《中國(guó)藥典》四部通則澄清度檢查法中可能存在問題的探討*

王立新，馬步芳，張培培，姚尚辰，胡昌勤，常 艷

中國(guó)食品藥品檢定研究院 化學(xué)藥品檢定所，北京 102629

溶液澄清度作為一項(xiàng)藥品質(zhì)控項(xiàng)目被各國(guó)藥典廣泛收載[1-3]，其在一定程度上可反映藥品質(zhì)量和生產(chǎn)工藝水平，綜合控制由多種因素引起的藥品質(zhì)量的未知變化[4]。澄清度檢查法系將藥品溶液與規(guī)定的濁度標(biāo)準(zhǔn)液相比較，檢查溶液的渾濁程度[1-3]。主要檢查方法可以分為兩種：目視法和儀器法。歐洲藥典（EP）和英國(guó)藥典（BP）分別自EP5.0 版[5]和BP2005版[6]起在通則“溶液澄清度”中同時(shí)收載了目視法和儀器法，其具體內(nèi)容分別在EP9.2 版[7]和BP2018 版[8]進(jìn)行過(guò)修訂，并明確兩種方法可以相互替代。《中國(guó)藥典》（ChP）2015 年版在原有目視法（第一法）的基礎(chǔ)上新增了濁度儀法（第二法）[9]，并要求“除另有規(guī)定外，應(yīng)采用第一法進(jìn)行檢測(cè)。第一法無(wú)法準(zhǔn)確判斷兩者的澄清度差異時(shí)，改用第二法進(jìn)行測(cè)定，并以其測(cè)定結(jié)果進(jìn)行判斷”[3，9]。

澄清度是檢查溶液的渾濁程度，即濁度。濁度是一種光學(xué)效應(yīng)，是光線與溶液中的懸浮顆粒相互作用的結(jié)果。懸浮固體會(huì)使得通過(guò)溶液的光線發(fā)生散射現(xiàn)象，使其產(chǎn)生渾濁，濁度表征光線透過(guò)溶液時(shí)受到的阻礙程度，是一個(gè)物理參數(shù)[10，11]。在一定濁度范圍內(nèi)，溶液的渾濁程度可以利用儀器進(jìn)行定量測(cè)定，獲得一個(gè)帶有特定單位的數(shù)值[12]。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織在ISO7027 標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)濁度單位給出了明確的定義，單位的復(fù)現(xiàn)依賴于福爾馬肼（formazine）標(biāo)準(zhǔn)溶液，規(guī)定1.25 mg 硫酸肼/L 和12.5 mg 六次甲基四胺/L 水中形成的甲臜聚合物為1度，單位為FTU（Formazin Turbidity Units）[10]。除FTU 外，文獻(xiàn)中常用的濁度單位還有FNU（Formazin Nephelometry Units）[10]和NTU（Nephelometric Turbidity Units）[11]，兩者雖均為福爾馬肼的散射濁度單位，但最初源于不同的專用儀器，并延續(xù)至今。但無(wú)論何種濁度單位，由于其均基于上述的福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液定義，故測(cè)定福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)的示值應(yīng)一致；但由于不同儀器的設(shè)計(jì)差異，不同類型的儀器僅在低濁度范圍（不超過(guò)40NTU）時(shí)，采用FTU、NTU 和FNU 為單位的示值相當(dāng)[5，6，10]。因此應(yīng)留意采用不同類型的儀器，特別是濁度示值單位不同的儀器得到數(shù)據(jù)間的比較。濁度值是對(duì)溶液中所有物質(zhì)總光散射效應(yīng)的表征，由于分子散射現(xiàn)象的存在，即使最理想的純水亦產(chǎn)生濁度，其數(shù)值約為0.010NTU或0.012NTU[13]。

在溶液澄清度檢查中，經(jīng)常會(huì)遇到這樣的問題：不同實(shí)驗(yàn)室間或同一實(shí)驗(yàn)室在不同實(shí)驗(yàn)日間，同一批次樣品與按規(guī)定隨行配制的濁度標(biāo)準(zhǔn)液相比較時(shí)，會(huì)得出截然相反的檢查結(jié)論。特別是使用儀器法時(shí)，此類問題更為明顯。

