• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    rAAV2-ND4基因玻璃體腔注射對Leber遺傳性視神經(jīng)病變的療效評價

    2021-08-23 02:30:46李欣田朕陳彰李斌張勇
    中華實驗眼科雜志 2021年8期
    關鍵詞:基因治療體腔眼壓

    李欣 田朕 陳彰 李斌,2,3 張勇

    1十堰市太和醫(yī)院眼科 湖北醫(yī)藥學院附屬醫(yī)院,十堰 442000;2華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院眼科,武漢 430030;3武漢紐福斯生物科技有限公司 420200

    Leber遺傳性視神經(jīng)病變(Leber hereditary optic neuropathy,LHON)是由線粒體DNA突變所致的遺傳性眼病,常見的突變位點為11778[1],臨床表現(xiàn)為雙眼視力同時或先后急性或亞急性下降[2]。本病好發(fā)于青少年男性,是導致青少年雙眼盲的常見原因之一,很多患者在較短時間內(nèi)雙眼視力急劇降至0.1以下。目前LHON的治療方法包括口服Q10、艾地苯醌、EPI-743等[3-5],但均未獲得確切的療效。本研究團隊前期進行了一系列基礎研究,證實重組腺相關病毒2-還原型輔酶Ⅰ脫氫酶4(recombinant adeno associated virus 2-NADH dehydrogenase 4,rAAV2-ND4)能夠正常表達于線粒體或注射后進入細胞的線粒體內(nèi)[6],驗證了rAAV2-ND4玻璃體腔內(nèi)注射的安全性和有效性,確定了注射劑量[7]。在完成前期基礎研究后,本研究團隊于2011—2012年對9例LHON患者進行了首次基因治療臨床試驗,隨訪36個月發(fā)現(xiàn)6例患者視力顯著提高,未見嚴重并發(fā)癥發(fā)生[8-9],初步證實了基因治療LHON的安全性和有效性。此后,法國和美國的研究團隊也分別進行了基因治療LHON的臨床試驗,但均出現(xiàn)較嚴重的眼部并發(fā)癥[10-11]。為了進一步擴大樣本量以證實基因治療藥物的安全性和有效性,本團隊開展第2次基因治療LHON的臨床試驗,以期為rAAV2-ND4玻璃體腔內(nèi)注射治療LHON提供方法學和臨床療效評價依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    采用多中心前瞻性非隨機對照臨床試驗研究設計,研究團隊由十堰市太和醫(yī)院、華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院、武漢大學附屬鄂州市中心醫(yī)院以及阿根廷布宜諾斯艾利斯的佩德羅·拉格萊澤眼科醫(yī)院臨床醫(yī)生組成,并于2017年12月至2018年2月在十堰市太和醫(yī)院眼科中心招募線粒體DNA 11778位點突變的LHON患者40例。選擇視力較差眼或右眼(雙眼視力相等時)行rAAV2-ND4玻璃體腔內(nèi)注射作為注射眼組,對側(cè)眼作為未注射眼組,每組40眼。LHON診斷標準:(1)急性或亞急性起病,無痛性視力下降;(2)單眼發(fā)病或雙眼相繼發(fā)病;(3)視覺誘發(fā)電位提示P100波潛伏期延長、振幅降低;(4)中心視野缺失或色覺障礙;(5)早期視盤正?;蜉p度充血、水腫,視盤旁局部微血管擴張,無出血、滲出,晚期視盤顳側(cè)蒼白;(6)基因測序結(jié)果符合LHON診斷。納入標準:(1)符合LHON診斷標準,并且通過基因測序確定為11778位點突變,近3個月未經(jīng)其他治療,且視力未提高;(2)年齡12~65歲,病程>6個月且視力穩(wěn)定;(3)同意治療期間不使用其他針對此疾病的藥物或治療方法。排除標準:(1)合并有糖尿病等慢性疾病,嚴重的心血管、腦血管、肝臟、腎臟等原發(fā)病,其他全身神經(jīng)性疾病者,心臟病手術后恢復期患者,有精神障礙的患者,腫瘤患者;(2)合并有青光眼等其他影響視力的眼部疾病患者;(3)近3個月內(nèi)參加其他臨床研究的患者;(4)酗酒、吸煙、吸毒或有藥物濫用史、有毒物質(zhì)接觸史者;(5)孕婦、哺乳期婦女或12個月內(nèi)有計劃懷孕者;(6)術前免疫實驗檢查結(jié)果明顯異常者,如AAV2體液免疫反應陽性、CD3/CD8異常等。40例患者均雙眼發(fā)病,其中男33例,女7例;病程為7~312個月,平均(41.30±56.08)個月;年齡為12~42歲,平均(20.30±6.39)歲;注射眼和未注射眼平均最佳矯正視力(best corrected visual acuity,BCVA)分別為(1.83±0.47)LogMAR和(1.75±0.46)LogMAR,差異無統(tǒng)計學意義(t=0.813,P=0.419);注射眼組和未注射眼組平均基線眼壓分別為(17.63±2.56)mmHg和(17.88±2.64)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),差異無統(tǒng)計學意義(t=0.430,P=0.669)。本研究遵循《赫爾辛基宣言》,研究方案獲得十堰市太和醫(yī)院倫理委員會批準(批文號:201807)。在充分告知研究內(nèi)容及手術風險后,所有患者和監(jiān)護人均自愿簽署知情同意書。

