蟲(chóng)草素的抑菌活性及機(jī)理研究

高蘇 馬婕馨 劉警鞠 趙國(guó)柱

（北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，北京 100083）

核苷類抗生素是由核苷和核苷酸衍生而來(lái)的一類微生物天然產(chǎn)物，由于核苷和核苷酸在大多數(shù)細(xì)胞代謝中起著重要的作用，因此核苷類抗生素表現(xiàn)出了廣泛的生物活性［1-2］。目前已經(jīng)從微生物來(lái)源的發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)了多種核苷化合物，其中的一些核苷化合物如脂西霉素、多毒素等能有效抑制真菌和細(xì)菌細(xì)胞壁的生物合成，是良好的核苷抑制劑［3-4］。天然產(chǎn)物的生物活性豐富且結(jié)構(gòu)復(fù)雜多變，因此從天然產(chǎn)物中篩選開(kāi)發(fā)新型的核苷類抗菌物質(zhì)是解決菌株耐藥性的一個(gè)重要思路。

蟲(chóng)草素又稱3′-脫氧腺苷，1951年首次從蛹蟲(chóng)草的發(fā)酵液中分離獲得［5］，具有抗菌［6］、抗氧化［7］、抗炎［8］、抗腫瘤［9］、溶血栓降血脂［10］、免疫調(diào)節(jié)［11］等廣泛的藥理作用。同時(shí)蟲(chóng)草素也是從蟲(chóng)草中分離得到的第一個(gè)核苷類抗菌素，對(duì)梭狀芽孢桿菌等細(xì)菌表現(xiàn)出了良好的抑菌效果，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾后能有效抑制炭疽桿菌、鏈球菌、鼻疽桿菌等病原菌的生長(zhǎng)［12-13］。在我國(guó)蛹蟲(chóng)草2009年已被批準(zhǔn)為新資源食品（2014改為新食品原料）［14］，被廣泛栽培食用，其核心成分蟲(chóng)草素也被用于開(kāi)發(fā)食品、藥品、保健品等。蟲(chóng)草素雖被報(bào)道具有抗菌作用，但對(duì)不同細(xì)菌的抗菌譜還不完善，對(duì)G+菌及G-菌抑菌效果的差異尚未見(jiàn)報(bào)道，抑菌機(jī)制缺乏深入研究。本文在前期蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵提取蟲(chóng)草素的基礎(chǔ)上，以枯草芽孢桿菌等3種常見(jiàn)的G+菌及大腸桿菌等3種常見(jiàn)的G-菌為對(duì)象，從抑菌圈、生長(zhǎng)曲線、最低抑制濃度、胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)泄露和細(xì)胞損傷角度，研究蟲(chóng)草素對(duì)其生長(zhǎng)影響、抗菌譜、抑菌效果及抑菌機(jī)理，旨為蟲(chóng)草素的深度開(kāi)發(fā)應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株：蛹蟲(chóng)草（Cordyceps militaris YCC-W）由中國(guó)科學(xué)院真菌學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供；G+：枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis BS-1）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus SA-1）、蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis BT-1），G-：大腸桿菌（Escherichia coli EC-1）、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa PA-1）來(lái)源于北京林業(yè)大學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室；G-：腸沙門氏菌（Salmonella enteritidis SE-1）由中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心提供，保藏編號(hào)為CGMCC1.10603。

實(shí)驗(yàn)試劑：酵母粉、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉購(gòu)自北京易秀博谷生物科技有限公司；磷酸鹽緩沖液、乙酸異戊酯、戊二醛、無(wú)水乙醇購(gòu)自北京藍(lán)弋化工產(chǎn)品有限責(zé)任公司。

實(shí)驗(yàn)儀器：HZC-250全溫振蕩培養(yǎng)箱（蘇州培英實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）；SPX-250 生化培養(yǎng)箱（上海龍躍儀器設(shè)備有限公司）；冷凍干燥機(jī)（北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；LC-20A高效液相色譜儀（島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司）；SU-8010場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡（日本日立有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基的配制及供試菌株的活化 種子液培養(yǎng)基（g/L）：蔗糖20，蛋白胨20，磷酸二氫鉀1，七水硫酸鎂0.5。