本文旨在找出上述問題的根源所在，并嘗試給出適宜的解決方案。文獻(xiàn)報(bào)道，采用標(biāo)準(zhǔn)化的操作，通過(guò)與濁度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行比對(duì)的方式，利用濁度儀進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)量，可最大程度上避免實(shí)驗(yàn)偏差[10-15]。因此，本研究采用統(tǒng)一的作業(yè)指導(dǎo)書對(duì)全部實(shí)驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的操作，利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)的方式，探討ChP 四部通則澄清度檢查法中可能存在的問題。

1 材料與方法

1.1 參加實(shí)驗(yàn)室

實(shí)驗(yàn)室共計(jì)14 家：中國(guó)食品藥品檢定研究院、北京市藥品檢驗(yàn)所、上海市食品藥品檢驗(yàn)所；遼寧、江蘇、江西、河南、廣東、海南等省的藥品檢驗(yàn)院；無(wú)錫、大連等藥品檢驗(yàn)所；華北制藥廠、新昌制藥廠、海正藥業(yè)等的藥品檢驗(yàn)室。

1.2 儀器

濁度儀共計(jì)9 個(gè)型號(hào)：HACH 2100N、HACH 2100AN、HACH 2300N、HACH TL2310（均美國(guó)HACH 公司）；HANNA HI83414、HANNA LP2000-11（均意大利HANNA 公司）；Turbiquant 3000IR（德國(guó)Merk 集團(tuán)）；WGZ-200A（上海昕瑞儀器儀表公司）；WGZ-200（上海精密科學(xué)儀器公司）。

紫外分光光度計(jì)共計(jì)8 個(gè)型號(hào)：Agilent8453（美國(guó)Agilent 公司）；UV-2700、UV-2600、UV-2550A、UV-2550、UV-2450（均日本島津公司）；Lambda 35（美國(guó)Perkin Elmer 公司）；TU-1901（北京普析通用儀器公司）。使用情況見表1。

表1 14 家比對(duì)實(shí)驗(yàn)室所用儀器、試劑和濁度儀校準(zhǔn)液的信息匯總

1.3 試劑

硫酸肼共計(jì)6 個(gè)來(lái)源單位，見表1。六亞甲基四胺（烏洛托品）共計(jì)6 個(gè)來(lái)源單位，見表1。上述試劑均為分析純。

1.4 方法

不同實(shí)驗(yàn)室間采用統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化作業(yè)指導(dǎo)書，按ChP2020 年版四部0902 澄清度檢查法和0401 紫外-可見光光度法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[3]。

1.5 方法比對(duì)作業(yè)指導(dǎo)書

1.5.1 基本要求 各實(shí)驗(yàn)室由1 名實(shí)驗(yàn)人員按作業(yè)指導(dǎo)書要求在三個(gè)不同實(shí)驗(yàn)日完成實(shí)驗(yàn)；每個(gè)實(shí)驗(yàn)日測(cè)定前，濁度儀應(yīng)采用儀器自帶的、在效期內(nèi)校準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)。濁度儀應(yīng)在有效校準(zhǔn)周期內(nèi)。

1.5.2 濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備 按ChP 2020 年版四部0902 澄清度檢查法[3]配制濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液并提供原始記錄，方法比對(duì)全程中須使用同一份濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.5.3 濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的制備 在第一、二、三實(shí)驗(yàn)日，分別取濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液20.0、15.0、10.0 mL，各置1000 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，制成濁度標(biāo)準(zhǔn)原液SY1、SY2、SY3。濁度標(biāo)準(zhǔn)原液可在48 h 內(nèi)使用，用前搖勻。注意：濁度標(biāo)準(zhǔn)原液SY1、SY2、SY3 的紫外吸收值不需滿足ChP2020 年版四部0902 中規(guī)定“在550 nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定，其吸光度應(yīng)在0.12～0.15 范圍內(nèi)”的要求[3]，只需記錄其在550 nm 波長(zhǎng)處的實(shí)際紫外吸光度數(shù)值即可。

