血清PAPPA、HSP90α 在NSCLC患者中的變化及其臨床意義

金燦輝，崔貫一，王愛紅，孟元普

（河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，河南 洛陽 471000）

基礎(chǔ)方面的研究認(rèn)為，腫瘤調(diào)控蛋白的改變，能夠在非小細(xì)胞肺癌（英文全稱，NSCLC）的發(fā)生過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用[1]。腫瘤蛋白的改變，能夠通過影響到癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄、 腫瘤細(xì)胞增殖及癌細(xì)胞凋亡抑制過程,最終影響到肺癌的發(fā)生發(fā)展[2]。熱休克蛋白90α（英文全稱，HSP90α）是腫瘤熱休克蛋白家族成員, 其能夠通過誘導(dǎo)腫瘤微環(huán)境的改變，加劇腫瘤細(xì)胞浸潤和粘附能力的增強(qiáng)，最終促進(jìn)肺泡上皮細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程[3,4]；妊娠相關(guān)血清蛋白A（英文全稱，PAPPA）是妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞間質(zhì)成分分泌的糖蛋白，其不僅能夠維持妊娠狀態(tài)，同時還能夠提高腫瘤細(xì)胞偽足形成的風(fēng)險，提高上皮細(xì)胞突破基底膜組織的能力。為了揭示PAPPA、HSP90α 在肺癌患者中的表達(dá)情況，從而深入揭示PAPPA、HSP90α 在 NSCLC 病情進(jìn)展過程中的作用, 本次研究選取 2016 年 8 月-2018 年 5 月本院經(jīng)病理學(xué)檢查確診的60 例NSCLC 患者, 探討了PAPPA、HSP90α 的表達(dá)及其與肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 對象 選取 2016 年 8 月-2018 年 5 月本院經(jīng)病理學(xué)檢查確診的60 例NSCLC 患者為 NSCLC組、體檢中心獲取的60 例健康成年人作為志愿者為對照組。NSCLC 組，年齡 44～76 歲，平均 61.8±8.2 歲；男 36 例、女 24 例；TNM 分期：Ⅰ期 14 例、Ⅱ期 19 例、Ⅲ期 20 例、Ⅳ期 7 例；病腫瘤部位：中央型24 例、周圍型36 例；腫瘤經(jīng)病理學(xué)檢查分化程度：高分化 16 例、中分化27 例、低分化 17 例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34 例； 腫瘤直徑≥3cm 23 例、＜3cm 37 例。對照組 60 例,年齡 40～75 歲,平均 60.2±12.0 歲；男 31 例、女 29 例。兩組患者的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) 診斷標(biāo)準(zhǔn)：NSCLC 患者診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會制定的標(biāo)準(zhǔn)[5]；納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴患者年齡范圍19～79 歲以內(nèi)；⑵經(jīng)胸部CT、MRI 檢查及病理學(xué)檢查確診； ⑶既往未接受放化療、免疫學(xué)治療；⑷對照組血液標(biāo)本來源于本院體檢中心結(jié)果健康的自愿者；⑸本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理規(guī)定。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并肺結(jié)核、哮喘、慢阻肺、肺部纖維化等疾??；⑵長期使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑；⑶其他部位感染及其他系統(tǒng)的重大疾??；⑷類風(fēng)濕性疾病、免疫系統(tǒng)疾病患者。

1.3 檢測方法 采用患者的肘部靜脈血5ml，1000r/min 離心10min，取上清液待測。密封袋中取出實驗板條，空白孔中加入樣品或者稀釋液100μl/孔，檢測孔中加入標(biāo)本100μl/孔, 膠紙封閉實驗表條孔,36℃條件下孵育60～90min,磷酸鹽緩沖液清洗5次,空白對照孔中加入生物素抗體稀釋液100μl，檢測孔中加入生物素抗體檢測液100μl，膠紙封閉實驗表條孔，36℃條件下孵育30～60min，空白對照孔中加入酶結(jié)合稀釋液100μl，檢測孔中加入酶結(jié)合檢測液100μl，膠紙封閉實驗表條孔，磷酸鹽緩沖液清洗 5 次,加入 TMB 顯色底液（品牌：YSRIBIO湖州英創(chuàng)生物科技公司）,避光36℃孵育15min，加入終止液 100μl，3min 內(nèi)檢測 OD450 值，BioTek 酶標(biāo)儀購自美國伯騰儀器有限公司。

