基于超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜技術(shù)的止得咳顆?；瘜W(xué)成分研究

黃光強(qiáng)，梁潔，3*，孫正伊，陳曉思，林婧，韋金玉，黃冬芳，周昱杉，趙立春，3*（.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，南寧 53000；.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，南寧 5300；3.廣西壯瑤藥工程技術(shù)研究中心，南寧 53000）

止得咳顆粒是由黃芩、射干、薄荷、荊芥、柴胡、桔梗、枇杷葉、白前、青天葵和龍脷葉10味中藥配伍而成，長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐證明該方具有清熱解毒、止咳化痰之功效，尤其是在治療感冒咳嗽及支氣管哮喘等方面具有顯著療效[1]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)止得咳顆粒質(zhì)量控制及化學(xué)成分的研究較少。在止得咳顆粒質(zhì)量方面，僅僅局限于對(duì)白前、射干及黃芩中的個(gè)別成分進(jìn)行分析，并未將桔梗、枇杷葉等藥味中的化學(xué)成分納入到該方的質(zhì)量控制系統(tǒng)之中[2]。在化學(xué)成分方面，雖已有文獻(xiàn)對(duì)該方中單味藥的化學(xué)成分進(jìn)行報(bào)道，但都未系統(tǒng)地對(duì)止得咳顆?；瘜W(xué)成分進(jìn)行全面研究[3-6]。此外，由于中藥復(fù)方所含的化學(xué)成分受到藥材與制備工藝等多方面因素的影響，導(dǎo)致中藥復(fù)方質(zhì)量參差不齊[7]。因此，本研究采用UPLCQ-Orbitrap HRMS技術(shù)對(duì)止得咳顆粒中的化學(xué)成分進(jìn)行快速分析與鑒定，以明確止得咳顆粒中存在的化學(xué)成分，旨在為止得咳顆粒的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供依據(jù)，為其建立更加安全、有效、可控的質(zhì)量控制體系提供參考和借鑒。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U3000 UPLC液相色譜儀、Q-Exactive質(zhì)譜儀、TraceFinder數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)（美國(guó)Thermo Fisher公司）；KQ-500DB超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；Milli-Q synergy超純水儀（美國(guó)Millipore公司）；XS205DU電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；5430R離心機(jī)（艾本德中國(guó)有限公司）。

1.2 試藥

甲醇、甲酸（色譜純，美國(guó)Fisher公司）；乙腈（色譜純，德國(guó)Merck公司）；乙酸銨（色譜純，上海斯信生物科技有限公司）。止得咳顆粒（廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，批號(hào)：20190701，規(guī)格：15 g/包）。

2 方法

2.1 供試品溶液的制備

取止得咳顆粒樣品1.0 g，加50 mL 50%甲醇超聲提取30 min，離心后，過濾，取續(xù)濾液，進(jìn)樣分析。

2.2 分析條件

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Thermo Hypersil Gold C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.9 μm）；流動(dòng)相為0.1%甲酸乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）（含10 mmol乙酸銨）；流速0.3 mL·min－1；梯度洗脫（0～2.0 min，5%A；2.0～42.0 min，5%～95%A；42.0～47.0 min，95%A；47～50 min，95%～5%A）；柱 溫35℃；進(jìn)樣量1 μL。

2.2.2 質(zhì)譜條件 離子源采用HESI源（heated ESI），正、負(fù)離子檢測(cè)模式；輔助氣體流量：10 μL·min－1；鞘氣體積流量：30 μL·min－1；噴霧電壓：3.5 kV（＋）、3.2 kV（－）；輔助氣溫度：300℃。離子傳輸管溫度：320℃。掃描方式為Full MS/dd-MS2模式，其中一級(jí)Full MS全掃描選擇分辨率為70 000 FWHM，dd-MS2的二級(jí)掃描選擇分辨率為17 500 FWHM，正、負(fù)離子掃描m/z范圍：100～1500，特定離子掃描模式為“off ”，頂點(diǎn)激發(fā)2～8 s，碰撞氣為高純氮，噴霧氣為氮?dú)狻?/p>

2.3 數(shù)據(jù)處理

利用美國(guó)Thermo Fisher公司的TraceFinder數(shù)據(jù)分析軟件，擬合得到分子式和一級(jí)質(zhì)譜的精確相對(duì)分子質(zhì)量，將所對(duì)結(jié)果與現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，對(duì)各色譜峰進(jìn)行初步推測(cè)。利用目標(biāo)化合物的一級(jí)碎片離子和二級(jí)碎片離子信息與參考文獻(xiàn)及Chemspider、massbank等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，進(jìn)一步推測(cè)和鑒定未知化學(xué)成分。

