血清微小RNA-210、白細(xì)胞介素-17水平與急性腦梗死患者頸動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性

楊 潔, 王本孝, 王俊珺

(安徽皖北煤電集團(tuán)總醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科, 安徽 宿州, 234000)

急性腦梗死(ACI)起病急，需及時(shí)進(jìn)行有效的治療，故早期快速而準(zhǔn)確地診斷病情非常重要[1]。動(dòng)脈粥樣硬化形成頸動(dòng)脈狹窄、閉塞，造成腦組織局部缺血或頸內(nèi)動(dòng)脈急性閉塞、斑塊脫落是ACI發(fā)病的重要機(jī)制，頸動(dòng)脈狹窄程度與ACI的發(fā)生、病情程度、預(yù)后均有緊密關(guān)聯(lián)[2]。微小RNA(miRNA)目前已被應(yīng)用于相關(guān)疾病的臨床診斷與鑒別中，其中微小RNA-15b(miR-15b)、微小RNA-210(miR-210)是目前熱門(mén)關(guān)注miRNA。miR-210已被證實(shí)與腦損傷、神經(jīng)元凋亡有一定聯(lián)系[3], 可能也與ACI頸動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)。此外相關(guān)研究[4]表明, miR-210表達(dá)與ACI患者炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。除miRNA外，炎癥反應(yīng)也參與了ACI患者頸動(dòng)脈狹窄進(jìn)程，多種炎癥因子表達(dá)異常與頸動(dòng)脈狹窄有關(guān)[5]。炎癥因子中，白細(xì)胞介素-17(IL-17)被證實(shí)能誘導(dǎo)粒細(xì)胞集落刺激因子表達(dá)，增加基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)，可誘導(dǎo)斑塊破裂，與動(dòng)脈粥樣硬化關(guān)系密切[6]。由此推測(cè), miR-210、IL-17可能與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度也存在一定聯(lián)系，但目前尚未明確。本研究重點(diǎn)分析了miR-210、IL-17與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇本院2019年1月—2020年12月收治的95例ACI患者作為研究對(duì)象，患者與家屬均對(duì)研究知情且自愿簽署同意書(shū)。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 符合《中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2014》[7]中ACI的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)腦部CT或MRI檢查確診ACI者; ② 頸動(dòng)脈超聲檢查確診頸動(dòng)脈狹窄者; ③ 病變部位為頸內(nèi)動(dòng)脈供血區(qū)域者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 短暫性腦缺血者; ② 有腦梗死病史者; ③ 合并其他心腦血管疾病者; ④ 合并感染性疾病或免疫性疾病者; ⑤ 近期(1個(gè)月內(nèi))使用免疫抑制劑或抗炎藥物者。95例患者中，男58例，女37例; 年齡43～85歲，平均60.00歲(58.00, 62.00); 體質(zhì)量指數(shù)為18.23～25.75 kg/m2, 平均22.02 kg/m2(21.83, 22.27); 發(fā)病至入院時(shí)間3～12 h, 平均7.24 h(6.72, 7.61)。

1.2 方法

1.2.1 血清指標(biāo)檢測(cè)方法: ① 炎癥因子水平。采集4 mL空腹靜脈血, 3 500轉(zhuǎn)/min(半徑10 cm)離心10 min,-20 ℃下保存待測(cè)，使用上海酶聯(lián)免疫科技有限公司提供的試劑盒以酶聯(lián)免疫法測(cè)定IL-17、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平。② miRNA水平。采集2 mL空腹靜脈血, 3 000轉(zhuǎn)/min(半徑12 cm)離心10 min,-80 ℃下保存待測(cè)。加入1 mL的Trizol RNA(美國(guó)Invitrogen公司)提取RNA，使用紫外分光光度計(jì)(美國(guó)THERMO公司, ND-1000N)檢測(cè)RNA總純度，達(dá)標(biāo)(1.8～2.0)后通過(guò)反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)用2﹣△△Ct法[△Ct=Ct(miR-15b)-Ct(U6)、△Ct=Ct(miR-210)-Ct(U6)]計(jì)算血清miR-15b、miR-210相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.2 頸動(dòng)脈狹窄程度評(píng)估方法和分組方法: 患者入院后1周內(nèi)完成相關(guān)檢查，通過(guò)數(shù)字減影血管造影(DSA)、CT血管成像(CTA)等影像學(xué)檢查方法測(cè)定頸動(dòng)脈狹窄范圍。根據(jù)頸動(dòng)脈狹窄范圍評(píng)估患者頸動(dòng)脈狹窄程度為重度狹窄(狹窄范圍>70%)、中度狹窄(狹窄范圍為50%～70%)、輕度狹窄(狹窄范圍<50%)，并分別納入重度狹窄組、中度狹窄組、輕度狹窄組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料均經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，偏態(tài)分布的數(shù)據(jù)以[M(P25,P75)]表示，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)，血清指標(biāo)與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性采用Kendall′s tau-b相關(guān)性分析檢驗(yàn)，偏態(tài)分布變量間相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 頸動(dòng)脈狹窄程度

本研究95例ACI患者頸動(dòng)脈狹窄范圍的檢查結(jié)果顯示, 23例(24.21%)患者頸動(dòng)脈狹窄范圍>70%, 屬于重度狹窄, 40例(42.11%)患者頸動(dòng)脈狹窄范圍為50%～70%, 屬于中度狹窄, 32例(33.68%)患者頸動(dòng)脈狹窄范圍<50%, 屬于輕度狹窄。

