大孔樹(shù)脂純化白背天葵多酚及其體外抗氧化研究

馬景蕃 謝曉倩 楊昊坤 劉喜明 陳雪梅

摘 ?要：為了分離純化白背天葵多酚，并探討其體外抗氧化活性，本研究比較了8種大孔樹(shù)脂對(duì)白背天葵多酚的靜態(tài)吸附和解吸能力，優(yōu)選出D101為最適宜純化白背天葵多酚的樹(shù)脂，并對(duì)其分離純化的工藝進(jìn)行了優(yōu)化。采用DPPH和ABTS法評(píng)價(jià)其抗氧化活性。結(jié)果表明，D101樹(shù)脂最佳純化工藝為上樣液濃度1 mg/mL、pH 3.1、上樣液流速2 mL/min，解吸的乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、體積60 mL、流速2 mL/min;白背天葵多酚的含量由14.73%提高到45.21%;其清除DPPH及ABTS自由基的能力為 Vc>純化物>粗提物。研究結(jié)果為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用白背天葵多酚提供了數(shù)據(jù)支持。

關(guān)鍵詞：白背天葵;多酚;純化;DPPH;ABTS

Abstract： Eight macroporous resins were compared to separate and purify Gynura formosana Kitam polyphenols and its antioxidant activity in vitro was determined. The optimal purify technology was optimized through static absorption and desorption experiments. Furthermore， the antioxidant activity of the polyphenols from G. formosana Kitam was analyzed by DPPH and ABTS methods. The results showed that D101 was the most optimal resin. The optimal purification process parameters were as follows： the concentration of polyphenols 1 mg/mL with pH 3.1， the loading flow rate 2 mL/min. The eluting solvent was 70% alcohol， the volume and flow rate was 60 mL and 2 mL/min respectively. Under the condition， the concentration of polyphenols increased from 14.73% to 45.21%. The DPPH and ABTS radicals scavenging activity was as follows： Vc>purified polyphenols>crude polyphenols. The result would provide a basis for the further utilization of polyphenols from G. formosana Kitam.

Keywords： Gynura formosana Kitam; polyphenols; purification; DPPH; ABTS

白背天葵（Gynura formosana Kitam）又名白背三七、白鳳菜，是菊科（Compositae）菊三七屬（Gynura）多年生草本植物[1]。在福建、海南、廣東等地多有分布。它是一種保健藥膳和珍稀蔬菜，有“最佳保健藥膳蔬菜”之稱(chēng)[2]。白背天葵營(yíng)養(yǎng)豐富，味道鮮美，且根、莖、葉均可入藥，主入肝、肺、腎、大小腸諸經(jīng)，具有抗炎[3]、解熱、抗氧化、利尿、抗癌等作用，主治肝炎、肝硬化、肺癌、高血壓、發(fā)燒及防治心腦血管等疾病[4]。目前白背天葵在利用上主要作為一種理想的無(wú)公害特色蔬菜鮮食，尚未見(jiàn)對(duì)其天然有效成分開(kāi)發(fā)利用的研究報(bào)道。

植物中的多酚類(lèi)化合物具有多種生物活性，如具有抗氧化、降血脂、增強(qiáng)身體抵抗力以及防止動(dòng)脈硬化、血栓形成等作用，還具有抑制細(xì)菌與癌細(xì)胞生長(zhǎng)等功效，因此近年來(lái)很多學(xué)者對(duì)多酚類(lèi)化合物的研究引起了廣泛的興趣。前期我們應(yīng)用超臨界CO2萃取法提取白背天葵粗多酚，提取得率為5.32%，但該法提取獲得的粗多酚含有較多雜質(zhì)，影響多酚純度及后續(xù)抗氧化效果的研究，因此有必要對(duì)白背天葵粗多酚進(jìn)行純化。大孔樹(shù)脂純化法是依靠大孔樹(shù)脂和被吸附的分子（吸附質(zhì)）之間的范德華引力，通過(guò)其巨大的比表面進(jìn)行物理吸附，再通過(guò)合適的溶劑洗脫，從而達(dá)到目標(biāo)物質(zhì)分離、純化的目的，近些年來(lái)，大孔樹(shù)脂純化法在天然多酚等功能性活性成分的分離純化中得到廣泛應(yīng)用。白背天葵資源豐富，且含有豐富的多酚類(lèi)物質(zhì)，將白背天葵多酚類(lèi)物質(zhì)作為功能性活性物質(zhì)進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用對(duì)于其高值化產(chǎn)業(yè)鏈延伸具有重要意義。目前，利用大孔樹(shù)脂純化白背天葵多酚及其活性的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，因此本文通過(guò)比較8種不同型號(hào)大孔吸附樹(shù)脂的吸附和解吸能力，篩選出最適宜純化白背天葵多酚的大孔樹(shù)脂，并確定吸附與解吸的最佳純化工藝參數(shù)。以Vc為陽(yáng)性對(duì)照，比較純化前后白背天葵多酚的體外抗氧化活性，旨在為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用白背天葵多酚提供依據(jù)。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 ?材料與試劑 ?白背天葵種植于龍巖學(xué)院植物房?jī)?nèi)。沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（≥98%）、1，1-二苯基-2-三硝基本肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl， DPPH）、2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽[2，2'-azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate）， ABTS]、Vc對(duì)照品（≥98%）購(gòu)自美國(guó)Fluka公司;大孔樹(shù)脂D-101、HPD-300、HP-750、ADS-17、AB-8、DM130、NKA-9、XDA-9購(gòu)自天津鴻博美化工科技有限公司，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.2 ?儀器與設(shè)備 ?UV-1800紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本Shimadzu公司;Bio-TekELX800酶標(biāo)儀，美國(guó)寶特公司;Re-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠。

