基于新型標(biāo)記材料的免疫分析技術(shù)在真菌毒素檢測中應(yīng)用的研究進(jìn)展

胡高爽，吳天琪，蘇 丹，高娟娟，陳永媛，韓 雪，郝建雄，李 娜，郭 峰，高 山,

（1.河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北石家莊 050000；2.河北英茂生物科技有限公司，河北石家莊 050000；3.河北省食品質(zhì)量與安全檢測技術(shù)創(chuàng)新中心，河北石家莊 051130）

真菌毒素（Mycotoxin）是由真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，按化學(xué)結(jié)構(gòu)來分，目前已知的真菌毒素有300 多種，其中具有代表性的有黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮毒素、伏馬毒素、赭曲霉毒素、嘔吐毒素等。真菌毒素不僅能夠?qū)е率称犯瘮∽冑|(zhì)、品質(zhì)降低，而且給人類和動物帶來嚴(yán)重的健康風(fēng)險，增加自身細(xì)胞出現(xiàn)癌變、畸形、突變的風(fēng)險[1?2]。因此針對其開發(fā)簡單快速、靈敏可靠的檢測方法，具有重要的研究價值和現(xiàn)實意義。真菌毒素的檢測方法有很多種，其中，儀器分析法，包括液相色譜法（Liquid chromatography,LC）[3]、液相色譜法與質(zhì)譜聯(lián)用方法（LC-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）[4?5]、氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用法[6?7]等，因具有靈敏度高、測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠是目前最常用的真菌毒素檢測方法，但由于其需要使用大量的有機(jī)溶劑，需要昂貴的精密儀器，檢測成本高，檢測步驟冗長繁瑣且需要專業(yè)的操作人員，因而在現(xiàn)場快速篩查中的應(yīng)用受到很大的限制。

免疫分析方法是一種基于抗體與抗原的特異性結(jié)合反應(yīng)，是生物分析的重要手段之一，具有操作簡單、特異性好、靈敏度高等優(yōu)點[8?9]，非常適合于大量樣品的現(xiàn)場快速檢測和篩選，在真菌毒素的快速檢測中應(yīng)用廣泛。近年來，隨著納米科學(xué)的發(fā)展，一些新型標(biāo)記材料的出現(xiàn)促進(jìn)了免疫分析技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，本文針對基于新型標(biāo)記材料的免疫分析技術(shù)應(yīng)用于糧食產(chǎn)品中真菌毒素快速檢測的研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，以期為免疫分析技術(shù)在真菌毒素檢測的應(yīng)用及發(fā)展提供參考。

1 酶聯(lián)免疫吸附法在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是利用固相載體上的抗原（或抗體）能夠與待測樣品的抗原（或抗體）特異性結(jié)合，洗滌除去未與固相結(jié)合的其他物質(zhì)，再加入能夠與抗原抗體結(jié)合的酶，此時待測物的量與固相上酶的量呈一定比例，最后加入底物，在酶催化的作用下底物顏色發(fā)生改變，通過測定底物的吸光度反映待測物量的多少，最終實現(xiàn)對目標(biāo)物定性定量分析。Michalina 等[10]利用ELISA 方法實現(xiàn)了花生中黃曲霉毒素B1和總黃曲霉毒素的快速檢測，其針對黃曲霉毒素B1和總黃曲霉毒素的檢測限分別能夠達(dá)到0.4 μg/kg 和0.3 μg/kg。Zhang 等[11]建立了測定谷物中赭曲霉毒素A 含量的間接競爭ELISA 方法，檢測限能夠達(dá)到0.15 ng/mL，線性范圍為0.55～6.75 ng/mL。ELISA方法利用抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，具有靈敏好、特異性強(qiáng)等特點，但由于其采用酶蛋白作為標(biāo)記物，需要復(fù)雜的樣品前處理步驟消除樣品中物質(zhì)的干擾，因此，目前在真菌毒素檢測中的應(yīng)用受到一定的限制，尋找抗基質(zhì)干擾能力強(qiáng)的信號標(biāo)記物成為目前酶聯(lián)免疫吸附法發(fā)展的趨勢。

