趙麗麗,楊國棟,賈俊香,李 娜,蔣欣陶,田 云,姜濱濱,張榮風,崔連偉,
(1.遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所,遼寧沈陽 110161;2.遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,遼寧營口 115009)
蔥(Allium fistulosumL.)屬于百合科(Liliaceae)蔥屬(Alilium),起源于中國西部和俄羅斯的西伯利亞,在中國已經(jīng)有2000 多年的栽培歷史。作為一種重要的香辛和保健蔬菜,近些年,蔥規(guī)模化、標準化、機械化生產(chǎn)模式正加速推進[1?2],蔥產(chǎn)業(yè)化發(fā)展呈現(xiàn)出穩(wěn)步增長的趨勢,國內(nèi)和國際市場對大蔥產(chǎn)量和品質(zhì)的要求也越來越高。我國大蔥生產(chǎn)占全世界的90%,遼寧省栽培面積近55 萬畝[3],產(chǎn)量達到200 多萬噸,人均年消費量超過40 kg,基本可以滿足本地需求量。
目前,國內(nèi)外關(guān)于蔥屬作物品質(zhì)方面已經(jīng)做了一些研究。高莉敏等[4]對3 個中國類型和1 個日本類型大蔥進行營養(yǎng)品質(zhì)方面的成分分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),中國類型的雞腿蔥和分蘗大蔥糖量較高,纖維含量較少,維生素C 和蛋白質(zhì)含量較高,適合鮮食,日本大蔥含糖量二丙酮酸含量較高,適合熟食,得出不同類型間的蔥品質(zhì)差異很大。吳慶等[5]以紅蔥和普通白蔥為研究對象,發(fā)現(xiàn)在6 個品質(zhì)指標中,緊實度與干物質(zhì)率、總糖、蛋白質(zhì)、香辛油含量具有顯著的正相關(guān)性,同心紅蔥中除氨基酸外,其他指標均顯著高于其他品種蔥。方海田等[6]對蔥屬的揮發(fā)性成分比較分析發(fā)現(xiàn),總含量最高的均為含硫化合物和醛類,酯類、雜環(huán)類和醇類物質(zhì)次之,并推測不同屬間特殊辛香氣味可能是由于組分含量差異而造成的。
利用主成分分析、聚類分析的方法對品質(zhì)性狀進行評價已經(jīng)在黃瓜[7]、蘋果[8]、楊梅[9]、桃[10]等作物上有所報道,但還未有同時應(yīng)用幾種方法對不同品種蔥品質(zhì)進行系統(tǒng)分析方面的研究。本試驗對不同來源的42 個蔥品種、39 個性狀,運用主成分分析、相關(guān)性分析、聚類分析等方法,對品質(zhì)性狀進行綜合分析和評價,來明晰不同品種間的差異性,為優(yōu)良品種篩選提供科學(xué)的參考依據(jù)。
本試驗所用蔥材料采自遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所實驗基地,42 個品種,采樣時務(wù)必保證每個品種的材料植株整齊、無機械傷和病蟲害,每批樣品采完后立即運送到蔬菜所試驗室進行取樣。所測品種如表1 所示;重鉻酸鉀、硝酸、硫代硫酸鈉、氯化鋇、硫酸銅、鄰菲啰啉、碘酸鉀、亞鐵氰化鉀、乙醇、正己烷、石油醚、甲苯、鹽酸、硫酸銅、酒石酸鉀鈉、乙酸鋅、冰乙酸國藥集團化學(xué)試劑有限公司;鄰苯二甲酸氫鉀、丙酮、亞甲藍、甲基紅天津市化學(xué)試劑研究所有限公司;蒽酮、乙酸乙酯、硫酸、氫氧化鈉 西隴科學(xué)股份有限公司;乙酸鈉、亮氨酸、異丙醇、氰化鈉、氯化鈉、甲醛 湖北奧生新材料科技有限公司;碳酸氫鈉、抗壞血酸、水合茚三酮、酚酞 天津市北辰方正試劑廠;牛血清蛋白、考馬斯亮藍G-250、磷酸、草酸、2,6-二氯酚靛酚、葡萄糖 天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司;以上試劑均為分析純。
