產(chǎn)前診斷中羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析的應(yīng)用及對出生缺陷的預(yù)防價(jià)值

劉丹丹

【摘要】 目的：探究產(chǎn)前診斷中羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析的應(yīng)用及對出生缺陷的預(yù)防價(jià)值。方法：選取2017年12月-2019年12月于本院分娩的182例產(chǎn)婦的臨床資料進(jìn)行回顧性分析。將91例行常規(guī)超聲產(chǎn)前診斷的產(chǎn)婦作為對照組，將91例使用羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析進(jìn)行產(chǎn)前診斷的產(chǎn)婦作為研究組。以實(shí)際情況為金標(biāo)準(zhǔn)，對比兩組產(chǎn)前診斷情況，分析出生缺陷者的臨床特征。結(jié)果：以實(shí)際情況為金標(biāo)準(zhǔn)，共62例發(fā)生出生缺陷。研究組的漏診、誤診率均低于對照組（P<0.05），且研究組的診斷準(zhǔn)確率明顯高于對照組（P<0.05）;發(fā)生出生缺陷者的無創(chuàng)檢查異常率、夫妻一方染色體異常率、唐氏篩查異常率、高齡產(chǎn)婦及不良孕產(chǎn)史占比均高于未發(fā)生出生缺陷者（P<0.05）。結(jié)論：將羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析應(yīng)用于產(chǎn)前診斷中可以降低出生缺陷的誤診率和漏診率，進(jìn)一步提高產(chǎn)前診斷準(zhǔn)確率。分析異常染色體核型的檢出情況，可為臨床上優(yōu)生優(yōu)育提供重要依據(jù)，有效降低出生缺陷的發(fā)生率，值得推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 產(chǎn)前診斷 羊水細(xì)胞培養(yǎng) 染色體核型分析 出生缺陷

Application of Amniotic Fluid Cell Culture and Chromosome Karyotype Analysis in Prenatal Diagnosis and Its Preventive Value to Birth Defects/LIU Dandan. //Medical Innovation of China， 2021， 18（14）： -155

[Abstract] Objective： To explore the application of amniotic fluid cell culture and chromosome karyotype analysis in prenatal diagnosis and the value of preventing birth defects. Method： The clinical data of 182 parturient women who delivered in our hospital from December 2017 to December 2019 were retrospectively analyzed. 91 parturient women underwent routine prenatal diagnosis by ultrasound were selected as the control group， and 91 parturient women underwent prenatal diagnosis by amniotic fluid cell culture and karyotype analysis were selected as the study group. The actual situation was used as the gold standard to compare the prenatal diagnosis of the two groups， the clinical characteristics of birth defects was analyzed. Result： According to the actual situation as the gold standard， there were 62 cases of birth defects. The rates of missed diagnosis and misdiagnosis in the study group were lower than those in the control group （P<0.05）， and the diagnostic accuracy in the study group was significantly higher than that in the control group （P<0.05）. The abnormal rate of noninvasive examination， abnormal rate of chromosome of one spouse， abnormal rate of Downs screening， the proportion of advanced maternal age and adverse pregnancy history in the patients with birth defects were all higher than those without birth defects （P<0.05）. Conclusion： The application of amniotic fluid cell culture and chromosome karyotype analysis in prenatal diagnosis can reduce the rate of misdiagnosis and missed diagnosis of birth defects and further improve the accuracy of prenatal diagnosis. The analysis of abnormal chromosome karyotype detection can provide an important basis for prenatal and postnatal care in clinical practice， and effectively reduce the incidence of birth defects， which is worthy of popularization and application.

