不同生產(chǎn)企業(yè)元胡止痛片質(zhì)量評價(jià)與探索性研究

高宇明，肖開春，劉 森，李華仙，李 丹，吳秀清

（四川省資陽市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，四川 資陽 641399）

元胡止痛片由醋延胡索、白芷組方，有理氣、活血、止痛功效，臨床主要用于氣滯血瘀的胃痛、脅痛、頭痛及痛經(jīng)，為常用非處方藥。目前其被收載于2015 年版《中國藥典（一部）》（2020 年版無修訂，簡稱《藥典》）及《國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件2014004》（簡稱《局頒標(biāo)準(zhǔn)》），有糖衣片和薄膜衣片2 種劑型。為了客觀評價(jià)其質(zhì)量，本試驗(yàn)中從四川省內(nèi)流通、使用單位中抽取樣本，按法定標(biāo)準(zhǔn)對延胡索及白芷進(jìn)行薄層鑒別，并測定延胡索乙素及歐前胡素的含量，以及進(jìn)行染色劑金胺O 等項(xiàng)目檢測，并圍繞藥品的安全性和有效性開展了標(biāo)準(zhǔn)外研究和評價(jià)，旨在查找潛在的藥品質(zhì)量安全隱患。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260 型高效液相色譜儀（配 DAD 檢測器），1200 型高效液相色譜儀（配UV 檢測器），均購自美國Agilent公司；UltiMate 3000 型高效液相色譜儀，配WVD 檢測器（美國 Thermo Fisher 公司）；ICP －mass Spectrometer NexIon 2000 型電子耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國PerkinElmer 公司）；XSE205DU 型電子分析天平（十萬分之一，瑞士Mettler Toledo 公司）；SB25 － 12D 型超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；DZKW－4 型水浴鍋（北京中興偉業(yè)世紀(jì)儀器有限公司）；DHG 型烘箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；WARS－XPRESS 型微波消解儀（美國 CEM 公司）；STEHDB －107 －1 型二氧化硫殘留量測定儀（濟(jì)南盛泰電子科技有限公司）；Camag Linomat 5 型薄層展開系統(tǒng)（瑞士Camag 公司）。

1.2 試藥

延胡索對照藥材（批號為120928－201609），白芷對照藥材（批號為120945－201510），延胡索乙素對照品（批號為 110726－201819，含量為 99.8%），異歐前胡素對照品（批號為 110827－201812，含量為 99.6%），鹽酸巴馬汀對照品（批號為 110732－201611，含量為86.8%），歐前胡素對照品（批號為 110826 －201818，含量為99.6%），鹽酸小檗堿對照品（批號為110713－201212，含 量 為 86.7% ），金 胺 O 對 照 品 （批 號 為111770－201603，含量為 100.0%），對乙酰氨基酚對照品（批號為 10008 －201610，含量為 99.9% ），阿司匹林對照品（批號為100173－201706，含量為 99.8%），萘普生對照品（批號為 100198－201706，含量為 99.9%），雙氯芬酸鈉對照品（批號為 100334－201803，含量為99.9%），吲哚美辛對照品（批號為 100258 －200904，含量為99.9%），均購自中國食品藥品檢定研究院；延胡索甲素對照品（批號為ST05600120MG，含量≥98.0%），去氫紫堇堿對照品（批號為ST07380120MG，含量≥97.0%），均購自上海詩丹德生物技術(shù)有限公司；鎘對照品（批號為 GSB04－1721－2004），鉛對照品（批號為GSB04－1742－2004），砷對照品 （批號為 GSB04－1714－2004），銅對照品（批號為 GSB04－1725－2004），汞對照品（批號為GSB04－1729－2004），均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心；內(nèi)標(biāo)溶液（美國PerkinElmer 公司，含鉍、鍺、銦、鋰、鈧、鋱，批號為N9303832，規(guī)格均為 10 μg ／mL）；硅膠 G 薄層板（青島海博生物技術(shù)有限公司）；甲醇和乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

國家藥品監(jiān)督管理局?jǐn)?shù)據(jù)庫中元胡止痛片批號最多的省份為四川（25 個(gè)），故本研究中選取在四川省內(nèi)流通的元胡止痛片197 批次，覆蓋全國7 個(gè)省、自治區(qū)、直轄市的共21 家生產(chǎn)企業(yè)（主要集中在四川、廣西和河南），排除同廠家同批號樣品后共得樣品100 批，詳見表1。劑型包括糖衣片180 批次（規(guī)格為片芯質(zhì)量0.25 g）、薄膜衣片17 批次（規(guī)格為每片質(zhì)量0.26 g），分別占總批次的 91.37% 和 8.63% 。

表1 各元胡止痛片抽樣批次信息Tab.1 Information of sampling batches of Yuanhu Zhitong Tablets from different manufacturers