表1 蔥供試品種Table 1 Tested varieties of welsh onions
0~200 mm 型游標卡尺 上海九量五金工具有限公司;JE502 型分析天平 上海浦春計量儀器有限公司;CT3 型質(zhì)構(gòu)分析儀 Brookfield 工程實驗室公司;JYL C020E 型料理機 九陽股份有限公司;DHG-9053A 型電熱恒溫鼓風干燥箱上海精宏實驗設(shè)備廠;UV752N 分光光度計 上海佑科儀器儀表有限公司;ThermoScientificTM6000i 離心機 賽默飛世爾科技(中國)有限公司;Vortex-Genie2 旋渦混合器 北京開源國創(chuàng)科技有限公司;CR-410 色差計 宏宇光電儀器有限公司;BrookField CT3 型質(zhì)構(gòu)儀 上海柜谷科技發(fā)展有限公司;Thermo Trace GC Ultra-ITQ900 氣質(zhì)聯(lián)用儀、TRACE TR-5MS 型色譜柱 賽默飛世爾科技(中國)有限公司。
外觀品質(zhì)性狀的指標可直接測定,內(nèi)在品質(zhì)性狀的指標需要先取樣,再置于?20 ℃冰箱中保存待用。
1.2.1 外觀品質(zhì)測定 單株重采用百分之一電子天平測定。株高、蔥白長度、葉片長度、株幅采用直尺測定。莖粗采用游標卡尺測定。葉片顏色、葉鞘顏色和葉面蠟粉采用色差儀測定(L*表示明暗度,a*表示紅綠色,b*表示黃藍色),以白板為標準背景,白板基礎(chǔ)值L*=98.12,a*=1.02,b*=0.81。莖基部形狀、單株葉數(shù)、葉片伸展角度、葉出孔閉合程度、葉片挺直度、蔥白緊實度、分蘗性狀調(diào)查參考國家農(nóng)作物種質(zhì)資源平臺中的“蔥種質(zhì)資源描述規(guī)范”來完成。
1.2.2 質(zhì)地品質(zhì)測定 蔥白硬度采用CT3 型質(zhì)構(gòu)分析儀測定,質(zhì)構(gòu)剖面分析(Texture profile analysis,TPA)及穿刺檢測,測定部位為莖基部向上3 cm 處的位置。參數(shù)設(shè)置參考劉莉等[11]的試驗參數(shù),并稍作調(diào)整。探頭采用TA9/1000(直徑20 mm)探頭,測試前速度為2 mm/s,測試速度為1 mm/s,測試后速度0.5 mm/s,兩次循環(huán),循環(huán)間可恢復(fù)時間3 s,下壓距離為2 mm,觸發(fā)力為0.75 N,數(shù)據(jù)頻率10 點/s。每個樣品重復(fù) 5 次。
1.2.3 蔥內(nèi)在品質(zhì)測定 含水率的測定:采用烘干法測量并計算,取樣部位為蔥白和假莖,含水率(%)=(單株鮮重?單株干重)/單株鮮重×100%。
以下內(nèi)在品質(zhì)指標測定的取樣部位為蔥白部分。
可溶性糖的測定采用蒽酮比色法[11],利用分光光度計在波長630 nm 處測定吸光度值并計算。
特征性揮發(fā)物質(zhì)的測定采用頂空固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用儀(SPME-GC-MS)測定[6,12],將獲得的物質(zhì)通過質(zhì)譜庫進行比對、分析成分并計算含量。
維生素C 的測定利用分光光度計在波長534 nm處測吸光度值并計算[13]。
可溶性蛋白的測定采用考馬斯亮藍G-250 方法[14],利用分光光度計在波長595 nm 處測定吸光度值并計算蛋白質(zhì)含量。