3 結(jié)果

在正、負(fù)離子檢測(cè)模式下，獲得止得咳顆粒的總離子流圖（見圖1），共鑒定得到30個(gè)化學(xué)成分，包括12個(gè)黃酮及其苷類化合物，9個(gè)有機(jī)酸類化合物，3個(gè)含氮類化合物，6個(gè)其他類化合物。被鑒定化合物的相關(guān)信息見表1。

圖1 止得咳顆粒正模式（A）和負(fù)模式（B）總離子流圖Fig 1 Total ion chromatogram of Zhideke granules in both positive（A）and negative（B）modes

表1 基于超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜技術(shù)鑒定止得咳顆粒中的化學(xué)成分Tab 1 Chemical components in Zhideke granules identified by UPLC-Q-Orbitrap HRMS

續(xù)表1

3.1 黃酮類成分

黃酮類化合物是指兩個(gè)苯環(huán)通過三個(gè)碳原子相連形成帶有C6-C3-C6母核的一類有機(jī)化合物。羥基、甲基及甲氧基等基團(tuán)在黃酮類化合物中十分常見，故其質(zhì)譜裂解規(guī)律主要是失去CO、H2O、CO2及側(cè)鏈取代基[10]。以化合物7為例，由一級(jí)質(zhì)譜可知其準(zhǔn)分子離子峰為m/z359.0762 [M-H]－，分子式為C18H16O8。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，同時(shí)失去三個(gè)CH3基團(tuán)，得到m/z314.0060 [M-H-3CH3]－的碎片離子。隨后，m/z314.0060的碎片離子繼續(xù)發(fā)生裂解，失去一個(gè)中性CO2分子，得到m/z270.0167 [M-H-3CH3-CO2]－的碎片離子。此外，準(zhǔn)分子離子峰也能先后失去兩個(gè)CH3碎片和一個(gè)中性CO2分子，產(chǎn)生m/z285.0392 [M-H-2CH3-CO2]－的碎片離子，結(jié)合文獻(xiàn)[13]報(bào)道的質(zhì)譜信息，推測(cè)化合物7為野鳶尾黃素。

化合物12，由一級(jí)質(zhì)譜可知其準(zhǔn)分子離子峰為m/z299.0551 [M-H]－，分子式為C16H12O6。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，先后失去一個(gè)CH3和一個(gè)中性CO分子，產(chǎn)生m/z256.0305 [M-H-CH3-CO]－的碎片離子。同時(shí)，準(zhǔn)分子離子峰也可失去一個(gè)中性CO2分子，得到m/z255.0305 [M-H-CO2]－的碎片離子。隨后m/z255.0305的碎片離子繼續(xù)裂解，失去一個(gè)CO的中性分子，產(chǎn)生m/z227.0338[M-H-CO2-CO]－的碎片離子。m/z151.0029 [M-HC9H8O2]－的碎片離子是由準(zhǔn)分子離子峰m/z299.0551發(fā)生逆狄爾斯-阿爾德（RDA）裂解反應(yīng)，失去C9H8O2的碎片基團(tuán)所產(chǎn)生的，隨后m/z151.0029的碎片離子繼續(xù)裂解，失去一個(gè)CO2的中性分子，得到m/z107.0135 [M-H-C9H8O2-CO2]－的碎片離子，由此推測(cè)化合物12為香葉木素[16]，并推測(cè)其可能的裂解路徑見圖2。

