網(wǎng)果酸模質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

許京 王瑞海 劉麗梅 苗青 嚴(yán)光俊 張秋海 楊詩(shī)龍 郭昌洪

【摘 要】 目的：對(duì)網(wǎng)果酸模進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。方法：建立網(wǎng)果酸模的性狀、顯微及薄層鑒別方法，并按《中國(guó)藥典》2015 年版有關(guān)規(guī)定對(duì)水分、灰分和酸不溶性灰分等項(xiàng)目進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果：網(wǎng)果酸模的薄層色譜中，在與對(duì)照品色譜相同位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物范圍分別為 5.60%～6.58% 、4.00%～7.26% 、0.96%～3.93% 、18.94%～25.94% 。結(jié)論：該標(biāo)準(zhǔn)可用于網(wǎng)果酸模藥材的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 網(wǎng)果酸模;顯微鑒別;薄層鑒別

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2021）1-0048-06

Study on Radix and Rhizome of Rumex chalepensis Mill. Quality Standard

XU Jing1 WANG Ruihai1 LIU Limei1 MIAO qing1 YAN Guangjun2 ZHANG Qiuhai1 GUO Changhong2*

1.Institute of Basic Theory Research of Traditional Chinese Medicine， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China;

2.Hubei jingzhou hospital of traditional Chinese medicine， Jingzhou 434000， China

Abstract：Objective To study the quality standard of Rumex chalepensis Mill.. Methods Establish the identification， microscopic and thin layer identification methods of Rumex chalepensis Mill.， and determine the items of moisture， ash and acid-insoluble ash according to the relevant provisions of the 2015 edition of the Chinese Pharmacopoeia. Result In the thin layer chromatography of Rumex chalepensis Mill.， fluorescent spots of the same color appeared at the same position as the reference substance chromatography. The range of moisture， total ash， acid-insoluble ash and alcohol-soluble extractives are 5.60%～6.58%， 4.00%～7.26%， 0.96%～3.93%， 18.94%～25.94% respectively. Conclusion The standard established by the institute can be used for the quality control of Rumex chalepensis Mill..

Keywords：Rumex chalepensis Mill.; Microscopic Identification; Thin Layer Identification

網(wǎng)果酸模為蓼科酸模屬植物網(wǎng)果酸模Rumex chalepensis Mill.的干燥根及根莖，始載于《中藥志》，又名紅絲酸模、金不換，主要分布在湖北、江西、河南、浙江及安徽等地[1-3]，味苦性寒，具有清熱解毒、通便、殺蟲(chóng)之功效，民間用于止血和治療痢疾[4]。

網(wǎng)果酸模根及根莖為地方草藥，其含有很強(qiáng)的抗真菌（白色念珠菌、紅色發(fā)癬菌）的成分酸模素[5-6]，瀉下主要藥效成分之一蒽醌苷，抗菌消炎、抗腫瘤等作用成分游離蒽醌[7]，臨床主要用于治療消化道出血、幽門(mén)螺桿菌感染的相關(guān)性胃炎、消化性潰瘍、十二指腸球部潰瘍等[8-10]，具有很高的研究和應(yīng)用價(jià)值。目前，網(wǎng)果酸模已有化學(xué)成分鑒定、含量測(cè)定、指紋圖譜等研究[11-12]，但基礎(chǔ)質(zhì)量研究未見(jiàn)報(bào)道，因此，本實(shí)驗(yàn)將從顯微鑒別、薄層鑒別（Thin Layer Identification，TLC）、水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物進(jìn)行研究，為快速、準(zhǔn)確的鑒別網(wǎng)果酸模提供科學(xué)依據(jù)，為完善、建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和提高臨床療效奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 CX41 型光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯公司）; INTA 2020D薄層掃描成像系統(tǒng)（北京澤祥佳燕科技有限公司）;電熱古風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;KQ3200DB 型數(shù)控超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）;CP2202S電子天平（瑞士梅特勒-托利多）;高速萬(wàn)能粉碎機(jī)（北京科偉永興儀器有限公司）;薄層層析硅膠 G 板（德國(guó)Merck 公司）;薄層層析硅膠 G 板（中國(guó)青島海洋化工）。