1.5.4 濁度標(biāo)準(zhǔn)液的制備 在第一、二、三實(shí)驗(yàn)日，分別取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液SY1、SY2、SY3 與水，按表2 配制，即得。濁度標(biāo)準(zhǔn)液應(yīng)臨用時(shí)制備并充分搖勻。

各級(jí)濁度標(biāo)準(zhǔn)液編號(hào)應(yīng)與濁度標(biāo)準(zhǔn)原液SY1、SY2、SY3一一對(duì)應(yīng)：濁度標(biāo)準(zhǔn)原液SY1 對(duì)應(yīng)濁度標(biāo)準(zhǔn)液S1-0.5、S1-1、S1-2、S1-3、S1-4；濁度標(biāo)準(zhǔn)原液SY2 對(duì)應(yīng)濁度標(biāo)準(zhǔn)液S2-0.5、S2-1、S2-2、S2-3、S2-4；濁度標(biāo)準(zhǔn)原液SY3 對(duì)應(yīng)濁度標(biāo)準(zhǔn)液S3-0.5、S3-1、S3-2、S3-3、S3-4。

1.5.5 各濁度液紫外吸光度的測(cè)定 在第n 個(gè)實(shí)驗(yàn)日（n=1、2、3），取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液SYn 和濁度標(biāo)準(zhǔn)液Sn-0.5、Sn-1、Sn-2、Sn-3、Sn-4 適量，分別置1 cm 吸收池中，按ChP2020 年版四部0401 紫外-可見光光度法[3]，在550 nm 的波長(zhǎng)處分別測(cè)定其吸光度值；測(cè)定時(shí)每個(gè)溶液讀取吸光度值兩次，按儀器顯示位數(shù)作原始記錄。

1.5.6 各濁度液濁度值的測(cè)定 在第n 個(gè)實(shí)驗(yàn)日（n=1、2、3），取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液SYn、濁度標(biāo)準(zhǔn)液Sn-0.5、Sn-1、Sn-2、Sn-3、Sn-4 適量，各置于儀器常規(guī)配置檢測(cè)管（池）中，例如：直徑為25 mm 檢測(cè)管，分別測(cè)定其濁度值；如可行，再另取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液和各級(jí)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)液，各置于小容量檢測(cè)管（池）中，例如：直徑為13 mm 檢測(cè)管，分別測(cè)定其濁度值。

操作注意事項(xiàng)：檢測(cè)管（池）中加入適量溶液，應(yīng)使液面完全超過(guò)濁度儀的入射光路，且每次測(cè)定時(shí)檢測(cè)管中加入的溶液量需盡量保持一致。測(cè)定每個(gè)溶液的濁度時(shí)，需待濁度儀示值穩(wěn)定后再讀取濁度值。

2 結(jié)果與討論

2.1 各國(guó)藥典中濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液、原液和各級(jí)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)液配置規(guī)定的比較

福爾馬肼具有良好的純度和穩(wěn)定性，其在溶液中可以形成不同長(zhǎng)度的聚合物，并可以隨機(jī)折疊得到顆粒大小和形態(tài)具有廣泛性的濁度液，與供試品中可能存在的顆粒大小與形態(tài)近似吻合[5，6]，因此各國(guó)藥典均采用福爾馬肼混懸液作為濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液[1-3]，這與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織在ISO7027 標(biāo)準(zhǔn)中所給濁度值的溯源保持一致[10]。由于濁度單位的復(fù)現(xiàn)完全依賴于福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液，因此ISO7027 對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制進(jìn)行了嚴(yán)格的規(guī)定[10]，各國(guó)藥典中濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液、濁度標(biāo)準(zhǔn)原液和各濃度濁度標(biāo)準(zhǔn)液的配制方法也均有規(guī)定[1-3]。EP9.2版[7]和BP2018 版[8]雖然對(duì)原有EP5.0 版[5]和BP2005 版[6]通則“溶液澄清度”章節(jié)進(jìn)行了修訂，但濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液、原液和各級(jí)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)液的配制要求并未發(fā)生實(shí)質(zhì)改變。將EP[1]、BP[2]、ChP[3]和ISO7027[10]中的配制過(guò)程進(jìn)行比較：各國(guó)藥典對(duì)濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液和濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的配制要求基本一致（見表2），均為“按規(guī)定精密量取適量的濁度標(biāo)準(zhǔn)原液和規(guī)定量的水混勻”[1-3]，而ISO7027 則強(qiáng)調(diào)“按規(guī)定精密量取適量福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液加水稀釋至規(guī)定體積”[10]。