近年來一些新型的納米標(biāo)記材料越來越多的引起關(guān)注，越來越多的應(yīng)用于真菌毒素的檢測中。Zhang 等[12]將碲化鎘量子點與黃曲霉毒素B1的單克隆抗體偶聯(lián)，建立了直接競爭熒光免疫吸附法（FLISA），該方法的檢測限為0.016 ng/mL，花生基質(zhì)中樣品回收率能夠達(dá)到85%～117% 。Wu 等[13]以包被原修飾的磁性納米顆粒（MNPs）作為免疫傳感探針，以多色上轉(zhuǎn)換納米粒子（UCNPs）修飾的抗體作為熒光信號探針，建立了能夠測定玉米中黃曲霉毒素B1（AFB1）和赭曲霉毒素 A（ochratoxin A，OTA）2 種毒素的新型 FLISA。這種方法利用 UCNPs 多組分檢測的特性和 MNPs 的磁性分離效應(yīng)，表現(xiàn)出靈敏度高（OTA 的檢測限均低至 0.01 μg/kg），檢測時間短等優(yōu)點，可用于復(fù)雜基質(zhì)中真菌毒素的快速檢測。Hu 等[14]利用發(fā)射波長為474 nm 的上轉(zhuǎn)換納米粒子，構(gòu)建了磺胺喹惡啉上轉(zhuǎn)換標(biāo)記-磁分離熒光免疫分析方法。該方法對磺胺喹惡啉的方法檢出限為0.1 μg/L，添加回收實驗得到磺胺喹惡啉的回收率良好，在69.8%～133.0%之間，且與商業(yè)化ELISA 試劑盒相比較，測定結(jié)果具有很好的一致性。

2 免疫層析技術(shù)在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

免疫層析方法是通過將特異性的抗原（或抗體）固定在硝酸纖維素膜等載體的某一區(qū)帶上，當(dāng)樣品和標(biāo)記探針混合物在層析作用下在膜上移動并流經(jīng)該區(qū)帶時，樣品中相應(yīng)的抗體（或抗原）與膜上對應(yīng)的抗原（或抗體）發(fā)生特異性結(jié)合并富集，并在該區(qū)帶上顯示出探針標(biāo)記物的信號，進(jìn)而實現(xiàn)對目標(biāo)物的定性定量分析。該技術(shù)由于操作步驟簡單、快速，成本低，在疾病快速診斷、食品安全檢測、環(huán)境污染監(jiān)測等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。

2.1 膠體金免疫層析技術(shù)

膠體金作為標(biāo)記材料具有檢測結(jié)果可視化、制作簡單等優(yōu)點，在免疫層析技術(shù)中應(yīng)用廣泛。Hou 等[15]構(gòu)建了基于25 nm 膠體金的復(fù)合免疫層析分析方法，并實現(xiàn)同時對小麥和玉米樣品中伏馬毒素B1（FB1）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）和玉米赤霉烯酮（ZEN）進(jìn)行定性半定量檢測。在最優(yōu)條件下，免疫層析試紙對FB1、DON 和ZEN 的可視化定量限分別為60、12.5 和6 ng/mL。然而膠體金作為信號標(biāo)記材料具有成本高、易受環(huán)境污染、易受樣品基質(zhì)干擾等缺點，因此在真菌毒素檢測中應(yīng)用受到限制。

2.2 基于功能性納米粒子的免疫層析技術(shù)

近年來一些基于新型納米粒子的免疫層析技術(shù)受到越來越多的關(guān)注。納米粒子一般是指尺寸在1～100 nm 的超微粒子，具有比表面積大、表面穩(wěn)定性高等特點。將其作為標(biāo)記物代替?zhèn)鹘y(tǒng)膠體金，可顯著提升現(xiàn)有免疫層析分析方法的靈敏度和穩(wěn)定性。

2.2.1 基于納米微球的免疫層析技術(shù) 納米微球免疫層析技術(shù)是利用微球表面修飾羧基，進(jìn)而可共價結(jié)合抗體，同時利用其穩(wěn)定而強(qiáng)的顏色信號或熒光信號進(jìn)行定量檢測的新型檢測技術(shù)。Liu 等[16]利用熒光微球作為信號探針并應(yīng)用于免疫層析技術(shù)中實現(xiàn)醬油中黃曲霉毒素B1的快速檢測。該方法針對黃曲霉毒素B1的可視檢出限為2.5 μg/L，低于中國政府規(guī)定的最高5 μg/L。并且測定的結(jié)果與液相.色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）的結(jié)果一致。Zhang 等[17]建立了基于熒光微球的免疫層析技術(shù)，并成功應(yīng)用于牛奶中黃曲霉毒素M1的快速檢測。在最佳條件下，該方法的IC50值為36.3 ng/L，樣品回收率為76.6%～110.8%，變異系數(shù)為4%～14.7%。結(jié)果表明，應(yīng)用該方法檢測牛奶中AFM1殘留具有簡便、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點。Li 等[18]構(gòu)建了基于乳膠微球的免疫層析技術(shù)，并研制了基于智能手機(jī)的定量檢測裝置，最終實現(xiàn)了谷物和飼料中玉米赤霉烯酮（ZEN）的現(xiàn)場檢測，利用該系統(tǒng)針對谷物和飼料中ZEN 的檢測限分別為0.08 和0.18 μg/kg，該方法表現(xiàn)出穩(wěn)定性好、靈敏度高、檢測方便快捷等優(yōu)點，非常適合現(xiàn)場快速檢測。

