妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥患者膽固醇代謝相關(guān)基因表達及意義

張 娟，樊延霞

(1.寶雞市婦幼保健院產(chǎn)科，陜西 寶雞 721000；2.延安市第四人民醫(yī)院產(chǎn)科，陜西 延安 716000)

妊娠期是女性特殊的生理時期，隨著體內(nèi)胎兒的生長，母體也伴隨有相應(yīng)的生理變化，在一定條件下可出現(xiàn)各種特有疾病[1]。妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(Intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)就為妊娠期特有的疾病，臨床主要表現(xiàn)為皮膚瘙癢、黃疸，可造成胎兒宮內(nèi)窘迫、新生兒窒息、早產(chǎn)等，甚或死胎、死產(chǎn)[2-3]。該病的具體發(fā)病機制還不明確，可能是由多種因素相互依存、共同作用形成的。研究表明妊娠期膽固醇水平呈現(xiàn)顯著波動狀況，孕31周左右達到高峰，以總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)變化為主[4]。妊娠期膽固醇水平的升高除了滿足胎兒正常發(fā)育需要，還可為妊娠期儲備能量[5]。不過如果膽固醇水平嚴重異?？赡茉黾硬涣既焉锝Y(jié)局的發(fā)生。而孕期膽固醇代謝異常與肝內(nèi)膽汁淤積癥的發(fā)生也有一定的相關(guān)性，可能與膽汁酸參與了膽固醇的調(diào)節(jié)相關(guān)[6]。在膽固醇代謝相關(guān)基因中，免疫相關(guān)基因NOS2編碼的蛋白與葡萄糖和膽固醇代謝有關(guān)，具有調(diào)節(jié)血管舒張、血管生成、血小板聚集、免疫功能等多種生理功能。由SFTPD基因編碼的表面活性蛋白D(Surfactant protein D，SPD)是調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、介導(dǎo)機體清除病原體的重要先天性免疫調(diào)節(jié)劑，也與其他的糖脂代謝存在相關(guān)性[7-8]。本文探討了ICP患者膽固醇代謝相關(guān)基因NOS2與SFTPD的表達及意義，希望為闡明ICP的發(fā)生機制提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2018年12月至2020年7月選擇在本院診治的ICP患者102例作為病例組，選取同期在本院正規(guī)產(chǎn)檢并分娩的健康孕婦102例作為對照組。納入標準：具有本地區(qū)戶籍或者居住在本地區(qū)≥3年；病例組符合ICP的診斷標準；漢族；孕周≥28周；孕婦知情同意本研究；本院倫理委員會批準了此次研究；年齡20～40歲；單胎妊娠。排除標準：存在其它嚴重疾病者或其他妊娠合并癥；孕28周前存在肝功能異?；蛱喊l(fā)育異常者；臨床資料缺乏者；其他疾病引起的皮膚瘙癢、黃疸者。兩組孕婦的孕周、產(chǎn)次、孕次、體重指數(shù)、年齡等對比差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者一般資料對比

1.2 膽固醇代謝血清學指標檢測 采集所有孕婦的空腹靜脈血2～3 ml，3000 r/min離心10 min，取上層血清，采用日立全自動生化分析儀檢測甘油三酯(TG)、TC、載脂蛋白A(ApoA)、載脂蛋白B(ApoB)、LDL-C、高密度脂蛋白(HDL-C)含量。

1.3 膽固醇代謝相關(guān)基因表達檢測 取1.2中的血清學樣本，采用qPCR方法檢測NOS2與SFTPD相對表達水平，按Trizol RNA提取試劑操作說明提取血清總RNA，逆轉(zhuǎn)錄得到總cDNA，然后進行qPCR。NOS2上游引物：5’-GACCACCAAGGGCCAAGGCAGATTCT-3’；下游引物：5’-TTAGTCAAAGGGAATTCCAGCGATG-3’。SFTPD上游引物：5’-AGCAGAAAGTCAAAGGGTCATAAGCCA-3’；下游引物：5’-GCAGTAATCTCCCGGGATTACTAAG-3’。PCR反應(yīng)條件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，45次循環(huán)，以U2作為內(nèi)標準，計算目的基因的相對表達水平。

1.4 妊娠結(jié)局調(diào)查 調(diào)查兩組孕婦的妊娠結(jié)局，包括早產(chǎn)、剖宮產(chǎn)、新生兒窒息、產(chǎn)后出血、羊水污染等。