    1.2 方法

    1.2.1手術方法 手術在手術室進行,患者取平臥位,術眼用鹽酸丙美卡因滴眼液點眼3次;常規(guī)消毒鋪巾,做好面部及眼部消毒;術眼用開瞼器開瞼,體積分數(shù)0.5%聚維酮碘消毒液沖洗結(jié)膜囊,10 s后用質(zhì)量分數(shù)0.9%氯化鈉溶液沖洗,洗凈消毒液;用1 ml注射器吸取0.05 ml rAAV2-ND4(1×1010vg)(武漢紐福斯生物科技有限公司),沿注射眼順時針7:00~8:00位角膜緣后4 mm處進針,緩慢推注藥物,拔出針頭后無菌棉簽按壓注射點2 min;術眼涂抗生素眼膏并包蓋,患者平臥30 min后返回病房。手術操作均由同一高年資醫(yī)師進行。

    1.2.2隨訪及評價指標 術后1、3、6、12個月定期檢查視力、眼壓、眼前節(jié)及眼底等。評估患者治療的有效率,定義為末次隨訪時視力提高≥0.3 LogMAR。主要終點指標為視力變化,由同一醫(yī)生采用兩用對數(shù)視力表(溫州星康醫(yī)學科技有限公司)檢查視力,并轉(zhuǎn)換成LogMAR視力;采用Full Auto Tonometer(日本Canon公司)噴氣式非接觸眼壓計測量眼壓3次,取平均值;采用裂隙燈顯微鏡檢查眼前節(jié)情況;采用CR-2免擴瞳眼底照相機(日本Canon公司)檢查眼底。

    1.3 統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料經(jīng)Shapiro-Wilk檢驗證實接近正態(tài)分布,以mean±SD表示;計數(shù)資料以頻數(shù)及百分率表示。注射眼組和未注射眼組基因治療前后BCVA和眼壓總體比較均采用重復測量兩因素方差分析,多重比較采用LSD-t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 患者治療有效率

    治療后,注射眼組視力提高6眼,未注射眼組視力提高4眼,雙眼視力同時提高13例。40例患者中23例患者視力提高≥0.3 LogMAR,有效率為57.5%。

    2.2 各組術眼治療前后BCVA比較

    2個組BCVA總體比較差異無統(tǒng)計學意義(F組別=0.084,P=0.772),治療前后BCVA總體比較差異有統(tǒng)計學意義(F時間=34.109,P<0.01);治療后12個月2個組BCVA均較治療前提高,差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.01)(表1)。

    表1 2個組治療前和治療后12個月BCVA比較(mesn±SD,LogMAR)Table 1 Comparison of BCVA between the two groups before and after 12-month treatment (mesn±SD,LogMAR)組別眼數(shù)治療前后BCVA治療前治療后12個月未注射眼組401.75±0.461.51±0.62a注射眼組401.83±0.471.62±0.58a 注:F組別=0.084,P=0.772;F時間=34.109,P<0.01.與治療前比較,aP<0.01(重復測量兩因素方差分析,LSD-t檢驗) BCVA:最佳矯正視力 Note:Fgroup=0.084,P=0.772;Ftime=34.109,P<0.01.Compared with pre-treatment,aP<0.01 (Repeated measurement two-way ANOVA,LSD-t test) BCVA:best corrected visual acuity