游離氨基酸的測定采用茚三酮比色法[15],利用分光光度計在波長570 nm 處測定吸光度值并計算。
香辛油的測定以石油醚為溶劑,采用索氏提取法測定[16]。
纖維素的測定采用酸堿洗滌法,然后利用Tecator分析儀測定[17?18]。
運用Microsoft Excel2010 軟件進行數(shù)據(jù)處理,IBM SPSS Statistics22 軟件進行方差分析、主成分分析、聚類分析和相關(guān)性分析,Origin2.0 軟件作圖。
對葉片伸展度、葉片挺直度、葉出孔閉合度、假莖基部形狀、蔥白緊實度和分蘗有無這些性狀進行觀察,結(jié)果如表2 所示,19 個品種的葉片伸展度小于30°,其余品種葉片伸展度在30°~60°之間。31 個品種的葉片呈挺直狀態(tài),其他品種呈下垂和半下垂狀。葉出孔呈現(xiàn)半閉合的品種占總品種數(shù)量的1/2,全閉合品種為17 個,不閉合的品種最少。假莖基部為直筒狀的品種有24 個,近紡錘形的品種為6 個,雞腿狀有12 個。蔥白緊實度以緊實品種為主。絕大多數(shù)品種是有分蘗的。
表2 蔥外觀品質(zhì)質(zhì)量性狀Table 2 Survey of appearance quality traits of welsh-onions
對42 份蔥材料的19 個外觀品質(zhì)數(shù)量性狀進行統(tǒng)計分析,如表3 所示,不同品種中各指標間存在豐富變異,表現(xiàn)出不同程度多樣性。單株重、株高、葉片長度整體都較高,其中韓文字?1 單株重高達530 g、遼蔥9 號株高119.33 cm、遼蔥8 號葉片長73.67 cm,而日本黑葉鋼蔥單株重最低,僅為70 g,保豐極晚抽株高和葉片長為64 和40 cm。假莖和葉片含水量整體水平低,在0.58%~0.97%范圍內(nèi)。韓文字?1 蔥白較粗,達到1.47 cm,盛遠高白王蔥白較硬,達到17.38。五葉齊葉片和上海匯合葉鞘顏色較淺、偏黃綠,韓文字?1 蔥葉L值最低,蠟粉最多,而遼蔥1 和海陽蔥最少。變幅最大的排在前5 名分別為株高、蔥白長度、葉片長度、株幅、葉片色度,最小的分別為假莖含水量、單株重、葉片含水量、蠟粉度、蔥白粗度。通過變異系數(shù)分析可以得出蔥外觀品質(zhì)數(shù)量性狀變異程度較大的前5 名分別為單株葉片數(shù)、葉片色度、單株重、蔥白長度、株幅。
表3 蔥外觀品質(zhì)數(shù)量性狀分布Table 3 Distribution of quantitative traits of external quality of welsh-onions
同理,對10 個內(nèi)在品質(zhì)性狀進行統(tǒng)計分析結(jié)果見表4,二丙基二硫、纖維素和雜環(huán)類物質(zhì)的相對含量較高,其中二丙基二硫的均值、總值和變幅都達到最高水平,“萬能葉蔥”中二丙基二硫含量最高,達到93.54%,高出同心紅蔥的3 倍多[6],含硫化合物能原生的、濃郁的辛香味,稍帶有硫磺的氣味,對洋蔥、大蒜風味貢獻很大[19]。纖維素參與人體葡萄糖轉(zhuǎn)運,對消化其重要作用[20],而且含量與植株的抗倒伏性是成正相關(guān)的,本研究中,遼蔥9 號纖維素含量最高,達到20.89%。這些品種中所含的可溶性蛋白、游離氨基酸和香辛油相對含量較其他性狀低,香辛油也是決定蔥等辛辣作物風味的特征性物質(zhì)[21],但是本試驗中所測含量并不高。可溶性糖與含水率與耐貯藏性密切相關(guān)[22?24],由于存在取樣部位的差異,本試驗中二者并未成正相關(guān)。二丙基二硫和雜環(huán)類物質(zhì)的標準差、變異系數(shù)也分別為最高水平,說明不同品種蔥中所含的這兩類物質(zhì)含量之間存在很大差異,而其他物質(zhì)含量在品種間的差異較小。