2.2 3組ACI患者基線資料及血清指標(biāo)水平比較

3組患者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、發(fā)病至入院時(shí)間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05); 重度狹窄組患者miR-15b、miR-210表達(dá)水平低于中度狹窄組、輕度狹窄組患者, IL-17、IL-1β、TNF-α水平高于中度狹窄組、輕度狹窄組患者，中度狹窄組患者miR-15b、miR-210表達(dá)水平低于輕度狹窄組患者, IL-17、IL-1β水平高于輕度狹窄患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 中度狹窄組患者TNF-α水平與輕度狹窄組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組ACI患者基線資料及血清指標(biāo)水平比較[n(%)][M(P25, P75)]

2.3 血清指標(biāo)與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性分析

Kendall′s tau-b相關(guān)性分析顯示, miR-15b、miR-210與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.001), 而IL-17、IL-1β、TNF-α與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度呈正相關(guān)(P<0.001)。見(jiàn)表2。

表2 血清指標(biāo)與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度的相關(guān)性

2.4 miR-210與IL-17的相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示, ACI患者的血清miR-210水平與血清IL-17水平呈顯著負(fù)相關(guān)(rs=-0.697,P<0.001)。

3 討 論

ACI是臨床常見(jiàn)的腦血管疾病，也是目前導(dǎo)致腦血管疾病患者殘疾的因素之一。頸動(dòng)脈狹窄是ACI患者的主要病因之一，且頸動(dòng)脈狹窄程度與ACI患者預(yù)后情況存在密切聯(lián)系[8-9]。由此可見(jiàn)，分析ACI頸動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)指標(biāo)對(duì)ACI患者的早期診治具有較為重要意義。ACI患者發(fā)病后存在不同程度缺血、缺氧，而缺血、缺氧會(huì)影響miRNA變化，多種miRNA在腦缺血、腦缺氧、再灌注損傷等過(guò)程中均有一定調(diào)節(jié)作用[10]。其中, miR-210在腦缺血發(fā)生后表達(dá)異常，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[11]表明, miR-210在腦缺血后血管新生過(guò)程中有一定促進(jìn)作用, miR-210與ACI進(jìn)展有關(guān)。炎性因子介導(dǎo)的炎癥免疫反應(yīng)也參與ACI頸動(dòng)脈狹窄的發(fā)生發(fā)展, IL-17是一種分泌于T淋巴細(xì)胞亞群的促炎因子，對(duì)各種炎癥反應(yīng)均有一定促進(jìn)作用，可能也與ACI的進(jìn)展相關(guān)[12]。由此推測(cè)，miR-210、IL-17可能與ACI頸動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)。

本研究相關(guān)性分析結(jié)果顯示, miR-15b、miR-210與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度呈負(fù)相關(guān)，而IL-17、IL-1β、TNF-α與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度呈正相關(guān)。因miR-15b、IL-1β、TNF-α與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)系數(shù)較小，本研究重點(diǎn)分析miR-210、IL-17與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度的關(guān)系。miR-210與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度相關(guān)可能是由于miR-210是一種缺氧激活因子，與機(jī)體缺血、缺氧具有緊密聯(lián)系，而ACI患者存在不同程度的缺血缺氧，從而影響miR-210水平[13]。同時(shí), miR-210在缺氧環(huán)境中可促進(jìn)新生血管形成，從而改善機(jī)體缺血缺氧, miR-210低表達(dá)可能會(huì)降低其減輕腦缺血損傷的作用，弱化miR-210抑制ACI頸動(dòng)脈狹窄進(jìn)展的作用[3, 14]。因此，隨著miR-210表達(dá)水平的降低, ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度加重。在ACI疾病發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中，炎癥反應(yīng)起著一定作用, IL-17通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥因子，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞趨化，可增加白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)等因子釋放，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成和發(fā)展，從而加重頸動(dòng)脈狹窄程度[15-16]。同時(shí), IL-17可增加調(diào)控因子、粒細(xì)胞集落刺激因子等因子生成，而這些細(xì)胞因子具有促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的作用[17]。此外, IL-17還會(huì)刺激巨噬細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶，誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)的降解而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂，因此, IL-17間接加重了頸動(dòng)脈狹窄[18]。相關(guān)研究[19]證實(shí), miRNA參與ACI患者的免疫調(diào)節(jié)、信號(hào)傳導(dǎo)等，從而影響機(jī)體炎癥反應(yīng)，且兩者可以相互調(diào)節(jié)。

本研究Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示, ACI患者血清miR-210水平與血清IL-17水平呈負(fù)相關(guān)。分析原因, miR-210對(duì)JAK激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(JAK/STAT)信號(hào)途徑具有調(diào)節(jié)作用，而JAK/STAT涉及多種信息，具有重要的修復(fù)和抗炎作用，可能抑制炎癥因子，利于IL-17下調(diào)[20]。因此, miR-210與IL-17存在聯(lián)系，兩者可能相互作用，共同參與并影響ACI患者的頸動(dòng)脈狹窄過(guò)程。

綜上所述，血清miR-210低表達(dá)、IL-17高表達(dá)與ACI患者頸動(dòng)脈狹窄程度加重有關(guān)，且血清miR-210水平與IL-17水平呈負(fù)相關(guān)，兩者可能相互影響并共同參與ACI患者的頸動(dòng)脈狹窄過(guò)程。