山東省部分地區(qū)牛傳染性鼻氣管炎抗體的ELISA檢測(cè)

白明月

山東省部分地區(qū)牛傳染性鼻氣管炎抗體的ELISA檢測(cè)

白明月

（山東省禹城市畜牧業(yè)發(fā)展中心，山東 禹城 251200）

本研究選取濟(jì)南、泰安、德州、東營(yíng)、濰坊、臨沂等6地15個(gè)奶牛場(chǎng)開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查，共計(jì)獲得牛的血清樣品1 981份，其中犢牛血清樣品489份，成年牛血清樣品1 492份，采用ELISA法測(cè)定血清樣品中的中和抗體，結(jié)果顯示，14個(gè)牛場(chǎng)檢測(cè)出IBRV gB抗體陽(yáng)性牛，場(chǎng)陽(yáng)性率為93.3 %，說(shuō)明山東省的牛場(chǎng)普遍感染IBRV。進(jìn)一步分析可知，不同地區(qū)、不同牛場(chǎng)、犢牛與成年牛的抗體陽(yáng)性率差異很大，并無(wú)明顯相關(guān)性。

牛傳染性鼻氣管炎；牛傳染性鼻氣管炎病毒；流行病學(xué)調(diào)查

牛傳染性鼻氣管炎（Infectious Bovine Rhinotra-cheitis, IBR）又稱紅鼻病，是由屬于I型孢疹病毒（bovine berpesvirus-1，BHV-1）的牛傳染性鼻氣管炎病毒（Infectious Bovine Rhino-tracheitis Virus，IBRV）引起的一種主要發(fā)生在牛的傳染病，主要特征是高熱、流鼻液，隨后發(fā)展為呼吸困難等癥狀，除導(dǎo)致牛生長(zhǎng)緩慢、產(chǎn)奶量下降外，亦可造成繁殖力下降、流產(chǎn)等，同時(shí)IBRV還可引起免疫抑制，繼發(fā)其他呼吸道病原，給各國(guó)養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。雖然IBR發(fā)病后死亡率不高，但由于其可影響國(guó)際貿(mào)易[2]，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報(bào)告的傳染病，我國(guó)也將其列為二類動(dòng)物疫病[3]。該病最早于1955年由Miller在美國(guó)科羅拉多的育肥牛群中發(fā)現(xiàn)，并于1956年由Madin首次分離出病毒，之后一些學(xué)者相繼在發(fā)病牛的眼結(jié)膜、腦、外陰、流產(chǎn)胎兒等組織、材料中分離出病毒。1964年Huck確認(rèn)IBRV為皰疹病毒。我國(guó)于1980年由周泰沖在新西蘭進(jìn)口奶牛中首次分離到IBRV[4]，之后流行病學(xué)調(diào)查顯示IBR在我國(guó)廣泛流行，嚴(yán)重制約我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病毒、細(xì)胞與血清 IBRV陽(yáng)性毒株由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院奶牛中心楊宏軍研究員饋贈(zèng)。牛胚腎細(xì)胞（MDBK）、IBR陽(yáng)性血清、陰性血清均購(gòu)于中國(guó)獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心（CVCC）。待檢血清采集自山東省內(nèi)的濟(jì)南、泰安、德州、東營(yíng)、濰坊、臨沂等6市共15個(gè)奶牛場(chǎng)或奶牛養(yǎng)殖小區(qū)，共計(jì)1981份樣品。上述牛場(chǎng)未暴發(fā)過(guò)IBR且均未接種包含IBRV抗原的疫苗。

1.1.2 檢測(cè)動(dòng)物 2～6月齡健康奶牛篩選自泰安市及周邊養(yǎng)殖場(chǎng)，要求IBRV抗原、抗體均為陰性。IBRV抗原檢測(cè)時(shí)取待檢牛的鼻拭子，浸泡于1.0 ml含10 % 胎牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液中，低溫運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，反復(fù)凍融3次，8 000 r/min離心10 min，取上清液抽提DNA后直接PCR檢測(cè)；IBRV抗體檢測(cè)時(shí)無(wú)菌采血，析出血清后使用IBRV ELISA抗體檢測(cè)試劑盒Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus（BHV-1） gB Antibody Test Kit進(jìn)行檢測(cè)。

1.1.3 主要試劑及儀器 IBRV ELISA抗體檢測(cè)試劑盒Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus（BHV-1）gB Antibody Test Kit為IDEXX產(chǎn)品。2×Taq Plus MasterMix（Dye）購(gòu)于康為世紀(jì)生物科技有限公司；低熔點(diǎn)瓊脂糖、中性紅染色液均為索萊寶公司產(chǎn)品；胎牛血清為Biological Industries（BI）公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 山東省牛傳染性鼻氣管炎流行病學(xué)調(diào)查 為了解山東省內(nèi)IBR的感染情況，本課題組在2016～2018年期間，連同地方畜牧獸醫(yī)局的春防秋防工作，選取濟(jì)南、泰安、德州、東營(yíng)、濰坊、臨沂等6地15個(gè)奶牛場(chǎng)開(kāi)展流行病學(xué)調(diào)查，分別對(duì)15個(gè)牛場(chǎng)中2～6月齡犢牛和1歲以上成年牛（包括懷孕牛）進(jìn)行采血，犢牛采血方式為頸靜脈采血，成年牛通過(guò)尾根靜脈采血，共計(jì)采血1 981份，其中犢牛采血489份，成年牛采血1 492份。操作時(shí)使用10 ml注射器無(wú)菌采血5.0 ml，之后將血液負(fù)吸到促凝管中，混勻后靜置，置于4 ℃ 析出血清后收集到EP管中，56 ℃水浴30 min進(jìn)行滅活，-20 ℃ 保存待用。15個(gè)牛場(chǎng)相關(guān)信息見(jiàn)表1。

