細(xì)菌性食物中毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的研究分析

蘇小蕓，張春蕾

1.山東省青島市黃島區(qū)疾病預(yù)防控制中心質(zhì)管科，山東青島 266000；2.山東省青島市黃島區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，山東青島 266000

細(xì)菌性食物中毒屬于食物中毒的一種，多發(fā)生在夏季和秋季，在濕度和溫度比較高的環(huán)境中也極易發(fā)生細(xì)菌性食物中毒，我國在近幾年關(guān)于細(xì)菌性食物中毒的報(bào)道有很多。對(duì)于細(xì)菌性食物中毒來說，致病菌主要包括變形桿菌、副溶血性弧菌、腸桿菌屬、克雷伯菌屬、沙雷菌屬等，早期的診斷和治療十分關(guān)鍵，如果患者的病情較重，會(huì)引發(fā)多種并發(fā)癥，嚴(yán)重威脅患者的生命健康[1]。在檢測(cè)細(xì)菌性食物中毒致病菌時(shí)常需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能夠明確致病菌的種類，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，讓醫(yī)生對(duì)癥治療，提升患者的生活質(zhì)量，該次研究采取實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的方法在2017年11月—2018年11月對(duì)80份細(xì)菌性食物中毒標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該次研究的主體是疾病預(yù)防控制中心收到的80份細(xì)菌性食物中毒標(biāo)本。可疑食物、肛拭子及廚房用具涂抹樣分別為28、30、22份。

1.2 方法

利用細(xì)菌鑒定卡和全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀鑒定并檢測(cè)標(biāo)本中的各種細(xì)菌，包括變形桿菌、副溶血性弧菌、金色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、沙門菌和致瀉性大腸埃希菌等。將標(biāo)本放置于對(duì)應(yīng)的選擇性平板中增殖，之后分離到不同的平板上，按照菌落的特點(diǎn)開展血清凝集鑒定與生化試驗(yàn)等一系列檢測(cè)活動(dòng)。

該次試驗(yàn)中使用到的儀器主要有冰箱、電子天平、顯微鏡、保溫箱、檢測(cè)試劑盒、革蘭陰性細(xì)菌生化板、HE平板、MMA平板、兔血漿平板等。該次試驗(yàn)中使用到的試劑主要有濃度是3%的H2O2溶液，動(dòng)力硝酸鹽培養(yǎng)基、乳糖膽鹽發(fā)酵管、肉湯培養(yǎng)基和緩沖葡萄糖蛋白胨水等[2]。

在該次試驗(yàn)中，一切檢查嚴(yán)格施行質(zhì)量控制。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)該次研究檢測(cè)的結(jié)果及不同標(biāo)本中致病菌的檢出率進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

使用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析該次研究中的各項(xiàng)臨床數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料應(yīng)用[n（%）]表示，使用χ2值進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 致病菌檢出分布的結(jié)果

在80份樣本中，共檢測(cè)出致病菌170株，其中變形桿菌和副溶血性弧菌的檢出率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于金色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、沙門菌和致瀉性大腸埃希菌的檢出率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 檢出致病菌種類分布的結(jié)果

2.2 不同標(biāo)本中致病菌檢出率比較

肛拭子標(biāo)本中的致病菌檢出率比可疑食物中致病菌及廚房涂抹樣中的致病菌檢出率更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同標(biāo)本中致病菌檢出率比較

3 討論

食物中毒的病因調(diào)查是一項(xiàng)比較復(fù)雜的工作，影響因素非常多，包括運(yùn)輸、加工、生產(chǎn)、儲(chǔ)存等眾多環(huán)節(jié)，每個(gè)環(huán)節(jié)都有可能引發(fā)食物中毒，人在食用帶有致病菌的食物后，會(huì)出現(xiàn)食物中毒反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能夠檢測(cè)出致病菌的類型，醫(yī)生可以根據(jù)檢測(cè)結(jié)果為患者提供針對(duì)性的治療，有效控制患者病情的發(fā)展，避免二次中毒事件的發(fā)生。通過實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，還可以讓工作人員總結(jié)不同致病菌的中毒體征，研制高效的治療藥物。在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作中，對(duì)儀器和試劑的選擇非常嚴(yán)格，為了確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要采取廣泛取樣的方式，保證檢測(cè)結(jié)果的可信度。

3.1 細(xì)菌性食物中毒檢測(cè)結(jié)果分析

細(xì)菌性食物中毒在全年都有發(fā)生的可能，是一種發(fā)生率比較高的食物中毒類型，掌握細(xì)菌性食物中毒致病菌的分布特點(diǎn)有利于此類型食物中毒的預(yù)防。在夏季、秋季或濕度與溫度比較高的環(huán)境下，食物中以變形桿菌為首的致病菌會(huì)快速的增殖。在我國，人們主要食用米飯和面食，這兩種食物如果長時(shí)間放置，變形桿菌和其他致病菌的數(shù)量會(huì)明顯增多。食用保存時(shí)間過長的米飯或面食時(shí)，如果加熱不徹底，很容易引發(fā)變形桿菌性的食物中毒。副溶血性弧菌這種致病菌大多出現(xiàn)在海產(chǎn)品中，如果人們食用沒有煮熟的海產(chǎn)品，容易令人們出現(xiàn)副溶血性弧菌中毒現(xiàn)象。