發(fā)酵培養(yǎng)基（g/L）：葡萄糖20、魚(yú)蛋白胨20、磷酸氫二鉀0.5、七水硫酸鎂0.5、硫酸錳0.5。

LB培養(yǎng)基（g/L）：酵母粉5，胰蛋白胨10，氯化鈉10；固體培養(yǎng)基另補(bǔ)加瓊脂粉16。

PDA培養(yǎng)基（g/L）：葡萄糖20，馬鈴薯200，瓊脂粉16。

菌株的活化：將蛹蟲(chóng)草菌種接種在PDA培養(yǎng)基上，于21℃生化培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)10 d。用無(wú)菌接種環(huán)將供試細(xì)菌劃線接種到LB斜面試管中，37℃培養(yǎng)24 h。

1.2.2 蟲(chóng)草素的制備

1.2.2.1 蛹蟲(chóng)草種子液的制備 從活化菌種中挑取約1 cm2的菌塊接種于裝有100 mL種子液培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，以26℃、130 r/min于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)84 h。

1.2.2.2 蛹蟲(chóng)草發(fā)酵液的制備 將種子液以4%接種量接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，24℃培養(yǎng)25 d，先150 r/min震蕩培養(yǎng)3 d后靜置培養(yǎng)至25 d，過(guò)濾收集發(fā)酵液。

1.2.2.3 蟲(chóng)草素的分離純化 將發(fā)酵液濃縮后冷凍干燥得凍干粉，加入適量純甲醇充分混勻后4℃過(guò)夜，9 500 r/min離心5 min后，減壓濃縮上清液至液體渾濁，加入少量蒸餾水，繼續(xù)濃縮至甲醇全部蒸出，于4℃過(guò)夜。抽濾后向粗結(jié)晶中加入與濃縮后等體積的預(yù)冷蒸餾水，混勻后于4℃過(guò)夜，再次抽濾并重復(fù)操作至沉淀顏色呈白色，將沉淀冷凍干燥即得蟲(chóng)草素，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為94.26% ± 0.31%。

1.2.3 最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）的測(cè)定 參照Moreira等［15］的方法并稍作修改。采用二倍稀釋法將高濃度蟲(chóng)草素溶液進(jìn)行稀釋，使其在培養(yǎng)基中的終濃度分別為10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL。以無(wú)菌的LB培養(yǎng)基作為對(duì)照組溶劑，取20 μL處于對(duì)數(shù)期（105-106CFU/mL）的上述6種供試細(xì)菌分別加入到2 mL含有系列濃度蟲(chóng)草素的LB培養(yǎng)基中，震蕩混勻后37℃恒溫培養(yǎng)24 h，觀察實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)液濁度與對(duì)照組濁度無(wú)差別即為蟲(chóng)草素對(duì)該細(xì)菌的MIC。

1.2.4 抑菌圈（diameter of inhibitory zone，DIZ）的測(cè)定 參照Sharma等［16］的方法并稍作修改。取20 μL處于對(duì)數(shù)期的上述6種供試菌加入到30 mL未凝固的LB培養(yǎng)基中，混勻后倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿（90 mm）中。待其凝固后，用打孔器在培養(yǎng)基等位置處打4個(gè)均勻分布直徑為8 mm的圓孔，向每孔中加入等體積（200 μL）的不同濃度（2.5、5、10 mg/mL）的蟲(chóng)草素溶液，對(duì)照孔加入無(wú)菌水，37℃培養(yǎng)24 h后測(cè)量記錄抑菌圈直徑。

