生后早期高氧暴露對卵清蛋白誘導(dǎo)支氣管哮喘模型小鼠的影響

王 維，朱海艷，鄭亞斐，胡晶晶，包天平，田兆方

南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院新生兒科，淮安市小兒呼吸重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 淮安 223300

支氣管哮喘（哮喘）是兒童最常見的慢性呼吸道疾病之一［1］。我國目前兒童哮喘患者約有3 000萬，且患病率正呈現(xiàn)快速上升趨勢［2］。哮喘的致病可追溯到嬰幼兒期，70%～80%的兒童哮喘發(fā)病于5 歲以前［3］。文獻(xiàn)報(bào)道早產(chǎn)［4］、生后氧療及支氣管肺發(fā)育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）與兒童哮喘的發(fā)生有關(guān)。兒童哮喘以咳嗽、喘息、肺部炎癥和氣道高反應(yīng)性（airway hyperresponsiveness，AHR）為主要特征，而早產(chǎn)兒，尤其是患有BPD的早產(chǎn)兒也經(jīng)常出現(xiàn)類似哮喘的反復(fù)喘息、氣道阻塞和AHR等癥狀［5-6］，其肺功能檢查主要表現(xiàn)為1秒用力呼氣容積（forced expiratory volume in one second，F(xiàn)EV1）和第1 秒用力呼氣量占用力肺活量的百分比（FEV1/FVC）降低［7］，由此被診斷為哮喘的風(fēng)險(xiǎn)增加［8］，但具體原因并不清楚。早產(chǎn)兒及BPD 患兒生后經(jīng)常需要氧氣支持治療，已有動(dòng)物研究證實(shí)新生小鼠早期高氧暴露可損害小鼠的氣道發(fā)育，造成氣道炎癥和AHR的增加［9］，而這與哮喘的發(fā)病密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)即利用BALB/c小鼠在生后早期高氧暴露基礎(chǔ)上建立卵清蛋白（ovalbumin，OVA）誘導(dǎo)的支氣管哮喘小鼠模型，并將之與單純哮喘模型進(jìn)行比較，以研究生后早期高氧暴露對OVA誘導(dǎo)的支氣管哮喘模型小鼠的影響。

1 材料和方法

1.1 材料

自南京醫(yī)科大學(xué)醫(yī)藥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購入出生時(shí)間相差30 min 以內(nèi)的新生BALB/c 小鼠（SPF 級）32只，飼養(yǎng)于南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，環(huán)境溫度恒定（24±2）℃，相對濕度60%～70%，晝夜光照各12 h，自由飲水及采食，飲水及飼料由動(dòng)物中心提供。為減少性別對本組研究的干擾，參照文獻(xiàn)全部選用雌性小鼠。實(shí)驗(yàn)所需FO-2型氧濃度測定儀購自無錫法斯達(dá)醫(yī)學(xué)設(shè)備有限公司，氧氣由淮安圣泰氣體有限公司提供。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組

32 只雌性BALB/c 新生小鼠，記錄出生體重后隨機(jī)分為4 組：空氣+PBS 組、高氧+PBS 組、空氣+OVA組和高氧+OVA組，每組8只。

1.2.2 生后早期高氧暴露

高氧+PBS組及高氧+OVA組新生小鼠出生后4 h內(nèi)置于65 cm×45 cm×70 cm 自制密閉塑料氧箱［氧濃度分?jǐn)?shù)（FiO2）≥95%，由氧氣瓶持續(xù)供氧，氧流量3～4 L/min］中，由FO-2型氧濃度測定儀持續(xù)監(jiān)測，連續(xù)暴露7 d；空氣+PBS組及空氣+OVA組新生小鼠則飼養(yǎng)于同環(huán)境室內(nèi)空氣（FiO2=21%）中。每日開箱1 h，記錄小鼠體重，補(bǔ)充飲水和飼料，更換墊料，并將空氣組母鼠與高氧組母鼠輪換，以防止母鼠氧中毒。7 d 后將高氧+PBS 組及高氧+OVA 組小鼠移出氧箱，與空氣+PBS組及空氣+OVA 組小鼠一同飼養(yǎng)于室內(nèi)空氣中，待其6周齡后以O(shè)VA 誘導(dǎo)支氣管哮喘模型。