    2.3 各組術眼治療前后眼壓比較

    2個組術眼治療前后眼壓總體比較差異均無統(tǒng)計學意義(F組別=0.557,P=0.575;F時間=2.314,P=0.106)(表2)。

    表2 2個組治療前后眼壓比較(mesn±SD,mmHg)Table 2 Comparison of intraocular pressure between the two groups before and after treatment (mesn±SD,mmHg)組別眼數(shù)治療前后不同時間點眼壓治療前治療后1個月治療后12個月未注射眼組4017.88±2.6418.25±2.2317.93±2.46注射眼組4017.63±2.5618.55±3.1417.85±2.51 注:F組別=0.557,P=0.575;F時間=2.314,P=0.106(重復測量兩因素方差分析) 1mmHg=0.133kPa Note:Fgroup=0.557,P=0.575;Ftime=2.314,P=0.106 (Repeated measurement two-way ANOVA) 1mmHg=0.133kPa

    2.4 注射眼并發(fā)癥發(fā)生情況

    隨訪期內(nèi),所有患者rAAV2-ND4玻璃體腔內(nèi)注射后均無結(jié)膜炎、角膜炎、前房炎癥、玻璃體炎癥及視網(wǎng)膜脫離出現(xiàn)。2眼注射治療后眼壓偏高,約為26 mmHg,使用鹽酸卡替洛爾滴眼液點眼,每日2次,眼壓恢復至正常。

    3 討論

    2007年,美國和英國3個研究小組針對Leber先天性黑矇成功開展了基因治療臨床試驗[12-13],開啟了眼部疾病的基因治療時代。LHON的發(fā)生是由于11778位點突變造成呼吸鏈上ND4基因編碼的第340位氨基酸由精氨酸變?yōu)榻M氨酸所致,導致ND4蛋白功能異常?;蛑委熅褪前盐赐蛔兊腘D4基因轉(zhuǎn)染到患者病變部位的細胞,編碼正常的ND4蛋白,替代患者體內(nèi)突變的ND4蛋白的功能。基因治療是目前治療LHON最有前景的方法,其安全性是首先要保證的問題。由于玻璃體腔內(nèi)注射AAV2載體會誘發(fā)機體的免疫排斥反應,從而影響藥物效果,本課題組在前期動物實驗階段確定了AAV2引起機體免疫反應的時間和峰值及用藥方案[14],從而降低了機體免疫排斥發(fā)生的風險。法國GenSight Biologics公司和美國Guy教授研究團隊用AAV2作為載體對LHON患者進行基因治療后,均出現(xiàn)不同程度的玻璃體炎癥或葡萄膜炎[10-11]。此后法國GenSight Biologics公司證實了眼內(nèi)炎癥反應與AAV2載體有關,并提出預防性系統(tǒng)地使用糖皮質(zhì)激素可以減輕炎癥反應[15]。本研究中所有患者基因治療前1周和治療后4周均應用糖皮質(zhì)激素,以減少免疫排斥反應的發(fā)生機會,術中及術后隨訪期內(nèi)均未發(fā)生任何嚴重并發(fā)癥,證實了基因治療的安全性。

    2011—2012年,本研究團隊首次使用rAAV2-ND4治療9例LHON患者并隨訪7年,有6例患者視力顯著提高(視力提高≥0.3 LogMAR),有效率超過60%[16]。本研究結(jié)果顯示,rAAV2-ND4玻璃體腔內(nèi)注射后有效率達57.5%,與前期研究結(jié)果一致,進一步證實了LHON基因治療的有效性。此外,值得注意的是,2次基因治療結(jié)果顯示,不僅注射眼視力較基線提高,未注射眼視力也出現(xiàn)不同程度的提高。Yu-Wai-Man等[17]對37例m.11778G突變的LHON患者注射眼采用隨機分配原則,選擇1眼進行rAAV2/2-ND4治療,在96周的隨訪期間觀察到雙眼視力的持續(xù)改善,結(jié)果顯示在第96周,68%(25/37)的受試者至少有1眼的BCVA較基線水平有臨床相關的恢復,78%(29/37)的受試者雙眼視力改善,表明單眼基因治療可以明顯改善雙眼視力。造成這種雙眼視力提高的機制仍不完全明確。一項非人靈長類動物的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),病毒載體DNA可從注射眼轉(zhuǎn)移到對側(cè)未注射眼的前節(jié)、視網(wǎng)膜和視神經(jīng)(https://www.gensight-biologics.com)。此外,Yang等[18]將熒光金注射到鼠一側(cè)眼的玻璃體腔內(nèi),2周后可見熒光金上行到對側(cè)視交叉,經(jīng)過視交叉后,部分進入對側(cè)眼的視神經(jīng),這為藥物單眼注射后雙眼視覺功能改善提供了一個合理的解釋,但物質(zhì)轉(zhuǎn)移是通過軸漿運輸、軸突再生或其他方式仍不清楚,需要進一步探索。

