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    Foretinib衍生物L(fēng)WK-126在不同種屬肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性研究

    2021-07-20 06:25王忠元楊華麗崔杏朱高峰湯磊廖偉科
    中國(guó)藥房 2021年11期
    關(guān)鍵詞:比格孵育樣品

    王忠元 楊華麗 崔杏 朱高峰 湯磊 廖偉科

    中圖分類號(hào) 969.1;R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408(2021)11-1325-05

    DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.11.08

    摘 要 目的:建立測(cè)定肝微粒體中Foretinib衍生物L(fēng)WK-126質(zhì)量濃度的方法,研究其在大鼠、比格犬、人肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性。方法:采用體外肝微粒體孵育體系,將LWK-126分別溶于由還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸溶液?jiǎn)?dòng)的大鼠、比格犬、人肝微粒體孵育體系中,于37 ℃水浴下分別孵育0、5、10、20、30、60 min時(shí)加入含內(nèi)標(biāo)(1 μg/mL甲苯磺丁脲)的乙腈終止反應(yīng),并采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)各孵育體系中LWK-126的質(zhì)量濃度。以Waters BEH C18為色譜柱,以水(含0.01%甲酸)-乙腈(含0.01%甲酸)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,流速為0.4 mL/min,柱溫為30 ℃,進(jìn)樣量為2 μL;離子源為電噴霧電離源,采用正離子模式采集,掃描范圍為m/z 50→1 200。以孵育0 min時(shí)LWK-126的質(zhì)量濃度為參照,計(jì)算其在不同孵育體系中的剩余百分率與酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果:LWK-126檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為0.05~15 μg/mL(R 2=0.999 2),定量下限為0.05 μg/mL,最低檢測(cè)限為0.01 μg/mL,精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)均符合生物樣品定量分析的要求。LWK-126在人、大鼠、比格犬肝微粒體中孵育60 min后的剩余百分率分別為(33.17±4.52)%、(3.14±6.73)%、(1.38±5.85)%,半衰期分別為33.15、11.76、5.62 min,清除率分別為38.45、118.81、245.76 μL/(min·mg)。結(jié)論:成功建立了肝微粒體中LWK-126質(zhì)量濃度的測(cè)定方法。LWK-126在不同種屬肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性排序依次為人>大鼠>比格犬。

    關(guān)鍵詞 LWK-126;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;肝微粒體;代謝穩(wěn)定性

    ABSTRACT? ?OBJECTIVE: To establish the method for the concentration determination of foretinib derivative LWK-126 in liver microsomes, and to study its metabolism stability in liver microsomes of rats, Beagle dogs and human. METHODS: In the in vitro incubation system of liver microsomes, LWK-126 was dissolved in liver microsomal incubation systems of rats, Beagle dog and human initiated by reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate solution. After incubation in water at 37 ℃ for 0,5,10,20,30 and 60 min, the reaction was terminated with acetonitrile containing internal standard (1 μg/mL tolbutamide). UPLC-MS/MS method was applied to determine the concentration of LWK-126 in the incubation systems. The determination was performed on Waters BEH C18 column with mobile phase consisted of water (containing 0.1% formic acid)-acetonitrile (containing 0.1% formic acid) by gradient elution at the flow rate of 0.4 mL/min. The column temperature was 30 ℃, and the sample size was 2 μL. The mass spectral analysis was performed in a positive electrospray ionization mode,and the full MS experiment was run with the selective reaction monitoring mode with a scanning range of m/z 50→1 200. Taking the concentration of LWK-126 at 0 min as reference,the remaining percentage and the enzyme kinetic parameters were calculated. RESULTS: The linear range of LWK-126 was 0.05-15 μg/mL (R 2=0.999 2); the lower limit of quantification was 0.05 μg/mL, and the lowest detection limit was 0.01? ? ? ?μg/mL. The precision, accuracy, extraction recovery and matrix effect all met the analysis requirements of biological samples. The remaining percentage of LWK-126 in liver microsomes of human, rats and Beagle dogs for 60 min were (33.17±4.52)%,(3.14±6.73)%,(1.38±5.85)%; t1/2 of them were 33.15, 11.76, 5.62 min; the clearance rates were 38.45, 118.81, 245.76 μL/(min·mg), respectively. CONCLUSIONS: The method for the content determination of LWK-126 in liver microsomes is established successfully. The order of metabolic stability of LWK-126 in liver microsomes of different species is human>rats>Beagle dogs.