表4 蔥內(nèi)在品質(zhì)數(shù)量性狀分布Table 4 Distribution of quantitative traits of internal quality of welsh-onions
表5 反映了不同品種蔥品質(zhì)性狀的相關(guān)性。單株重與株高、蔥白長度、蔥白粗度、葉片長度和株幅這些指標彼此之間在0.01 水平上呈現(xiàn)顯著相關(guān),與前人研究結(jié)果相一致[4],蠟粉與維生素C 在0.01 水平上顯著相關(guān),香辛油、乙醇、環(huán)類物質(zhì)含量與干物質(zhì)和可溶性固形物糖含量表現(xiàn)出顯著性相關(guān),這與前人研究結(jié)果也是相同的[22]結(jié)合其他成分,說明這些指標對蔥品質(zhì)形成具有重要意義。不同指標彼此間具有一定程度的相關(guān)性,但是反映的信息具有重疊,因此有必要對29 個指標進行分類并簡化來提高綜合評價的效率,同時有利于提高統(tǒng)計信息的準確性。
對蔥品質(zhì)的數(shù)量性狀進行主成分分析結(jié)果見表6 和圖1 所示,前10 個主成分的特征值均大于1,累計方差貢獻率達到81.2 %,這些主成分可反映原始變量的大部分信息,從而起到降維的作用。主成分1 的貢獻率為18.67%,代表指標為株高、蔥白長度和葉片長度。主成分2 方差貢獻率為10.98%,代表指標為葉片顏色。主成分3 代表指標為假莖含水率和蠟粉,主成分4 代表指標為葉鞘顏色,主成分5 代表指標為葉片含水率和維生素C。主成分6 代表指標為可溶性糖和蔥白硬度,主成分7 代表性指標為游離氨基酸和二丙基二硫,主成分8 代表性指標為可溶性蛋白和香辛油含量,主成分9 代表性指標為纖維素,主成分10 的方差貢獻率最小,僅為3.65%,代表指標為醇類物質(zhì)。結(jié)合相關(guān)性分析(表5),株高、蔥白長度、蔥白粗度、葉片長度、葉片顏色、葉鞘顏色、蠟粉、假莖含水率、纖維素、蔥白硬度、可溶性糖、游離氨基酸、香辛油、醇類物質(zhì)這14 個因子可以認為是蔥品質(zhì)的評價指標。其中前4 個因子可定義為植株大小因子,5~7 定義為葉色因子,8~10 定義為質(zhì)地因子,11~14 定義為風味因子。
表5 蔥品質(zhì)指標間的相關(guān)性分析Table 5 Correlation analysis of quality indexes of welsh-onions
表6 蔥品質(zhì)數(shù)量性狀主成分分析結(jié)果Table 6 Principal component analysis result of quantitative traits for welsh-onions
圖1 主成分分析碎石圖Fig.1 Screen plot of principal component analysis
為明晰42 個品種蔥品質(zhì)的綜合排名,根據(jù)10 個主成分的得分情況,以各自的方差貢獻率為權(quán)重,二者相乘求和構(gòu)建綜合評價得分函數(shù),計算出各個品種的綜合得分及排名。
F=0.1867F1+0.1098F2+0.1F3+0.087F4+0.0782F5+0.065F6+0.0547F7+0.0501F8+0.044F9+0.0365F10
其中,F(xiàn) 為每個品種蔥品質(zhì)的綜合得分,F(xiàn)1~F10 分別為每個主成分得分。如表7 示,得分越高,表明該品種的品質(zhì)越好,綜合得分排在前5 名的品種編號依次為3、8、11、14、30,分別是“遼蔥7 號”、“遼蔥12 號”、“萬能葉蔥”、“五葉齊”和“特級元藏大蔥”。
