子宮內(nèi)膜癌的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與PD-L1表達(dá)的相關(guān)性及臨床意義

梁婷　　黃慧艷　　雷先華　　李榮

[摘要] 目的 探討子宮內(nèi)膜癌的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與PD-L1表達(dá)的相關(guān)性及臨床意義。 方法 選取2016年1月至2018年12月在我院病理庫(kù)中搜集所有行手術(shù)治療切除子宮的內(nèi)膜癌標(biāo)本共120例，采用免疫組化的方法標(biāo)記錯(cuò)配修復(fù)蛋白MLH1、MSH2、PMS2和MSH6，檢測(cè)其表達(dá)水平，以（+）和（-）記錄各抗體表達(dá)情況。采用免疫組化的方法標(biāo)記PD-L1蛋白，以（+）和（-）記錄抗體的表達(dá)情況。統(tǒng)計(jì)分析120例子宮內(nèi)膜癌患者的微衛(wèi)星狀態(tài)與臨床病理特征、PD-L1表達(dá)的相關(guān)性。 結(jié)果 120例子宮內(nèi)膜癌患者中，MSI 40例，MSS 80例，分別占總數(shù)的33.3%、66.7%。MSI和MSS患者的年齡、體質(zhì)量指數(shù)、病理分期、組織分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。MSI患者的子宮內(nèi)膜癌組織、免疫及腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)陽性率分別為50.0%、42.5%，明顯高于MSS患者的26.3%、17.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Spearman相關(guān)分析顯示，子宮內(nèi)膜癌的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與PD-L1表達(dá)顯著相關(guān)（P<0.05）。敏感性、特異性和準(zhǔn)確性分別為50.0%（20/40）、73.8%（59/80）、65.8%（79/120）。 結(jié)論 子宮內(nèi)膜癌的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性會(huì)上調(diào)子宮內(nèi)膜癌組織、免疫及腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)，可以作為PD-1/PD-L1途徑免疫治療子宮內(nèi)膜癌的生物標(biāo)志物。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜癌;微衛(wèi)星不穩(wěn)定性;PD-L1表達(dá);相關(guān)性;臨床意義

[中圖分類號(hào)] R737.33? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2021）11-0122-03

Correlation between microsatellite instability and PD-L1 expression in endometrial carcinoma and its clinical significance

LIANG Ting1? ?HUANG Huiyan2? ?LEI Xianhua1 LI Rong1

1.Department of Pathology，Ganzhou Cancer Hospital in Jiangxi Province， Ganzhou 341000， China; 2.Department of Pathology，the People′s Hospital of Yudu County in Jiangxi Province，Yudu 342300，China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between microsatellite instability （MSI） and PD-L1 expression in endometrial carcinoma and its clinical significance. Methods A total of 120 cases of endometrial carcinoma specimens from the pathological database of our hospital from January 2016 to December 2018 were collected. The mismatch repair proteins MLH1， MSH2， PMS2 and MSH6 were labeled by the immunohistochemistry method，and their expression levels were detected. The expression of each antibody was recorded by（+）and（-）. The expression of PD-L1 protein was labeled by the immunohistochemistry method， and the expression of antibody was recorded by （+） and （-）. The correlation between microsatellite status （MSS） and clinicopathological features and PD-L1 expression in 120 patients with endometrial carcinoma was analyzed statistically. Results Among 120 patients with endometrial carcinoma，there were 40 cases of MSI and 80 cases of MSS， accounting for 33.3% and 66.7% of the total respectively. There were no statistically significant differences between all patients with MSI and MSS in age， body mass index，pathological stage，degree of tissue differentiation， depth of muscle infiltration and lymph node metastasis（P>0.05）. The positive rates of PD-L1 expression in endometrial carcinoma tissue，immunity and tumor cells in patients with MSI were 50.0% and 42.5%， which were significantly higher than those of 26.3%， 17.5% in patients with MSS， with significant difference（P<0.05）. It was shown by Spearman correlation analysis that MSI in endometrial carcinoma was significantly correlated with PD-L1 expression（P<0.05）. The sensitivity，specificity and accuracy were 50.0%（20/40），73.8% （59/80） and 65.8%（79/120）， respectively. Conclusion MSI in endometrial carcinoma can up-regulate the expression of PD-L1 in endometrial carcinoma tissue， immunity and tumor cells， which can be used as a biomarker of PD-1/PD-L1 immunotherapy for endometrial carcinoma.