表2 各級(jí)號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液配制規(guī)定

對(duì)EP[1]、BP[2]和ChP[3]中濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液、原液和各濁度標(biāo)準(zhǔn)液的配制規(guī)定作進(jìn)一步比較，其中，濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制中的最大差異在于是否將硫酸肼置于105 ℃干燥至恒重，ChP 規(guī)定硫酸肼應(yīng)在105 ℃干燥至恒重[3]；濁度標(biāo)準(zhǔn)原液配制規(guī)定中的最大差異在于是否在550 nm 波長(zhǎng)處對(duì)原液的吸光度進(jìn)行控制，僅ChP 規(guī)定濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的吸光度A 范圍應(yīng)為0.12～0.15[3]；1～4（I～I(xiàn)V）號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液的配制規(guī)定保持一致，但ChP 中收載了0.5 號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液的配制方法[3]。除上述三點(diǎn)外，EP9.2 版[7]和BP2018 版[8]在修訂時(shí)增加了對(duì)配制過(guò)程的溫度要求，即全部配制應(yīng)在（25±3）℃條件下完成。而ISO7027對(duì)配制過(guò)程的溫度控制更為嚴(yán)格，要求應(yīng)在（25±1）℃的恒溫箱或恒溫水浴中完成[10]。這些差異是否是造成不同實(shí)驗(yàn)室間或同一實(shí)驗(yàn)室日間誤差的根本原因？已有文獻(xiàn)報(bào)道，在ChP2015 年版四部0902 規(guī)定的吸光度A 范圍（0.12～0.15）內(nèi)，采用同一濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制的濁度標(biāo)準(zhǔn)原液具有不同的吸光度數(shù)值；利用濁度儀測(cè)定各濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的濁度數(shù)值，發(fā)現(xiàn)各標(biāo)準(zhǔn)濁度液的濁度值與其對(duì)應(yīng)的紫外吸光度值間存在良好的線性關(guān)系，且ChP2015 年版四部0902 所規(guī)定的吸光度下限對(duì)應(yīng)的濁度值僅為上限對(duì)應(yīng)濁度值的75%[13]。

2.2 各國(guó)藥典中濁度儀法的比較

濁度儀利用入射光通過(guò)溶液時(shí)產(chǎn)生的透射光或散射光的變化來(lái)測(cè)量溶液的濁度[3]。與目視法比較，濁度儀測(cè)定不再依靠實(shí)驗(yàn)人的視覺敏銳度，可以提供一個(gè)無(wú)偏差的測(cè)定數(shù)值[1，2]。

EP、BP 和ChP 在通則“溶液澄清度”章節(jié)中均已收載了濁度儀法，但在儀器類型、測(cè)量單位、濁度標(biāo)準(zhǔn)液定義值、系統(tǒng)適用性、供試品溶液檢查、結(jié)果判定和其他要求等方面存在明顯差異[1-3]，且EP9.2 版[7]和BP2018 版[8]又對(duì)該章節(jié)中的規(guī)定進(jìn)行了多處實(shí)質(zhì)性修訂[1，2]，其差異見表3。