2 結(jié) 果

2.1 兩組膽固醇代謝血清學指標對比 病例組的TG、TC、LDL-C、ApoB值均高于對照組(均P<0.05)，HDL-C、ApoA值均低于對照組(均P<0.05)，見表2。

表2 兩組膽固醇代謝血清學指標對比

2.2 兩組膽固醇代謝相關(guān)基因相對表達水平對比 病例組的NOS2與SFTPD基因相對表達水平均高于對照組(均P<0.05)，見表3。

表3 兩組膽固醇代謝相關(guān)基因相對表達水平對比

2.3 兩組妊娠結(jié)局對比 病例組的早產(chǎn)、剖宮產(chǎn)、新生兒窒息、產(chǎn)后出血、羊水污染等發(fā)生率均高于對照組(均P<0.05)，見表4。

表4 兩組妊娠結(jié)局對比[例(%)]

2.4 相關(guān)性分析 在病例組中，NOS2、SFTPD基因相對表達水平與早產(chǎn)、剖宮產(chǎn)、新生兒窒息、產(chǎn)后出血、羊水污染都存在相關(guān)性(均P<0.05)，見表5。

表5 ICP患者NOS2、SFTPD基因相對表達水平與妊娠結(jié)局相關(guān)性

3 討 論

ICP多發(fā)于妊娠中晚期，該病的發(fā)生與感染、中毒、遺傳等有關(guān)，受遺傳、內(nèi)分泌和環(huán)境因素的共同影響[9]。本研究顯示病例組的TG、TC、LDL-C、ApoB值均高于對照組，HDL-C、ApoA值均低于對照組，表明ICP患者多伴隨有膽固醇代謝異常。從機制上分析，肝臟是膽固醇代謝的重要器官，高水平的膽酸對細胞膜有破壞作用，可致肝細胞損傷，從而導(dǎo)致膽固醇異常[10-11]。ICP患者雌激素水平增高可導(dǎo)致血脂增高，引起內(nèi)皮細胞功能紊亂，膽固醇代謝障礙，也可刺激前列腺素釋放，導(dǎo)致機體膽固醇代謝異常[12]。

ICP在臨床上主要表現(xiàn)為手足瘙癢與膽汁酸水平升高，也可增加妊娠期婦女緊張情緒，從而增加孕中晚期心理負擔。該病患者也可伴隨有白細胞炎癥反應(yīng)、胰島素抵抗、膽固醇代謝異常，伴隨有氧化應(yīng)激相關(guān)基因表達異常。本研究顯示病例組的NOS2與SFTPD基因相對表達水平均高于對照組，從機制上分析，NOS2基因過表達導(dǎo)致NO水平增高，這與ICP的發(fā)生相關(guān)；其高表達也可促進血管平滑肌細胞炎癥因子的表達，導(dǎo)致機體動脈粥樣硬化發(fā)生風險增大[13-14]。肝細胞內(nèi)的膽汁酸濃度，SFTPD可增強機體清除病原體，調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，也是機體糖脂代謝相互影響的重要因素[15-16]。ICP患者SFTPD基因表達水平上調(diào)，可能為高膽固醇環(huán)境誘導(dǎo)機體發(fā)生氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，進而促進SPD的高表達[17]。

ICP患者血脂異常可引起胎盤血流灌注量不足，胎兒易發(fā)生缺氧，導(dǎo)致妊娠結(jié)局不佳[18]。本研究顯示病例組的早產(chǎn)、剖宮產(chǎn)、新生兒窒息、產(chǎn)后出血、羊水污染等發(fā)生率均高于對照組；ICP患者的NOS2、SFTPD基因相對表達水平與早產(chǎn)、剖宮產(chǎn)、新生兒窒息、產(chǎn)后出血、羊水污染都存在相關(guān)性。從機制上分析，NOS2、SFTPD的高表達可導(dǎo)致胎兒因暴露于高膽汁酸環(huán)境時間更持久，在確定胎盤成熟的情況下需要及時引產(chǎn)，從而導(dǎo)致早產(chǎn)率增加[19-20]。并且ICP患者更易出現(xiàn)膽固醇代謝異常，可能是新生兒窒息、羊水污染等原因?qū)е?，且膽固醇異常和糖代謝異常關(guān)系密切，可能增加早產(chǎn)、剖宮產(chǎn)的發(fā)生率[21-22]。

綜上所述，ICP患者伴隨有膽固醇代謝血清指標異常，其可增加妊娠不良結(jié)局發(fā)生率，NOS2與SFTPD基因表達量也增加，且與妊娠不良結(jié)局存在相關(guān)性。