1.4 統(tǒng)計分析 本研究中所有數(shù)據(jù)的分析均采用SPSS21.0 版本，計量指標(biāo)采用±s 表示，組間比較采用t 檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 二組血清 PAPPA、HSP90α 水平比較 NSCLC組患者的血清PAPPA、HSP90α 水平顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）,見表1。

表1 二組血清 PAPPA、HSP90α 水平比較（±s）

表1 二組血清 PAPPA、HSP90α 水平比較（±s）

組別 n NSCLC 組對照組t 值P 值60 60 PAPPA（ng/ml）10.84±3.17 6.20±2.53 8.862 0.000 HSP90α（μg/L）381.4±133.9 72.0±26.4 17.560 0.000

表2 不同病理學(xué)特征的NSCLC組患者血清PAPPA水平比較(±s)

表2 不同病理學(xué)特征的NSCLC組患者血清PAPPA水平比較(±s)

因素 n PAPPA（ng/ml） t 值TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期吸煙-3.790 33 27 9.27±2.83 12.18±3.11 0.541是 否25 35 11.15±2.81 10.74±2.95分化程度高+中低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移-1.357 43 17 10.20±3.06 11.33±2.46 3.735是 否34 26 11.74±2.91 8.87±3.00病灶直徑（cm）≥3cm＜3cm 0.844 23 37 11.20±2.96 10.52±3.08 P 值0.000 0.590 0.180 0.000 0.402

表3 不同病理學(xué)特征的NSCLC組患者血清HSP90α 水平比較(±s)

表3 不同病理學(xué)特征的NSCLC組患者血清HSP90α 水平比較(±s)

因素 n HSP90α（μg/L） t 值TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期吸煙-3.598 33 27 344.0±128.4 461.9±123.6 0.639是 否25 35 394.8±125.4 373.5±128.6 P 值0.001 0.525分化程度高+中低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移-2.4890.016 43 17 361.0±114.2 445.4±128.7 2.2220.030是 否34 26 413.0±131.4 339.7±120.0病灶直徑（cm）≥3cm＜3cm 0.6370.526 23 37 396.0±128.6 375.3±118.3

2.2 不同病理學(xué)特征的NSCLC 組患者血清PAPPA、HSP90α 水平比較 不同 TNM 分期、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC 組患者的血清PAPPA 水平組間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；是否吸煙、不同分化程度、不同病灶直徑的NSCLC 患者血清PAPPA 水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),見表2。

不同TNM 分期、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同分化程度的NSCLC 組患者的血清HSP90α 水平組間比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；是否吸煙、不同病灶直徑的NSCLC 患者血清HSP90α 水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）,見表3。

3 討論

NSCLC 的發(fā)生,能夠顯著增加肺癌患者的病死率，導(dǎo)致肺癌患者整體臨床結(jié)局的惡化。在高齡、長期吸煙或者合并有相關(guān)乙肝基因攜帶的群體中，NSCLC 具有更高的發(fā)病風(fēng)險和致殘風(fēng)險[6]。臨床上NSCLC 中晚期病情進(jìn)展的風(fēng)險較高, 早期疾病的診斷及中晚期臨床結(jié)局的預(yù)測缺乏可靠的指標(biāo)。通過對于NSCLC 患者病情或者臨床病理特征的評估,能夠為臨床上肺癌的診療及病情預(yù)后評估提供依據(jù)?，F(xiàn)階段臨床上已有的相關(guān)指標(biāo)如癌胚抗原等非特異性腫瘤標(biāo)志物,雖然能夠在肺癌的診斷過程中起到一定的參考作用。但癌胚抗原與肺癌患者的組織學(xué)分級、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理特征的關(guān)系并不密切[7,8]。通過尋找臨床上新的NSCLC 指標(biāo)標(biāo)志物, 不僅能夠進(jìn)一步揭示NSCLC 的發(fā)生機(jī)理, 同時還能夠為臨床上NSCLC 的病情整體評估提供參考。