表3 各國(guó)藥典中溶液澄清度濁度儀法的差別

按照濁度儀使用規(guī)范和各國(guó)藥典規(guī)定[1-3]，濁度儀在使用前應(yīng)采用濁度標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，從而確保儀器示值可以正確溯源至ISO7027 標(biāo)準(zhǔn)中定義的單位。因此，采用不同的儀器測(cè)定不同濃度的福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，無(wú)論單位是否一致，測(cè)定結(jié)果都將具有可比性，這是實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)的基礎(chǔ)。

2.3 實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)結(jié)果

針對(duì)各國(guó)藥典濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液、原液和各濁度標(biāo)準(zhǔn)液的配制規(guī)定，其中兩個(gè)關(guān)鍵性差異引發(fā)思考：①按各國(guó)藥典規(guī)定制備的濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濃度是否一致？其濁度值是否均為其定義的4000NTU？②ChP 四部通則澄清度檢查法中通過(guò)吸光度對(duì)濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的濃度（濁度）進(jìn)行質(zhì)控，不同實(shí)驗(yàn)室間制備的濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的濁度值與其紫外吸光度間是否存在定量關(guān)系？為回答上述兩點(diǎn)疑問，本研究對(duì)濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液、原液和各濁度標(biāo)準(zhǔn)液的配制方法開展實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)。

本次比對(duì)試驗(yàn)涉及14 家實(shí)驗(yàn)室、共計(jì)15 臺(tái)濁度儀，濁度儀常規(guī)配置的檢測(cè)管（池）容量約為20～30 mL，其中6 家實(shí)驗(yàn)室共計(jì)7 臺(tái)濁度儀還配備有容量為5～10 mL 的小容量檢測(cè)管（池），此6 家實(shí)驗(yàn)室同時(shí)采用常規(guī)檢測(cè)管（池）和小容量檢測(cè)管（池），分別測(cè)定同一份濁度原液或標(biāo)準(zhǔn)液。對(duì)全部上報(bào)數(shù)據(jù)按不同容量的檢測(cè)管（池）分別匯總，并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。首先，由于福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液的濁度值與其濃度成直線關(guān)系[1-3，10]，故可利用各實(shí)驗(yàn)室濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的濁度測(cè)定值和稀釋倍數(shù)計(jì)算出濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濁度數(shù)值，其中，采用常規(guī)配置檢測(cè)管（池）的計(jì)算結(jié)果見表4；采用小容量檢測(cè)管（池）的計(jì)算結(jié)果見表5。第二，假設(shè)福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液的濁度值與其在550 nm 波長(zhǎng)處的吸光度數(shù)值成線性關(guān)系，利用各實(shí)驗(yàn)室的濁度數(shù)值（NTU）（Y）和對(duì)應(yīng)的吸光度值（X）進(jìn)行線性擬合，其中，采用常規(guī)配置檢測(cè)管（池）的擬合方程參數(shù)見表4；采用小容量檢測(cè)管（池）的擬合方程參數(shù)見表5。