[Key words] Endometrial carcinoma; Microsatellite instability; PD-L1 expression; Correlation; Clinical significance

子宮內(nèi)膜癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，晚期患者療效不佳。有文獻(xiàn)報(bào)道，存在MSI的散發(fā)性內(nèi)膜癌患者預(yù)后不良[1]。部分國(guó)外學(xué)者認(rèn)為[2]，MSI可作為免疫治療反應(yīng)的生物標(biāo)志物，使晚期子宮內(nèi)膜癌患者接受抗PD-1治療，并從中獲益。本研究統(tǒng)計(jì)分析了我院病理庫(kù)中2016年1月至2018年12月所有行手術(shù)治療切除子宮的內(nèi)膜癌標(biāo)本共120例的臨床資料，旨在通過檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌的MSI表型和PD-L1表達(dá)情況，并分析其相關(guān)性及表達(dá)的意義，最終探討存在MSI的子宮內(nèi)膜癌患者是否更適于接受PD-1/PD-L1抑制劑的治療，將新的依據(jù)提供給晚期患者的個(gè)體化精準(zhǔn)治療，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院病理庫(kù)中2016年1月至2018年12月所有行手術(shù)治療切除子宮的內(nèi)膜癌標(biāo)本共120例，選取腫瘤組織及癌旁（距離至少1 cm）組織各一塊，統(tǒng)一搜集出組織蠟塊，并記錄相關(guān)患者基本信息和臨床病理信息。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)手術(shù)病理檢查確診為子宮內(nèi)膜癌者;②均符合子宮內(nèi)膜癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]者;③術(shù)中均清除淋巴結(jié)者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有子宮內(nèi)膜癌以外的腫瘤病史者;②有其他部位腫瘤者;③術(shù)前接受過放化療及激素等治療者。

1.3 方法

將收集的組織蠟塊切片、烤片后，隨機(jī)分批次上全自動(dòng)免疫組化儀，采用半自動(dòng)的方法，人工滴加一抗，實(shí)驗(yàn)完成后洗片、封片、鏡檢。所有病理切片由兩名不參與本研究的病理醫(yī)生判讀，整張切片>10%目標(biāo)細(xì)胞陽性即判定為陽。采用免疫組化的方法標(biāo)記錯(cuò)配修復(fù)蛋白MLH1、MSH2、PMS2和MSH6，檢測(cè)其表達(dá)水平，以（+）和（-）記錄各抗體表達(dá)情況。MSI-H（高頻度微衛(wèi)星不穩(wěn)定性）：四個(gè)錯(cuò)配修復(fù)蛋白2個(gè)或以上表達(dá)缺失;MSI-L（低頻度微衛(wèi)星不穩(wěn)定性）：四個(gè)錯(cuò)配修復(fù)蛋白中只有一個(gè)發(fā)生表達(dá)缺失;MSS（微衛(wèi)星穩(wěn)定性）：四個(gè)錯(cuò)配修復(fù)蛋白均未見表達(dá)缺失[4]。按照以上標(biāo)準(zhǔn)將免疫組化結(jié)果進(jìn)行分類、整理。采用免疫組化的方法標(biāo)記PD-L1蛋白，以（+）和（-）記錄抗體的表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn);采用Spearman秩相關(guān)分析進(jìn)行相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 120例子宮內(nèi)膜癌患者的微衛(wèi)星狀態(tài)與臨床病理特征的相關(guān)性分析

120例子宮內(nèi)膜癌患者中，MSI 40例，MSS 80例，分別占總數(shù)的33.3%、66.7%。MSI和MSS患者的年齡、體質(zhì)量指數(shù)、病理分期、組織分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 120例子宮內(nèi)膜癌患者的微衛(wèi)星狀態(tài)與PD-L1表達(dá)的相關(guān)性分析

120例子宮內(nèi)膜癌患者中，MSI患者的子宮內(nèi)膜癌組織、免疫及腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)陽性率分別為50.0%、42.5%，明顯高于MSS患者的26.3%、17.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是常見的女性生殖道惡性腫瘤，無論是我國(guó)還是歐美國(guó)家，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率均逐年增高[5]。對(duì)于病灶局限于子宮的早期患者，手術(shù)即可達(dá)到較好的治療效果，但當(dāng)患者已存在轉(zhuǎn)移病灶或疾病復(fù)發(fā)時(shí)，傳統(tǒng)的治療方法療效有限，患者預(yù)后通常較差[6]。為此類患者探索新的治療方法已成為當(dāng)務(wù)之急。