1.2 材料 酸模素對(duì)照品（批號(hào)：PS170608-03）、大黃素對(duì)照品（批號(hào)：PS000259）、大黃酚對(duì)照品（批號(hào)：PS010475）、大黃素甲醚對(duì)照品（批號(hào)：PS000263）、大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品（批號(hào)：PS010712）均購(gòu)自成都普思科技股份有限公司;試劑均為分析純。

實(shí)驗(yàn)用10樣品均采自湖北省荊州市公安縣章莊鋪鎮(zhèn)，生藥學(xué)圖片見(jiàn)圖1-1、1-2、1-3，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)王振月教授鑒定為網(wǎng)果酸模Rumex chalepensis Mill.的干燥根及根莖，粉碎后過(guò)50目篩，置于干燥器中備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀 網(wǎng)果酸模飲片為類(lèi)圓形、橢圓形或不規(guī)則厚片，外表皮棕褐色至灰褐色，可見(jiàn)皺縮紋。切面黃白色、黃色至棕黃色或黃棕色，具有明顯的形成層環(huán)紋，部分可見(jiàn)纖維，斷面顯黃白色。本品質(zhì)脆硬，掰斷可見(jiàn)粉性煙塵，氣特異，味微苦。

2.2 顯微鑒別 藥材樣品粉末為黃棕色。取粉末少許，置載玻片中央，經(jīng)水合氯醛液透化，加稀甘油2滴，拌勻，蓋片;淀粉粒觀察用水裝片，應(yīng)用自帶攝像功能的光學(xué)顯微鏡拍攝顯微圖像，同步存入計(jì)算機(jī)中。草酸鈣簇晶類(lèi)圓形，棱角尖銳，直徑22～52m，見(jiàn)圖2-1;石細(xì)胞極少，近無(wú)色或淡棕黃色，呈類(lèi)方形、多角形或梭形，壁厚，直徑19～35m，見(jiàn)圖2-2;纖維多成群或離散，長(zhǎng)梭形，稍彎曲，一端稍鈍圓，一端尖銳，或兩端漸尖，壁厚，孔溝明顯，長(zhǎng)300～530m，直徑20-45m，見(jiàn)圖2-3;具緣紋孔導(dǎo)管、梯紋導(dǎo)管常見(jiàn)，直徑18-66m，見(jiàn)圖2-4;木栓細(xì)胞近長(zhǎng)方形，無(wú)色或棕色，垂周壁波狀彎曲，見(jiàn)圖2-5;淀粉粒眾多，單粒類(lèi)圓形、橢圓形或腎形，直徑4～19m，臍點(diǎn)點(diǎn)狀或裂縫狀，復(fù)粒由2～3分粒組成，見(jiàn)圖2-6。

2.3 網(wǎng)果酸模薄層的薄層鑒別

2.3.1 對(duì)照品的制備 精密稱(chēng)取酸模素對(duì)照品、大黃素對(duì)照品、大黃酚對(duì)照品、大黃素甲醚對(duì)照品、大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1mL含酸模素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品分別為482.4g、116.8g、302.8g、99.2g、99.6g的溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備[13] 取本品粉末1.0g，加甲醇10mL，超聲30min，濾過(guò)，取濾液5mL，蒸干，殘?jiān)蛹状糽mL使溶解，作為供試品溶液。