抑菌圈直徑（mm）= 藥品組抑菌圈直徑-對(duì)照組抑菌圈直徑

1.2.5 細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 參照何學(xué)文等［17］的方法并稍做修改。將6種供試菌液濃度稀釋到108CFU/mL，分別加入不同劑量的蟲(chóng)草素并調(diào)節(jié)其終濃度為2MIC（不受抑制的3種菌中蟲(chóng)草素的終濃度為10 mg/mL），以不含蟲(chóng)草素的菌液為對(duì)照組，37℃恒溫培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)期間每隔2 h取樣，利用752型紫外分光光度計(jì)在600 nm處測(cè)量光密度值。

1.2.6 細(xì)菌胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)泄露檢測(cè) 參照江琦的方法并稍作修改［18］。將6種對(duì)數(shù)期供試菌菌液與2MIC蟲(chóng)草素混勻（不受抑制的3種菌中蟲(chóng)草素的終濃度為10 mg/mL），以不含蟲(chóng)草素的菌液作為對(duì)照組，37℃培養(yǎng)8 h，期間每隔2 h取樣，8 000 r/min高速離心后收集上清液，用752型紫外分光光度計(jì)在260 nm處測(cè)量光密度值。為避免蟲(chóng)草素這一類核苷類化合物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾，本實(shí)驗(yàn)使用含有對(duì)應(yīng)量蟲(chóng)草素的空白培養(yǎng)基作調(diào)零組。

1.2.7 蟲(chóng)草素對(duì)細(xì)菌形態(tài)的影響 參照Li等［19］的方法并略做修改。將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的6種供試菌分別加入含有0、2MIC蟲(chóng)草素的LB培養(yǎng)基中（3種G-菌中蟲(chóng)草素的終濃度為10 mg/mL），搖床培養(yǎng)（37℃，150 r/min）4 h后分別取樣2 mL，8 000 r/min離心5 min收集菌體沉淀，PBS洗滌3次后留沉淀。使用2.5%的戊二醛4℃條件下固定12 h，固定結(jié)束后依次使用40%、70%、90%、100%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，最后使用乙酸異戊酯置換2次。將處理好的樣品滴于錫箔紙（1× 1 cm），冷凍干燥后于場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡下觀察。

1.2.8 數(shù)據(jù)分析 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差（Mean ± SD）表示，采用Origin 2019b軟件作圖；采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，兩組數(shù)據(jù)間的比較采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行分析，3組及以上數(shù)據(jù)間的比較采用（One-way ANOVA）的Duncan法進(jìn)行多重比較分析，顯著性水平均為0.05。

2 結(jié)果

2.1 MIC測(cè)定結(jié)果

MIC可以定量的反映出蟲(chóng)草素抑菌能力的強(qiáng)弱，測(cè)定結(jié)果如表1所示：在供試濃度范圍內(nèi)，蟲(chóng)草素對(duì)供試G+細(xì)菌具有一定的抑菌效果，對(duì)供試G-細(xì)菌無(wú)明顯抑菌效果。其中蟲(chóng)草素對(duì)B. subtilis BS-1的抑制效果最好，MIC為2.5 mg/mL；B. thuringiensis BT-1和S. aureus SA-1對(duì)蟲(chóng)草素的敏感度次之，MIC均為5 mg/mL。

表1 蟲(chóng)草素MIC測(cè)定結(jié)果Table1 Determination of cordycepin MIC

2.2 DIZ測(cè)定結(jié)果

由圖1和表2可知，蟲(chóng)草素對(duì)3種G+菌均具有一定的抑制作用，且抑制效果呈濃度依賴性（P＜0.05），而對(duì)3種G-菌無(wú)明顯抑制作用。其中B. subtilis BS-1對(duì)蟲(chóng)草素最為敏感，經(jīng)不同濃度蟲(chóng)草素處理后測(cè)得的DIZ分別為3.6 mm、5.2 mm和8.75 mm，顯著高于同濃度處理的B. thuringiensis BT-1和S. aureus SA-1（P＜0.05）。B. thuringiensis BT-1 和 S.aureus SA-1經(jīng)2.5 mg/mL蟲(chóng)草素處理后均無(wú)抑菌圈產(chǎn)生，進(jìn)一步提高濃度后蟲(chóng)草素對(duì)B. thuringiensis BT-1的抑制效果顯著高于S. aureus SA-1（P＜0.05）。該結(jié)果與上述MIC的測(cè)定結(jié)果一致。