表1 選取牛場(chǎng)相關(guān)信息

1.2.2 ELISA法檢測(cè)血清樣品 按Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus（BHV-1）gB Antibody Test Kit說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果與分析

表2 不同牛場(chǎng)犢牛ELISA法檢測(cè)抗體陽(yáng)性率匯總（2016～2018年）

表3 不同牛場(chǎng)成年牛ELISA法檢測(cè)抗體陽(yáng)性率匯總（2016～2018年）

將采集的1 981份血清樣品全部使用Infec-tious Bovine Rhinotracheitis Virus（BHV-1） gB Antibody Test Kit進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，濟(jì)南等6地15個(gè)牛場(chǎng)中有14個(gè)牛場(chǎng)檢測(cè)出IBRV gB抗體陽(yáng)性牛，場(chǎng)陽(yáng)性率為93.3 %。其中濟(jì)南、泰安、德州、東營(yíng)、濰坊、臨沂試驗(yàn)牛場(chǎng)的IBRV gB抗體整體平均陽(yáng)性率分別約為10.2 %、58.0 %、12.4 %、20.3 %、18.5 %和5.0 %。通過(guò)數(shù)據(jù)分析可知，山東省的牛場(chǎng)普遍感染IBRV，但不同牛場(chǎng)的檢測(cè)結(jié)果差異很大，有些牛場(chǎng)，如TA1，犢牛與成年?？贵w檢出率都很高，而牛場(chǎng)DZ4的IBRV gB抗體檢出率則為0。試驗(yàn)結(jié)果顯示，不同牛場(chǎng)犢牛、成年牛的抗體檢出率并明顯相關(guān)性。

表4 不同地區(qū)ELISA法檢測(cè)抗體平均陽(yáng)性率（2016～2018年）

3 討論

3.1 不同牛場(chǎng)IBRV抗體存在差異的原因

經(jīng)檢測(cè)可知，不同牛場(chǎng)IBRV抗體陽(yáng)性率存在較大差異，部分牛場(chǎng)IBRV抗體檢出率高達(dá)90 % 以上，部分牛場(chǎng)則未檢出，原因之一在于不同牛場(chǎng)采取的管理措施不同[5]，如牛場(chǎng)TA1，未實(shí)行自繁自養(yǎng)的模式，主要從東北、內(nèi)蒙古和浙江等地引牛，犢牛的流動(dòng)性較大，在引牛的過(guò)程中不清楚當(dāng)?shù)嘏?chǎng)疫病、免疫等情況[6]，加之長(zhǎng)途運(yùn)輸，可能導(dǎo)致引進(jìn)的牛感染了IBRV或是IBRV隱形感染牛，之后配種產(chǎn)犢，由于病毒垂直傳播的特性，導(dǎo)致新生犢牛也存在IBRV抗體[7]。反觀牛場(chǎng)DZ4，實(shí)行自繁自養(yǎng)，近3年中均未檢出IBRV抗體陽(yáng)性牛，說(shuō)明牛場(chǎng)的管理方式對(duì)于疫病的防控會(huì)起到關(guān)鍵作用[8]。

3.2 犢牛與成年牛抗體關(guān)系的分析

對(duì)于自繁自養(yǎng)的牛場(chǎng)，如濟(jì)南的3個(gè)牛場(chǎng)，牛場(chǎng)DZ5、DY2等，新生犢牛全部來(lái)源于牛場(chǎng)的懷孕牛，犢牛出生后需飼喂初乳，如果懷孕牛曾經(jīng)感染過(guò)IBRV，體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并隨著初乳被犢牛吸收。初乳在犢牛體內(nèi)的生物半衰期只有3周左右，但9月齡也能檢測(cè)到[9]，同時(shí)考慮到IBRV垂直傳播的特性，體內(nèi)有IBRV抗體的懷孕牛產(chǎn)犢后的犢牛IBRV抗體檢測(cè)應(yīng)為陽(yáng)性。本研究采集的犢牛與成年牛樣品雖然只有部分為母子關(guān)系，但抗體陽(yáng)性率整體符合規(guī)律，既懷孕牛IBRV抗體陽(yáng)性牛產(chǎn)犢后犢牛IBRV抗體也為陽(yáng)性。而另外部分的牛場(chǎng)，由于經(jīng)常引進(jìn)、賣出犢牛，加之引進(jìn)的犢牛背景不清楚，部分犢牛育成后會(huì)配種產(chǎn)犢，導(dǎo)致?tīng)倥Ｅc成年牛之間沒(méi)有明顯的IBRV抗體相關(guān)性[10]。

4 結(jié)論

流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，山東省的牛場(chǎng)普遍感染IBRV，抗體陽(yáng)性率為5 % ～ 58 %，不同牛場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果差異很大，不同牛場(chǎng)犢牛、成年牛的抗體檢出率并無(wú)明顯相關(guān)性。

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（2021–04–25）

S858.23

A

1007-1733（2021）08-0050-04