2.2.2 基于量子點的免疫層析技術(shù) 量子點（Quantum dots，QDs）粒徑一般介于1～10 nm 之間，是一類由Ⅱ-Ⅵ族（如CdSe，CdTe，CdS，ZnSe 等）或Ⅲ-Ⅴ族（如InP，InAs 等）元素組成的納米顆粒。與傳統(tǒng)的熒光染料相比，它具有寬的紫外激發(fā)光譜和狹窄對稱的熒光發(fā)射光譜，量子產(chǎn)率高，光化學(xué)穩(wěn)定性強(qiáng)，熒光壽命長，可接受多次激發(fā)等優(yōu)越的熒光特性，因此，可以很好地應(yīng)用于熒光標(biāo)記。Hu 等[19?20]利用量子點與膠體金存在熒光淬滅的現(xiàn)象，構(gòu)建了基于量子點的信號turn-on 模式的熒光猝滅免疫層析檢測方法，并成功應(yīng)用于動物源性食品中喹諾酮和磺胺類獸藥的快速檢測。該設(shè)計方法操作簡便，檢測時間短，靈敏度高，可以為獸藥殘留快速檢測提供新思路。Hou 等[21]構(gòu)建了基于量子點標(biāo)記的熒光免疫層析法，并實現(xiàn)了谷物中的伏馬毒素B1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）和玉米赤霉烯酮（ZEN）同時定量檢測，針對FB1、DON 和ZEN 的IC50值分別為12.66、2.97、0.87 ng/mL。在構(gòu)建針對小分子的免疫層析技術(shù)的過程中，直接標(biāo)記抗體可能會影響抗體與靶抗原的結(jié)合性能。此外，化學(xué)合成半抗原偶聯(lián)物，特別是毒性半抗原，可能面臨操作復(fù)雜、批次間誤差大、環(huán)境污染等問題。Hu 等[22]利用量子點標(biāo)記的鏈球菌蛋白G 作為通用熒光探針和生物合成模擬肽MBP 融合蛋白（F15-MBP）作為生物毒素包被原的替代物構(gòu)建免疫層析方法，改善了以生物毒素直接制備半抗原存在污染環(huán)境、操作復(fù)雜等缺點，并實現(xiàn)了伏馬毒素B1的快速檢測，該方法表現(xiàn)出檢測靈敏度高，毒性小，環(huán)境友好等特點，可以作為真菌毒素檢測的有效方法。

2.2.3 基于普魯士藍(lán)納米粒子的免疫層析技術(shù) 普魯士藍(lán)（Prussian blue，PB）是一種古老的藍(lán)色染料，由 Fe2+和 Fe3+混合價態(tài)組合成的六氰合鐵酸鹽，其制備工藝簡單成本低，表面易修飾，且具有良好的光物理、電化學(xué)、電質(zhì)變色和磁性等特點被應(yīng)用于諸多領(lǐng)域。近年來，其在食品安全檢測方面的應(yīng)用逐漸增多。Zhao 等[23]利用普魯士藍(lán)納米粒子作為標(biāo)記材料構(gòu)建了針對克侖特羅快速檢測的免疫層析試紙條，該方法針對克倫特羅的檢測靈敏度為1.0 ng/mL，是傳統(tǒng)膠體金免疫層析技術(shù)的5 倍。Tian 等[24]利用普魯士藍(lán)納米粒子介導(dǎo)信號的產(chǎn)生和級聯(lián)放大靈敏的免疫層析方法，并實現(xiàn)了針對赭曲霉毒素A（OTA）的快速檢測。當(dāng)OTA 濃度為10 ng/mL 時，試紙條T 線上的顏色完全消失。普魯士藍(lán)作為一種新型的納米粒子在免疫層析技術(shù)中的應(yīng)用有待進(jìn)一步研究和開發(fā)。