1.2.3 OVA誘導(dǎo)支氣管哮喘模型的建立

參照文獻(xiàn)的方法［10］，于第43日齡、50日齡、57日齡分別給予空氣+OVA組與高氧+OVA組新生小鼠腹腔注射混懸致敏液［OVA 1 mg/mL+Al（OH）31 mg/mL］100 μL 進(jìn)行致敏；空氣+PBS 組及高氧+PBS 組新生小鼠腹腔注射等量PBS。于新生小鼠第58日齡起，將空氣+OVA 組與高氧+OVA 組新生小鼠分別置于霧化箱中，霧化吸入激發(fā)液（1%OVA）予以激發(fā)，連續(xù)7 d，每次30 min；空氣+PBS組及高氧+PBS組用等量PBS霧化吸入替代。

1.2.4 標(biāo)本采集

小鼠于第65日齡用10%水合氯醛0.04 mL/10 g腹腔注射麻醉，固定四肢，剪開皮膚暴露胸腔，1 mL注射器肝素沖管抗凝后心尖部取血，1 600g離心10 min后留取血清。繼續(xù)解剖，分離暴露氣管，由氣管上1/3處置入1 mL 注射器針頭并固定，抽取1 mL無菌生理鹽水對氣管、支氣管及肺泡進(jìn)行灌洗，反復(fù)抽吸3次，保證回收率在75%以上，回收的支氣管肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid，BALF）4 000 r/min 離心后分離上清與沉淀，沉淀立即進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，上清置于-80 ℃等待進(jìn)行細(xì)胞因子檢測。灌洗結(jié)束后留取右肺中葉進(jìn)行肺組織病理檢查。

1.2.5 ELISA 檢測小鼠血清IgE 及BALF 中細(xì)胞因子水平

采用ELISA 檢測各組小鼠血清中IgE 水平和BALF 中白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-5、IL-12、IL-13水平。ELISA 試劑盒購自NeoBioscien 公司，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.2.6 BALF細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

將留取的BALF 沉淀涂片，自然晾干，于4%中性多聚甲醛溶液中固定10 min，蘇木精-伊紅（HE）染色，光鏡200 倍視野下隨機(jī)選取4 個(gè)視野進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)（至少計(jì)數(shù)300個(gè)細(xì)胞）。

1.2.7 肺組織標(biāo)本病理檢查

將留取的小鼠右肺中葉固定于4%中性多聚甲醛中，經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟包埋制成蠟塊。切片后經(jīng)HE染色、脫水、透明、封片，在顯微鏡下觀察，計(jì)算氣道壁厚度占?xì)獾揽偯娣e比值以及輻射狀肺泡計(jì)數(shù)值（radical alveolar counts，RAC），并拍照進(jìn)行圖像采集。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠一般生長狀況

出生時(shí)，空氣+PBS組、高氧+PBS組、空氣+OVA組和高氧+OVA 組小鼠體重?zé)o明顯差異；7 日齡時(shí)，高氧+PBS 組、高氧+OVA 組體重相較于空氣+PBS組、空氣+OVA 組明顯減輕，且毛色雜亂，自主活動(dòng)減少；6周齡時(shí)空氣+PBS組、空氣+OVA組之間及高氧+PBS 組、高氧+OVA 組之間體重?zé)o明顯差異，高氧+PBS 組、高氧+OVA 組體重仍較空氣+PBS 組、空氣+OVA組明顯減輕，自主活動(dòng)仍減少，但毛色雜亂程度減輕，外觀幾乎無差別?？諝?OVA組及高氧+OVA組小鼠OVA致敏激發(fā)后出現(xiàn)明顯呼吸急促，口唇發(fā)紺，煩躁、抓耳撓腮等表現(xiàn)。65 日齡處死時(shí)各組體重?zé)o明顯差異（表1）。