    本研究的優(yōu)勢在于國內(nèi)缺少基因治療臨床實踐的相關報道,僅限于對外文文獻的參考和總結(jié),本研究為我國LHON的基因治療提供了臨床依據(jù)。因本研究未設置正常對照組,而且單眼基因治療改變的是雙眼視功能,故未進行玻璃體腔內(nèi)注射rAAV2-ND4治療的眼不能作為對照組。因此,40例患者80眼均以基因治療前后的視力變化進行對比分析。本研究的不足之處在于未設置自然病程作為對照組,同時缺少自然病程患者分析。本研究未進行視力提高與未提高患者的相關性影響因素分析,未納入視野、視神經(jīng)纖維層厚度和視覺誘發(fā)電位等客觀檢測指標。

    本研究結(jié)果表明,玻璃體腔內(nèi)注射rAAV2-ND4治療LHON是安全、有效的,研究結(jié)果為未來LHON基因治療走向臨床提供了理論依據(jù)。本研究團隊將繼續(xù)對40例患者進行長期跟蹤隨訪,觀察患者全身情況,并結(jié)合視野、視神經(jīng)纖維層厚度和視覺誘發(fā)電位等客觀檢查資料評價基因治療后患者視功能的改善情況,探討基因治療LHON的遠期安全性和有效性。

    利益沖突李斌教授為武漢紐福斯生物科技有限公司董事長,是基因藥物rAAV2/2-ND4的發(fā)明者;本研究所用基因藥物來自武漢紐福斯生物科技有限公司;本研究承擔單位為公立三級甲等醫(yī)院,所有數(shù)據(jù)均為客觀檢查獲得,研究結(jié)果不會受到影響;其余作者均聲明不存在利益沖突