2.2.4 基于上轉(zhuǎn)換納米粒子的免疫層析技術(shù) 上轉(zhuǎn)換納米粒子（UCNPs）是指受到光激發(fā)時能夠通過多光子機(jī)制發(fā)射比激發(fā)波長短的熒光納米材料[25?26]，其基本組成包括基質(zhì)材料、激活劑和敏化劑，相較于傳統(tǒng)的有機(jī)染料作為生物標(biāo)記材料，具有如下諸多優(yōu)點[27,28]：光化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定性高；長波長激發(fā)短波長發(fā)射，背景干擾小，特別適合復(fù)雜生物樣本中的熒光標(biāo)記。黃震等[29]利用上轉(zhuǎn)換納米材料，構(gòu)建了牛奶中大腸桿菌O157:H7 的快速檢測的免疫層析方法，方法檢測限能夠達(dá)到2.8×104CFU/mL。該方法靈敏度較高，抗基質(zhì)干擾能力強(qiáng)，不僅能用于大腸桿菌O157:H7 的檢測，也可被推廣應(yīng)用于其它食源性致病菌檢測。Gong 等[30]開發(fā)了一個小型化、便攜化的基于上轉(zhuǎn)換納米粒子的免疫層析檢測（LFA）平臺，該平臺由免疫層析檢測系統(tǒng)、UCNP-LFA 讀數(shù)和智能手機(jī)輔助的UCNP-LFA 分析儀組成。LFA 檢測系統(tǒng)由三種發(fā)射波長UCNPs 構(gòu)成，可以進(jìn)行多路檢測。UCNP-LFA 讀數(shù)長寬高為24.0 cm×9.4 cm×5.4 cm（L×W×H）和重量為0.9 kg。該分析儀基于智能手機(jī)定制設(shè)計的軟件（稱為UCNP-LFA 分析儀），可以實時得到定量分析結(jié)果。通過對小分子赭曲霉毒素A（OTA)、重金屬離子（Hg2+）、細(xì)菌（沙門氏菌，SE）、核酸（乙肝病毒，HBV）和蛋白（生長刺激表達(dá)基因2，ST-2）的高靈敏度定量檢測，證明了該平臺的通用性。

2.2.5 基于磁性納米粒子的免疫層析技術(shù) 磁性納米粒子主要由磁性元素包括Fe，Ni，Co 以及它們的氧化物組成，具有比表面積大，可快速移動及生物相容性、超順磁性、單分散性好等特性，在磁場作用下可實現(xiàn)快速定位富集和分離[31]。Tang 等[32]以納米Fe2O3顆粒為核，金標(biāo)納米顆粒為殼，制備了磁納米金微球（MnGMs），并構(gòu)建了一種快速檢測食物中黃曲霉毒素 B2（AFB2）的免疫層析檢測方法。該方法針對AFB2檢出限為0.9 ng/mL，比傳統(tǒng)膠體金免疫層析試紙條靈敏度提高3 倍。Huang 等[33]利用納米磁珠富集和分離 AFM1，建立了快速檢測 AFM1的免疫層析方法，該方法針對牛奶中AFM1檢出限為0.1 ng/mL，且檢測結(jié)果和酶聯(lián)免疫吸附法檢測結(jié)果相一致，說明該方法非常適合牛奶中AFM1的快速檢測。劉坤等[34]采用聚乙烯亞胺-戊二醛介導(dǎo)體系制備了ZEN 免疫磁性微球，建立了高效富集捕獲飼料樣本中ZEN 的方法。結(jié)果表明該試紙條定量檢測時間為15 min，最低靈敏度為2.559 μg/L，且與ELISA 試劑盒有很好的相關(guān)性。此外，張博等[35]利用超聲乳化法成功制備多包裹磁納米球，將其作為信號標(biāo)記物，構(gòu)建了基于磁致熒光淬滅的雙模態(tài)聯(lián)檢免疫層析試紙條，并實現(xiàn)對血清及全血中生物標(biāo)志物的高靈敏雙模態(tài)聯(lián)合檢測。結(jié)果表明，多包裹磁球熒光淬滅能力強(qiáng)，穩(wěn)定性好，在對乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物CA153 和CEA 的聯(lián)合檢測中，靈敏度分別可達(dá)到0.06 ng/mL 和0.09 U/mL，該聯(lián)檢技術(shù)的應(yīng)用能夠提高腫瘤和急性病癥的檢出率，降低成本和樣本用量，縮短檢測時間。目前，基于磁性納米粒子的免疫層析技術(shù)作為新興的標(biāo)記層析技術(shù)已經(jīng)引起了研究者的廣泛關(guān)注，是未來較好的研究方向。