表1 各組小鼠體重比較Table 1 Body weight of mice in each group （g，）

表1 各組小鼠體重比較Table 1 Body weight of mice in each group （g，）

與空氣+PBS組比較，*P＜0.05；與空氣+OVA組比較，#P＜0.05。

2.2 小鼠肺組織病理檢查

空氣+PBS 組支氣管及肺泡結(jié)構(gòu)正常；高氧+PBS組肺泡直徑明顯增大，數(shù)量減少，可見肺泡間隔斷裂及少量炎性細(xì)胞浸潤；空氣+OVA 組肺泡大小分布較均勻，數(shù)量正常，但支氣管壁明顯增厚，柱狀上皮增生肥大，支氣管內(nèi)見明顯炎性細(xì)胞浸潤；高氧+OVA 組支氣管壁則更為明顯增厚，柱狀上皮增生肥厚，支氣管管腔狹窄，可見明顯炎性細(xì)胞浸潤，肺泡數(shù)量較多，大小不一（圖1）。空氣+OVA 組、高氧+OVA組可見支氣管壁面積占?xì)獾揽偯娣e比值增加（P＜0.05），高氧+PBS 組、高氧+OVA 組可見RAC明顯減少（P＜0.05，圖2）。

圖1 各組小鼠支氣管及肺泡病理變化（HE）Figure 1 Pathological changes of lung tissue in each group（HE）

圖2 各組小鼠支氣管壁面積占?xì)獾揽偯娣e比值及肺組織RAC值Figure 2 Ratio of wall thickness to airway area and RAC in each group

2.3 小鼠血清IgE水平

各組小鼠血清IgE 水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=40.709，P＜0.05）。空氣+OVA 組血清IgE 含量［（11.84±2.89）ng/mL）］相對于空氣+PBS 組［（3.55±0.91）ng/mL］明顯增高（P＜0.05）；高氧+OVA組血清IgE 含量［（15.63±3.57）ng/mL］相對于空氣+OVA 組［（11.84±2.89）ng/mL］明顯升高（P＜0.05），但空氣+PBS 組［（3.55±0.91）ng/mL］與高氧+PBS 組［（4.38±2.26）ng/mL］IgE水平無差別（P＞0.05，圖3）。

圖3 各組小鼠血清IGE含量比較Figure 3 Serum IgE of mice in each group

2.4 小鼠BALF細(xì)胞計(jì)數(shù)

各組小鼠BALF 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果顯示：與空氣+PBS 組相比，高氧+PBS 組白細(xì)胞總數(shù)明顯上升（P＜0.05），分類計(jì)數(shù)后嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)雖有上升，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空氣+PBS組相比，空氣+OVA 組白細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯升高（P＜0.05）；此外淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)增加，單核細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，但差異都不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空氣+OVA組相比，高氧+OVA組白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著增加（P＜0.05，表2）。

表2 各組小鼠支氣管肺泡灌洗液白細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)比較Table 2 Total WBC count and differential count in BALF in each group （×104個(gè)/mL，）

表2 各組小鼠支氣管肺泡灌洗液白細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)比較Table 2 Total WBC count and differential count in BALF in each group （×104個(gè)/mL，）

與空氣+PBS組比較，*P＜0.05；與空氣+OVA組比較，#P＜0.05。

2.5 小鼠BALF 中細(xì)胞因子IL-5、IL-12、IL-13 水平檢測

與空氣+PBS 組相比，空氣+OVA 組小鼠BALF中IL-5、IL-12 和IL-13 水平均明顯升高（P＜0.05）；高氧+OVA 組相對于空氣+OVA 組，IL-5、IL-13 水平升高，而IL-12水平降低（P＜0.05，表3）。

表3 各組小鼠支氣管肺泡灌洗液中IL-5、IL-12、IL-13水平比較Table 3 IL-5，IL-12，IL-13 measurements in BALF in each group （pg/mL，）

表3 各組小鼠支氣管肺泡灌洗液中IL-5、IL-12、IL-13水平比較Table 3 IL-5，IL-12，IL-13 measurements in BALF in each group （pg/mL，）