    KEYWORDS? ?LWK-126; UPLC-MS/MS; Liver microsomes; Metabolic stability

    c-Met是受體酪氨酸激酶(RTK)家族Ron亞族中一個(gè)原型成員,是唯一一個(gè)已知的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的高親和力受體(HGFR)[1]。已有研究表明,HGF/c-Met活性與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和腫瘤細(xì)胞的分裂、血管生成、侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥性等密切相關(guān),并在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)異常的高表達(dá)、突變及活性改變[1]。同時(shí),c-Met編碼基因的異常擴(kuò)增、c-Met或HGF的過表達(dá)、c-Met編碼基因的突變都與腫瘤患者的不良預(yù)后有關(guān)[2]。目前,已有4種小分子Met抑制劑獲批在我國(guó)上市,但大部分僅用于治療攜帶Met外顯子14跳躍突變的非小細(xì)胞肺癌患者[3-5]。因此,開發(fā)新型、高效的小分子c-Met抑制劑是目前的一個(gè)重要研究方向。

    化合物L(fēng)WK-126(結(jié)構(gòu)式見圖1)是一個(gè)通過對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和HGF受體抑制劑Foretinib的Linker部分進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾而得到的含咪唑酮酰胺片段的喹啉類衍生物;體外研究表明,LWK-126對(duì)c-Met、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(c-Kit)等多種激酶均表現(xiàn)出較好的抑制活性,半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為1.42、92.6、38.2 nmol/L[6]。此外,LWK-126對(duì)c-Met依賴性腫瘤細(xì)胞的抑制活性優(yōu)于Foretinib,具有一定的開發(fā)價(jià)值[7]。已有研究表明,在新藥研發(fā)早期,對(duì)先導(dǎo)化合物在不同種屬肝微粒體中的體外代謝穩(wěn)定性進(jìn)行研究,可有助于評(píng)價(jià)其代謝差異[8]。為此,本文參考文獻(xiàn)[9-10],建立了肝微粒體中LWK-126質(zhì)量濃度的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS),比較了LWK-126在比格犬、大鼠、人肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性,一方面為L(zhǎng)WK-126的成藥性評(píng)價(jià)提供參考,另一方面為其后續(xù)的體內(nèi)藥效及毒理學(xué)研究的動(dòng)物選擇提供依據(jù)。

    1 材料

    1.1 主要儀器

    本研究所用主要儀器包括XevoG2-XS型UPLC-四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(配有MassLynx V4.1型質(zhì)譜工作站、UNIFI 7.0 數(shù)據(jù)庫,美國(guó)Waters公司)、DK-98-Ⅱ型電熱恒濕水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)、X1型高速離心機(jī)(香港基因有限公司)、JN300-2型氮?dú)獯祾邇x(蘇州吉米諾儀器有限公司)、FA805N型十萬分之一電子天平(上海菁海儀器有限公司)、KH-600E型超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)、DW-86L486型超低溫保存箱(青島海爾股份有限公司)等。

    1.2 主要藥品與試劑

    LWK-126原料藥(批號(hào)20150216,純度>98%)由沈陽藥科大學(xué)提供;甲苯磺丁脲對(duì)照品(內(nèi)標(biāo),批號(hào)M26M7L15275,純度>98%)購自上海源葉生物科技有限公司;煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二鈉(NADP-Na2,批號(hào)718B0225)、葡萄糖-6-磷酸-二鈉(G-6-P-Na2,批號(hào)116B039)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-P-DH,批號(hào)20160725)均購自北京索萊寶科技有限公司;甲醇、乙腈均為色譜純,氯化鎂、檸檬酸鈉等均為分析純,其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格,水為純凈水。

    1.3 肝微粒體

    雄性SD大鼠肝微粒體(批號(hào)MIC254034)、雄性比格犬肝微粒體(批號(hào)MIC257015)均購自上海斯信生物科技有限公司,男女混合人肝微粒體(批號(hào)38292)購自美國(guó)Corning Costar公司,質(zhì)量濃度均為20 mg/mL(以蛋白計(jì))。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 溶液的制備