1.2 ?方法

1.2.1 ?白背天葵多酚粗提物的制備 ?在前期工作的基礎(chǔ)上，采用超臨界CO2萃取法提取白背天葵多酚。取白背天葵莖葉部分于60?℃烘干、粉碎后，在萃取壓力為35 MPa，時(shí)間為2 h，溫度為40?℃、CO2流量20 L/h的條件下進(jìn)行超臨界CO2提取多酚，經(jīng)真空冷凍干燥機(jī)干燥24 h，得到多酚粗提物備用。

1.2.2 ?白背天葵多酚含量的測(cè)定 ?參照文獻(xiàn)[5-7]的方法，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，在765 nm波長(zhǎng)下，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A=0.3527C+0.0316， R2=0.9985，對(duì)照沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中多酚的含量。

1.2.3 ?大孔樹(shù)脂預(yù)處理 ?將大孔樹(shù)脂D-101、HPD-300、HP-750、ADS-17、AB-8、DM130、NKA-9、XDA-9用95%乙醇浸泡24 h后，用蒸餾水洗滌至無(wú)醇味。用5% HCl溶液浸泡12 h，蒸餾水洗至中性，再用5% NaOH溶液浸泡12 h，蒸餾水洗至中性，將樹(shù)脂濾干備用。

1.2.4 ?大孔樹(shù)脂的靜態(tài)吸附與解吸性能 ?分別稱(chēng)取上述8種型號(hào)的大孔樹(shù)脂各1 g，放入100 mL三角瓶中，加入30 mL濃度為1.058 mg/mL的白背天葵多酚溶液，置于25?℃恒溫?fù)u床中，100?r/min振蕩12 h，將吸附飽和的大孔樹(shù)脂用150?mL蒸餾水洗滌，抽濾后，用30 mL 75%的乙醇解吸附12 h。按下式計(jì)算各樹(shù)脂的吸附率與吸附率：

式中，C0為吸附前多酚的質(zhì)量濃度（mg/mL）;C1為吸附后多酚的質(zhì)量濃度（mg/mL）;C2為解吸后多酚的質(zhì)量濃度（mg/mL）。

1.2.5 ?大孔樹(shù)脂的靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線 ?選取上述樹(shù)脂中吸附和解吸效果最好的3種樹(shù)脂，按上述操作，進(jìn)行恒溫振蕩吸附，分別于0.5、1、2、4、8、16 h吸取上清液，在波長(zhǎng)765 nm處測(cè)定吸光度值，計(jì)算吸附率并繪制大孔樹(shù)脂的靜態(tài)吸附曲線。

1.2.6 ?多酚樹(shù)脂吸附單因素試驗(yàn) ?采用濕法裝柱，選取16 mm×20 cm（柱體積約為20 mL）的玻璃層析柱，分別對(duì)上樣液質(zhì)量濃度、上樣量、上樣液pH、上樣液流速進(jìn)行單因素試驗(yàn)，確定各因素的最佳選擇范圍。