PAPPA 是妊娠狀態(tài)過程中滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的糖蛋白成分，其主要成分為非特異性的多肽結(jié)構(gòu)，能夠在上皮細(xì)胞連接、 滋養(yǎng)細(xì)胞損傷修復(fù)等過程中發(fā)揮作用。近年來相關(guān)研究認(rèn)為，PAPPA 還能夠在其他臟器組織中存在低水平的表達(dá),其表達(dá)濃度的維持,能夠影響到炎癥反應(yīng)或者惡性腫瘤的發(fā)生過程；HSP90α 是熱休克蛋白成員,其作為熱休克蛋白家族的重要組成成分,能夠在癌細(xì)胞信號通路的激活方面發(fā)揮作用。HSP90α 對于癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因的激活，能夠增強(qiáng)癌基因的轉(zhuǎn)錄翻譯速度，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖速率的加快[9]。有研究者探討揭示了熱休克蛋白在肺癌患者中的表達(dá)情況,認(rèn)為在肺癌患者中,熱休克蛋白的表達(dá)濃度或者表達(dá)陽性率均可明顯上升[9-11]，但對于PAPPA 的表達(dá)分析不足。

通過蛋白定量分析技術(shù)探討了PAPPA、HSP 90α 在肺癌患者血清中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在肺癌患者中，PAPPA、HSP90α 蛋白的表達(dá)濃度均明顯高于對照組，推測 PAPPA、HSP90α 的高表達(dá)均能夠影響到NSCLC 的病情進(jìn)展過程，其中PAPPA、HSP90α 的高表達(dá)趨勢取決于腫瘤細(xì)胞的增殖活躍狀態(tài)和腫瘤病情進(jìn)展速度。有其他研究者也發(fā)現(xiàn)，在肺癌患者中，PAPPA 蛋白的表達(dá)濃度水平雖然仍然維持在較低的水平,但NSCLC 患者中PAPPA 的表達(dá)濃度可較正常對照人群上升3~4 倍，同時肺癌患者的短期內(nèi)惡病質(zhì)的表現(xiàn)越為明顯，PAPPA 蛋白的表達(dá)水平的上升越為顯著[12]。在探討PAPPA、HSP90α 的表達(dá)與肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系過程中,發(fā)現(xiàn)在臨床分期為中晚期或者發(fā)生了顯著引流部位淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，PAPPA蛋白的表達(dá)濃度較高，提示PAPPA 的高表達(dá)能夠顯著影響到肺癌的臨床病理特征。這分析其原因，主要由于PAPPA 能夠提高生長因子的活性，促進(jìn)癌細(xì)胞核DNA 的分裂，增強(qiáng)了癌細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白的合成速度，最終促進(jìn)了肺癌病理或者生物學(xué)行為的惡化。但在不同分化程度的患者中，PAPPA 的表達(dá)并無明顯的差異，表明PAPPA 并不能影響到肺癌細(xì)胞的分化成熟過程。在臨床分期進(jìn)展明顯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者癌細(xì)胞低分化的患者中，HSP90α 的表達(dá)濃度較高，表明HSP90α 的表達(dá)同樣能夠顯著影響到肺癌患者的臨床病理特征。這主要由于HSP90α 能夠通過提高癌細(xì)胞內(nèi)MAPK 或者P16/AKT 信號通路的激活，增加了癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換的風(fēng)險，誘導(dǎo)了癌細(xì)胞粘附淋巴結(jié)組織能力的增強(qiáng)，最終促進(jìn)了相關(guān)病理特征的進(jìn)展[13-16]。

NSCLC 組患者的血清 PAPPA、HSP90α 水平較健康人群顯著升高,并能夠影響到肺癌患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理特征。