在我國，食物中毒大多集中在夏季和秋季，體現(xiàn)出比較明顯的季節(jié)性，第3季度是食物中毒的高峰期，這是由于7、8、9月份的氣溫比較高，適宜微生物的生長和繁殖，在這樣的環(huán)境下，無論是食品還是食品原料都容易出現(xiàn)變質(zhì)的問題；部分食品生產(chǎn)的經(jīng)營單位沒有嚴(yán)格地按照衛(wèi)生要求運(yùn)輸、保存、加工或銷售食品，極易引發(fā)細(xì)菌性食物中毒事件[3]。

在進(jìn)行食物中毒檢測(cè)時(shí)，通常會(huì)比較關(guān)注那些常見致病菌的檢測(cè)，對(duì)易引發(fā)食物中毒的細(xì)菌重視程度不足，除了那些對(duì)人體致病的致病菌以外，還包括一些條件致病菌，包括腸桿菌屬、克雷伯菌屬、沙雷菌屬等，這些致病菌廣泛存在于自然界中的土壤和水中，是人與動(dòng)物以及呼吸道的長居菌。這幾年，條件致病菌導(dǎo)致的食物中毒也時(shí)有發(fā)生，但是因?yàn)檫@些致病菌引起的臨床反應(yīng)比較輕微，檢測(cè)致病菌時(shí)常常會(huì)忽視這些致病菌[4]。為保證致病菌檢測(cè)的效果，還需要考慮條件致病菌因素。如果留樣的食品、肛拭子和環(huán)節(jié)樣本中同時(shí)發(fā)現(xiàn)某類優(yōu)勢(shì)菌，需要加強(qiáng)對(duì)這種細(xì)菌的鑒定，以免漏診。

在細(xì)菌性中毒檢測(cè)中，有時(shí)會(huì)遇到原因不明的細(xì)菌性食物中毒情況，導(dǎo)致這一情況發(fā)生的原因有很多，比方說食品經(jīng)營單位不配合調(diào)查取樣工作、采樣期間患者應(yīng)用抗生素或拒絕采樣、食物中毒的緩報(bào)和遲報(bào)……還有可能是留樣流于形式或留樣的制度不完善，取樣無法反映整個(gè)過程，缺乏環(huán)節(jié)導(dǎo)致的污染，且保存的方法不科學(xué)，通常為冷凍保存，此種保存環(huán)境不利于致病菌的生存[5]。除此之外，還有可能是樣品的采集或檢驗(yàn)技術(shù)等因素導(dǎo)致的檢測(cè)結(jié)果不佳。

該次試驗(yàn)的結(jié)果表明，肛拭子標(biāo)本的致病菌檢出率是53.33%，可疑食物標(biāo)本的致病菌檢出率是10.71%，廚房用具涂抹樣的致病菌的檢出率是27.27%，明顯肛拭子的致病菌檢出率更高（P＜0.05）。肛拭子屬于直接采集患者的標(biāo)本，能夠較為確切地反映患者的致病菌感染情況，此種采樣的方式比較簡(jiǎn)單，能夠隨時(shí)采樣，而可疑食物和廚房用具涂抹樣標(biāo)本受外界因素的影響較大，增菌期間應(yīng)用的增菌液會(huì)引起雜菌的大量繁殖，進(jìn)而影響致病菌檢測(cè)的準(zhǔn)確率[6]。在細(xì)菌性食物中毒的檢測(cè)中，變形桿菌和副溶血性弧菌的占比較高，而且采用肛拭子檢測(cè)的方式檢出效果更理想，在今后的細(xì)菌性食物中毒檢測(cè)中需要充分掌握細(xì)菌性食物中毒致病菌的分布特點(diǎn)，科學(xué)地采集標(biāo)本，采用正確的檢測(cè)技術(shù)和手段，加強(qiáng)質(zhì)量監(jiān)控，保證致病菌的檢測(cè)效果，為患者的病情診斷提供可靠依據(jù)[7]。

3.2 細(xì)菌性食物中毒的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)急監(jiān)測(cè)

