氣相色譜法同時(shí)測(cè)定甲磺酸伊馬替尼原料藥中7 種有機(jī)溶劑殘留量*

鄒 江 ，沈丹丹 ，王 東 ，王建華 ，羅立駿 △，曾令高

（1. 重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院·麻醉精神藥品質(zhì)量監(jiān)測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 401121； 2. 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院，重慶 400044）

甲磺酸伊馬替尼是全球首個(gè)獲批的小分子酪氨酸激酶抑制劑，其對(duì) BCR － ABL 酪氨酸激酶［1－3］、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體［4］和 c － kit 酪氨酸激酶［5］有高度特異性，且不影響正常造血干細(xì)胞的生長(zhǎng)。人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議《殘留溶劑的指導(dǎo)原則》（Q3C）指出，殘留溶劑是指原料藥（API）、輔料及制劑的生產(chǎn)過(guò)程中使用過(guò)的溶劑，通過(guò)分離、純化等步驟不能保證完全將其除去，通常是指有機(jī)溶劑。20 世紀(jì)90 年代，殘留有機(jī)溶劑的毒性及致癌作用引起了各國(guó)研究機(jī)構(gòu)和監(jiān)管部門(mén)的重視，將其作為藥品質(zhì)量控制的一個(gè)重要內(nèi)容。甲磺酸伊馬替尼原料藥在其合成、晶型制備等過(guò)程中使用了多種有機(jī)溶劑［6－9］，如二類溶劑甲醇、四氫呋喃、N，N－二甲基甲酰胺（DMF），三類溶劑乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯，均對(duì)人體和環(huán)境具有潛在毒性，甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 的限度分別為 0.3% ，0.5% ，0.5% ，0.5% ，0.5%，0.072% ，0.088%［10］。本研究中參照 2020 年版《中國(guó)藥典（四部）》通則 0861 殘留溶劑測(cè)定法［11］，建立了毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定甲磺酸伊馬替尼原料藥中上述7 種有機(jī)溶劑含量，并進(jìn)行了方法學(xué)研究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7890B 型氣相色譜儀，包括FID 檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司）；XPE205 型電子分析天平（瑞士 MettlerToledo 公司）。

1.2 試藥

甲磺酸伊馬替尼原料藥（石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為 695171257，695180104，695180203）；乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜均為分析純，甲醇、四氫呋喃、DMF 均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：以6%氰丙基苯－94%二甲基硅氧烷為固定液的 Agilent DB － 624 型毛細(xì)管柱（30 m × 320 mm，1.8 μm）；程序升溫：初始溫度為 45 ℃，保持 4 min，再以 15 ℃ ／min 的速率升至 200 ℃ ，保持 2 min；載氣：氮?dú)?；流速? mL ／min；進(jìn)樣口溫度：220 ℃，分流比：15 ∶1；檢測(cè)器：火焰離子化檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度：250 ℃；氫氣流量：40 mL ／min；空氣流量：400 mL ／min；進(jìn)樣量：1 μL。

2.2 溶液制備

取甲醇 3.010 3 g、乙醇 5.023 9 g、丙酮 5.015 5 g、異丙醇 5.007 6 g、乙酸乙酯 5.223 9 g、四氫呋喃 0.743 2 g、DMF 0.921 0 g，精密稱定，分別置 100 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜定容，搖勻，各精密量取5 mL，置同一50 mL容量瓶中，用二甲基亞砜定容，即得混合對(duì)照品貯備液，精密量取5 mL，置50 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜定容，即得混合對(duì)照品溶液。取甲磺酸伊馬替尼約1 g，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜溶解并定容，搖勻，即得供試品溶液。取二甲基亞砜作為空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下空白溶液和混合對(duì)照品溶液各適量，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，色譜圖見(jiàn)圖1。甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 依次出峰，分離度均大于1.5，基線分離良好；空白溶液在與上述7 種對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，表明專屬性良好。

