TGF-1、Smad7 和VEGF在腦膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義

趙巖江，韓熙成，高遠

（1.遂平仁安醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 駐馬店463100；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 鄭州 450000）

越來越多的研究關(guān)注到, 腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病率和病死率的上升,已經(jīng)促使其成為臨床上威脅生命健康的重要疾病[1,2]。隨著檢查或者診斷方式的改進，腦膠質(zhì)瘤的檢出率可持續(xù)的上升?；A(chǔ)分子生物學(xué)蛋白的探討,能夠在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病病因的研究方面發(fā)揮作用,并能夠為臨床上腦膠質(zhì)瘤的診療提供基礎(chǔ)方面的依據(jù)。轉(zhuǎn)化生長因子1（英文全稱，Transforming Growth Factor(TGF)1,TGF-1）、Smad 同源物 7 蛋白 （英文全稱，Smad homolog 7 protein，Smad7）是轉(zhuǎn)化生長因子家族相關(guān)成員，其能夠通過誘導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)細胞上游轉(zhuǎn)錄因子的激活，增加其對于神經(jīng)膠質(zhì)細胞的轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)激活程度，最終促進癌細胞的凋亡抑制和異常分化[3]；血管內(nèi)皮生長因子（英文全稱，Vascular endothelial growth factor, VEGF）是腫瘤血管內(nèi)皮誘導(dǎo)調(diào)控因子，其對于腫瘤新生血管的誘導(dǎo)作用，能夠提高腫瘤病灶組織的血流灌注水平[4]。為了揭示 TGF-1、Smad7 和VEGF 在腦膠質(zhì)瘤患者病灶組織中的表達情況，并深入揭示TGF-1、Smad7 和VEGF 與腦膠質(zhì)瘤患者臨床特征的關(guān)系，本次研究選取2018 年1 月-2019 年2 月我院保存的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本84 例，探討了 TGF-1、Smad7 和 VEGF 的表達情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2018 年 1 月-2019 年 2 月我院保存的腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本84 例（腦膠質(zhì)瘤組），同時選取正常腦組織80 例作為對照 （正常腦組織組）,兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05),見表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴均經(jīng)病理學(xué)確診；⑵術(shù)前未行放化療等治療；⑶臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤； ⑵合并有嚴重肝腎功能障礙、 內(nèi)分泌疾病、 免疫系統(tǒng)疾病等嚴重基礎(chǔ)性疾病。

表1 兩組一般資料比較

1.2 檢測方法 搜集的標(biāo)本組織采用液氮保存，采用蛋白提取試劑盒進行蛋白提取，BCA 法調(diào)整蛋白濃度，提取的蛋白與SDS 緩沖液混合10min，SDS-PAGE 電泳分離檢測蛋白，醋酸纖維膜進行蛋白的轉(zhuǎn)移，清洗膜后采用5%的血清蛋白進行封閉，TBST 清洗 3 次，每次 5min，加入 TGF-1、Smad7和 VEGF 一抗（鼠抗人 濃度：1:1000）5ml，4℃冰箱過夜，TBST 清洗 3 次，每次 5min，加入二抗（羊抗鼠 濃度：1:2000）3ml，TBST 清洗 3 次，每次 5min，加入DAB 顯影液 （北京索萊寶科技有限公司），以β-actin 蛋白為內(nèi)參，采用GSG2000 核酸/蛋白凝膠圖像分析管理軟件掃描分析蛋白條帶。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計分析采用SPSS22.0 軟件，TGF-1、Smad7 和 VEGF 表達等資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異比較使用t 檢驗；計數(shù)資料采用頻數(shù)或百分比表示，組間差異比較使用χ2檢驗；相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 腦膠質(zhì)瘤組和正常腦組織TGF-1、Smad7 和VEGF 表達比較 腦膠質(zhì)瘤組 TGF-1、Smad7 和VEGF 相對表達量明顯高于正常腦組織組(P＜0.05),見表2。

表2 腦膠質(zhì)瘤組和正常腦組織TGF-1、Smad7 和VEGF表達比較

2.2 TGF-1、Smad7 和 VEGF 表達與臨床病理特征關(guān)系 Hunt-Hess 分級Ⅲ～Ⅳ組織 TGF-1、Smad7 和VEGF 相對表達量明顯高于Ⅰ～Ⅱ級組織(P＜0.05)。見表3。

2.3 相關(guān)性分析 將腦膠質(zhì)瘤組織TGF-1、Smad7和VEGF 相對表達量進行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：TGF-1、Smad7 與 VEGF 相對表達量呈正相關(guān) （r=0.341 和 0.332，P＜0.05），TGF-1 和 Smad7 相對表達量呈正相關(guān)（r=0.477，P＜0.05）。見表4。