圖1 蟲(chóng)草素對(duì)6種供試菌抑菌圈Fig.1 DIZ of cordycepin against six tested strains

表2 蟲(chóng)草素DIZ測(cè)定結(jié)果Table 2 Determination of cordycepin DIZ

2.3 供試菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定結(jié)果

六種供試菌經(jīng)蟲(chóng)草素處理前后生長(zhǎng)曲線的測(cè)定結(jié)果如圖2所示?？煽闯?種供試菌的對(duì)照組生長(zhǎng)曲線呈典型的S型，可明顯區(qū)分出遲緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期，細(xì)菌生長(zhǎng)狀況良好。在添加2MIC的蟲(chóng)草素后3種G+菌的生長(zhǎng)曲線變化明顯，雖然光密度值也隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，但增加幅度較對(duì)照組明顯減小，無(wú)法正常進(jìn)入對(duì)數(shù)期（P＜0.05）。培養(yǎng)6-12 h后3種G+菌實(shí)驗(yàn)組的光密度值趨于平緩，菌液濃度明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），蟲(chóng)草素對(duì)3種G+菌的生長(zhǎng)起到了明顯的抑制作用。3種G-菌經(jīng)10 mg/mL蟲(chóng)草素處理后，整體的生長(zhǎng)趨勢(shì)及最終菌群密度較對(duì)照組無(wú)明顯變化（P＞0.05），蟲(chóng)草素對(duì)供試G-菌的整體生長(zhǎng)進(jìn)程無(wú)明顯影響。

圖2 蟲(chóng)草素對(duì)6種供試菌生長(zhǎng)曲線的影響Fig.2 Effects of cordycepin on the growth curves of six tested strains

2.4 細(xì)菌胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)泄漏結(jié)果

六種供試菌經(jīng)蟲(chóng)草素處理后胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)泄漏情況見(jiàn)圖3。培養(yǎng)期間6種供試菌的對(duì)照組OD260無(wú)明顯變化，胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)無(wú)外泄趨勢(shì)，細(xì)胞生長(zhǎng)狀況良好。3種G+菌經(jīng)2MIC蟲(chóng)草素處理后，OD260均在經(jīng)歷短暫的平穩(wěn)期后急速增加（P＜0.05），在2-8 h內(nèi)造成胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)不同程度的泄露。部分G-菌如E. coli EC-1經(jīng)蟲(chóng)草素處理后胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)有輕微泄露趨勢(shì)，而S. enteritidis SE-1及P.aeruginosa PA-1在給藥后OD260較對(duì)照組無(wú)顯著變化（P＞0.05），胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)無(wú)外泄趨勢(shì)。

圖3 蟲(chóng)草素對(duì)6種供試菌胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)泄露的影響Fig.3 Effects of cordycepin on the leakage of intracellular ultraviolet absorbents of six tested strains

2.5 蟲(chóng)草素對(duì)6種供試菌菌體形態(tài)的影響

利用掃描電鏡觀察6種供試菌經(jīng)蟲(chóng)草素處理前后的超微形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，結(jié)果如圖4和圖5所示。當(dāng)6種供試菌未經(jīng)蟲(chóng)草素處理時(shí)，正常的菌體呈長(zhǎng)桿型或圓球形，菌體大小均一、表面飽滿光滑，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。3種G+菌經(jīng)2MIC蟲(chóng)草素處理后，形態(tài)較對(duì)照組發(fā)生了明顯的變化。B. subtilis BS-1經(jīng)處理后菌體嚴(yán)重皺縮不再充盈，表面粗糙、凸起；B.thuringiensis BT-1經(jīng)處理后菌體干癟皺縮嚴(yán)重、部分菌體細(xì)胞壁出現(xiàn)斷裂甚至溶解，失去原有的細(xì)胞形態(tài)。S. aureus SA-1經(jīng)處理后黏聯(lián)現(xiàn)象明顯，菌體腫脹變形、少量細(xì)胞解體破碎。3種G-菌經(jīng)蟲(chóng)草素處理后也表現(xiàn)出輕微損傷，如E. coli EC-1菌體腫脹變形；部分S. enterica SE-1菌體表面破損、有孔洞出現(xiàn)；部分P. aeruginosa PA-1菌體表面破損脫落，菌體兩端有缺口。