與空氣+PBS組比較，*P＜0.01；與空氣+PBS組比較，#P＜0.05；與空氣+OVA組比較，ΔP＜0.01。

3 討論

支氣管哮喘是由多種細(xì)胞（如嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞）和細(xì)胞成分參與的氣道慢性炎癥性疾病，其典型的臨床特征有氣道炎癥、氣道重塑和氣道高反應(yīng)性等［11］。經(jīng)典的OVA 誘導(dǎo)的支氣管哮喘模型小鼠表現(xiàn)為血清IgE 水平升高，肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞大量浸潤和明顯的氣道結(jié)構(gòu)重塑。本研究中空氣+OVA組相對于空氣+PBS 組BALF 中嗜酸性粒細(xì)胞明顯增加，血清IgE 水平升高，肺組織病理切片中可觀察到明顯的氣道狹窄和管壁厚度增加以及炎癥細(xì)胞的大量浸潤，提示本實(shí)驗(yàn)在空氣+OVA 組中成功復(fù)制了經(jīng)典的支氣管哮喘模型。同時(shí)，參照本課題組生后早期高氧損傷致C57BL/6小鼠BPD模型的經(jīng)驗(yàn)［12］，采用出生后4 h 內(nèi)置于95%以上高氧環(huán)境中暴露7 d 的方法，通過比較高氧+PBS 組和空氣+PBS 組肺組織病理可以發(fā)現(xiàn)，前者小鼠肺泡數(shù)量明顯減少，大小不勻，肺泡壁斷裂增加，RAC值降低，由此驗(yàn)證了本課題組C57BL/6 小鼠BPD 模型在BALB/c 小鼠上的一致性。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上另外設(shè)置高氧+OVA組，在生后早期高氧暴露基礎(chǔ)上再進(jìn)行OVA誘導(dǎo)支氣管哮喘模型的建立，以探究生后早期高氧暴露對支氣管哮喘模型小鼠的影響。

本研究發(fā)現(xiàn)，高氧+OVA組相對于空氣+OVA組小鼠支氣管壁明顯增厚，氣道壁厚度占?xì)獾揽傊睆奖壤黠@升高，氣道狹窄明顯，提示生后早期高氧暴露可以促進(jìn)支氣管哮喘對小氣道的結(jié)構(gòu)重塑。同時(shí)，高氧+OVA 組相對于空氣+OVA 組，其肺組織切片中支氣管壁周圍存在更多的炎細(xì)胞浸潤，血清IgE 水平明顯升高，BALF 中白細(xì)胞總數(shù)增加明顯，分類計(jì)數(shù)后發(fā)現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞均增加，嗜酸性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞增加尤為顯著，提示生后早期高氧暴露的哮喘模型小鼠氣道炎癥反應(yīng)更為明顯。

支氣管哮喘與早產(chǎn)［4］、生后氧療及BPD 病史［8］密切相關(guān)。BPD 患兒更容易出現(xiàn)慢性咳嗽、反復(fù)喘息等癥狀，也更容易患有慢性喘息性疾病或被診斷為哮喘。從嬰兒期到成年期，BPD 對患兒肺功能的損害持續(xù)存在，表現(xiàn)為類似哮喘的FEV1和FEV1/FVC降低，呼氣峰流速（PEF）降低，呼吸道氣流阻滯等癥狀［7，13-15］。