    猜你喜歡
    基因治療體腔眼壓
    仿刺參水管系統(tǒng)與體腔間物質(zhì)交換問題探究
    中間球海膽體腔細胞損失后的恢復規(guī)律及恢復期中軸器觀察*
    高眼壓癥及原發(fā)性開角型青光眼患者的24 h眼壓波動規(guī)律
    玻璃體腔注射康柏西普聯(lián)合復合式小梁切除術及5氟尿嘧啶治療新生血管性青光眼
    輕壓眼球自測眼壓
    洪專:中國基因治療領域的引路人
    華人時刊(2017年21期)2018-01-31 02:24:04
    有些頭疼是因為眼壓高
    益壽寶典(2018年11期)2018-01-27 17:55:03
    基因治療在醫(yī)學中的應用?
    封閉端粒酶活性基因治療對瘢痕疙瘩成纖維細胞的影響
    直腸癌放療、化療、熱療及基因治療新進展
    十八禁网站免费在线| 欧美黑人巨大hd| 免费观看人在逋| 成人手机av| 亚洲男人的天堂狠狠| 成人欧美大片| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久精品国产清高在天天线| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲av成人一区二区三| 此物有八面人人有两片| 色综合站精品国产| 视频区欧美日本亚洲| 午夜福利在线在线| 国产男靠女视频免费网站| 欧美日韩精品网址| 校园春色视频在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 成年人黄色毛片网站| 精品久久久久久久末码| a在线观看视频网站| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲黑人精品在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 人成视频在线观看免费观看| 男女视频在线观看网站免费 | 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲免费av在线视频| 视频在线观看一区二区三区| 波多野结衣av一区二区av| 老司机在亚洲福利影院| 麻豆一二三区av精品| 18美女黄网站色大片免费观看| 波多野结衣巨乳人妻| 中文在线观看免费www的网站 | 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 欧美乱色亚洲激情| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲精品色激情综合| 天天一区二区日本电影三级| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲七黄色美女视频| 国产成年人精品一区二区| 欧美日韩乱码在线| bbb黄色大片| 国产极品粉嫩免费观看在线| 青草久久国产| 久久久久久国产a免费观看| 黄色 视频免费看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲成人久久性| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产一区二区在线av高清观看| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 一a级毛片在线观看| 精品国产亚洲在线| 最近最新中文字幕大全电影3 | 久久人人精品亚洲av| 黄色片一级片一级黄色片| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲,欧美精品.| 精品福利观看| 午夜福利成人在线免费观看| 国产精品影院久久| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久久久久久精品吃奶| 男人的好看免费观看在线视频 | 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品久久蜜臀av无| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产成人欧美在线观看| 黄色女人牲交| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产精品 国内视频| 国产国语露脸激情在线看| 中出人妻视频一区二区| xxx96com| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产黄片美女视频| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 亚洲精品美女久久av网站| 两个人视频免费观看高清| 欧美色视频一区免费| 精品日产1卡2卡| 中文字幕av电影在线播放| 精品福利观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 日韩欧美一区视频在线观看| 色综合站精品国产| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 99riav亚洲国产免费| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产精品二区激情视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 日本免费一区二区三区高清不卡| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 成人18禁在线播放| 国产99久久九九免费精品| 国产精品乱码一区二三区的特点| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 免费高清视频大片| 亚洲无线在线观看| 精品久久久久久久末码| 首页视频小说图片口味搜索| 色尼玛亚洲综合影院| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 精品福利观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲,欧美精品.| 亚洲中文av在线| 一区二区三区精品91| 精品欧美一区二区三区在线| 国产精品电影一区二区三区| 激情在线观看视频在线高清| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美日韩黄片免| 波多野结衣av一区二区av| 哪里可以看免费的av片| www.www免费av| 精品久久蜜臀av无| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲熟妇熟女久久| 99久久无色码亚洲精品果冻| 午夜老司机福利片| 高清在线国产一区| 成人永久免费在线观看视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久精品国产清高在天天线| 免费高清在线观看日韩| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久久久九九精品影院| 国内精品久久久久久久电影| 长腿黑丝高跟| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 欧美性猛交黑人性爽| 久久精品91无色码中文字幕| 国产国语露脸激情在线看| 级片在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 免费在线观看影片大全网站| www日本黄色视频网| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美色视频一区免费| 日韩欧美在线二视频| 韩国av一区二区三区四区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| www.