[Key words] Prenatal diagnosis Amniotic fluid cell culture Chromosome karyotype analysis Birth defects

First-authors address： Jiamusi Maternal and Child Health Hospital， Jiamusi 154002， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.14.036

現(xiàn)階段，降低新生兒出生缺陷的最主要方法是進(jìn)行產(chǎn)前診斷。其中出生缺陷中以染色體病為重要因素[1]?，F(xiàn)階段，對孕中期孕婦進(jìn)行羊膜腔穿刺，其中最為普遍和安全的診斷方法是實(shí)施羊水細(xì)胞體外培養(yǎng)以及染色體核型分析[2]。自20世紀(jì)首次對羊水實(shí)施體外培養(yǎng)以及染色體核型分析開始，通過多年的持續(xù)發(fā)展，羊水細(xì)胞的體外培養(yǎng)、染色體核型分析得到完善[3]。隨著目前臨床上新生兒出生缺陷的數(shù)量增加，羊水細(xì)胞的體外培養(yǎng)、染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中更具有價(jià)值性[4]。本文研究分析了產(chǎn)前診斷中羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析的應(yīng)用及預(yù)防出生缺陷的價(jià)值，其報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年12月-2019年12月于本院分娩的182例產(chǎn)婦的臨床資料進(jìn)行回顧性分析。納入標(biāo)準(zhǔn)：均進(jìn)行產(chǎn)前診斷并成功分娩;單胎妊娠;依從性高。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在嚴(yán)重的心、肝等重要器官疾病者;存在意識障礙;臨床資料不完整;中途退出。將91例行常規(guī)超聲產(chǎn)前診斷的產(chǎn)婦作為對照組，將91例使用羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析進(jìn)行產(chǎn)前診斷的產(chǎn)婦作為研究組。本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 對照組 行常規(guī)產(chǎn)前超聲檢查。B超檢查可以檢查出胎兒身體結(jié)構(gòu)上的畸形情況，還能查出內(nèi)臟發(fā)育畸形，一般適宜于妊娠18～22周。孕中期則利用其影像檢查結(jié)果判斷胎兒結(jié)構(gòu)是否出現(xiàn)異常。產(chǎn)前超聲檢查可發(fā)現(xiàn)羊水量異常（過多、過少）;胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩;胎兒水腫;頭面部畸形;神經(jīng)管畸形;消化道畸形;泌尿系畸形等。

1.2 2 研究組 行羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析。（1）羊膜腔穿刺術(shù)：以B超對胎盤的具體位置、羊水最佳穿刺點(diǎn)進(jìn)行精確定位，對穿刺部位進(jìn)行常規(guī)性的無菌消毒，隨后經(jīng)腹壁實(shí)施羊膜腔穿刺術(shù)。利用20 mL注射器采集20 mL羊水，將注射器進(jìn)行嚴(yán)格的密封，放置在無菌條件下短時(shí)間內(nèi)送檢。（2）羊水細(xì)胞接種培養(yǎng)：借助無菌超的凈臺將所采集到的羊水注入15 mL無菌的離心管中，每管10 mL，利用1 500 r/min的離心儀器在常溫狀態(tài)下實(shí)施離心活動10 min，移去血漿上清液，保留約0.5 mL的上清液，加入5 mL的羊水全培養(yǎng)基，均勻混合后加入25 cm2的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，分兩線培養(yǎng)，其培養(yǎng)周期為6～7 d。（3）獲取細(xì)胞及進(jìn)行制片：經(jīng)過6～7 d的培養(yǎng)后，利用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的具體生長狀態(tài)，將新鮮培養(yǎng)液持續(xù)更新，每天對其進(jìn)行觀察，2～3 d后，每個(gè)細(xì)胞島持續(xù)成長且達(dá)到70%～80%的細(xì)胞融合度，且存在不同數(shù)量的透亮細(xì)胞，其主要呈現(xiàn)圓形、類圓形的兩類形態(tài)，進(jìn)一步獲取所使用的細(xì)胞。獲取前1 d或獲取當(dāng)天應(yīng)繼續(xù)保持培養(yǎng)液的更換，混入秋水仙素，最終將培養(yǎng)液的濃度維持在0.1 μg/mL，持續(xù)進(jìn)行4～4.5 h，如鏡下觀察中存在許多“魚眼樣”的透明細(xì)胞，則表明細(xì)胞處于可以獲取狀態(tài)。將培養(yǎng)上清吸取到新的離心管中，融入濃度為0.25%的胰酶，在37 ℃的恒溫環(huán)境下消化約2 min，利用1 000 r/min的離心儀器實(shí)施10 min的離心操作，取出上清液，加入劑量為0.075 mol/L 的KCl低滲液，在37 ℃的恒溫環(huán)境下靜置12～13 min，利用配比為3︰1的甲醇/冰醋酸進(jìn)行預(yù)固定、固定后，滴片且隨后常規(guī)G顯帶進(jìn)行染色體分析。（4）核型分析。利用顯微鏡進(jìn)行常規(guī)的計(jì)數(shù)，其內(nèi)容包括：核型表現(xiàn)為分散良好時(shí)，其存在30個(gè)中期分裂象。異常核型出現(xiàn)時(shí)，其計(jì)數(shù)包括50個(gè)分裂象，如對所獲取細(xì)胞進(jìn)行觀察時(shí)出現(xiàn)不低于2個(gè)數(shù)目的異常情況則應(yīng)該對全部分裂象實(shí)施計(jì)數(shù)，通過染色體核型分析軟件有效獲取清晰的核型圖像，研究分析其中的3～5個(gè)核型。隨后依據(jù)具體計(jì)數(shù)情況出具報(bào)告，進(jìn)而提供具有價(jià)值和參考性的遺傳咨詢意見。

