改良Schiff試劑熱配法的應用和體會

臧志偉 吳佗

摘要：目的：探討用改良Schiff試劑在科研和臨床病理檢驗技術中得到的應用價值。方法：采用跟傳統(tǒng)經(jīng)典方法對比，跟蹤之后再驗證的方法。結(jié)果：以改良后染色效果明顯，糖原染色陽性物質(zhì)為紫紅色等實際操作染色片例為佐證染色后效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的方法。結(jié)論：改良后Schiff試劑熱配法配制簡單簡潔，方便，值得推廣。

關鍵詞：改良;Schiff試劑;偏重亞硫酸鈉;36%～38%的濃鹽酸

高碘酸能使細胞內(nèi)多糖含有的1，2-乙二醇氧化，產(chǎn)生二醛，此二醛基進而與Schiff液作用形成紅色化合物。定位于胞漿中其強度與糖原含量成正比，但傳統(tǒng)方法配制Schiff試劑步驟繁瑣，不易掌握且配制后保存時間短，不易推廣。實驗者經(jīng)多年實踐總結(jié)改良熱法快速配制schiff試劑不僅方法簡便、成功率高，而且染色效果比改進前更加艷麗，染色色彩更加銳利鮮明。

1材料與方法

1.1 實驗材料

①研磨成粉狀的堿性品紅;②偏重亞硫酸鈉;③36%～38%的濃鹽酸;④蒸餾水;⑤活性碳粉。

1.2 傳統(tǒng)Schiff試劑配制

將1 g堿性品紅加入煮沸的200 ml蒸餾水中，再煮1 min，使堿性品紅完全溶解。冷卻至50℃時過濾，加入1 mol/L濃鹽酸20 ml，再冷卻至35℃時，加入偏重亞硫酸鈉2 g，蓋緊并輕輕搖動使其溶解，于暗處靜置24 h，溶液變成稻草色或淡紅色，加入活性炭1 g，塞瓶口輕搖1～2 min，靜置1～2 h后過濾，置于4℃冰箱內(nèi)保存。

1.3 改進后的Schiff試劑配制方法

用500 ml的三角燒瓶加入260 ml蒸餾水在電爐加熱至沸騰，取1.5 g堿性品紅置于260 ml沸水中，先用玻璃棒攪拌混勻再繼續(xù)搖動燒瓶5 min使之溶解，移入量筒。冷卻至25℃時，加29.5 g偏重亞硫酸鈉，用玻璃棒攪拌混勻，使之完全溶解，滴加36%～38%的濃鹽酸3 ml添加蒸餾水至300 ml充分混勻振蕩10 min。使該溶液顏色褪至淡黃色，若呈紅色則不能使用，加活性碳粉5 g顛倒混勻。取濾紙放入漏斗過濾至棕色瓶，此時溶液呈無色透明狀，置4℃冰箱備用（可保存1.5年以上）。

1.4 染色方法

①干燥的新鮮血膜片或病理組織切片[脫水脫蠟（略）]于95%乙醇中固定10 min，流水沖洗;②0.5%高碘酸水溶液氧化5～10 min;③蒸餾水充分水洗;④放入無色品紅溶液玻璃染缸中反應30 min，流動自來水沖洗10 min;⑤HE染色用蘇木素染核（血膜片可用1%甲基綠染核3 min）水洗、返藍、鏡檢，如核顏色深用鹽酸乙醇分化，再水洗顯藍;⑥無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2染色結(jié)果

Schiff試劑（PAS法）陽性物質(zhì)呈紫紅色或紅色。見圖1。

3討論

作者將反應物（偏重亞硫酸鈉29.5 g）濃度增加以避免無色品紅的氧化，也避免了背景及非糖類物質(zhì)的物理著色，清晰地顯示含醛基的糖類物質(zhì)。以濃度36%～38%的濃鹽酸（3 ml）滴入法取代1 mol/L鹽酸，加速了對染色劑色素的破壞速度，縮短了配制時間，提高了工作效率。增加鹽酸和偏重亞硫酸鈉濃度，提高了配制Schiff試劑生成速度加速了對色素的破壞。但為了能使Schiff液染色力保證發(fā)揮最佳效果，最好采用浸泡染色。Schiff染色反應成功與否、染色附著力好與否、反應快慢則取決于染色時間，氧化時間長短與（高碘酸濃度）氧化劑的優(yōu)劣和氧化液（避免污染）新鮮等因素有關。

Schiff液制配法有很多，有冷配法及熱配法。都以1：200堿性品紅溶液為最基本配方，都是熱配法（將堿性品紅加熱煮沸是通過熱效應來加速分子運動，使染料溶解與脫色）。冷配法的報導也不少，但無定性推廣。我們通過多年教學實驗應用實踐觀察，取得了改進Schiff液與傳統(tǒng)熱配法一致的滿意效果。改良后schiff試劑優(yōu)點是Schiff液可以長期保存使用而不影響試劑質(zhì)量和染色結(jié)果。改進后的Schiff液配液時間大大縮短（原為24 h，現(xiàn)為50 min），配液步驟簡化，易于掌握，高效實用。而傳統(tǒng)方法配Schiff試劑步驟繁瑣，配制過程稍有不慎極易失敗，不易掌握，且Schiff試劑貯存時間較短。改良法制備Schiff試劑中增加濃鹽酸和偏重亞硫酸鈉的濃度，加快Schiff試劑生成速度，可大量配制（筆者有時配制多達1 000 ml，放置冰箱1年以上效果仍良好），具有高成功率、效果理想、便于儲存等特點。改良后schiff試劑能使師生與科研工作者較快達到實驗目的，提高實驗積極性，極大提高了實驗的效率，滿足教學科研的需要而且試劑新鮮還可在冰箱可保存多年。染色結(jié)果與改進前相比更加鮮艷，染色色彩更加銳利鮮明。

參考文獻

[1]丁偉，王德田.簡明病理檢驗技術[M].杭州：浙江科學技術出版社，2014：70.