圖2 香葉木素可能的裂解路徑Fig 2 Possible fragmentation pathway of diosmetin

依據(jù)上述黃酮類成分的裂解規(guī)律，推測(cè)化合物8、9、10和11分別為鳶尾黃酮乙素、黃芩素、漢黃芩素和白楊素。

自然界中的黃酮類成分大多以苷類的形式存在，因此，糖苷鍵的斷裂是黃酮苷類成分最主要的裂解路徑，其苷元的裂解路徑則與黃酮類成分的裂解規(guī)律一致。對(duì)化合物2進(jìn)行分析，由一級(jí)質(zhì)譜可知其準(zhǔn)分子離子峰為m/z461.1078[M-H]－，分子式為C21H22O11。準(zhǔn)分子離子峰的糖苷鍵發(fā)生裂解，失去C6H10O5的碎片基團(tuán)，產(chǎn)生m/z299.1078 [M-H-C6H10O5]－的黃酮苷元碎片離子。得到的苷元碎片離子繼續(xù)裂解，分別失去一個(gè)CH3基團(tuán)和一個(gè)中性CO2分子，分別產(chǎn)生m/z284.0317 [M-H-C6H10O5-CH3]－和255.0293[M-H-C6H10O5-CO2]－的特征碎片離子。隨后，m/z284.0317的碎片離子繼續(xù)發(fā)生裂解，失去一個(gè)中性CO2分子，得到m/z240.0326 [M-H-C6H10O5-CH3-CO2]－的碎片離子，由此推測(cè)出化合物2為射干苷[9]，其可能的裂解路徑見圖3。

圖3 射干苷可能的裂解路徑Fig 3 Possible fragmentation pathway of tectoridin

化合物6，由一級(jí)質(zhì)譜可知其準(zhǔn)分子離子峰m/z459.0921 [M-H]－，分子式為C22H20O11。準(zhǔn)分子離子峰糖苷鍵發(fā)生斷裂，失去一分子葡萄糖醛酸C6H8O6碎片，產(chǎn)生m/z283.0602 [M-H-C6H8O6]－的碎片離子。隨后，準(zhǔn)分子離子峰繼續(xù)裂解，失去一個(gè)CH3碎片，產(chǎn)生m/z268.0370 [M-H-C6H8O6-CH3]－的碎片離子，結(jié)合參考文獻(xiàn)提供的質(zhì)譜信息[12]，推測(cè)化合物6為漢黃芩苷。

根據(jù)上述黃酮苷類成分的裂解規(guī)律，推測(cè)化合物1、3、4和5分別為野黃芩苷、橙皮苷、黃芩苷和木蝴蝶苷A。

3.2 有機(jī)酸類成分

止得咳顆粒中的有機(jī)酸主要成分存在于枇杷葉、桔梗、薄荷等藥味中。按其與羧基所連的基團(tuán)不同，將其分為脂肪酸和芳香酸。脂肪有機(jī)酸是指羧基與烴基相連形成的化合物，其裂解規(guī)律通常表現(xiàn)為先失去一分子的H2O、CO和CO2，隨后則會(huì)失去烴基等碎片離子。對(duì)化合物13進(jìn)行分析，由一級(jí)質(zhì)譜得其準(zhǔn)分子離子峰為m/z191.0554[M-H]－，分子式為C7H12O6。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，失去兩分子H2O和一個(gè)中性CO分子，產(chǎn)生m/z127.0398 [M-H-2H2O-CO]－的碎片離子。此外，準(zhǔn)分子離子峰也可失去三分子H2O和一個(gè)中性CO2分子，產(chǎn)生m/z93.0343 [M-H-3H2O-CO2]－的碎片離子，由此推測(cè)化合物13為右旋奎寧酸[17]。

化合物14，由一級(jí)質(zhì)譜信息得其準(zhǔn)分子離子峰為m/z191.019 [M-H]－，分子式為C6H8O7。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，失去一分子H2O，產(chǎn)生m/z173.0085 [M-H-H2O]－的碎片離子，得到的此碎片離子繼續(xù)裂解，失去一分子H2O和一個(gè)中性CO2分子，產(chǎn)生m/z111.0084 [M-H-2H2O-CO2]－的碎片離子。同時(shí)，m/z173.0085的碎片離子也可直接失去一個(gè)中性CO2分子，得到m/z129.0189[M-H-H2O-CO2]－的碎片離子。此外，準(zhǔn)分子離子峰也可先后失去一個(gè)中性CO2分子，產(chǎn)生m/z102.9488 [M-H-2CO2]－的碎片離子，由此推測(cè)化合物14為檸檬酸[17]。

化合物21，由一級(jí)質(zhì)譜得其準(zhǔn)分子離子峰為m/z187.0969 [M-H]－，分子式為C9H16O4。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，失去一個(gè)中性CO2分子，產(chǎn)生m/z143.1070 [M-H-CO2]－的碎片離子，得到的碎片離子繼續(xù)裂解，失去一分子H2O，產(chǎn)生m/z125.0967 [M-H-CO2-H2O]－的碎片離子，然后繼續(xù)裂解，分別失去C2H4和C4H8的碎片，產(chǎn)生m/z97.0654 [M-H-CO2-H2O-C2H4]－和m/z69.0342[M-H-CO2-H2O-C4H8]－的碎片離子，推測(cè)化合物21為壬二酸[17]，并推測(cè)其可能的裂解路徑見圖4。