1.3 觀察指標(biāo) （1）對比兩組產(chǎn)婦的產(chǎn)前診斷情況。胎兒出生后1個(gè)月檢查有無出生缺陷，以實(shí)際情況為金標(biāo)準(zhǔn)，對比兩組漏診、誤診和診斷準(zhǔn)確情況。（2）分析發(fā)生出生缺陷者的臨床特征。比較有無出生缺陷者的無創(chuàng)檢查異常、夫妻一方染色體異常、高齡產(chǎn)婦（≥35歲）、唐氏篩查異常、不良孕產(chǎn)史以及其他異常情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 對照組年齡22～45歲，平均（33.5±1.5）歲;孕周20～22周，平均（21.0±1.2）周;孕次：1～2次，平均（1.5±0.2）次。研究組年齡22～46歲，平均（34.0±1.6）歲;孕周20～22周，平均（21.0±1.2）周;孕次：1～3次，平均（2.0±0.1）次。兩組孕婦一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組產(chǎn)前診斷情況比較 以實(shí)際情況為金標(biāo)準(zhǔn)，共62例新生兒存在出生缺陷。研究組的漏診率、誤診率均低于對照組（P<0.05），且研究組的診斷準(zhǔn)確率明顯高于對照組（P<0.05），見表1。

2.3 出生缺陷者的臨床特征分析 臨床實(shí)際情況顯示，發(fā)生出生缺陷62例，未發(fā)生出生缺陷120例。發(fā)生出生缺陷者的無創(chuàng)檢查異常率、夫妻一方染色體異常率、唐氏篩查異常率、高齡產(chǎn)婦及不良孕產(chǎn)史占比均高于未發(fā)生出生缺陷者（P<0.05），見表2。