    2.1.1 LWK-126貯備液 精密稱取LWK-126原料藥適量,用甲醇溶解并定容于10 mL量瓶中,制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的LWK-126貯備液。

    2.1.2 內(nèi)標(biāo)溶液和終止液 精密稱取甲苯磺丁脲對(duì)照品適量,按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備質(zhì)量濃度為1 mg/mL的甲苯磺丁脲內(nèi)標(biāo)溶液。使用前,取上述內(nèi)標(biāo)溶液,用乙腈稀釋成甲苯磺丁脲質(zhì)量濃度為1 μg/mL的終止液。

    2.1.3 還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)輔酶溶液 稱取NADP-Na2 200 mg、G-6-P-Na2 200 mg、氯化鎂133 mg,用水溶解并定容至同一10 mL量瓶中,于-20 ℃下保存,記為A液。稱取檸檬酸鈉44 mg、G-6-P-DH 1 000 U,用水溶解并定容至同一25 mL量瓶中,于-20 ℃下保存,記為B液。使用前,將A液和B液按體積比5 ∶ 1混合均勻,即得NADPH輔酶溶液,其最終濃度為1 mmol/L(以反應(yīng)產(chǎn)物NADPH計(jì))。

    2.2 孵育體系的建立與處理

    取大鼠、比格犬、人肝微粒體各0.1 mg,分別用100 mmol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS,pH=7.4)稀釋至0.5 g/L,隨即加入LWK-126貯備液適量,使最終孵育體系中LWK-126的質(zhì)量濃度為5 μg/mL。將上述溶液于37 ℃水浴中預(yù)孵育5 min后,立即加入NADPH輔酶溶液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)。該孵育體系的總體積為200 μL,其中NADPH的終濃度為1 mmol/L,甲醇的體積分?jǐn)?shù)不超過1%,LWK- 126的終質(zhì)量濃度為5 μg/mL,肝微粒體的終質(zhì)量濃度為0.5 μg/mL。將上述各種屬孵育體系放置在37 ℃恒溫水浴中,分別于孵育0、5、10、20、30、60 min時(shí)加入“2.1.2”項(xiàng)下含內(nèi)標(biāo)的終止液400 μL終止反應(yīng);渦旋均勻,于4 ℃下以16 000 r/min離心10 min,取上清液,用氮?dú)饬鞔蹈?殘?jiān)眉状?00 μL復(fù)溶,再次以16 000 r/min離心10 min,取上清液適量進(jìn)樣分析,考察各個(gè)時(shí)間點(diǎn)LWK-126的質(zhì)量濃度。每個(gè)孵育體系平行操作3次。

    2.3 LWK-126質(zhì)量濃度的測(cè)定方法

    2.3.1 色譜條件與質(zhì)譜條件 以Waters BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)為色譜柱,Waters VanGuard BEH C18(5 mm×2.1 mm,1.7 μm)為保護(hù)柱;以水(含0.01%甲酸)為流動(dòng)相A、乙腈(含0.01%甲酸)為流動(dòng)相A進(jìn)行梯度洗脫(0~0.5 min,5%A;0.5~4.5 min,5%A→98%A;4.5~5 min,98%A→5%A);流速為0.4 mL/min;柱溫為30 ℃;進(jìn)樣量為2 μL。離子源為電噴霧電離源(ESI),離子源溫度為100 ℃;毛細(xì)管電壓為1.5 kV,錐孔電壓為30 V,脫溶劑氣溫度為400 ℃,錐孔氣流量為50 L/h,脫溶劑氣流量為800 L/h;采用選擇反應(yīng)檢測(cè)(SRM),采集正離子,掃描范圍為m/z 50→1 200;數(shù)據(jù)采集分析軟件為Masslynx V4.1,采集時(shí)間為5 min。

    2.3.2 專屬性考察 分別取適量空白孵育樣品(不含待測(cè)物和內(nèi)標(biāo),以高溫滅活的大鼠肝微粒體為介質(zhì),其余按“2.2”項(xiàng)下方法制得)、LWK-126對(duì)照樣品(含待測(cè)物5 μg/mL和內(nèi)標(biāo)1 μg/mL,以高溫滅活的大鼠肝微粒為介質(zhì),按“2.2”項(xiàng)下方法制得)和孵育15 min時(shí)的LWK-126樣品(大鼠肝微粒體,按“2.2”項(xiàng)下方法制得)各適量,按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析,記錄色譜圖。結(jié)果,LWK-126的色譜峰峰形良好,保留時(shí)間約為2.08 min,孵育體系中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾LWK-126的測(cè)定,表明該方法專屬性良好,詳見圖2。