2.3.3 酸模素及蒽醌薄層條件 按照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015版第四部通則0502）實(shí)驗(yàn)，吸取大黃素、酸模素、大黃酚、大黃素甲醚對(duì)照品和供試品溶液各5L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板（德國(guó)Merck公司）上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-丙酮-甲酸（6∶[KG-*3/5]1∶[KG-*3/5]1∶[KG-*3/5]0.15）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置紫外光燈365nm下檢識(shí)，大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對(duì)照品呈亮黃色斑點(diǎn)、酸模素對(duì)照品呈淡藍(lán)色斑點(diǎn)，Rf大黃素=0.26，Rf酸模素=0.46，Rf大黃酚=0.54，Rf大黃素甲醚=0.62，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相同的位置上，顯相同顏色熒光斑點(diǎn)，表明網(wǎng)果酸模中含有大黃素、酸模素、大黃酚和大黃素甲醚。薄層色譜圖見(jiàn)圖3-1。

2.3.4 大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷的薄層條件 按照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015版第四部通則0502）實(shí)驗(yàn)，吸取大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品溶液和供試品溶液各1L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板（中國(guó)青島海洋化工）上，以乙酸乙酯-氯仿-丙酮-甲醇-水（1∶[KG-*3/5]5∶[KG-*3/5]2.5∶[KG-*3/5]1.5∶[KG-*3/5]0.4）上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置紫外光燈365nm下檢識(shí)，大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品熒光斑點(diǎn)呈橘黃色斑點(diǎn)，Rf大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷=0.59，供試品色譜中，在與大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)，表明網(wǎng)果酸模中含有大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷。薄層色譜圖見(jiàn)圖3-2。

2.4 水分測(cè)定 根據(jù)《中國(guó)藥典》2015 版四部通則 0832 水分測(cè)定法第二法[14]，烘干法測(cè)定：取供試品2～5g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱(chēng)量瓶中，厚度不超過(guò)5mm，疏松供試品不超過(guò)10mm， 精密稱(chēng)定，開(kāi)啟瓶蓋在100～105℃干燥5h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30min，精密稱(chēng)定，再在上述溫度干燥1小時(shí)，放冷，稱(chēng)重，至連續(xù)兩次稱(chēng)重的差異不超過(guò)5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量，結(jié)果見(jiàn)表2。10批樣品水分約5.60%～6.58%。

2.5 總灰分測(cè)定 根據(jù)《中國(guó)藥典》2015版四部通則2302灰分測(cè)定法項(xiàng)下總灰分測(cè)定法測(cè)定[14]：取供試品粉末3～5g，置于熾灼至恒重的坩堝中，稱(chēng)定重量（準(zhǔn)確至0.01g），緩緩熾灼，注意避免燃燒（先逐漸升溫至200～300℃）。至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至500～600℃，使其完全灰化至恒重。稱(chēng)重記錄，計(jì)算總灰分含量，結(jié)果見(jiàn)表2。10批樣品總灰分在4.00%～7.26%之間。

2.6 酸不溶灰分測(cè)定 根據(jù)《中國(guó)藥典》2015 版四部通則 2302 灰分測(cè)定法項(xiàng)下酸不溶性灰分測(cè)定法測(cè)定[14]：取上述所得灰分，在坩堝中小心加入稀鹽酸約10mL，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10min，表面皿用熱水5mL沖洗，沖洗液并入坩堝中，用無(wú)灰濾紙濾過(guò)，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，至洗滌液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移至同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓浚?jì)算酸不溶灰分含量，結(jié)果見(jiàn)表2。10批樣品酸不溶灰分在0.96%～3.93%之間。

2.7 醇溶性浸出物測(cè)定 根據(jù)《中國(guó)藥典》2015 版四部通則 2201 浸出物測(cè)定法項(xiàng)下醇溶性浸出物測(cè)定法第二法，熱浸法測(cè)定[14]：取供試品約2～4g，精密稱(chēng)定，置100～250mL 的錐形瓶中，精密加人50%乙醇100mL，密塞，稱(chēng)定重量，靜置1h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱(chēng)定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過(guò)，精密量取濾液25mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱(chēng)定重量。除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。10批樣品醇溶性浸出物在18.94%～25.94%之間。

