一起由鼠傷寒沙門氏菌和金黃色葡萄球菌混合感染引起食物中毒的實驗室檢測與分析

潘銀玲

（新疆烏魯木齊市米東區(qū)疾病預防控制中心，新疆 烏魯木齊 831400）

0 引言

沙門氏菌屬于腸桿菌科中常見的一個重要的病原性菌屬，除引起傷寒、副傷寒疾病外，還可以引起人類細菌性食物中毒[1]。金黃色葡萄球菌是革蘭氏陽性球菌，屬于葡萄球菌屬。其致病性并不是通過菌體自身，致病力強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶[2]。本事件就是患者食用了被沙門氏菌和金黃色葡萄球菌腸毒素污染的食品引起食物中毒。

1 流行病學調(diào)查

1.1 臨床癥狀。2021年4月30日22點左右，程氏父子及朋友一行4人在本市某餐飲店就餐，主要食用了店主自制的鹵豬耳朵和鹵雞。5月1日凌晨（具體時間患者自述不詳）4名就餐者先后出現(xiàn)頭疼、惡心、腹痛（臍周陣痛）、腹瀉（＞10次/24 h）、發(fā)熱39℃～42℃等程度不同的臨床癥狀，就醫(yī)后診斷為急性腸胃炎。通過及時治療病情好轉(zhuǎn)已出院。

1.2 樣本采集。5月1日上午10時本中心接到報告后迅速組織流調(diào)人員和采樣人員趕往現(xiàn)場進行采樣。①將剩余的鹵豬耳朵和和鹵雞各采500 g；②將生食抹布和熟食抹布各剪取1塊（25 g）；③將生食菜刀、熟食菜刀的涂抹棉拭子各采1份；④將生食菜板和熟食菜板的涂抹棉拭子各采1份。上述8份樣本盛裝于滅菌瓶內(nèi)，立即送往實驗室檢測；⑤收集程氏父子在治療前留存的2份腹瀉標本（另兩名患者已使用過抗生素未采樣）用運送箱運送至實驗室進行檢測。

1.3 實驗室檢測

1.3.1 儀器：智能生化培養(yǎng)箱SPH-250（上海鴻都電子科技有限公司），新華牌立式滅菌器LMQ.C（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司），奧林巴斯光學顯微鏡（日本奧林巴斯公司）

1.3.2 試劑：7.5%氯化鈉肉湯，GN增菌液，亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC），腦心浸出液肉湯（BHI），血平板，腸道菌增菌肉湯，SS瓊脂培養(yǎng)基，沙門氏顯色培養(yǎng)基，志賀氏顯色培養(yǎng)基，三糖鐵瓊脂，微量生化試劑盒均由北京路橋技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)。凍干兔血漿由上海瑞楚生物科技有限公司生產(chǎn)。革蘭氏染液由珠海貝索生物有限公司生產(chǎn)。沙門氏菌屬診斷血清由蘭州生物制品研究所生產(chǎn)。以上試劑和診斷血清均在有效期內(nèi)使用。

1.3.3 檢測方法：根據(jù)《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗》（GB4789-2016）系列標準[3]對采集的樣本進行沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌和致瀉大腸埃希氏菌檢測。①增菌培養(yǎng)。首先將2份腹瀉標本直接劃線接種選擇性瓊脂SS平板和志賀氏顯色培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)24 h。再將餐飲店采集的8份樣本逐一接種到亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液、GN增菌液（志賀氏菌41.5℃厭氧培養(yǎng)20 h）、7.5%氯化鈉肉湯、腸道菌增菌肉湯中于37℃培養(yǎng)24 h；②分離培養(yǎng)。直接劃線培養(yǎng)的2份糞便標本志賀氏顯色培養(yǎng)基上無可疑菌落生長。但SS平板上長有可疑菌落。增菌液SC和7.5%氯化鈉肉湯呈均勻混濁生長，其余增菌液清亮。取SC增菌液和7.5%氯化鈉增菌液分別轉(zhuǎn)種于沙門氏顯色培養(yǎng)基和血平板上，于37℃培養(yǎng)24 h。

2 結(jié)果

2.1 培養(yǎng)特性。直接分離的2份腹瀉標本、增菌培養(yǎng)的2份鹵制品和2份生、熟食抹布6份樣本中都分離出相似的可疑菌落，菌落形態(tài)為SS平板上長有直徑約1～2 mm，圓形凸起，光滑濕潤，多數(shù)無色透明，少數(shù)中心帶黑色的菌落。沙門氏顯色培養(yǎng)基上長有大小不一的紫色菌落，還發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)種于血平板上的生食抹布和鹵豬耳朵也長有相似的可疑菌落，菌落形態(tài)為菌落較大，圓形凸起，光滑濕潤，金黃色略白，菌落周圍可見透明溶血圈。

