NSCLC患者腫瘤組織中EGFR和K-Ras基因各亞型的突變情況及意義

李東

（河南省鶴壁市鶴煤總醫(yī)院，河南 鶴壁 458000）

流行病學(xué)研究證實,我國部分地區(qū)非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）的發(fā)病率可達(dá) 273-482/10 萬人左右[1]。臨床上NSCLC 的發(fā)生, 能夠?qū)е禄颊邿o進展生存期或者無瘤生存期的縮短,導(dǎo)致患者臨床預(yù)后的惡化[2]。

在探討NSCLC 靶向藥物治療結(jié)局的過程中可以發(fā)現(xiàn)不同位點的基因突變的發(fā)生,能夠影響受體的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致分子靶向藥物治療結(jié)局的改變。血管內(nèi)皮生長因子（EFGR）上外顯子18、19 位點的突變，能夠?qū)е缕渥陨砣姿峤Y(jié)構(gòu)的改變，導(dǎo)致EGFR 受體結(jié)合能力的上調(diào)，提高了免疫靶向治療的效果，有助于提高治療的敏感性[3]；EGFR 外顯子20 位點的突變，能夠改變ATP 結(jié)合酶的活性，導(dǎo)致癌細(xì)胞攝取分子靶向性藥物的能力不足，使得癌細(xì)胞對于表皮生長因子絡(luò)氨酸激酶抑制劑的抵抗性明顯的增強[4]；K-Ras 基因的突變能夠?qū)е孪掠蜧TP 酶結(jié)合能力的改變, 影響腫瘤信號通路的激活，提高了肺癌上皮細(xì)胞的增殖能力，進而影響肺癌的免疫靶向治療效果[5]。為了揭示NSCLC 患者中EGFR 和K-Ras 基因的突變情況,從而指導(dǎo)臨床上肺癌患者的免疫靶向性治療, 本次研究選取2015 年 2 月-2018 年 1 月在我院治療的 NSCLC患者110 例,探討了EGFR 和K-Ras 基因的突變情況，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2015 年 2 月-2018 年 1 月在我院治療的NSCLC 患者110 例，其中男性67 例，女性 43 例；年齡 32～81 歲，平均年齡 52 歲；腺癌83 例，非腺癌27 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴均經(jīng)病理學(xué)確診；⑵臨床病理資料保存完整；⑶術(shù)前未行放化療等治療；⑷患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有其他惡性腫瘤者。

1.2 實驗方法 采用組織研磨法獲得上皮細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液TRIZOL，10000r/min 離心取清液，每1ml 的TRIZOL 試劑裂解的樣品中加入0.2ml 的氯仿，4 攝氏度冰上采用無酶的RNA 沖洗液進行洗滌，10000r/min 離心 5min，得到 RNA。加入逆轉(zhuǎn)錄酶后，37℃孵育 60min 生成 cDNA。進 PCR 產(chǎn)物擴增, 反應(yīng)設(shè)置為：93℃ 2min、93℃ 1min、55℃ 2min，共 40 個 RT-PCR 循環(huán)。

采用南京博奧生物檢測公司生產(chǎn)的mtltipical檢測試劑盒, 在相應(yīng)的位點進行單堿基的序列檢測。使用ABI1310 進行PCR 跑膠電泳，儀器購自美國 Life Technologies 公司, 采用 GENEMAPPER 軟件進行對比分析，儀器購自美國Life Technologies公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計分析采用SPSS19.0 軟件，計數(shù)資料比較使用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EGFR 基因突變情況 110 例患者中共檢測到37 例 EGFR 基因突變（33.64%），其中外顯子 18、19 和 20 突變分別占為 27.03%、32.43%、16.22%，外顯子18 和20 共同突變占13.51%，外顯子19 和20 共同突變占10.81%，見表1。

表1 EGFR基因突變情況

2.2 KRAS 基因突變情況 110 例患者中共檢測到3 例KRSA 基因突變（2.73%），其中外顯子 2 G12C突變 1 例，G12A 突變 1 例，外顯子 3 Q61H 突變 1例。未檢測到EGFR 與KRAS 基因雙重突變。

2.3 EGFR 和KRAS 基因突變與臨床病理特征關(guān)系 女性患者EGFR 基因突變率明顯高于男性患者（P＜0.05）；腺癌患者 EGFR 基因突變率明顯高于非腺癌患者 （P＜0.05）；KRAS 基因突變與患者年齡、性別、吸煙史、病灶大體類型、腫瘤直徑、TNM分期、分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P＞0.05）。見表2。