表7 42 種蔥測定指標得分及排名Table 7 Scores and ranking of determination indexes of 42 kinds of welsh-onions
運用系統(tǒng)聚類和K 均值聚類兩種方法,依據(jù)數(shù)量品質(zhì)性狀觀測值距離聚心的長度,采用離差平方和對不同品種蔥進行聚類分析。如圖2 所示,在歐式距離20 處,這些品種被聚為2 類,而在歐式距離為5 處,被聚為6 類。在進行K 均值聚類分析時,將這些品種的性狀設(shè)定為4 類,見表8 有18 個品種聚為Ⅰ類,占總品種數(shù)量的42.86%,而Ⅳ類僅有2 個品種,占總數(shù)的4.76%。通過這兩種聚類分析方法可以看出,有些品種的聚類大致是相同的,說明這兩種方法的分析是真實可信的。表9 中主成分分析綜合得分排在前5 位的被分別聚在兩大類中,3 獨自聚在一類中,8、11、14、30 聚在一大類中,其中8 和30 歐式距離很近,聚在一小類中。這與兩種聚類分析結(jié)果是完全一致的。
表8 K 值聚類分析結(jié)果Table 8 Analysis results of K-means cluster
圖2 42 種蔥的系統(tǒng)聚類分析圖Fig.2 Systemic cluster analysis of 42 kinds of welsh-onions
根據(jù)42 個品種蔥品質(zhì)性狀的主成分分析綜合得分結(jié)果,對4 類品種進行等級劃分,由表9 可知,最終得分從大到小依次為C>B>D>A。由此表明,C 等級的品種得分最高,品質(zhì)為優(yōu),B 等級品種的品質(zhì)為良,D 等級品種的品質(zhì)為一般,A 等級品種的品質(zhì)為差。
表9 42 種蔥最終等級劃分Table 9 Final grading of 42 kinds of welsh onions
本文通過對42 種蔥外在品質(zhì)和內(nèi)在品質(zhì)性狀指標進行觀察測定發(fā)現(xiàn),不同品種間是存在一定差異的,主要原因在于品種的遺傳特性不同。在對數(shù)量性狀指標主成份分析中發(fā)現(xiàn),“遼蔥7 號”和“遼蔥12 號”綜合得分高于其他品種,因此綜合品質(zhì)為最優(yōu)。對這些品種的品質(zhì)進行聚類分析,劃分為4 個等級,級別最高的為C 級,包括遼蔥1 號、遼蔥10 號、遼蔥11 號等15 個品種。二丙基二硫是蔥、洋蔥、大蒜中含有的典型特征性揮發(fā)物質(zhì)之一,散發(fā)濃郁的硫磺似的刺激氣味,在調(diào)味香精中被普遍應(yīng)用,本研究中“萬能葉蔥”、“韓國春川”、“日本黑葉鋼蔥”中二丙基二硫含量較高,說明這三個品種在菜肴等食品調(diào)味中具有重要的應(yīng)用價值。香辛油是決定蔥辣味的物質(zhì)[22],含量越高,辣味越重,有些品種可溶性糖含量高而香辛油含量低,適宜鮮食,反之則適宜熟食,醇類物質(zhì)可使植物散發(fā)獨特的香氣,二丙基二硫、可溶性糖、香辛油、醇類物質(zhì)共同構(gòu)成了蔥獨特的口感風味,含水率、可溶性糖和干物質(zhì)含量是決定蔥耐貯性的重要因素。而且纖維素含量與植株的抗倒伏性是成正相關(guān)的。通過本試驗的研究,將對蔥的品種改良、開發(fā)不同地區(qū)資源和推廣種植提供科學(xué)的參考依據(jù),同時也為深入研究品質(zhì)相關(guān)分子機理奠定理論基礎(chǔ)。