對上述21 家生產(chǎn)企業(yè)均發(fā)函調(diào)研，收回14 家生產(chǎn)企業(yè)的資料，調(diào)研結(jié)果顯示，各企業(yè)所使用的原輔料不完全相同、部分工藝參數(shù)有差異。如處方中醋制延胡索，來源分為外購和自行炮制，且各生產(chǎn)企業(yè)執(zhí)行炮制規(guī)范不一致，炮制方法及輔料用量均存在差異。壓片時(shí)各企業(yè)加入的輔料種類不同，包括硬脂酸鎂和氫氧化鋁，滑石粉或硬脂酸鎂，硬脂酸鎂和羧甲基淀粉鈉等。元胡止痛片為常用止痛類中成藥，存在非法添加化學(xué)藥物風(fēng)險(xiǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 延胡索、白芷薄層鑒別

薄層色譜條件及溶液制備參照2015 年版《中國藥典（一部）》［1］。16 家生產(chǎn)企業(yè)的 81 批次樣品，需加大取樣量和點(diǎn)樣量才能全部檢出與延胡索對照藥材及白芨對照藥材相應(yīng)的主斑點(diǎn)，且不同生產(chǎn)企業(yè)樣品斑點(diǎn)大小及顏色深淺有一定差異。

2.2 延胡索乙素和歐前胡素含量測定

采用高效液相色譜法測定，色譜條件及溶液制備參照 2015 年版《中國藥典（一部）》［1］規(guī)定：“本品每片含醋延胡索以延胡索乙素（C21H25NO4）計(jì)，不得少于 75 μg；含白芷以歐前胡素（C16H14O4）計(jì)，不得少于 50 μg”。方法學(xué)考察結(jié)果中，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的 RSD 均小于2.0%，延胡索乙素、歐前胡素平均加樣回收率分別為 98.90%和 99.60%，RSD 分別為 0.88%和 1.44%。197 批次樣品均符合規(guī)定，結(jié)果見表2。不同生產(chǎn)企業(yè)的樣品間含量差異較大，A，R 生產(chǎn)企業(yè)的樣品中延胡索乙素含量批間差異大，C，D，K，R 生產(chǎn)企業(yè)的樣品中歐前胡素含量批間差異大（見圖1），可能是醋延胡索和白芷藥材質(zhì)量差異大、醋延胡索炮制工藝不一致等原因所致。

2.3 染色劑金胺O 檢測

采用高效液相色譜法檢測，色譜條件及溶液制備參照《局頒布標(biāo)準(zhǔn)》。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)處有吸收峰，陰性對照無干擾，色譜圖見圖2。方法學(xué)考察結(jié)果中，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的 RSD 均小于2.1%，平均加樣回收率為 100.10% ，RSD 為 1.25% 。有 5 批次（3 個(gè)批號）元胡止痛片檢出金胺O，均源于R 生產(chǎn)企業(yè)。

表2 樣品含量測定結(jié)果（μg／片，n ＝2）Tab.2 Content determination of tetrahydropalmatine and imperatorin in the samples（μg ／table，n ＝ 2）

圖1 樣品含量箱式圖A.Tetrahydropalmatine B. ImperatorinFig.1 Box diagram of tetrahydropalmatine and imperatorin content in the samples

2.4 標(biāo)準(zhǔn)外研究

2.4.1 重金屬及有害元素檢測

按 2015 年版《中國藥典（四部）》通則 2321“鉛、鎘、砷、汞、銅測定法第二法—— 電感耦合等離子體質(zhì)譜法”檢驗(yàn)；供試品溶液用微波消解制備。參照2015 年版《中國藥典（一部）》中藥材的限量，197 批次樣品合格率為100.0%。

2.4.2 二氧化硫殘留量檢測

經(jīng)查閱文獻(xiàn)，延胡索與白芷在加工過程中均存在硫熏現(xiàn)象［2－3］，在產(chǎn)地調(diào)研中發(fā)現(xiàn)，上述 2 種藥材（尤其是白芷）在產(chǎn)地加工時(shí)，加工戶均有使用硫磺熏蒸曬干習(xí)慣。硫磺熏蒸會破壞中藥材有效成分，降低療效，在2015 年版《中國藥典（一部）》中也對白芷的二氧化硫殘留量進(jìn)行了限制。元胡止痛片處方中，30%的白芷為原粉入藥，極易將藥材中的毒性物質(zhì)引入制劑，而在制劑中未有相關(guān)規(guī)定，存在安全風(fēng)險(xiǎn)。

本研究中取樣品粉末約5 g，精密稱定，按2015 年版《中國藥典（四部）》二氧化硫殘留量測定法（通則2331）第一法—— 酸堿滴定法檢測［4］，197 批樣品中二氧化硫含量介于0 ～88 mg／kg，其中85 批檢出二氧化硫。參照2015 年版《中國藥典（四部）》通則0212 中“藥材及飲片（礦物類除外）的二氧化硫殘留量不得過150 mg／kg”的規(guī)定，按原藥材到制劑中80%轉(zhuǎn)移率計(jì)算，擬訂二氧化硫殘留量限度為不得過40 mg／kg，100 批樣品中有16 批（16%）不合格。