1.2.7 ?響應(yīng)面優(yōu)化 ?在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用Design Expert 8.0.6軟件設(shè)計(jì)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，選擇上樣液質(zhì)量濃度（X1）、上樣液pH（X2）、上樣液流速（X3）3個(gè)因素作為自變量，以多酚吸附率為響應(yīng)值，設(shè)計(jì)三因素三水平的響應(yīng)面試驗(yàn)。

1.2.8 ?體外抗氧化活性測(cè)定 ?白背天葵多酚清除DPPH及ABTS自由基的測(cè)定分別參照文獻(xiàn)[8]及文獻(xiàn)[9]的方法，以抗壞血酸為對(duì)照。

1.3 ?數(shù)據(jù)處理

每項(xiàng)試驗(yàn)至少重復(fù)3次，試驗(yàn)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。單因素方差分析及自由基清除率IC50計(jì)算使用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件包。采用Design Expert 8.0.6軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，Origin 8.0軟件制圖。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?樹(shù)脂的篩選

2.1.1 ?大孔樹(shù)脂的靜態(tài)吸附與解吸 ?為了選擇合適的白背天葵多酚純化樹(shù)脂，本文結(jié)合文獻(xiàn)[10-11]純化多酚的基礎(chǔ)上分別選擇了2種極性樹(shù)脂、1種中極性樹(shù)脂、2種弱極性樹(shù)脂和3種非極性樹(shù)脂。由表1可知，吸附效果較好的3種樹(shù)脂分別為AB-8、DM130、D-101，其中DM130的吸附率最高為（87.42±0.58）%;解吸效果較好的4種樹(shù)脂分別是XDA-9、AB-8、DM130和D-101，其中AB-8的解吸率最高為（86.34±0.81）%。綜合考慮吸附率和解吸率這2個(gè)指標(biāo)，我們選擇AB-8、DM130和D-101這3種樹(shù)脂做靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線來(lái)進(jìn)一步篩選。

2.1.2 ?大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線 ?由圖1可見(jiàn)，3種樹(shù)脂對(duì)白背天葵多酚的吸附均為快速平衡型。DM130和AB-8樹(shù)脂在2 h達(dá)到吸附平衡，D-101樹(shù)脂在4 h達(dá)到吸附平衡，平衡后3種樹(shù)脂的吸附動(dòng)力學(xué)曲線均隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸趨于平緩。DM130樹(shù)脂對(duì)白背天葵多酚的最大吸附率大于AB-8和D-101樹(shù)脂的最大吸附率。從節(jié)約時(shí)間和吸附效果考慮，DM130樹(shù)脂更適合富集純化白背天葵多酚類(lèi)化合物，因此，后續(xù)試驗(yàn)采用DM130樹(shù)脂作為純化樹(shù)脂。

2.2 ?大孔樹(shù)脂吸附單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 ?上樣液體積的確定 ?設(shè)定上樣液濃度1?mg/mL、pH 5.0、流速為1.0 mL/min，分段收集流出液，每10 mL收集1管，測(cè)定白背天葵多酚濃度，并繪制動(dòng)態(tài)吸附滲透曲線。如圖2所示，開(kāi)始階段，多酚濃度很低，說(shuō)明多酚幾乎被大孔樹(shù)脂全部吸附，無(wú)滲透;但當(dāng)流出液體積大于70?mL時(shí)，大孔樹(shù)脂吸附有泄漏，說(shuō)明多酚吸附量已基本達(dá)到飽和;當(dāng)流出液體積為130 mL時(shí)，流出液多酚濃度約是上樣液濃度的10%時(shí)，此時(shí)已達(dá)到樹(shù)脂的滲透點(diǎn)，故選擇上樣液體積為130?mL。

2.2.2 ?上樣液質(zhì)量濃度對(duì)白背天葵多酚吸附的影響 ?設(shè)定上樣液pH 5、流速為1.0 mL/min、體積為150 mL，考查當(dāng)上樣液質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/mL時(shí)DM130樹(shù)脂對(duì)白背天葵多酚吸附率的影響。由圖3可知，隨著上樣液質(zhì)量濃度的提高，吸附率呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)。濃度低時(shí)吸附率低，可能是由于樹(shù)脂的表面與多酚分子的接觸面積小，樹(shù)脂未達(dá)到飽和吸附;而當(dāng)濃度增加到一定值后吸附率下降，可能是由于多酚分子含有的羰基和羥基通過(guò)氫鍵而聚合成大分子，不容易被樹(shù)脂吸附基團(tuán)所吸附[12]。本研究選擇上樣液質(zhì)量濃度范圍為0.5～1.5?mg/mL。