3 討論

新生兒出生缺陷是新生兒在出生時(shí)存在機(jī)體外在、內(nèi)在結(jié)構(gòu)或功能發(fā)生異常的一種綜合征，其主要是由于遺傳、環(huán)境或兩者聯(lián)合等多種因素相互作用造成的，染色體異常是遺傳因素中最具代表性的現(xiàn)象[5]。經(jīng)過不完全統(tǒng)計(jì)，我國國內(nèi)一年超過10萬新生兒出現(xiàn)染色體異常情況，活產(chǎn)新生兒中存在約0.5%的染色體核型異常，其中0.12%～0.17%出現(xiàn)唐氏綜合征，約0.1%出現(xiàn)性染色體異常情況[6]。臨床表明高風(fēng)險(xiǎn)孕婦妊娠胎兒出現(xiàn)染色體核型異常的概率高于健康正常孕婦[7]。出生缺陷的種類較多，一方面對新生兒的生活質(zhì)量產(chǎn)生極大的影響，同時(shí)為家庭、社會帶來極大的壓力[8]。出生缺陷能夠利用產(chǎn)前診斷及時(shí)發(fā)現(xiàn)，有效地降低出生缺陷的發(fā)生[9]。因此產(chǎn)前診斷對于減少出生缺陷具有極為關(guān)鍵的作用，在將羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析應(yīng)用于產(chǎn)前診斷中能夠盡早終止妊娠，減少對母體的傷害，促進(jìn)其優(yōu)生優(yōu)育[10]。

隨著羊水細(xì)胞培養(yǎng)和獲取技術(shù)以及染色體核型分析技術(shù)的持續(xù)提高，產(chǎn)前診斷的診斷準(zhǔn)確率隨之增加[11]。經(jīng)研究結(jié)果顯示，研究組的漏診率、誤診率均低于對照組（P<0.05），且研究組的診斷準(zhǔn)確率明顯高于對照組（P<0.05），說明在產(chǎn)前診斷中應(yīng)用羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析能夠明顯提高診斷準(zhǔn)確性，有利于優(yōu)生優(yōu)育。主要是因?yàn)椋海?）新生兒出生缺陷主要是由于環(huán)境和遺傳因素造成的，而大部分患兒均存在遺傳因素，遺傳因素的異常均體現(xiàn)在機(jī)體的染色體核型中，在產(chǎn)前診斷對其進(jìn)行染色體核型分析能夠準(zhǔn)確地診斷出因遺傳因素形成的缺陷[12-13]。（2）羊水細(xì)胞的最佳采集時(shí)間為20～22周，羊水在這一時(shí)期具有較強(qiáng)的活力，極易貼壁，處于生長旺盛狀態(tài)，能夠更加清晰的反映新生兒的實(shí)際情況，從而進(jìn)一步提高產(chǎn)前診斷出生缺陷的準(zhǔn)確率[14-15]。

本研究結(jié)果顯示，發(fā)生出生缺陷者的無創(chuàng)檢查異常率、夫妻一方染色體異常率、唐氏篩查異常率、高齡產(chǎn)婦及不良孕產(chǎn)史占比均高于未發(fā)生出生缺陷者（P<0.05），說明無創(chuàng)檢查異常、夫妻一方染色體異常、高齡產(chǎn)婦和唐氏篩查異常、不良孕產(chǎn)史及其他異常均屬于形成出生缺陷的影響因素，其中夫妻一方染色體異常與染色體病具有緊密的關(guān)系。應(yīng)用羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析進(jìn)行產(chǎn)前診斷能夠提高染色體異常的檢出數(shù)量。分析和掌握羊膜腔穿刺指征，能夠提高胎兒染色體異常的檢出率，從而縮短產(chǎn)前診斷的時(shí)間，進(jìn)一步提高產(chǎn)前診斷的準(zhǔn)確率，為終止妊娠和治療提供具有針對性的指導(dǎo)，從而更好地落實(shí)優(yōu)生優(yōu)育的國策[16-20]。

綜上所述，將羊水細(xì)胞培養(yǎng)與染色體核型分析應(yīng)用于產(chǎn)前診斷中可以減少胎兒畸形的誤診率和漏診率，進(jìn)一步提高產(chǎn)前診斷準(zhǔn)確率，同時(shí)分析異常染色體核型的檢出情況，有效降低出生缺陷的發(fā)生率，為臨床上優(yōu)生優(yōu)育提供重要依據(jù)，值得推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2020-08-18） （本文編輯：田婧）