3 討論

圖1 Westernblot檢測圖（A：腦膠質(zhì)瘤組；B：正常腦組織）

表4 相關(guān)分析表

神經(jīng)膠質(zhì)細胞癌基因錯配的發(fā)生、長期精神應(yīng)激導(dǎo)致的膠質(zhì)細胞損傷修復(fù)的異常,均能夠促進腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生[5]。在具有精神壓力較大或者具有放射線接觸病史的群體中，腦膠質(zhì)細胞潛在病變的風(fēng)險較高，腦膠質(zhì)瘤遠期臨床結(jié)局的惡化程度也較高[6,7]。臨床病理特征的評估，能夠在腦膠質(zhì)瘤的病情認知或者治療預(yù)后判斷方面發(fā)揮作用?，F(xiàn)階段臨床上多數(shù)臨床工作者采用影像學(xué)檢查評估腦膠質(zhì)瘤的病情進展情況，但影像學(xué)檢查的費用較高、檢查耗時較長、檢查的靈敏度較低。腫瘤蛋白或者腫瘤調(diào)控相關(guān)因子的改變，能夠在神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生過程中發(fā)揮作用。本次研究通過對于腦膠質(zhì)瘤患者病灶組織中TGF-1、Smad7 和VEGF 蛋白的表達分析，不僅能夠揭示腦膠質(zhì)瘤患者的病情進展特征，同時還能夠為臨床上腦膠質(zhì)瘤的診療提供一定的參考依據(jù)。

表3 TGF-1、Smad7 和VEGF表達與臨床病理特征關(guān)系

TGF-1、Smad7 是轉(zhuǎn)化因子型號通路效應(yīng)蛋白，其對于TGF 信號通路的激活，能夠提高表皮生長因子或者胰島素樣生長因子的活性，促進上皮細胞或者間質(zhì)細胞的增殖。分子生物學(xué)蛋白領(lǐng)域的研究認為，TGF-1、Smad7 還能夠影響到癌細胞內(nèi)核酸染色體的轉(zhuǎn)錄復(fù)制活性,導(dǎo)致核酸結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的下降[8]；VEGF 是血管內(nèi)皮生長因子，其對于內(nèi)皮細胞遷移和定向分化誘導(dǎo)作用,能夠促進新生血管的形成[9]。有相關(guān)的研究主要探討揭示了VEGF蛋白在腦膠質(zhì)瘤患者腦組織中的表達情況，認為在腦膠質(zhì)瘤患者腦組織中，VEGF 蛋白的表達濃度明顯上升[10]，但對于 TGF-1、Smad7 蛋白的分析相對較少。

本次研究通過蛋白定量分析檢測技術(shù)，探討了 TGF-1、Smad7 和 VEGF 蛋白的表達情況，發(fā)現(xiàn)在腦膠質(zhì)瘤患者病灶組織中，TGF-1、Smad7 和VEGF 蛋白的定量表達水平明顯高于正常組，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，表明 TGF-1、Smad7 和 VEGF 蛋白的高表達可能在腦膠質(zhì)瘤的病情進展中發(fā)揮了作用。存在較高的TGF-1、Smad7 和VEGF 表達水平，主要由于神經(jīng)膠質(zhì)細胞腫瘤微環(huán)境的改變,影響到了腫瘤基因的激活, 促進了癌細胞內(nèi)TGF 信號通路的激活, 最終促進了 TGF-1、Smad7 的釋放[11,12]；而VEGF 水平的上升，主要由于腫瘤血管生成調(diào)控的異常有關(guān)[13]。有其他研究者分析也發(fā)現(xiàn)，在腦膠質(zhì)瘤或者其他神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤患者中，TGF-1蛋白的表達濃度水平同樣明顯上升，惡性腫瘤浸潤范圍越廣、遠處轉(zhuǎn)移越為明顯，TGF-1 蛋白的表達濃度越高[14,15]。Hunt-Hess 分級是判斷腦膠質(zhì)瘤患者病情程度的指標(biāo)，Hunt-Hess 分級越高，腦膠質(zhì)瘤患者的病情嚴重程度越高。

本次研究中可以發(fā)現(xiàn)，Hunt-Hess 分級較高的患者，其腦組織中 TGF-1、Smad7 和 VEGF 蛋白的相對表達濃度明顯高于分級較低的患者，統(tǒng)計學(xué)差異顯著，表明 TGF-1、Smad7 和 VEGF 能夠影響到腦膠質(zhì)瘤患者的病情程度。這主要由于TGF-1、Smad7 和VEGF 的改變，能夠在腫瘤細胞血流灌注水平、腫瘤細胞浸潤轉(zhuǎn)移、殘留癌細胞自我增殖能力等方面發(fā)揮調(diào)控作用，最終加劇了腦膠質(zhì)瘤患者短期內(nèi)病情進展的風(fēng)險。但腦膠質(zhì)瘤患者的年齡或者性別等一般性因素并不會影響到TGF-1、Smad7 和VEGF 的表達。相關(guān)關(guān)系分析可以發(fā)現(xiàn)，TGF-1、Smad7 與VEGF 的表達具有一定的內(nèi)在相關(guān)關(guān)系，但其具體的機制仍然不清。

TGF-1、Smad7 和 VEGF 在腦膠質(zhì)瘤中表達上調(diào)，與惡性程度有關(guān)，三者間表達存在正相關(guān)關(guān)系。