2.2.3 ?上樣液pH對(duì)白背天葵多酚吸附的影響 ?上樣液質(zhì)量濃度為1 mg/mL、流速為1.0?mL/min、體積為150 mL，考查當(dāng)上樣液pH分別為1、2、3、4、5、6 時(shí)DM130樹(shù)脂對(duì)白背天葵多酚吸附率的影響。由圖4可知，隨著pH的增加，多酚吸附率先增加后下降，當(dāng)pH為3時(shí)，吸附率達(dá)到最大。其原因可能是當(dāng)溶液pH較小時(shí)，多酚類(lèi)化合物的溶解度在酸性條件下降低，呈現(xiàn)分子形式，可通過(guò)范德華力被樹(shù)脂吸附，但當(dāng)pH過(guò)小時(shí)，因溶液酸性過(guò)強(qiáng)而導(dǎo)致多酚類(lèi)化合物發(fā)生沉淀，所以吸附率不高;當(dāng)pH過(guò)高時(shí)，多酚類(lèi)化合物中的酚羥基容易失去H+，削弱了與溶液中水分子的相互作用力，從而不易被樹(shù)脂吸附[13]。另外，當(dāng)pH過(guò)高時(shí)，大孔樹(shù)脂容易結(jié)塊，不利于多酚的吸附。本研究選擇上樣液pH范圍為2～4。

2.2.4 ?上樣液流速對(duì)白背天葵多酚吸附的影響 ?設(shè)定上樣液質(zhì)量濃度為1 mg/mL、pH為5、體積為150 mL，考查當(dāng)上樣液流速分別為1、2、3、4、5、6 mL/min時(shí)DM130樹(shù)脂對(duì)白背天葵多酚吸附率的影響。由圖5可知，隨著上樣液流速的增加，多酚吸附率逐漸下降，其原因可能為流速較小時(shí)，白背天葵多酚類(lèi)化合物可與樹(shù)脂充分接觸使得吸附率較高[14]。本研究選擇上樣液流速范圍為1～3 mL/min。

2.3 ?響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 ?試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果 ?通過(guò)三因素三水平的Box-Benhnken 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)，考察上樣液質(zhì)量濃度（A）、上樣液pH（B）、上樣液流速（C）對(duì)白背天葵多酚吸附率（R）的影響，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表2。

對(duì)回歸方程進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)分析，結(jié)果如表3所示，該模型極顯著（P<0.0001），相關(guān)系數(shù)R2=0.9950， 校正決定系數(shù)R2adj=0.9886，其失擬項(xiàng)不顯著（P= 0.1575>0.05），說(shuō)明回歸方程擬合度較好，模型試驗(yàn)誤差小，可以用該方程對(duì)白背天葵多酚吸附率進(jìn)行準(zhǔn)確預(yù)測(cè)和分析。模型的A、A2、B2為極顯著，B、AB、C2為顯著。由F值可知，各單因素對(duì)白背天葵多酚吸附率影響的大小順序?yàn)椋篈>B>C;交互項(xiàng)對(duì)吸附率影響的大小順序?yàn)椋篈B>BC>AC。

2.3.2 ?響應(yīng)面分析 ?由圖6可知，上樣液濃度和上樣液pH交互作用最為顯著，上樣液濃度和上樣液流速、上樣液pH和上樣液流速作用均不顯著，這與模型中F值分析結(jié)果相一致。

2.3.3 ?驗(yàn)證試驗(yàn) ?通過(guò)響應(yīng)面回歸方程，得到大孔樹(shù)脂吸附白背天葵多酚的最佳條件為上樣液濃度為1.07 mg/mL，上樣液pH為3.12、上樣液流速2.06 mL/min，在此條件下模型預(yù)測(cè)白背天葵多酚吸附率為90.49%。為方便實(shí)際操作，修正后的條件為上樣液濃度為1 mg/mL，上樣液pH?3.1、上樣液流速2 mL/min，此條件下多酚吸附率為90.38%，與理論值接近，RSD為0.37%。證明該回歸模型是可靠的。

2.4 ?大孔樹(shù)脂解吸單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.4.1 ?乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)白背天葵多酚解吸的影響 ?設(shè)定乙醇洗脫流速為1 mL/min，體積為60 mL，考查當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)分別為 50%、60%、70%、80%、90%、100%對(duì)白背天葵多酚解吸率的影響。由圖7可以看出，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，解吸率先升高后下降，當(dāng)體積分?jǐn)?shù)為70%時(shí)，解吸率達(dá)到最大（88.21%）。因此選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%。