圖4 壬二酸可能的裂解路徑Fig 4 Possible fragmentation pathway of azelaic acid

芳香酸一般是指分子結(jié)構(gòu)中同時(shí)含有苯環(huán)和羧基的一類化合物。這類化合物在發(fā)生質(zhì)譜裂解時(shí)易失去芳香側(cè)鏈基團(tuán)，隨后失去CO2、H2O和CO等中性分子。對(duì)化合物16進(jìn)行分析，由一級(jí)質(zhì)譜可知其準(zhǔn)分子離子峰為m/z197.0448[M-H]－，分子式為C9H10O5。準(zhǔn)分子離子發(fā)生裂解，失去一分子H2O，產(chǎn)生m/z179.0343 [M-HH2O]－的碎片離子，得到的碎片離子繼續(xù)裂解，分別失去一個(gè)中性CO分子和一個(gè)中性CO2分子，同時(shí)產(chǎn)生m/z151.0399 [M-H-H2O-CO]－和m/z135.0369 [M-H-H2O-CO2]－的特征碎片離子。此外，準(zhǔn)分子離子峰中的芐基碳也能發(fā)生裂解，失去C7H8O2的碎片基團(tuán)，產(chǎn)生72.9928 [M-HC7H8O2]－的碎片離子，由此推測(cè)化合物16為丹參素[18]，并推測(cè)其可能的裂解路徑見圖5。

圖5 丹參素可能的裂解路徑Fig 5 Possible fragmentation pathway of danshensu

化合物17，由一級(jí)質(zhì)譜信息可知其準(zhǔn)分子離子峰為m/z353.0867 [M-H]－，分子式為C16H18O9。準(zhǔn)分子離子發(fā)生裂解，分別失去C7H10O5和C9H6O3的碎片基團(tuán)，產(chǎn)生m/z179.0343 [M-H-C7H10O5]－和m/z191.0554 [M-H-C9H6O3]－的碎片離子，隨后m/z191.0554 [M-H-C9H6O3]－的碎片離子繼續(xù)裂解，脫去一分子H2O，產(chǎn)生m/z173.0448 [M-H-C9H6O3-H2O]－的碎片離子，由此推測(cè)化合物17為隱綠原酸[17]，其可能的裂解路徑見圖6。

圖6 隱綠原酸可能的裂解路徑Fig 6 Possible fragmentation pathway of cryptochlorogenic acid

化合物20，由一級(jí)質(zhì)譜信息可知其準(zhǔn)分子離子峰為m/z537.1027 [M-H]－，分子式為C27H22O12。m/z493.1027 [M-H-CO2]－的碎片離子是由準(zhǔn)分子離子峰失去一個(gè)CO2分子所產(chǎn)生的，隨后，其繼續(xù)裂解，分別失去C9H10O5和C9H8O4的碎片離子，產(chǎn)生m/z295.0601 [M-H-CO2-C9H10O5]－和m/z313.0710 [M-HC9H8O4]－的碎片離子，得到的m/z295.0601碎片離子繼續(xù)裂解，失去C11H6O3的碎片基團(tuán)，產(chǎn)生m/z109.0291[M-H-CO2-C9H10O5-C11H6O3]－的碎片離子，由此推測(cè)化合物20為紫草酸[20]。