自偷自拍.com| 在线永久观看黄色视频| 欧美激情高清一区二区三区| 两性夫妻黄色片| 国产片内射在线| 亚洲av片天天在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 精品熟女少妇八av免费久了| 黄色丝袜av网址大全| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美成人午夜精品| 无遮挡黄片免费观看| 黄色视频不卡| 欧美在线一区亚洲| 国产麻豆成人av免费视频| 级片在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 成人亚洲精品一区在线观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 成人午夜高清在线视频 | 人人澡人人妻人| 成人永久免费在线观看视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美黄色片欧美黄色片| 狠狠狠狠99中文字幕| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美久久黑人一区二区| 老司机在亚洲福利影院| 国产av在哪里看| 久久久久久久久久黄片| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美色视频一区免费| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 桃色一区二区三区在线观看| 观看免费一级毛片| 中文字幕精品免费在线观看视频| 婷婷亚洲欧美| 欧美亚洲日本最大视频资源| 波多野结衣av一区二区av| 哪里可以看免费的av片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 免费在线观看成人毛片| 最新美女视频免费是黄的| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 男人舔奶头视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 性色av乱码一区二区三区2| 中文字幕人妻熟女乱码| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美日本视频| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 国产av不卡久久| 欧美zozozo另类| 在线看三级毛片| 黄片播放在线免费| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 91av网站免费观看| 美女 人体艺术 gogo| 精品国产乱子伦一区二区三区| 色播在线永久视频| 老司机靠b影院| 欧美午夜高清在线| 免费人成视频x8x8入口观看| 性欧美人与动物交配| 国产免费男女视频| 亚洲自拍偷在线| 久久久久久大精品| 禁无遮挡网站| 亚洲人成网站高清观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久天堂一区二区三区四区| 最近最新中文字幕大全免费视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 色综合婷婷激情| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 色哟哟哟哟哟哟| 国产免费av片在线观看野外av| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日本成人三级电影网站| 他把我摸到了高潮在线观看| 69av精品久久久久久| 中出人妻视频一区二区| 欧美日本视频| 国产视频一区二区在线看| 999久久久国产精品视频| 国产在线观看jvid| 午夜亚洲福利在线播放| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲国产看品久久| 国产精品久久久人人做人人爽| www.999成人在线观看| 长腿黑丝高跟| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久精品成人免费网站| 热99re8久久精品国产| 一区二区三区国产精品乱码| 白带黄色成豆腐渣| 一区二区三区国产精品乱码| 一本精品99久久精品77| xxx96com| 国产精品国产高清国产av| 18禁观看日本| 亚洲精品美女久久av网站| 久久亚洲真实| aaaaa片日本免费| 国产1区2区3区精品| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 久久久久久人人人人人| 亚洲熟妇熟女久久| 女警被强在线播放| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 日本一本二区三区精品| 看黄色毛片网站| 成人国产一区最新在线观看| 国产av一区二区精品久久| 色综合站精品国产| 午夜精品在线福利| 日本一本二区三区精品| 日韩国内少妇激情av| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久热这里只有精品99| 日韩视频一区二区在线观看| 后天国语完整版免费观看| 99热这里只有精品一区 | 国产精品一区二区免费欧美| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久久国产成人免费| videosex国产| 69av精品久久久久久| 欧美色欧美亚洲另类二区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲国产精品合色在线| 韩国精品一区二区三区| 亚洲av美国av| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 91麻豆精品激情在线观看国产| videosex国产| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 一级作爱视频免费观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品av久久久久免费| 久久性视频一级片| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 美国免费a级毛片| 亚洲第一青青草原| 嫩草影院精品99| 一本一本综合久久| 美女扒开内裤让男人捅视频| 免费在线观看日本一区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久久水蜜桃国产精品网| 久久久久久久精品吃奶| 国产精品亚洲av一区麻豆| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲三区欧美一区| 亚洲美女黄片视频| 亚洲av成人av| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产成人啪精品午夜网站| 欧美三级亚洲精品| 国产一卡二卡三卡精品| cao死你这个sao货| 精品无人区乱码1区二区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 中文资源天堂在线| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲熟妇熟女久久| 黄片大片在线免费观看| 亚洲成av人片免费观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 婷婷精品国产亚洲av| 啦啦啦免费观看视频1| 国产精品精品国产色婷婷| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 不卡一级毛片| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美日韩乱码在线| 国产av又大| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 一级毛片女人18水好多| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 久久久久久人人人人人| a级毛片a级免费在线| 男人操女人黄网站| 在线看三级毛片| 亚洲精品av麻豆狂野| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 精品免费久久久久久久清纯| 国产激情久久老熟女| www日本在线高清视频| 国产男靠女视频免费网站| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 免费在线观看黄色视频的| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 在线永久观看黄色视频| 国产精品亚洲美女久久久| 成人一区二区视频在线观看| 久久久久久九九精品二区国产 | 777久久人妻少妇嫩草av网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 成人三级黄色视频| 欧美激情高清一区二区三区| 美女 人体艺术 gogo| 精品高清国产在线一区| 国产精品综合久久久久久久免费| 欧美午夜高清在线| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 99久久国产精品久久久| 久久人妻av系列| 成人特级黄色片久久久久久久| 男女下面进入的视频免费午夜 | 日本a在线网址| 精品一区二区三区四区五区乱码| 日本一本二区三区精品| 神马国产精品三级电影在线观看 | 成人av一区二区三区在线看| 香蕉av资源在线| 久久精品91无色码中文字幕| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲第一电影网av| 国产成人精品久久二区二区免费| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 