    2.3.3 線性關(guān)系、定量下限與最低檢測(cè)限考察 取“2.1.1”項(xiàng)下LWK-126貯備液適量,加入至經(jīng)高溫滅活的大鼠肝微粒體孵育體系中,制成LWK-126質(zhì)量濃度分別為0.05、0.1、0.5、1、2.5、5、10、15 μg/mL的系列孵育樣品溶液,按“2.2”項(xiàng)下方法處理后,取上清液按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析,記錄峰面積。以LWK-126質(zhì)量濃度(x, μg/mL)為橫坐標(biāo)、LWK-126與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值(y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析,得回歸方程為y=11.16x+0.5? ? (R 2=0.999 2),結(jié)果表明LWK-126檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為0.05~15 μg/mL,定量下限為0.05 μg/mL,最低檢測(cè)限為0.01 μg/mL(按信噪比3 ∶ 1計(jì))。

    2.3.4 準(zhǔn)確度與精密度試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下LWK-126貯備液適量,加入至經(jīng)高溫滅活的大鼠肝微粒體孵育體系中,制成定量下限質(zhì)量濃度(0.05 μg/mL)的孵育樣品溶液和低、中、高質(zhì)量濃度(0.1、2.5、10 μg/mL)的質(zhì)控樣品溶液,各5份。各樣品按“2.2”項(xiàng)下方法處理后,取上清液按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析,記錄峰面積,考察日內(nèi)精密度;連續(xù)測(cè)定3天,考察日間精密度。以實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度與理論質(zhì)量濃度進(jìn)行比較以評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度,結(jié)果以相對(duì)誤差(RE)表示。結(jié)果,定量下限質(zhì)量濃度孵育樣品與各質(zhì)控樣品的日內(nèi)、日間RSD均小于10%,RE均在±6%之內(nèi),表明方法準(zhǔn)確度和精密度良好,詳見表1。

    2.3.5 提取回收率與基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下LWK-126貯備液適量,加入至經(jīng)高溫滅活的大鼠肝微粒體孵育體系中,制成低、中、高質(zhì)量濃度(0.1、2.5、10? ?μg/mL)的質(zhì)控樣品溶液,按“2.2”項(xiàng)下方法處理后,取上清液按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析,記錄峰面積(A1)。將經(jīng)高溫滅活的大鼠肝微粒體孵育體系按“2.2”項(xiàng)下方法處理后,加入LWK-126貯備液適量,制成與上述低、中、高質(zhì)量濃度一致的樣品溶液,按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析,記錄峰面積(A2)。以甲醇配制與上述低、中、高質(zhì)量濃度一致的LWK-126溶液,按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析,記錄峰面積(A3)。每種樣品平行操作5次,計(jì)算提取回收率和基質(zhì)效應(yīng):提取回收率(%)=(A1/A2)×100%,基質(zhì)效應(yīng)(%)=(A2/A3)×100%,結(jié)果見表2。

    2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.1.1”項(xiàng)下LWK-126貯備液適量,加入至經(jīng)高溫滅活的大鼠肝微粒體孵育體系中,制成低、中、高質(zhì)量濃度的孵育樣品溶液(0.1、2.5、10? ? ? ? ? μg/mL),各5份。各樣品按“2.2”項(xiàng)下方法處理后,分別在室溫放置24 h、4 ℃冰箱中冷藏24 h、常溫至-80 ℃反復(fù)凍融3次后,按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析,記錄峰面積,代入回歸方程計(jì)算質(zhì)量濃度。結(jié)果,各孵育樣品溶液質(zhì)量濃度的RSD均小于10%,表明LWK-126孵育樣品溶液在上述條件下穩(wěn)定性良好,詳見表3。