3 電化學(xué)免疫傳感器在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

電化學(xué)免疫傳感器是一種結(jié)合電化學(xué)測定和免疫反應(yīng)反應(yīng)的分析器件，具有分析速度快、靈敏度高、特異性好、所需樣品量少、操作簡單、易于微型化等優(yōu)點，在臨床診斷、食品分析及環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價值。Hou 等[36]開發(fā)一種超靈敏和綠色的檢測赭曲霉毒素A（OTA）的電化學(xué)免疫傳感器方法。該方法以O(shè)TA 噬菌體模擬肽代替?zhèn)鹘y(tǒng)化學(xué)合成的競爭抗原，應(yīng)用與競爭感應(yīng)平臺上進(jìn)行檢測。并用聚乙二醇（PEG）修飾工作電極固定化抗體。在優(yōu)化的試驗條件下，建立的免疫傳感器的檢出限（LOD）為2.04×10?14g/mL，線性范圍為7.17×10?14～5.49×10?12g/mL。Enrique 等[37]構(gòu)建了一種用于食品樣品中霉菌毒素殘留檢測的電化學(xué)免疫傳感器。該裝置使用電化學(xué)納米探針（CdSNP-AbDON）和抗原修飾的磁粒子（DON-BSAMP）檢測霉菌毒素，在小麥的檢測限量（LOD,IC90）為342.4 μg/L，低于歐盟規(guī)定的該霉菌毒素的最大殘留限量（MRL，未加工的硬粒小麥為1750 μg/L，直接供人類食用的谷物為750 μg/L）。Paniel 等[38]開發(fā)了一種基于磁性納米顆粒的電化學(xué)免疫傳感器并用于檢測牛奶中微量的黃曲霉毒素M1（AFM1）。該傳感器的樣品檢測限低至0.01 μg/L，且具有良好的重現(xiàn)性。

4 免疫芯片技術(shù)在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

免疫芯片技術(shù)是近年發(fā)展應(yīng)用的一種高新技術(shù)。人工制成抗原或抗體與芯片結(jié)合，再將芯片與樣品一同反應(yīng)，將反應(yīng)信號數(shù)據(jù)實時上傳，從而實現(xiàn)定量檢測。免疫芯片準(zhǔn)確度高，靈敏度好，過程全自動，但技術(shù)尚不成熟，仍需發(fā)展。Chen 等[39]基于微流體技術(shù)和蛋白芯片技術(shù)，建立了一套快速、靈敏的真菌毒素免疫檢測系統(tǒng)。利用一個定制包含流體控制系統(tǒng)和成像系統(tǒng)的微型裝置可以實現(xiàn)在30 min 內(nèi)檢測四種真菌毒素的目的，表現(xiàn)出樣品用來體積小并且對用戶友好的特點。蔡婷婷等[40]利用多孔硅比表面積大，結(jié)合位點多的特點，以多孔硅為載體，結(jié)合免疫分析技術(shù)，建立一種蛋白質(zhì)芯片技術(shù)來檢測谷物中的多元真菌毒素。方法對OTA 的檢測限為 32.6 pg/mL，AFB1的檢測限為0.314 ng/mL，F(xiàn)B1的檢測限為0.197 ng/mL。Li 等[41]提出了一種基于納米銀的可視化免疫微陣列方法，應(yīng)用該方法可實現(xiàn)牛奶中的三聚氰胺、頭孢氨芐和黃曲霉毒素M1等多種靶標(biāo)的同時檢測，其針對黃曲霉毒素M1的檢出限能夠達(dá)到0.21 ng/mL。