2.4.2 ?洗脫流速對(duì)白背天葵多酚解吸的影響 ?設(shè)定乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%，體積為60 mL，考查當(dāng)流速分別為 1、2、3、4、5、6 mL/min對(duì)白背天葵多酚解吸率的影響。由圖8可以看出，隨著流速的增加，解吸率逐漸減小，但太低的流速不利于工業(yè)化生產(chǎn)，因此，選擇乙醇洗脫流速為2 mL/min。

2.5 ?白背天葵多酚的純化結(jié)果

按上述最佳工藝條件對(duì)白背天葵多酚粗提物進(jìn)行上樣、吸附和洗脫，測(cè)定多酚的含量，再經(jīng)濃縮，真空冷凍干燥。純化結(jié)果表明，白背天葵多酚粗提物中多酚的含量為14.73%，經(jīng)DM101樹(shù)脂純化后多酚的含量為45.21%，約為純化前的3.07倍。

2.6 ?白背天葵多酚體外抗抗氧化活性

2.6.1 ?DPPH方法測(cè)定白背天葵多酚的抗氧化能力 ?如圖9顯示，隨著白背天葵多酚濃度的增加，DPPH自由基清除率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，白背天葵多酚粗提物、純化物及Vc清除DPPH自由基的IC50值分別為131.786、16.574、0.021 mg/mL，說(shuō)明Vc的清除能力強(qiáng)于白背天葵多酚粗提物和純化物，清除率大小順序?yàn)閂c>純化物>粗提物。當(dāng)濃度達(dá)200 mg/mL時(shí)，白背天葵多酚粗提物和純化物對(duì)DPPH自由基的清除率分別為72.19%和88.49%。

2.6.2 ?ABTS方法測(cè)定白背天葵多酚的抗氧化能力 ?對(duì)ABTS自由基的清除效果見(jiàn)圖10，與清除DPPH自由基相似，其清除ABTS自由基的作用也隨著濃度的增加而增加，白背天葵多酚粗提物、純化物及Vc清除ABTS自由基的IC50值分別為74.375、27.456、0.015 mg/mL，當(dāng)濃度達(dá)到200?mg/mL時(shí)，白背天葵多酚粗提物和純化物對(duì)ABTS自由基的清除率分別為81.22%和92.36%。

3 ?討論

大孔樹(shù)脂是一種有機(jī)高聚物吸附劑，因其具有選擇吸附性強(qiáng)、物理化學(xué)穩(wěn)定性高、分離效果好等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于中草藥活性物質(zhì)成分的分離純化，韋琴等[15]利用AB-8型大孔樹(shù)脂富集金雞毛草葉總黃酮，純化后的樣液純度提高了5.24倍;羅磊等[16]利用NKA-9大孔樹(shù)脂對(duì)綠豆皮黃酮進(jìn)行純化，綠豆皮黃酮的純度由28.26%上升到 75.74%;本研究使用DM101大孔樹(shù)脂純化白背天葵多酚，其純度提高了3.07倍，可見(jiàn)使用大孔樹(shù)脂純化中草藥活性物質(zhì)效果明顯。且該方法所用的設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低、操作方便[17]，適于白背天葵多酚的富集與純化。

中草藥具有的獨(dú)特療效，可能與其高效清除體內(nèi)自由基密切相關(guān)，植物多酚類(lèi)物質(zhì)現(xiàn)己被證明是一種天然的抗氧化活性劑，具有較強(qiáng)的清除自由基能力[18]。Sakihama等[19]研究表明，植物多酚能夠清除有害的活性氧種類(lèi)，如O2·–，H2O2，·OH等。本研究表明，白背天葵多酚具有顯著的清除DPPH和ABTS自由基的能力，且純化物的清除能力強(qiáng)于粗提物。植物多酚的抗氧化活性與其含量、結(jié)構(gòu)、種類(lèi)、分子量等有密切的關(guān)系，因此，今后還要對(duì)白背天葵多酚的抗氧化物質(zhì)基礎(chǔ)做進(jìn)一步的研究。

本研究所用的白背天葵多酚純化方法簡(jiǎn)單、快速，且純化效果明顯，白背天葵多酚具有顯著的清除自由基作用，說(shuō)明其具有較強(qiáng)的生物學(xué)活性，具備進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成為保健產(chǎn)品的潛力，同時(shí)本研究也為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用白背天葵多酚提供了一定的技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)

林燕燕， 許新恒， 黃仲慶， 等. 白鳳菜總黃酮對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和凋亡的影響[J]. 廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2019， 58（1）： 54-61.