3 討論

多種病理性因素的進展,均能夠促進肺泡上皮細(xì)胞的異常分裂，導(dǎo)致NSCLC 的發(fā)生率的上升。特別是在合并有長期吸煙病史的人群中，NSCLC 的發(fā)病率可進一步的上升[6]。NSCLC 的發(fā)生能夠?qū)е禄颊呖傮w生存時間的下降，影響患者的5 年或者3年生存率[7,8]。臨床靶向性治療在NSCLC 的整體治療過程中發(fā)揮了重要的作用,其能夠結(jié)合靶向性受體，抑制癌細(xì)胞的增殖或者擴增,降低癌細(xì)胞DNA的復(fù)制速度。但一項囊括了109 例樣本量的NSC LC 患者的表皮生長因子絡(luò)氨酸激酶抑制劑治療分析可見, 表皮生長因子絡(luò)氨酸激酶抑制劑治療后，18%左右的患者存在不同程度的耐藥，同時認(rèn)為免疫靶向治療結(jié)局與NSCLC 患者的EGFR 外顯子的基因突變密切相關(guān)[9]。而本次研究對于NSCLC 患者體內(nèi)EGFR 外顯子不同位點或者K-Ras 基因突變的分析研究, 不僅能夠揭示NSCLC 患者的病情進展機制, 同時還能夠為臨床上NSCLC 患者的免疫靶向治療提供指導(dǎo)。

病理性因素如射線、化學(xué)性毒素等，均能夠促進基因突變的發(fā)生，增加堿基替換或者缺失的風(fēng)險。EGFR 位點的突變主要位于細(xì)胞內(nèi)的核轉(zhuǎn)錄區(qū)域的外顯子上，常見的EGFR 外顯子的突變包括10~20 種,而其中 18、19、20 及 21 是最為常見的相關(guān)突變類型[10]；K-Ras 基因與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，K-Ras 基因的突變主要為點突變和位移突變,相關(guān)的突變位點的改變能夠通過影響到GTP酶的結(jié)合狀態(tài),進而導(dǎo)致癌細(xì)胞內(nèi)的信號通路的激活, 并影響癌細(xì)胞對于靶向性治療藥物的抵抗性[11]。

本次研究首先探討了EGFR 基因突變的情況,發(fā)現(xiàn)EGFR 基因突變類型主要為外顯子18、19、20位點，這與湯雪璐等[12]研究者報道的相關(guān)EGFR 外顯子突變位點的結(jié)論較為一致，湯雪璐等[12]研究者認(rèn)為，在 NSCLC 患者中，EGFR 外顯子 18、19 位點突變的比例可分別達(dá)18.5%、20.5%左右。對于外顯子18、19 位點突變的患者，可以采用針對EGFR的免疫靶向性藥物治療，其治療的敏感性較高，而對于外顯子20 位點突變或者18、20 位點聯(lián)合突變的NSCLC 患者, 免疫靶向性治療的耐藥風(fēng)險較高,臨床上應(yīng)該聯(lián)合采用其他的綜合性治療方式改善NSCLC 的臨床結(jié)局。對于K-Ras 基因的分析研究顯示，其突變的比例較低不足3%，而其主要的突變類型為G12C 突變、G12A 突變或者外顯子突變，提示了G12 等位點突變對于NSCLC 的影響。通過匯集不同的相關(guān)文獻，筆者認(rèn)為這主要由于G12 位點突變的下列幾個方面的作用有關(guān)[13-15]：⑴G12C 或者G12A 突變，能夠?qū)е掳┘?xì)胞內(nèi)GTP 依賴性蛋白激酶的激活，增加了三磷酸腺苷的激活程度，導(dǎo)致癌細(xì)胞的增殖和擴散風(fēng)險的上升；⑵KRas 基因外顯子突變，能夠通過影響到癌細(xì)胞的核轉(zhuǎn)錄基因的活性，進而改變癌細(xì)胞的自我擴增的干細(xì)胞特性，導(dǎo)致NSCLC 患者臨床結(jié)局的改變。對于不同基因的突變與肺癌患者臨床特征的關(guān)系研究可見，KRAS 基因突變與NSCLC 患者的臨床特征并無明顯的關(guān)系，提示KRAS 基因具有較高的保守性，其進化過程中的基因穩(wěn)定性更高；而在女性患者或者肺腺癌患者中，EGFR 基因突變率明顯的上升，高于男性組或者其他類型肺癌組，差異較為明顯,提示了性別因素和腺癌耐藥的惡性腫瘤對于EGFR 基因的影響,這可能與女性患者體內(nèi)性激素的影響或者腺體細(xì)胞的EGFR 基因的保守程度較低有關(guān)，但具體的機制仍然需要深入研究。

表2 EFGR和KRAS基因突變與臨床病理特征關(guān)系

綜上所述，NSCLC 患者腫瘤組織中EGFR 突變率較高，而KRAS 基因突變率較低，其中EGFR突變與患者性別、病理類型有關(guān)。