5 基于免疫分析的流式微球技術(shù)在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

流式微球技術(shù)是集懸浮芯片技術(shù)和流式細(xì)胞技術(shù)于一體的新型分析技術(shù)，具有靈敏度高、檢測速度快、組合靈活、反應(yīng)動力學(xué)快的特點，將其與免疫分析技術(shù)相結(jié)合，在多殘留檢測領(lǐng)域具有很大的應(yīng)用前景。Qu 等[42]選取黃曲霉毒素M1、赭曲霉毒素A、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、伏馬毒素B1等4 種霉菌毒素作為模型分析物，建立了針對牛奶中多種霉菌毒素檢測的流式微球技術(shù)，與傳統(tǒng)的ELISA 方法相比，所建立的方法具有更低的檢測限。然而，目前流式微球技術(shù)主要采用有機(jī)熒光染料和量子點制備編碼微球。這兩種材料都為下轉(zhuǎn)換熒光編碼材料，易受基質(zhì)的影響，常伴有不同程度的背景熒光干擾，進(jìn)而導(dǎo)致檢測靈敏度的下降。Zhang 等[43?44]利用上轉(zhuǎn)換熒光編碼磁性微球UCNPMMs 在免疫分析檢測領(lǐng)域進(jìn)行了初步的探索，構(gòu)建了針對黃曲霉毒素B1檢測的流式熒光免疫分析技術(shù)。因此，降低流式微球技術(shù)背景熒光干擾、簡化樣品前處理步驟成為目前流式微球技術(shù)用于實際樣品多殘留檢測中亟待解決的問題。

6 時間分辨熒光免疫分析技術(shù)在真菌毒素檢測中的應(yīng)用

時間分辨熒光免疫分析技術(shù)是一種新型的超微量免疫標(biāo)記分析方法，相較于酶標(biāo)記免疫分析和放射免疫分析，其具有靈敏快速、操作簡便、線性范圍寬、無放射性、無背景光干擾等優(yōu)點。Wang 等[45]利用Eu 納米粒子作為標(biāo)記材料建立了一種基于時間分辨熒光的快速、靈敏的黃曲霉毒素B1的免疫層析定量檢測方法，結(jié)合時間分辨熒光傳感和免疫層析的優(yōu)點，該方法針對黃曲霉毒素B1檢測限（LOD）為0.1 μg/kg，回收率為87.2%～114.3%。Tang 等[46]制備了增強(qiáng)熒光的Eu/Tb（III）納米球作為標(biāo)記，并與抗個體基因型的納米體（AIdnb）和單克隆抗體（mAb）偶聯(lián)。在納米膜-抗體結(jié)合的基礎(chǔ)上，建立了兩種競爭性時間分辨條帶方法（AIdnb-TRFICA 和mAb-TRFICA），并進(jìn)行了比較。AIdnb-TRFICA 對黃曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的半抑制濃度分別為0.46和0.86 ng/mL，比mAb-TRFICA 方法的靈敏度高18.3倍和20.3 倍。

7 展望

本文綜述了免疫分析技術(shù)在真菌毒素檢測中應(yīng)用的現(xiàn)狀，如表1 所示。目前，免疫分析技術(shù)因其簡便，快速，靈敏及經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點而被越來越多地應(yīng)用于大量樣品的快速檢測，顯示出其巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景。但是，該技術(shù)應(yīng)用于真菌毒素快速分析領(lǐng)域仍存在一些需要深入研究和開發(fā)的問題:現(xiàn)有研究表明[47]，同一樣品中多種真菌毒素共同存在的可能性極大，多毒素間協(xié)同作用可增強(qiáng)毒素的體內(nèi)毒性作用。因此，建立同時檢測多種真菌毒素的快速、靈敏、準(zhǔn)確檢測方法有重要的現(xiàn)實意義；免疫分析檢測法需要將真菌毒素偶聯(lián)蛋白作為包被抗原，制備過程困難且存在對環(huán)境和人員有毒有害、價格昂貴等問題。因此，尋找抗原替代品，實現(xiàn)“綠色化”檢測真菌毒素迫在眉睫。近來通過噬菌體展示技術(shù)制備模擬表位肽取代抗原，表現(xiàn)出制備成本低，抗體效能好，是未來真正實現(xiàn)無毒無害檢測非常重要的研究方向[48?49]；免疫分析法需要制備特異性抗體，而抗體制備需要動物免疫等步驟制備成本高，時間長，受免疫原性限制且無法分離交叉反應(yīng)的物質(zhì)。相比抗體，適配體作為一種可體外化學(xué)合成、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、具有高親和性和特異性的“化學(xué)抗體”，完善了免疫分析檢測出現(xiàn)的不足[50]，是未來的發(fā)展方向。

表1 基于不同標(biāo)記物的免疫分析技術(shù)在真菌毒素檢測中的應(yīng)用Table 1 Application of different labeling materials-based immunoassay in mycotoxins detection