在线观看免费日韩欧美大片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 91九色精品人成在线观看| 91字幕亚洲| 欧美zozozo另类| 国产激情久久老熟女| a在线观看视频网站| 欧美中文日本在线观看视频| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲成人久久性| 成人免费观看视频高清| 无人区码免费观看不卡| 免费看日本二区| 亚洲国产精品合色在线| 草草在线视频免费看| 日本 欧美在线| 制服人妻中文乱码| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲熟妇熟女久久| 久久久久国内视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产精品 欧美亚洲| 91大片在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| 国产精品久久久人人做人人爽| 男女之事视频高清在线观看| 人妻久久中文字幕网| 日本成人三级电影网站| 俄罗斯特黄特色一大片| 桃红色精品国产亚洲av| 国产成人av激情在线播放| 999久久久国产精品视频| 1024视频免费在线观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 欧美成人午夜精品| 他把我摸到了高潮在线观看| 久9热在线精品视频| 亚洲国产欧美网| 最好的美女福利视频网| 男女之事视频高清在线观看| 一级毛片女人18水好多| 亚洲成人久久性| 日韩欧美 国产精品| 一个人免费在线观看的高清视频| tocl精华| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产高清视频在线播放一区| 听说在线观看完整版免费高清| 国产精华一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲专区国产一区二区| 欧美性猛交黑人性爽| 男人操女人黄网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 在线免费观看的www视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产精品影院久久| 久久久久九九精品影院| 亚洲午夜理论影院| 久久99热这里只有精品18| 日韩大码丰满熟妇| 窝窝影院91人妻| 国产私拍福利视频在线观看| 一进一出抽搐动态| 欧美日本视频| 变态另类丝袜制服| 最近在线观看免费完整版| 亚洲av片天天在线观看| 丁香欧美五月| 人成视频在线观看免费观看| 男男h啪啪无遮挡| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲五月天丁香| 搞女人的毛片| 国产一卡二卡三卡精品| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 搡老岳熟女国产| 老鸭窝网址在线观看| 怎么达到女性高潮| 色在线成人网| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 欧美乱色亚洲激情| 一二三四社区在线视频社区8| 精品久久久久久久末码| 淫妇啪啪啪对白视频| av天堂在线播放| 久久精品成人免费网站| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产精品影院久久| 99久久无色码亚洲精品果冻| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 哪里可以看免费的av片| 久久久国产成人精品二区| 欧美日韩精品网址| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲五月婷婷丁香| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 黑丝袜美女国产一区| 国产片内射在线| 成人国产一区最新在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 三级毛片av免费| 一本综合久久免费| 国产精品久久久久久精品电影 | svipshipincom国产片| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲男人天堂网一区| 一进一出抽搐动态| 婷婷亚洲欧美| 国产一区二区激情短视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 在线视频色国产色| 桃红色精品国产亚洲av| 午夜日韩欧美国产| av在线播放免费不卡| 一级作爱视频免费观看| 欧美不卡视频在线免费观看 | 麻豆一二三区av精品| 美女午夜性视频免费| 欧美色视频一区免费| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 久久这里只有精品19| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲欧美激情综合另类| 少妇 在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产乱人伦免费视频| 亚洲av成人av| 校园春色视频在线观看| 欧美成人午夜精品| 欧美成人性av电影在线观看| 日本一本二区三区精品| 无遮挡黄片免费观看| 国产成人影院久久av| 韩国av一区二区三区四区| 久久精品国产清高在天天线| 国产麻豆成人av免费视频| 国产乱人伦免费视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 免费在线观看亚洲国产| 国产精品一区二区精品视频观看| 免费观看人在逋| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 好男人在线观看高清免费视频 | 人人妻人人澡人人看| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久久久久久久中文| 一本综合久久免费| 久久精品91蜜桃| 老汉色∧v一级毛片| 国产不卡一卡二| 亚洲av熟女| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产av不卡久久| 免费在线观看日本一区| 久热这里只有精品99| 国产精品永久免费网站| 亚洲自拍偷在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 亚洲成人久久爱视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 怎么达到女性高潮| 日韩欧美一区视频在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 美女 人体艺术 gogo| 手机成人av网站| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲美女黄片视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 99久久久亚洲精品蜜臀av| av超薄肉色丝袜交足视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产男靠女视频免费网站| 久久午夜亚洲精品久久| 成人av一区二区三区在线看| 国产精品久久视频播放| 韩国av一区二区三区四区| 天堂动漫精品| 亚洲精品国产一区二区精华液| 精品国产亚洲在线| 老鸭窝网址在线观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 美女高潮到喷水免费观看| 两个人看的免费小视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 成年女人毛片免费观看观看9| 岛国在线观看网站| 久久中文看片网| 亚洲avbb在线观看| 午夜福利18| 亚洲成人久久爱视频| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲熟妇熟女久久| 午夜精品在线福利| 国产精品亚洲美女久久久| 免费高清视频大片| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲自拍偷在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲一区中文字幕在线| 一个人免费在线观看的高清视频| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 男女那种视频在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| av超薄肉色丝袜交足视频|