依據(jù)上述芳香酸的裂解規(guī)律，推測(cè)化合物15、18和19分別為沒食子酸、咖啡酸和對(duì)羥基肉桂酸。

3.3 含氮類成分

含氮類化合物主要是指分子結(jié)構(gòu)中含有氮元素的一類有機(jī)化合物，主要包括核苷、氨基酸和煙酰胺等。止得咳顆粒中的含氮類化合物主要來源于薄荷、柴胡等藥味。含氮化合物質(zhì)譜裂解規(guī)律主要表現(xiàn)為失去H2O、CO2、NH3、COOH及OH等碎片基團(tuán)。同時(shí)，核苷類化合物之間的核苷鍵易發(fā)生斷裂。對(duì)化合物22進(jìn)行分析，由一級(jí)質(zhì)譜得到其準(zhǔn)分子離子峰為m/z182.0803 [M＋H]＋，分子式為C9H11NO3。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，失去一個(gè)COOH碎片基團(tuán)，產(chǎn)生m/z136.0751 [M＋H-HCOOH]＋的碎片離子，該碎片離子繼續(xù)裂解，失去一個(gè)CH3碎片，得到m/z119.0488 [M＋H-COOH-NH3]＋的碎片離子。此外，準(zhǔn)分子離子峰也可能發(fā)生另一種路徑的裂解，同時(shí)失去一個(gè)OH基團(tuán)和一個(gè)NH3分子，產(chǎn)生m/z147.0434 [M＋H-H2O-NH3]＋的碎片離子。m/z147.0434的碎片離子失去C2H3O2的碎片離子得到m/z91.0543 [M＋H-OH-NH3-C2H3O2]＋的碎片離子，由此推測(cè)化合物22為L(zhǎng)-酪氨酸[10]，其可能的質(zhì)譜裂解路徑見圖7。

圖7 L-酪氨酸可能的裂解路徑Fig 7 Possible fragmentation pathway of L-tyrosine

化合物23，在負(fù)離子模式下得到的準(zhǔn)分子離子峰為m/z243.0615 [M-H]－，分子式為C9H12N2O6。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，分別失去C5H8O4和C5H9O4碎片基團(tuán)，同時(shí)得到m/z111.0198 [M-H-C5H8O4]－和m/z110.0245 [M-H-C4H7NO4]－的碎片離子。隨后，m/z110.0245的碎片離子繼續(xù)裂解，失去一個(gè)中性CO分子，產(chǎn)生m/z82.0296 [M-H-C5H9O4-CO]－的碎片離子，由此推測(cè)化合物23為尿苷[21]，其可能的裂解路徑見圖8。

圖8 尿苷可能的裂解路徑Fig 8 Possible fragmentation pathway of uridine

化合物24，由一級(jí)質(zhì)譜得到其準(zhǔn)分子離子峰為m/z123.0548 [M＋H]＋，分子式為C6H6N2O。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，失去一個(gè)中性CO分子，產(chǎn)生m/z95.0606 [M＋H-CO]＋的碎片離子。此外，準(zhǔn)分子離子峰也可先后失去一個(gè)NH3分子和一個(gè)中性CO分子，得到m/z78.0341 [M＋H-NH3-CO]＋的碎片離子。同時(shí)，苯環(huán)與羰基所連的C-C鍵和吡啶環(huán)也可發(fā)生裂解，分別失去CHN和CONH碎片基團(tuán)，分別得到m/z96.0444 [M＋H-CHN]＋和m/z80.0497 [M＋H-CONH]＋的碎片離子，由此推測(cè)化合物24為煙酰胺[22]。

3.4 其他類成分

止得咳顆粒中除了上述的化學(xué)成分之外，還存在一些其他類化合物，包括糖類、酚類及少量的揮發(fā)性成分等。對(duì)化合物25進(jìn)行分析，由一級(jí)質(zhì)譜得到其準(zhǔn)分子離子峰為m/z181.0711 [M-H]－，分子式為C6H14O6。分子離子峰發(fā)生裂解，失去一分子H2O，產(chǎn)生m/z163.0670 [M-H-H2O]－的碎片離子，此碎片離子繼續(xù)裂解，分別失去C2H6O2、C4H8O3和C3H6O2的碎片基團(tuán)，得到m/z101.0240 [M-HH2O-C2H6O2]－、m/z59.0136 [M-H-H2O-C4H8O3]－和m/z89.0241 [M-H-H2O-C3H6O2]－的碎片離子。隨后，m/z89.0241的碎片離子繼續(xù)裂解，失去一分子H2O，產(chǎn)生m/z71.0135 [M-H-2H2O-C3H6O2]－的碎片離子，由此推測(cè)化合物25為甘露醇[23]，其可能的質(zhì)譜裂解路徑見圖9。