    2.4 LWK-126在肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性

    2.4.1 肝微粒體孵育體系建立的驗(yàn)證 為考察待測(cè)物是否受到非酶催化降解的影響,本研究按“2.2”項(xiàng)下方法設(shè)立空白組(即肝微粒體孵育體系中加入經(jīng)高溫滅活的肝微粒體)和陰性對(duì)照組(即肝微粒體孵育體系中不加入啟動(dòng)因子NADPH輔酶溶液)人、大鼠、比格犬肝微粒體孵育體系,分別于孵育0、5、10、20、30、60 min時(shí)按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析,并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算體系中LWK-126的質(zhì)量濃度。以孵育0 min時(shí)LWK-126的質(zhì)量濃度為參照,以其余各時(shí)間點(diǎn)LWK-126的質(zhì)量濃度與參照的比值計(jì)算剩余百分率。實(shí)驗(yàn)平行操作3次。結(jié)果,LWK-126在空白組和陰性對(duì)照組孵育體系中孵育60 min時(shí)的剩余百分率在101.3%~108.8%(以平均值表示)范圍內(nèi),表明可用本研究所創(chuàng)建的肝微粒體孵育體系對(duì)LWK-126的代謝特征進(jìn)行探究,詳見表4。

    2.4.2 LWK-126在不同種屬肝微粒體中的剩余百分率測(cè)定 按“2.2”項(xiàng)下方法建立人、大鼠、比格犬肝微粒體孵育體系,分別于孵育0、5、10、20、30、60 min時(shí)按“2.3.1”項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析,并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算體系中LWK-126的質(zhì)量濃度,再按“2.4.1”項(xiàng)下方法計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)LWK-126的剩余百分率。實(shí)驗(yàn)平行操作3次。結(jié)果,LWK-126在人、大鼠肝微粒體孵育體系中在5~10 min時(shí)消除最快,而在比格犬肝微粒體孵育體系中則是0~5 min時(shí)消除最快。LWK-126在人、大鼠、比格犬肝微粒體中孵育60 min時(shí)的剩余百分率分別為(33.17±4.52)%、(3.14±6.73)%、(1.38±5.85)%,詳見表5。

    2.4.3 LWK-126在肝微粒體中的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算 在人、大鼠、比格犬肝微粒體中,以LWK-126剩余百分率的自然對(duì)數(shù)(y)與孵育時(shí)間(x)進(jìn)行線性回歸分析,得LWK-126在人、大鼠、比格犬肝微粒體中的回歸方程分別為y人=-0.019 3x人+4.557 1(R 2=0.994 3)、y鼠= -0.059 2x鼠+4.590 0(R 2=0.998 7)、y犬=-0.123 7x犬+4.602 6(R 2=0.992 6)。根據(jù)各線性回歸方程的斜率計(jì)算體外代謝的半衰期(t1/2)與清除率(CLint):t1/2=-0.693/k(k是消除速率常數(shù))、CLint=[(0.693/t1/2)×孵育體積(mL)]/肝微粒體質(zhì)量(mg)[11]。結(jié)果顯示,LWK-126在人、大鼠、比格犬肝微粒體中的t1/2分別為33.15、11.76、5.62 min,CLint分別為38.45、118.81、245.76 μL/(min·mg)。

    3 討論

    本研究成功建立了LWK-126的UPLC-MS/MS定量分析方法,方法的專屬性、線性關(guān)系、定量下限、精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)均符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[12]。為防止溶解藥物的有機(jī)溶劑對(duì)肝微粒體起滅活作用,在實(shí)驗(yàn)操作中保證了孵育總體系中有機(jī)溶劑(甲醇)的體積分?jǐn)?shù)不超過1%,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度[11]。在本研究中,LWK-126加入到孵育體系中的終質(zhì)量濃度為5 μg/mL、加入到孵育體系的肝微粒體的終質(zhì)量濃度為0.5 μg/mL較為合適,因LWK-126的質(zhì)量濃度過高,可能導(dǎo)致肝微粒體中酶系飽和,而質(zhì)量濃度過低又不利于檢測(cè)[11]。

    為進(jìn)一步確認(rèn)本實(shí)驗(yàn)中肝微粒體孵育體系的可靠性,本研究還設(shè)置了空白組與陰性對(duì)照組。結(jié)果顯示,在高溫使酶滅活的空白組以及不加入NADPH輔酶溶液的陰性對(duì)照組中LWK-126的剩余百分率在101.3%~108.8%之間,表明本實(shí)驗(yàn)所建立的肝微粒體孵育體系可靠,可用于對(duì)待測(cè)物L(fēng)WK-126的代謝特征探究。