①樣本的細(xì)菌培養(yǎng)。在采集完樣本之后，可以隨機(jī)開展分離及增菌培養(yǎng)工作，直接分離能夠檢測(cè)出樣本當(dāng)中的優(yōu)勢(shì)菌，節(jié)省檢測(cè)的時(shí)間，但是此種方法容易漏檢[8]。增菌可以檢出樣本中菌量比較小的致病菌，可以使用增菌液提升致病菌的檢出率。若留樣的食品比較少且需要進(jìn)行多項(xiàng)檢測(cè)，工作人員可以先使用營養(yǎng)肉湯增菌，之后利用培養(yǎng)基增菌，此種檢測(cè)的方法不足之處是檢測(cè)的時(shí)間比較久[9]。

②實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)流程和方法。對(duì)樣品行增菌處理后，可以采取兩種方法檢驗(yàn)，一種是按照以往的方法展開培養(yǎng)鑒定，另一種方法是使用PCR或快檢試劑開展檢測(cè)工作[10]。把熒光PCR用于致病菌的初步篩查，此種方法方便、快捷、靈敏度高，可以基本明確細(xì)菌性食物中毒的類型，具有良好的應(yīng)用效果[11]。

③實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)時(shí)的注意事項(xiàng)?？焖贆z測(cè)方法得出的結(jié)果僅供參考，如果使用PCR檢測(cè)出致病菌，但是經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)沒有檢測(cè)出活菌，不可以報(bào)結(jié)果[12]。針對(duì)那些條件致病菌，一方面需要定性，另一方面還需要定量，比方說變形桿菌的計(jì)數(shù)要＞106 cfu/g，蠟樣芽孢桿菌的計(jì)數(shù)要＞105 cfu/g。若沙門氏菌的血清試驗(yàn)與生化反應(yīng)結(jié)果不一致，需要以生化反應(yīng)結(jié)果為準(zhǔn)[13]。

④加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基的質(zhì)量控制。為滿足應(yīng)急檢測(cè)的需求，實(shí)驗(yàn)室需常備那些常見食物中毒檢測(cè)會(huì)使用到的培養(yǎng)基，在使用時(shí)應(yīng)檢查培養(yǎng)基的使用有效期，以免影響檢測(cè)的結(jié)果，同時(shí)在使用培養(yǎng)基時(shí)還需要按照相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范使用[14]。

3.3 提高細(xì)菌性食物中毒檢測(cè)效率的方法

3.3.1 加強(qiáng)專業(yè)知識(shí)的培訓(xùn)和學(xué)習(xí)，應(yīng)用高效檢測(cè)措施實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員應(yīng)當(dāng)積極學(xué)習(xí)相關(guān)的專業(yè)知識(shí)與技能，在拿到樣品后，先按照流行病學(xué)的調(diào)查結(jié)果分析是否為細(xì)菌性食物中毒[15]。按照潛伏期的不同、患者的癥狀表現(xiàn)、中毒食品種類，初步判斷導(dǎo)致細(xì)菌性食物中毒的致病菌種類[16]。將樣本放置于血平板、TCBS、EMB、SS平板中，將溫度控制為36℃，培養(yǎng)24 h，然后觀察菌落的形態(tài)，與此同時(shí)，把剩余的食物與肛拭子利用GN增菌液、SC增菌液、營養(yǎng)肉湯、氯化鈉結(jié)晶紫增菌液或其他培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌，增菌后劃線到瓊脂平板中，將溫度控制為36℃，培養(yǎng)24 h并觀察菌落的形態(tài)[17]。針對(duì)可疑菌落，使用ID32E腸道桿菌的生化檢定試條開展檢測(cè)工作[18]。

3.3.2 做好實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制工作 強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管控，提升食源性致病菌的檢出率，以此來保證實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。需要確保試驗(yàn)中培養(yǎng)基、血清以及應(yīng)用試劑的質(zhì)量，檢查這些物品的保質(zhì)期，必須在有效期內(nèi)使用，與此同時(shí)，定期利用標(biāo)準(zhǔn)菌株測(cè)定其特異性與敏感性。每天檢測(cè)培養(yǎng)箱的溫度，檢查是否滿足實(shí)驗(yàn)規(guī)定的溫度要求[19]。在采集完標(biāo)本之后妥善保存，立即送往實(shí)驗(yàn)室供實(shí)驗(yàn)檢測(cè)[20]。

4 結(jié)語

綜上所述，在細(xì)菌性食物中毒中，致病菌大部分是變形桿菌和副溶血性弧菌，其他致病菌的占比較少，采用肛拭子檢測(cè)的檢出率高于廚房涂抹樣標(biāo)本和可疑食物標(biāo)本的檢出率。為保證細(xì)菌性食物中毒的檢出率，可以先按照流行病學(xué)分析最有可能是哪種病菌，之后行細(xì)菌培養(yǎng)，采取肛拭子的檢測(cè)方式，準(zhǔn)確判斷細(xì)菌性食物中毒的致病菌。在檢測(cè)期間需要加強(qiáng)質(zhì)量監(jiān)管，以免影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度，通過有效的細(xì)菌性食物中毒檢測(cè)方法為臨床診斷和治療提供可靠依據(jù)。