氣道重塑是哮喘的重要特征之一。哮喘患者的氣道重塑涉及氣道壁的全層結(jié)構(gòu)，包括氣道上皮、基底膜、固有層、平滑肌和血管［16］，其主要特征包括氣道基底膜增厚［17］，平滑肌細(xì)胞增生［18］，杯狀細(xì)胞化生和黏蛋白分泌增多［19］，細(xì)胞外基質(zhì)增加和膠原蛋白沉積［20-21］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，生后早期高氧暴露同樣造成了相似的小鼠氣道結(jié)構(gòu)損傷和重塑現(xiàn)象。Kumar 等［9］經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，高氧可以促進(jìn)小鼠氣道柱狀上皮增生和肥大、氣道壁厚度和平滑肌厚度增加，細(xì)胞外基質(zhì)中膠原蛋白沉積及肺部血管生成增加。這與本研究在單純高氧和單純哮喘小鼠中觀察到的現(xiàn)象相符合。另外，本研究比較空氣+OVA 組與高氧+OVA 組后發(fā)現(xiàn)生后早期高氧暴露進(jìn)一步加重了支氣管哮喘小鼠的氣道結(jié)構(gòu)損傷與重塑，主要表現(xiàn)為氣道柱狀上皮增生肥大，基底膜增厚，氣道管腔狹窄，氣道壁厚度及其占?xì)獾揽傊睆奖壤黾拥榷几鼮槊黠@，這可能是高氧暴露造成的氣道結(jié)構(gòu)重塑和損傷與哮喘造成的氣道結(jié)構(gòu)重塑相疊加的結(jié)果。研究發(fā)現(xiàn)，IL-13可抑制氣道成纖維細(xì)胞中彈性蛋白的表達(dá)，引起氣道壁硬化和氣道塌陷從而引起氣道阻塞［22］，這與本實(shí)驗(yàn)中高氧+OVA組BALF中IL-13含量增加相一致。此外，高氧暴露帶來的氣道結(jié)構(gòu)損傷可能遷延不愈直至小鼠成年期［17］，這也與臨床上BPD患兒2歲［23］、3歲［24］、6歲［25］、11歲［26］、19 歲［7］及成年期［27］肺功能持續(xù)受損表現(xiàn)相一致，臨床上BPD患兒哮喘發(fā)病率的增加可能與此相關(guān)。

氣道炎癥反應(yīng)增加亦是哮喘的重要特點(diǎn)之一。哮喘患者常表現(xiàn)為由嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及多種細(xì)胞因子驅(qū)動(dòng)的氣道慢性炎癥反應(yīng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)小鼠高氧暴露早期也可出現(xiàn)肺組織中白細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)量增加的急性炎癥反應(yīng)表現(xiàn)［28］，并且至15周齡時(shí)炎癥仍未緩解但轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨图?xì)胞為主的慢性炎癥［9］，這與本研究觀察到的高氧暴露后小鼠65日齡時(shí)BALF中淋巴細(xì)胞的增加相一致。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)經(jīng)高氧暴露后再建立哮喘模型的小鼠BALF中淋巴細(xì)胞增加的現(xiàn)象更為明顯，而CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞在哮喘氣道炎癥的發(fā)生中起著重要作用。

哮喘患者中可以觀察到支氣管周圍淋巴細(xì)胞浸潤和支氣管肺泡灌洗液中活化CD4+T 細(xì)胞增加［29］。CD4+T 淋巴細(xì)胞中的Th1 和Th2 與哮喘的發(fā)生密切相關(guān)。經(jīng)典觀點(diǎn)認(rèn)為哮喘的炎癥反應(yīng)增加是由于體內(nèi)Th1/Th2 失衡所致，哮喘患者中Th2 占優(yōu)勢而Th1 相對較弱［30］。Th1 分泌γ干擾素，Th2 分泌IL-4、IL-5、IL-13 等細(xì)胞因子，兩者處于相互制衡的關(guān)系而保持細(xì)胞因子的分泌相對穩(wěn)定。本研究發(fā)現(xiàn)高氧暴露后哮喘模型小鼠BALF 中IL-5 及IL-13 含量升高較為明顯，提示高氧暴露可能促進(jìn)了Th2 的活化和細(xì)胞因子分泌；而IL-12是Th0向Th1分化的重要誘導(dǎo)因子，本研究中IL-12明顯降低，提示高氧可能抑制了Th0 向Th1 的分化。由此我們推測，生后早期高氧暴露可能加劇了OVA 誘導(dǎo)的哮喘模型小鼠中Th1 向Th2 的偏移，增加了Th2 細(xì)胞因子的分泌。Th2分泌的細(xì)胞因子如IL-4、IL-5、IL-13可參與氣道嗜酸性粒細(xì)胞募集，通過刺激B細(xì)胞分化，增加IgE 產(chǎn)生，誘發(fā)肥大細(xì)胞脫顆粒釋放組胺等導(dǎo)致哮喘氣道炎癥反應(yīng)的發(fā)生。