線性關(guān)系考察：精密量取2.2 項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液0.25，1.00，2.50，5.00，7.50，10.00 mL，分別置 50 mL容量瓶中，用二甲基亞砜定容，搖勻，制成系列溶合對(duì)照品溶液，取適量，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)、各成分質(zhì)量濃度（C，mg／mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見(jiàn)表1。

檢測(cè)限考察：精密量取2.2 項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液0.5 mL，置100 mL 容量瓶中，用二甲基亞砜定容，搖勻，按 2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比（S ／ N）＝3 計(jì)算檢測(cè)限。結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 氣相色譜圖1.methanol 2.ethanol 3. acetone 4.isopropanol 5. tetrahydrofuran 6.ethyl acetate 7.dimethylformamideA.Blank solution B.Mixed reference solutionFig.1 GC chromatograms

表1 7 種有機(jī)溶劑的線性范圍、回歸方程、檢測(cè)限Tab.1 Linear range，regression equation and LOD of seven organic solvents

精密度試驗(yàn)：取 2.2 項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄峰面積。結(jié)果甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 峰面積的 RSD 分別為 1.72% ，2.03% ，2.20% ，2.22% ，2.12%，2.04%，4.91%（n ＝ 6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，室溫下放置 0，2，4，8，12 h 后，按 2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算各成分峰面積。結(jié)果甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、DMF 的 RSD 分別為4.37%，6.95% ，8.32% ，14.94% ，4.72% ，7.22% ，11.57%（ n ＝5），表明對(duì)照品溶液室溫下放置8 h 內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取甲磺酸伊馬替尼約0.5 g，精密稱定，置5 mL 容量瓶中，共9 份，分別加入約相當(dāng)于各成分限度50%，100%，150%的混合對(duì)照品溶液，用二甲基亞砜定容，平行3 份，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3 批原料藥，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果7 種殘留有機(jī)溶劑含量測(cè)定結(jié)果均低于檢測(cè)限。

3 討論

DMF 的沸點(diǎn)很高，不宜采用頂空進(jìn)樣法，采用直接進(jìn)樣法靈敏度高，精密度及重復(fù)性好。選擇溶劑時(shí)，由于四氫呋喃、DMF 限度要求較低，對(duì)靈敏度要求高，因此需制備的樣品質(zhì)量濃度很高。樣品僅在水、二甲基乙酰胺、二甲基亞砜中的溶解度滿足要求，若采用二甲基乙酰胺為溶劑，會(huì)對(duì)DMF 的檢測(cè)產(chǎn)生較大干擾，同時(shí)考慮到直接進(jìn)樣，以水為溶劑影響色譜柱使用壽命，故采用二甲基亞砜為溶劑。選擇色譜柱時(shí)，本研究中涉及的有機(jī)溶劑極性差異較大，采用常見(jiàn)的非極性和弱極性色譜柱 HP －1（30 m × 0.25 mm，1.0 μm）和HP － 5（30 m ×0.25 mm，1.0 μm），發(fā)現(xiàn)丙酮和異丙醇難以實(shí)現(xiàn)基線分離；采用強(qiáng)極性色譜柱 DB－WAX（30 m×0.25 mm，0.25 μm），HP － Innowax（30 m × 0.25 mm，0.5 μm），HP － Innowax（30 m × 0.32 mm，0.5 μm），異丙醇和乙醇的分離度均不佳。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，使用上述色譜柱時(shí)均存在不同程度的空白干擾。選用中等極性色譜柱DB － 624，能實(shí)現(xiàn)對(duì)各組分的良好分離，未發(fā)現(xiàn)空白干擾。

本研究中建立了同時(shí)測(cè)定甲磺酸伊馬替尼中7 種殘留溶劑含量的方法，3 批樣品的檢測(cè)結(jié)果均符合有關(guān)規(guī)定。所建立的方法操作簡(jiǎn)便、快速，靈敏度及回收率均較高，可為制訂及完善甲磺酸伊馬替尼原料藥相關(guān)法定標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n ＝9）Tab.2 Results of the recovery test（n ＝ 9）