2.4 存在問題的探討

2.4.1 通過(guò)吸光度限值方式控制福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液濁度的合理性探討 通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)室比對(duì)試驗(yàn)，首先可以確認(rèn)各實(shí)驗(yàn)室按ChP2020 年版四部0902 規(guī)定配制出的濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濁度并不一致。由表4 可知，各實(shí)驗(yàn)室所配制濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液中濁度最大值（實(shí)驗(yàn)室H）和最小值（實(shí)驗(yàn)室N）分別為5369NTU 和3586NTU，兩極值間相差約1.5 倍，其中最小值與文獻(xiàn)結(jié)果基本一致[13]。EP10.0 版和BP2020 版中對(duì)濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濁度定義值均為4000NTU[1，2]。第二，在各個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部，濁度標(biāo)準(zhǔn)原液、各級(jí)號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液的濁度值與其各自溶液在550 nm 處對(duì)應(yīng)的吸光度數(shù)值呈良好的直線關(guān)系（見表4、表5），相關(guān)系數(shù)約為0.999 9，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果基本一致[13]；但匯總各實(shí)驗(yàn)室間的全部濁度值和吸光度值的擬合方程，相關(guān)系數(shù)卻降至0.9，其原因?yàn)楦鲗?shí)驗(yàn)室的擬合方程的斜率間存在較大差異（見表4、表5），其中具有最大、最小斜率值的濁度值和吸光度直線方程和文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)據(jù)間的比較由圖1 可見，提示：不同實(shí)驗(yàn)室獲得的福爾馬肼溶液具有不同的濁度數(shù)值。造成這一現(xiàn)象的可能原因主要包括兩點(diǎn)：第一，ISO7027 標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的各濃度福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液必須是硫酸肼和六次甲基四胺以1∶10 的質(zhì)量比在水中形成的甲臜聚合物，該聚合物為具有不同長(zhǎng)度且可以隨機(jī)折疊形成的混合物，其形成過(guò)程需在（25±1）℃的恒溫箱或恒溫水浴中避光靜置24 h，再加適量水稀釋至特定濃度[10]。當(dāng)配制濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液時(shí)，若硫酸肼和六次甲基四胺的比例或形成甲臜聚合物的過(guò)程發(fā)生變化時(shí)，貯備液中聚合物的長(zhǎng)度和隨機(jī)折疊結(jié)構(gòu)都將隨之發(fā)生改變，使得混合物的屬性出現(xiàn)差異。第二，根據(jù)朗伯-比爾定律（Lambert-Beer law）對(duì)同一物質(zhì)而言，在特定波長(zhǎng)下其吸收系數(shù)為物理常數(shù)，因此可以利用吸光度對(duì)吸光物質(zhì)的濃度進(jìn)行控制。綜合上述兩點(diǎn)原因：在不同實(shí)驗(yàn)室間，按ChP 四部通則“澄清度檢查法”規(guī)定配制出的濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液中，甲臜聚合物混合物的屬性可能出現(xiàn)差異，故各濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的吸光系數(shù)將不再是統(tǒng)一的常數(shù)，此時(shí)將無(wú)法利用吸光度對(duì)濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的濃度（濁度）進(jìn)行有效質(zhì)控；但在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部，由于濁度標(biāo)準(zhǔn)原液和各級(jí)號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液均由同一濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液稀釋而成，則濁度值與其吸光度之間形成了良好的直線關(guān)系。

圖1 在不同實(shí)驗(yàn)室中各福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液的濁度值與吸光度間的線性方程

表4 采用常規(guī)配置檢測(cè)管（池）得到的福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液濁度值與吸光度的線性方程參數(shù)和濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液計(jì)算的濁度值

表5 小容量檢測(cè)管（池）獲得各福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)溶液的濁度值與吸光度間線性方程的參數(shù)和濁度標(biāo)

這就是造成“不同實(shí)驗(yàn)室間或同一實(shí)驗(yàn)室在不同實(shí)驗(yàn)日間、同一批次樣品與按規(guī)定及隨行配制的濁度標(biāo)準(zhǔn)液相比較時(shí)，會(huì)得出截然相反的檢查結(jié)論”的根本原因。舉例說(shuō)明，假設(shè)某批次原料藥，其“溶液的澄清度”標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為“如顯渾濁，與II 號(hào)/2 號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，不得更深”，采用濁度儀法常規(guī)配置的檢測(cè)管（池）對(duì)其溶液濁度進(jìn)行測(cè)定，濁度值為5.50NTU。若按EP10.0 版和BP2020 版進(jìn)行判定，II 號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液的定義值為6NTU[1，2]，則該批原料藥的澄清度符合規(guī)定；若在本次比對(duì)中對(duì)該樣品按ChP2020 年版標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定，根據(jù)表4 中濁度值和吸光度直線方程參數(shù)，分別計(jì)算出吸光度A 為0.12和0.15 時(shí)，實(shí)驗(yàn)室H（得到的濁度值-吸光度直線方程的斜率值最大）、實(shí)驗(yàn)室N（得到的濁度值-吸光度直線方程的斜率值最?。岫葮?biāo)準(zhǔn)原液的對(duì)應(yīng)濁度數(shù)值，并根據(jù)稀釋倍數(shù)關(guān)系計(jì)算出各實(shí)驗(yàn)室中各級(jí)號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液的濁度數(shù)值（考慮到數(shù)字修約和紫外分光光度計(jì)顯示位數(shù)兩個(gè)因素，代入計(jì)算的A 值分別為0.11500 和0.15499），其計(jì)算結(jié)果見表6。將該批原料藥的濁度值5.50NTU 與表6 中2 號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液的數(shù)值進(jìn)行比較，則吸光度A 在0.12～0.15 時(shí)，該批原料藥的澄清度在實(shí)驗(yàn)室H、實(shí)驗(yàn)室N 的判定結(jié)果分別為“符合規(guī)定”和“無(wú)法判定”，而采用文獻(xiàn)數(shù)據(jù)則應(yīng)判斷為“不符合規(guī)定”。