另外，除了CD4+T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞在過敏性哮喘中也具有重要作用［31］。哮喘患者氣道上皮細(xì)胞存在分泌IL-13 的CD8+T 淋巴細(xì)胞［32］。CD8+T 細(xì)胞缺失的小鼠誘導(dǎo)OVA 哮喘模型后，其BALF 中嗜酸性粒細(xì)胞、IL-13 水平及AHR 表現(xiàn)均明顯降低［33］。BPD 患兒生后氧氣補(bǔ)充治療和缺氧狀況導(dǎo)致體內(nèi)氧化應(yīng)激失常，可誘導(dǎo)線粒體產(chǎn)生大量線粒體活性氧（mitochondrial reactive oxygen species，mROS）［34］，mROS 可通過抑制漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（plasmacytoid dendritic cells，pDCs）抗原吞噬小體中酸性溶酶體蛋白酶活性保護(hù)抗原不被過度水解從而提高pDCs的抗原提呈作用，由此促進(jìn)CD8+T細(xì)胞免疫應(yīng)答的增強(qiáng)［35］。CD8+T細(xì)胞致敏后產(chǎn)生的效應(yīng)記憶性CD8+T細(xì)胞是體內(nèi)IL-13的產(chǎn)生來源之一，可顯著增加OVA 致敏哮喘模型小鼠BALF 中IL-13 水平［36］。另外，BPD 患兒因肺泡發(fā)育受阻常存在缺氧現(xiàn)象，低氧條件可激活缺氧誘導(dǎo)因子，促進(jìn)CD8+T 細(xì)胞向分泌IL-13 的Tc2 細(xì)胞的分化，從而提高體內(nèi)的IL-13水平。IL-13可通過促進(jìn)漿細(xì)胞合成IgE［37］，促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞向肺部遷移［38］，增加氣道上皮細(xì)胞通透性［39］，促進(jìn)杯狀細(xì)胞化生［40］等參與氣道炎癥反應(yīng)的發(fā)生。本研究觀察到高氧暴露后哮喘模型小鼠BALF 中IL-13水平相較于單純哮喘組明顯升高，由此推測生后早期高氧暴露導(dǎo)致的氧化應(yīng)激失常和后續(xù)持續(xù)缺氧狀態(tài)使得肺組織中IL-13升高可能是哮喘模型小鼠氣道炎癥反應(yīng)增加的原因之一。

氣道高反應(yīng)性亦是支氣管哮喘的特征之一。Regal 等［41］發(fā)現(xiàn)高氧+OVA 處理的新生小鼠對乙酰膽堿激發(fā)產(chǎn)生的氣道高反應(yīng)性相對于單純哮喘的新生小鼠明顯增加，其氣道阻力基線水平和引起支氣管收縮的最低激發(fā)劑量均與單純哮喘模型小鼠有明顯差別。但本研究未就高氧+OVA組小鼠進(jìn)行氣道功能評估，此方面還需更多研究以證實(shí)。

有趣的是本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)OVA 誘導(dǎo)哮喘模型的建立后，小鼠原本的高氧肺損傷癥狀似乎得到了減輕，肺泡數(shù)量增加，RAC升高，肺泡發(fā)育停滯狀況似乎得到了改善，受限于本研究樣本量較小，此現(xiàn)象還需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

綜上，本實(shí)驗(yàn)通過在生后早期高氧暴露基礎(chǔ)上進(jìn)行OVA誘導(dǎo)支氣管哮喘模型的建立，證實(shí)生后早期高氧暴露可能通過參與氣道重塑作用和增加氣道炎癥反應(yīng)從而導(dǎo)致哮喘的發(fā)生。