近年來，臨床不斷深入研究了多種惡性腫瘤，在腫瘤的發(fā)生中，多基因突變發(fā)揮著重要作用，其中包括抑癌基因突變、錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)缺失[7]。錯(cuò)配修復(fù)基因（MMR genes）在細(xì)胞內(nèi)負(fù)責(zé)修復(fù)堿基錯(cuò)配，復(fù)制錯(cuò)誤陽性或微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）會(huì)在錯(cuò)配修復(fù)基因突變的情況下發(fā)生，增加整個(gè)基因組不穩(wěn)定性，從而引發(fā)抑癌基因、癌基因的一系列改變，促進(jìn)各種腫瘤的發(fā)生[8]。錯(cuò)配修復(fù)基因是一組看家基因，高度保守，一方面在基因組穩(wěn)定性發(fā)揮著重要作用，另一方面還在DNA復(fù)制的忠實(shí)性中發(fā)揮著重要作用[9]?，F(xiàn)階段，PMS2、MSH2、MSH6、MLH1是較為常見的錯(cuò)配修復(fù)基因。由于子宮內(nèi)膜細(xì)胞具有頻繁的DNA復(fù)制，因此堿基錯(cuò)配率及MMR基因突變率高[10]。MMR系統(tǒng)修復(fù)功能會(huì)在MMR基因突變的情況下發(fā)生障礙，進(jìn)而造成MMR蛋白失表達(dá)，無法對(duì)DNA復(fù)制過程中細(xì)胞缺失和錯(cuò)誤滲入進(jìn)行修復(fù)，促進(jìn)染色體交換不均、復(fù)制錯(cuò)誤、滑鏈錯(cuò)配等現(xiàn)象的發(fā)生，從而改變微衛(wèi)星DNA長(zhǎng)度，促進(jìn)MSI的發(fā)生，影響正常細(xì)胞的增殖調(diào)控，促進(jìn)廣泛腫瘤易感的出現(xiàn)，并以較快的速度將一些癌基因、抑癌基因中的突變積累起來，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤形成[11]。近年來，臨床不斷深入研究了腫瘤微環(huán)境、腫瘤細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)信號(hào)通路、靶向免疫檢查點(diǎn)的治療等免疫治療給腫瘤患者帶來了新的希望[12]。

T細(xì)胞活化是腫瘤免疫的核心。PD-1（PDCD1，即程序性死亡受體1）是一種免疫共抑制受體，在T細(xì)胞表面發(fā)揮著重要作用，主要在活化的T細(xì)胞表面表達(dá)。PD-1結(jié)合其配體程序性死亡受體配體1（PD-L1，PDCD1LG1）后會(huì)對(duì)T細(xì)胞的增殖、分化進(jìn)行抑制，同時(shí)使T細(xì)胞處于無功能狀態(tài)，從而對(duì)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)進(jìn)行抑制。PD-1/PD-L1抑制劑治療是指將PD-1/PD-L1負(fù)性調(diào)節(jié)免疫的作用消除，解除抑制免疫檢查點(diǎn)的作用，從而恢復(fù)效應(yīng)T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行特異性識(shí)別與殺傷的功能[13]。有研究報(bào)道[14]，PD-1、PD-L1抗體能夠持久性消退晚期腫瘤，使患者能夠?qū)Σ涣挤磻?yīng)耐受，保持穩(wěn)定的病情。在復(fù)發(fā)及難治性非小細(xì)胞肺癌、黑色素瘤等疾病的治療中，PD-1/PD-L1抑制劑的應(yīng)用前景極為廣闊。目前有關(guān)免疫檢查點(diǎn)抑制劑在子宮內(nèi)膜癌中的應(yīng)用相關(guān)臨床研究并不多。部分學(xué)者認(rèn)為[15]，MSI可作為免疫治療反應(yīng)的生物標(biāo)志物，使晚期子宮內(nèi)膜癌患者接受抗PD-1治療，并從中獲益。

前期實(shí)驗(yàn)已發(fā)現(xiàn)，在散發(fā)性子宮內(nèi)膜癌中有相當(dāng)一部分患者存在MSI表型，本研究旨在通過檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌的MSI表型和PD-L1表達(dá)情況，并分析其相關(guān)性及表達(dá)的意義，最終探討存在MSI的子宮內(nèi)膜癌患者是否更適于接受PD-1/PD-L1抑制劑的治療，為晚期患者的個(gè)體化精準(zhǔn)治療提供新的依據(jù)。本研究結(jié)果顯示，120例子宮內(nèi)膜癌患者中，MSI 40例，MSS 80例，分別占總數(shù)的33.3%、66.7%。MSI和MSS患者的年齡、體質(zhì)量指數(shù)、病理分期、組織分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。MSI患者的子宮內(nèi)膜癌組織、免疫及腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)陽性率均顯著高于MSS患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Spearman相關(guān)分析顯示，子宮內(nèi)膜癌的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與PD-L1表達(dá)顯著相關(guān)。敏感性、特異性和準(zhǔn)確性分別為50.0%（20/40）、73.8%（59/80）、65.8%（79/120），提示微衛(wèi)星不穩(wěn)定表型與PD-L1表達(dá)存在相關(guān)性，存在微衛(wèi)星不穩(wěn)定表型的患者均伴有PD-L1高表達(dá)。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性會(huì)上調(diào)子宮內(nèi)膜癌組織、免疫及腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)，可以作為PD-1/PD-L1途徑免疫治療子宮內(nèi)膜癌的標(biāo)志物。

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（收稿日期：2020-10-26）