Lin Y， Huang T， Lin Y， et al. First record of Phytophthora drechsleri on Gynura formosana[J]. Australasian Plant Disease Notes， 2019，14（16）： 1-4.

馬景蕃， 劉喜明， 陳晶晶， 等. 白背天葵不同提取部位抗炎活性及機(jī)制研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2018， 39（2）： 90-93.

Ma J， Guo C， Pan Y， et al. Antioxidant and anti-inflammatory activities of ethyl acetate extract of Gynura formosana （Kitam） leaves[J]. Experimental & Therapeutic Medicine， 2017， 14（3）： 2303-2309.

Conde T， Mussatto S I. Isolation of polyphenols from spent coffee grounds and silverskin by mild hydrothermal pretreatment[J]. Preparative Biochemistry， 2017， 46（4）： 406-409.

Jovanovic A A， Dordevic V B， Zdunic G M， et al. Optimization of the extraction process of polyphenols from Thymus serpyllum L. herb using maceration， heat- and ultrasound-assisted techniques[J]. Separation and Purification Technology， 2017， 179： 369-380.

Sun H， Chen Y， Cheng M， et al. The modulatory effect of polyphenols from green tea， oolong tea and black tea on human intestinal microbiota in vitro[J]. Journal of Food Science and Technology， 2018， 55（1）： 399-407.

Ullah F， Iqbal N， Ayaz M， et al. DPPH， ABTS free radical scavenging， antibacterial and phytochemical evaluation of crude methanolic extract and subsequent fractions of Chenopodium botrys aerial parts[J]. Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences， 2017， 30（3）： 761-766.

Song J， Kim M J， Kim Y J， et al. Monitoring changes in acid value， total polar material， and antioxidant capacity of oils used for frying chicken[J]. Food Chemistry， 2017， 220： 306-312.

Silva E M， Pompeu D R， Larondelle Y， et al. Optimisation of the adsorption of polyphenols from Inga edulis leaves on macroporous resins using an experimental design methodology[J]. Separation & Purification Technology， 2007， 53（3）： 274-280.

Zhang Q， Jia D Y， Yao K， et al. Purification of polyphenols from pomegranate peel by macroporous adsorbent resin[J]. Fine Chemicals， 2007， 24（4）： 345-349.

Fu R， Wang Y， Yu F， et al. Optimization of the macroporous resin-based adsorption of apple polyphenol through response surface methodology[J]. Toxicological & Environmental Chemistry Reviews， 2016， 98（3-4）： 479-491.

Zhuang M， Zhao M， Lin L， et al. Macroporous resin purification of peptides with umami taste from soy sauce[J]. Food Chemistry， 2016， 190： 338-344.

Guo Y， Wang J， Lu L， et al. Application of mid-infrared spectroscopy in analyzing different segmented production of Angelica by AB-8 macroporous resin[J]. Journal of Molecular Structure， 2016， 1103： 61-69.

韋 ?琴， 梅 ?輝， 江詠雪， 等. 金雞毛草葉總黃酮大孔樹(shù)脂的富集及抗氧化活性研究[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā)， 2019， 40（19）： 88-94.

羅 ?磊， 姬青華， 馬麗蘋(píng)， 等. NKA-9大孔樹(shù)脂對(duì)綠豆皮黃酮的純化研究[J]. 中國(guó)食品學(xué)報(bào)， 2019， 19（6）： 157-167.

Zou Y， Zhao， Mouming， Yang， Kun， et al. Enrichment of antioxidants in black garlic juice using macroporous resins and their protective effects on oxidation-damaged human erythrocytes[J]. Journal of Chromatography B-Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences， 2017， 1060： 443-450.

Pulido R， Bravo L， Saura-Calixto F. Antioxidant activity of dietary polyphenols as determined by a modified ferric reducing/antioxidant power assay[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2000， 48（8）： 3396-3402.

Sakihama Y， Cohen M F， Grace S C， et al. Plant phenolic antioxidant and prooxidant activities： phenolics-induced oxidative damage mediated by metals in plants[J]. Toxicology， 2002， 177（1）： 67-80.

責(zé)任編輯：崔麗虹