品国产| 免费av观看视频| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 一级毛片我不卡| 少妇的逼水好多| 美女大奶头视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲内射少妇av| 亚洲av电影不卡..在线观看| ponron亚洲| 99久久精品国产国产毛片| 欧美人与善性xxx| 久久久久久久久大av| 国产乱来视频区| 一区二区三区高清视频在线| 日韩av在线大香蕉| 免费看不卡的av| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 男人舔奶头视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 可以在线观看毛片的网站| 黄片wwwwww| 亚洲成人久久爱视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| av在线天堂中文字幕| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲av中文av极速乱| 婷婷色综合www| 国产一区二区三区综合在线观看 | 日韩av在线大香蕉| av专区在线播放| 久久精品国产自在天天线| 精品欧美国产一区二区三| 在线a可以看的网站| 国产午夜精品论理片| 亚洲国产av新网站| 国产免费视频播放在线视频 | 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产黄色小视频在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 热99在线观看视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 深爱激情五月婷婷| 国产精品不卡视频一区二区| 国产亚洲91精品色在线| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲真实伦在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美高清成人免费视频www| 美女黄网站色视频| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美xxⅹ黑人| 好男人在线观看高清免费视频| 精品酒店卫生间| 久久久精品欧美日韩精品| 日韩电影二区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 99久久人妻综合| 日本午夜av视频| 99久国产av精品| 日日啪夜夜撸| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久久午夜欧美精品| 大香蕉97超碰在线| av天堂中文字幕网| 久久97久久精品| 黄色配什么色好看|