圖9 甘露醇可能的裂解路徑Fig 9 Possible fragmentation pathways of mannitol

化合物26，由一級(jí)質(zhì)譜得到其準(zhǔn)分子離子峰為m/z341.1078 [M-H]－，分子式為C12H22O11。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，失去C9H16O8的碎片基團(tuán)，產(chǎn)生m/z89.0241 [M-H-C9H16O8]－的碎片離子；隨后，此碎片離子離子繼續(xù)裂解，失去一分子H2O，產(chǎn)生m/z71.0136 [M-H-C9H16O8-H2O]－的碎片離子，這與文獻(xiàn)[24]報(bào)道的質(zhì)譜數(shù)據(jù)信息基本相同，由此推測(cè)化合物26為蔗糖。同理，并結(jié)合文獻(xiàn)[25]，推測(cè)化合物27為棉籽糖。

化合物28，在正離子模式下的準(zhǔn)分子離子峰為m/z127.0384 [M＋H]＋，分子式為C6H6O3。準(zhǔn)分子離子m/z發(fā)生裂解后，先后失去一個(gè)H2O和一個(gè)中性CO分子，產(chǎn)生m/z81.0337 [M＋H-H2OCO]＋的碎片離子，此碎片離子繼續(xù)裂解，失掉一個(gè)中性CO分子，產(chǎn)生m/z53.0392 [M＋H-H2O-2CO]＋的碎片離子。此外，準(zhǔn)分子離子也能失去兩個(gè)CO中性分子，得到m/z71.0495 [M＋H-COCO]＋的碎片離子，由此推測(cè)化合物28為5-羥甲基糠醛[26]。

化合物29，由一級(jí)質(zhì)譜信息得到其準(zhǔn)分子離子峰為m/z137.0238 [M-H]－，分子式為C7H6O3。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，分別失去一個(gè)中性CO分子、一個(gè)中性CO2分子和一個(gè)CHO碎片基團(tuán)，同時(shí)生成m/z109.0213 [M-H-CO]－、m/z93.0342[M-H-CO2]－和108.0213 [M-H-CHO]－的碎片離子。隨后，得到的m/z109.0213碎片離子繼續(xù)裂解，失去一個(gè)中性CO分子，產(chǎn)生m/z81.0343[M-H-2CO]－的碎片離子，結(jié)合參考文獻(xiàn)[27]的質(zhì)譜信息，推測(cè)化合物29為原兒茶醛。

化合物30，由一級(jí)質(zhì)譜可知其準(zhǔn)分子離子峰為m/z623.1966 [M-H]－，分子式為C29H36O15。準(zhǔn)分子離子峰發(fā)生裂解，失去咖啡?；鵆9H6O3，產(chǎn)生m/z461.1658 [M-H-C9H6O3]－的碎片離子。同時(shí)，準(zhǔn)分子離子也可失去C20H28O11碎片基團(tuán)，產(chǎn)生m/z179.0343 [M-H-C20H28O11]－的碎片離子；隨后此碎片離子繼續(xù)裂解，失去一個(gè)H2O分子，產(chǎn)生m/z161.0238 [M-H-C20H28O11-H2O]－的碎片離子，結(jié)合參考文獻(xiàn)[28]的質(zhì)譜碎片信息，推測(cè)化合物30為異麥角甾苷。

4 討論

本研究利用UPLC-Q-Orbitrap HRMS技術(shù)對(duì)止得咳顆粒中的化學(xué)成分進(jìn)行了分析，共鑒定出30個(gè)化學(xué)成分，結(jié)果表明其含有的主要成分為黃酮類及其有機(jī)酸類化合物。黃酮類成分具有抗菌、抗病毒、抗炎、解熱及鎮(zhèn)咳的藥理活性[29]，有機(jī)酸類成分大多具有止咳平喘及抗炎、抗菌和抗病毒的作用[30-31]。這與止得咳顆粒在臨床上用于感冒咳嗽、止咳化痰的作用基本一致，為該方在臨床上更好地應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。但有關(guān)龍脷葉、青天葵等壯藥的研究較少，其中的許多化學(xué)成分都不明確，故無法對(duì)某些鑒定出的化學(xué)成分的來源進(jìn)行歸屬。加之，由于現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫(kù)及文獻(xiàn)資料的限制，僅從質(zhì)譜的角度對(duì)化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定仍然存在一定的困難。因此，后續(xù)研究過程還需要進(jìn)一步通過與對(duì)照物比對(duì)，并結(jié)合制備液相及大孔吸附樹脂等方法對(duì)止得咳顆粒中的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，并連同氫譜、碳譜及IR光譜等方法對(duì)分離得到的化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn)，以明確止得咳顆粒中的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，為該方進(jìn)一步的質(zhì)量控制及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供參考與借鑒。