3 討論

由于酸模素、游離蒽醌與結(jié)合蒽醌極性相差較大，難以在一張薄層板、同一展開(kāi)系統(tǒng)下使要鑒別的斑點(diǎn)得到很好地分離，所以本研究分為兩個(gè)展開(kāi)系統(tǒng)，分別對(duì)酸模素和游離蒽醌以及結(jié)合蒽醌進(jìn)行鑒別。

TLC實(shí)驗(yàn)過(guò)程中進(jìn)行了不同檢測(cè)波長(zhǎng)、不同溶劑和不同薄層板的考察，薄層板在日光及紫外225nm、254nm、365nm不同波長(zhǎng)下檢識(shí)，在紫外365nm波長(zhǎng)下，對(duì)照品及供試品斑點(diǎn)明亮、清晰。石油醚為主的展開(kāi)系統(tǒng)，沸程30～60℃、90～120℃石油醚為展開(kāi)劑，色譜斑點(diǎn)有拖尾，沸程60～90℃石油醚為展開(kāi)劑，色譜斑點(diǎn)清晰、無(wú)拖尾;在確定展開(kāi)劑基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)德國(guó)Merck公司生產(chǎn)的硅膠G板對(duì)大黃素、酸模素、大黃酚和大黃素甲醚分離效果更佳;中國(guó)青島海洋化工生產(chǎn)的硅膠G板對(duì)大黃酚-8-O-β-D-葡萄苷分離效果更佳。因此，確定網(wǎng)果酸模的檢測(cè)波長(zhǎng)為365nm;石油醚沸程選擇90～120℃沸程石油醚，不同成分的鑒別采用了兩種不同的薄層板。采用中國(guó)青島海洋化工生產(chǎn)的硅膠G板對(duì)大黃酚-8-O-β-D-葡萄苷進(jìn)行分離，硅膠板前沿會(huì)出現(xiàn)亮藍(lán)色弧線，反復(fù)試驗(yàn)未能消除，可能是展開(kāi)劑中乙酸乙酯和丙酮最大吸收波長(zhǎng)較大有關(guān)。

浸出物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，網(wǎng)果酸模水溶性浸出物難過(guò)率，可能與網(wǎng)果酸模中淀粉含量高有關(guān)，故本實(shí)驗(yàn)只測(cè)定網(wǎng)果酸模醇溶性浸出物。經(jīng)過(guò)對(duì)冷浸法、熱浸法以及不同乙醇濃度的考察，采用熱浸法，50%乙醇為溶劑網(wǎng)果酸模醇溶性浸出物易過(guò)濾，浸出物含量較穩(wěn)定，因此，采用50%乙醇為溶劑測(cè)定網(wǎng)果酸模醇溶性浸出物較合理。

網(wǎng)果酸模TLC鑒別，游離蒽醌及酸模素、大黃酚8-O-β-D-葡萄糖苷鑒別的展開(kāi)劑分別為石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（20∶[KG-*3/5]5∶[KG-*3/5]1）上層溶液和乙酸乙酯-氯仿-丙酮-甲醇-水（1∶[KG-*3/5]5∶[KG-*3/5]2.5∶[KG-*3/5]1.5∶[KG-*3/5]0.4）上層溶液。根據(jù)表2并結(jié)合《中國(guó)藥典》2015年版對(duì)藥材水分、浸出物的規(guī)定，建議將網(wǎng)果酸模的水分?jǐn)M定不得過(guò)7.0%，總灰分不得超過(guò)8.0%，酸不溶性灰分不得超過(guò)4.0%，醇溶性浸出物不得少于18.0%。

綜上，本研究所建立的網(wǎng)果酸模定性、定量方法具有簡(jiǎn)便、可行、重復(fù)性好的特點(diǎn)，可為快速、準(zhǔn)確的鑒別網(wǎng)果酸模提供科學(xué)依據(jù)，為完善、建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和提高臨床療效奠定基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2020-07-23 編輯：劉斌）