    根據(jù)t1/2可判斷化合物是否穩(wěn)定,參照標(biāo)準(zhǔn)如下:t1/2<30 min,表明受試物代謝不穩(wěn)定;t1/2在30~90 min之間,表明受試物代謝穩(wěn)定性中等;t1/2>90 min,表明受試物代謝穩(wěn)定性良好[13]。本研究結(jié)果顯示,LWK-126在大鼠肝微粒體(t1/2=11.76 min)、比格犬肝微粒體(t1/2= 5.62 min)中的代謝速率相近且代謝不穩(wěn)定,而在人肝微粒體(t1/2=36.15 min)中的代謝速率相對(duì)于前兩種肝微粒體較慢,屬于中等穩(wěn)定。這表明LWK-126在不同種屬肝微粒體中的代謝速率存在種屬差異,推測(cè)其體內(nèi)代謝穩(wěn)定性不理想,易被細(xì)胞色素P450酶所代謝[8,11],需進(jìn)一步對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾以提高代謝穩(wěn)定性。

    綜上所述,本研究成功建立了測(cè)定肝微粒體中LWK-126質(zhì)量濃度的UPLC-MS/MS法;LWK-126在不同種屬肝微粒體中的代謝穩(wěn)定性排序依次為人>大鼠>比格犬。后期應(yīng)借助高分辨質(zhì)譜及核磁共振等波譜手段對(duì)肝微粒體代謝產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證,明確其體外代謝特征,為設(shè)計(jì)出代謝穩(wěn)定、成藥性好的c-Met抑制劑提供理論依據(jù)。

    參考文獻(xiàn)

    [ 1 ] BIRCHMEIER C,BIRCHMEIER W,GHERARDI E,et al. Met metastasis,motility and more[J]. Nat Rev Mol Cell Bio,2003,4(12):915-925.

    [ 2 ] ENGELMAN J A,ZEJNULLAHU K,MITSUDOMI T,et al. Met amplification leads to gefitinib resistance in lung cancer by activating ERBB3 signaling[J]. Science,2007,316(5827):1039-1043.

    [ 3 ] ZHANG Y Z,XIA M F,JIN K,et al. Function of the c-Met receptor tyrosine kinase in carcinogenesis and associated therapeutic opportunities[J]. Mol Cancer,2018,17(1):45-59.

    [ 4 ] BRADLEY C A,SALTO-TELLEZ M,BARDELLI A,et al. Targeting c-MET in gastrointestinal tumours:rationale,opportunities and challenges[J]. Nat Rev Clin Oncol,2017,14(9):562-576.

    [ 5 ] HUGHES V S,SIEMANN D W. Have clinical trials pro- perly assessed c-Met inhibitors[J]. Trends Cancer,2018,4(2):94-97.

    [ 6 ] LIAO W K,HU G,GUO Z,et al. Design and biological evaluation of novel 4-(2-fluorophenoxy)quinoline derivatives bearing an imidazolone moiety as c-Met kinase inhibitors[J]. Bioorg Med Chem,2015,23(15):4410-4422.

    [ 7 ] 宮平,劉亞婧,趙燕芳,等.含咪唑酮的4-苯氧基取代喹啉類化合物及其應(yīng)用:中國(guó),201510259084.5[P]. 2015- 09-23.

    [ 8 ] WRING S A,SILVER I S,SERABJIT C J. Automated quantitative and qualitative analysis of metabolic stability:a process for compound selection during drug disco- very[J]. Method Enzymol,2002,357:285-296.

    [ 9 ] 饒靜,劉劍敏,吳鵬飛,等.新型他克林衍生物ST09與ST10的體外代謝研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2017,52(11):965-970.

    [10] 鄧星,羅莉婭,茍立平,等.采用UPLC-MS/MS法研究辣薄荷基厚樸酚在不同種屬肝微粒體中的代謝特征[J].中國(guó)藥房,2019,30(2):170-175.

    [11] 張麗,蔡進(jìn),班玉娟,等.采用UPLC-MS/MS法研究樹豆酮酸A在不同種屬肝微粒體中的代謝差異[J].中國(guó)藥房,2019,30(18):2497-2502.

    [12] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:四部[S]. 2020年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2020:466-472.

    [13] WATERBEEMD H V,GIFFORD E. ADMET in silico modelling:towards prediction paradise?[J]. Nat Rev Drug Discov,2003,2(3):192-204.

    (收稿日期:2021-01-15 修回日期:2021-03-16)

    (編輯:鄒麗娟)

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