2.2 鏡檢。挑取直接劃線平板SS或沙門氏顯色培養(yǎng)基上可疑菌落進行革蘭氏染色，鏡檢為G—無芽孢桿菌。挑取血平板上可疑菌落染色鏡檢為G+葡萄球菌。

2.3 沙門氏菌生化試驗，見表1。

表1 可疑菌落生化反應結(jié)果

2.4 沙門氏菌血清學鑒定，見表2。根據(jù)菌落形態(tài)特征及染色鏡檢，生化試驗，血清學試驗，判定6份樣本均檢出沙門氏菌。查沙門氏菌型抗原成分表屬于鼠傷寒沙門氏菌。

表2 可疑菌血清凝集試驗結(jié)果

2.5 金黃色葡萄球菌確證鑒定。血漿凝固酶試驗：挑取生食抹布和豬耳朵血平板上各5個可疑菌落分別接種到5 mL腦心浸出液（BHI）中于36℃培養(yǎng)24 h。取BHI培養(yǎng)物0.3 mL加入0.5 mL血漿（用無菌蒸餾水0.5 mL將凍干血漿溶解）中，震蕩搖勻，置37℃水浴箱內(nèi)，每半小時觀察1次，結(jié)果觀察到1小時后開始凝固，1個半小時后將試管傾斜，呈現(xiàn)凝塊，判定為血漿凝固酶陽性，同時以血漿凝固酶陽性菌株的培養(yǎng)物作對照。

2.6 葡萄球菌腸毒素檢驗。按GB4789.10-2016附錄B葡萄球菌毒素檢驗。直接濃縮法從以上2份金黃色葡萄球菌血漿凝固酶陽性菌中提取腸毒素，用玻片雙相瓊脂擴散法檢測腸毒素為A+D型。

3 結(jié)論

根據(jù)流行病學調(diào)查和以上實驗室鑒定，分析此次中毒事件是由鼠傷寒沙門氏菌和金黃色葡萄球菌腸毒素混合污染食物所致。沙門氏菌是革蘭氏陰性桿菌，是食品、水源及畜產(chǎn)品的重要污染菌。沙門氏菌屬種類繁多，其中引起食物中毒的主要有鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌。沙門氏菌進入腸道后大量繁殖，除使腸道黏膜發(fā)炎外，大量活菌釋放的內(nèi)毒素還會引起機體中毒[4]。因金黃色葡萄球菌腸毒素耐熱性極強，100℃加熱30分鐘都不能完全破壞腸毒素，人若進食含有腸毒素的葡萄球菌污染的食物即可發(fā)生食物中毒[5]。

本案中，店主馬某自述4月30日13點左右鹵制了一鍋豬耳朵和雞肉，鹵熟后未放置冰箱保存，直到當日晚上22點左右程氏父子等4人來店里就餐，食用了高溫環(huán)境下（當日最高氣溫達32℃）存放近9小時的鹵制品，于5月1日凌晨相繼出現(xiàn)疑似食物中毒癥狀，這很有可能食物被細菌污染導致致病菌大量繁殖，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒[6]。該餐飲店衛(wèi)生條件差，沒有定期做清潔消毒工作。盛放食品的容器無生熟標識，存在交叉感染隱患，食品從業(yè)人員衛(wèi)生意識差，缺乏基本的食品安全知識。建議衛(wèi)生監(jiān)管部門加強對食品安全知識的宣傳力度，加強對餐飲服務業(yè)的監(jiān)管力度，完善食品加工、儲存等環(huán)節(jié)的監(jiān)督檢查制度。有效的控制食源性疾病的發(fā)生，真正做到防患于未然。

4 體會

4.1 在實驗室檢測中常采用腹瀉物直接分離與增菌后分離相結(jié)合的方法，一是可以提早出具檢測結(jié)果，再就是增菌培養(yǎng)可以提高目的菌的敏感性。兩者相互補充，既提高檢出率，又縮短檢測周期，為處理突發(fā)公共衛(wèi)生事件爭取寶貴時間。

4.2 對培養(yǎng)基的選擇，沒有任何一種培養(yǎng)基可以全面的保持所有食品的基質(zhì)，所以適當?shù)淖龇ň褪鞘褂门囵B(yǎng)基平行的進行試驗，以提高檢出率。

4.3 采樣時應盡可能采集剩余的食物、患者的排泄物以及食品操作間的涂抹棉拭子送實驗室檢測，以形成完整的證據(jù)鏈。