表6 本次比對(duì)中部分實(shí)驗(yàn)室和已發(fā)表文獻(xiàn)中濁度標(biāo)準(zhǔn)原液和各濁度標(biāo)準(zhǔn)液的計(jì)算濁度值—常規(guī)配置檢測(cè)管（池）

2.4.2 小容量檢測(cè)管（池）使用過(guò)程中存在問題的探討 由表4 和表5 結(jié)果可知，在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部采用常規(guī)配置檢測(cè)管（池）和小容量檢測(cè)管（池）測(cè)定同一濁度標(biāo)準(zhǔn)原液，推算濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濁度值時(shí)會(huì)得到不同的結(jié)果，小容量檢測(cè)管（池）得到的數(shù)值明顯小于常規(guī)配置檢測(cè)管（池）的結(jié)果，此與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致[13]。其原因是由于在校準(zhǔn)儀器時(shí)僅對(duì)常規(guī)配置檢測(cè)管（池）進(jìn)行了校準(zhǔn)（見表1），而未使用小容量檢測(cè)管（池）對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)或?qū)Σ捎贸Ｒ?guī)配置檢測(cè)管（池）的校準(zhǔn)結(jié)果按小容量檢測(cè)管（池）進(jìn)行修正。本次比對(duì)僅實(shí)驗(yàn)室D在采用常規(guī)配置檢測(cè)管（池）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提下，同時(shí)上報(bào)了以采用常規(guī)配置檢測(cè)管（池）測(cè)定結(jié)果，小容量檢測(cè)管（池）測(cè)定的修正和未修正結(jié)果，其修正結(jié)果與常規(guī)配置檢測(cè)管（池）測(cè)定的結(jié)果間無(wú)顯著性差異。

3 結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)結(jié)果表明，ChP 四部通則“澄清度檢查法”存在兩個(gè)方面的問題：第一，其規(guī)定的濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制方法無(wú)法確保對(duì)濁度單位的準(zhǔn)確再現(xiàn)，致使不同實(shí)驗(yàn)室或同一實(shí)驗(yàn)室、不同次配制的濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的濁度數(shù)值可能存在較大差異。第二，在濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液存在差異的前提下，利用控制吸光度的方法無(wú)法對(duì)濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的濃度（濁度）進(jìn)行有效質(zhì)控，即具有不同濁度數(shù)值的濁度標(biāo)準(zhǔn)原液可能對(duì)應(yīng)于相同的吸光度數(shù)值。

我們建議：首先，提升《中國(guó)藥典》四部通則0902 第二法濁度儀法的檢驗(yàn)地位，同EP 10.0 版和BP 2020 版一致，規(guī)定目視法和濁度儀法兩種方法可以相互替代[1，2]。第二，將濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液、原液和各濁度標(biāo)準(zhǔn)液由自行配制修訂為使用相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，并刪除對(duì)濁度標(biāo)準(zhǔn)原液在550 nm 波長(zhǎng)處吸光度的規(guī)定。第三，對(duì)于濁度儀法，在保證儀器計(jì)量溯源性的前提下，可采用具體濁度數(shù)值作為限度判定標(biāo)準(zhǔn)，而非與各級(jí)號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行隨行比較判定結(jié)果。