2.4.3 止痛成分［5］檢測

色譜條件：色譜柱為 Waters XSelect HSS T3柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相為 0.05 mol／L 乙酸銨－乙腈，梯度洗脫（0 ～25 min 時(shí) 10%→35%乙腈，25 ～ 45 min 時(shí) 35% →65% 乙腈，45 ～ 55 min 時(shí) 65% →90% 乙腈）；流速為 1.0 mL ／min；檢測波長為 280 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μL。色譜圖見圖3。

溶液制備：稱取對乙酰氨基酚對照品10.11 mg、阿司匹林對照品9.67 mg、萘普生對照品9.77 mg、雙氯芬酸鈉對照品9.82 mg、吲哚美辛對照品9.53 mg，精密稱定，置同一100 mL 棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，即得貯備溶液；精密量取10 mL，置100 mL 棕色容量瓶中，加甲醇定容，即得混合對照品溶液。取樣品6 片，除去包衣，研細(xì)，取約 1.0 g，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加甲醇40 mL，超聲（功率250 W，頻率45 kHz）處理1 h，冷卻至室溫，用甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按元胡止痛片處方及工藝制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

圖2 元胡止痛片中金胺O 檢驗(yàn)高效液相色譜圖1. auramine OA.Blank solution B.Reference solution C. Test solutionFig.2 HPLC chromatograms for determination auramine O in Yuanhu Zhitong Tablets

圖3 止痛成分含量測定高效液相色譜圖1.paracetamol 2.aspirin 3.naproxen 4.diclofenac sodium 5.indomethacinA.Negative reference solution B. Mixed reference solution C.Test solutionFig.3 HPLC chromatograms for content determination of analgesic components

方法學(xué)考察：制備系列質(zhì)量濃度混合對照品溶液，按上述色譜條件測定，記錄峰面積。以對照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（ Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表3。取混合對照品溶液，依法連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄峰面積，結(jié)果對乙酰氨基酚、阿司匹林、萘普生、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛的 RSD 分別為 1.25% ，1.74%，0.74%，0.79% ，0.72% （n ＝6），表明儀器精密度良好。取已知含量的樣品6 份，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入不同量的對照品溶液，依法進(jìn)樣測定，結(jié)果各成分的回收率和 RSD 分別為，對乙酰氨基酚 99.00%和 0.81%，阿司匹林 98.01%和 2.48%，萘普生98.79%和0.62%，雙氯芬酸鈉98.58%和0.77%，吲哚美辛 98.12%和 0.65%（n ＝6），表明方法回收率良好。

表3 各止痛成分回歸方程與線性范圍Tab.3 Regression equation and linear range of each analgesic component

樣品測定：取21 家企業(yè)生產(chǎn)的100 批元胡止痛片樣品，依法制備供試品溶液，并進(jìn)樣測定，結(jié)果均未檢出對乙酰氨基酚、阿司匹林、萘普生、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛。

3 討論

本研究中，市場流通的元胡止痛片金胺O 檢測合格率達(dá)97.46%，僅5 個(gè)批次（3 個(gè)批號）樣品檢出金胺O，說明通過藥品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法的多年應(yīng)用，延胡索染色現(xiàn)象得到了較好控制。但通過標(biāo)準(zhǔn)外研究，開展質(zhì)量分析和評價(jià)，顯示目前元胡止痛片質(zhì)量方面仍存在一些問題，包括標(biāo)準(zhǔn)延胡索薄層鑒別展開系統(tǒng)分離度較差，需改進(jìn)；部分生產(chǎn)企業(yè)的樣品中延胡索薄層鑒別未檢出全部主斑點(diǎn)；指標(biāo)成分延胡索乙素、歐前胡素含量差異大。分析原因可能有以下幾點(diǎn)：一是原料藥材質(zhì)量差異。文獻(xiàn)報(bào)道顯示，不同產(chǎn)地延胡索有效成分含量差異明顯［6］，炮制前后含量也會產(chǎn)生較大變化［7］。各生產(chǎn)企業(yè)執(zhí)行炮制規(guī)范不一致，炮制方法及輔料用量也存在差異。二是部分企業(yè)可能存在少投或不投延胡索的違規(guī)生產(chǎn)行為。三是生產(chǎn)過程中原料混合不均勻，導(dǎo)致同一生產(chǎn)企業(yè)不同批號的含量測定結(jié)果差異大。

針對發(fā)現(xiàn)的質(zhì)量問題，建議修訂元胡止痛片中延胡索的薄層鑒別方法；生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格控制原料藥材質(zhì)量，并按處方和工藝投料生產(chǎn)；中藥制劑含量均勻性問題由多種原因?qū)е拢?］，其中之一就是缺乏相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)，而目前已有成熟的中成藥的含量均勻度檢測方法［9－10］，建議國家加快制訂中藥制劑含量均勻度標(biāo)準(zhǔn)；各地監(jiān)管部門也要加強(qiáng)日常監(jiān)管，尤其是生產(chǎn)過程的監(jiān)管。此外，建議關(guān)注中成藥中二氧化硫殘留問題。目前對于硫磺熏蒸中藥材質(zhì)量的研究報(bào)道較多［11－12］，但對于中成藥中二氧化硫殘留及其危害相關(guān)的研究較少，存在安全風(fēng)險(xiǎn)。