3 討論

核苷類抗生素包括抗細(xì)菌、抗真菌和抗病毒等主要類型［2］。蟲(chóng)草素作為第一個(gè)從真菌中分離得到的抗菌核苷類抗生素，其抑菌效果也有所報(bào)道。Cunningham等［5］首先探究了蟲(chóng)草素的抑菌作用，發(fā)現(xiàn)其對(duì)枯草芽孢桿菌表現(xiàn)出了較好的抑菌效果。相關(guān)研究表明蟲(chóng)草素對(duì)大腸桿菌等細(xì)菌均有抑菌活性［18，20］。但蟲(chóng)草素對(duì)受體菌的選擇性及作用機(jī)理還不夠明確，本研究將供試菌分成G+組和G-組進(jìn)一步完善蟲(chóng)草素的抑菌譜，從宏觀生長(zhǎng)進(jìn)程和微觀形態(tài)結(jié)構(gòu)角度對(duì)蟲(chóng)草素的抑菌機(jī)理進(jìn)行了初步的探究，為開(kāi)發(fā)蟲(chóng)草素的生物活性奠定理論基礎(chǔ)。

圖4 場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡下的供試G+菌形態(tài)Fig.4 Morphology of tested G+ bacteria under field emission scanning electron microscope

圖5 場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡下的供試G-菌形態(tài)Fig.5 Morphology of tested G- bacteria under field emission scanning electron microscope

研究結(jié)果顯示蟲(chóng)草素對(duì)供試G+菌具有明顯的抑制作用并呈濃度依賴性，而對(duì)供試G-菌無(wú)明顯抑制作用，表明蟲(chóng)草素在抑菌方面具有一定的選擇性，但這種選擇專一性并不高，可能受到環(huán)境條件的影響及菌株的適應(yīng)性耐藥性而變化［21］。如江琦［18］和Jiang等［20］發(fā)現(xiàn)蟲(chóng)草素對(duì)枯草芽孢桿菌（G+）和大腸桿菌（G-）均有抑制效果，分析可能與菌株耐藥性的差異有關(guān)。細(xì)胞壁膜系統(tǒng)為細(xì)菌提供了天然的保護(hù)屏障，受到抗菌物質(zhì)作用時(shí)，壁膜系統(tǒng)受損并喪失功能，胞內(nèi)大分子物質(zhì)如DNA、RNA和酶類等會(huì)外滲到培養(yǎng)液中，影響細(xì)菌正常的生理代謝甚至造成菌體的死亡［22-23］。滲透到胞外的主要是核酸類物質(zhì)，由于核酸在260 nm處有很強(qiáng)的吸收峰也稱“260 nm物質(zhì)”，因此OD260被廣泛用作評(píng)價(jià)細(xì)胞完整性的指標(biāo)［23-26］。經(jīng)蟲(chóng)草素處理后，G+菌胞內(nèi)核酸等物質(zhì)大量泄露且電鏡觀察結(jié)果顯示菌體表面嚴(yán)重受損，表明蟲(chóng)草素能破壞質(zhì)膜、細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和功能，造成細(xì)胞內(nèi)容物的流失和代謝的紊亂，因此菌體的完整性受損是細(xì)菌死亡的原因之一［27］。有研究表明抗菌核苷類抗生素是細(xì)菌磷酸-N-乙酰壁氨酰-五肽轉(zhuǎn)位酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，通過(guò)阻斷肽聚糖生物合成的脂質(zhì)循環(huán)進(jìn)而阻礙細(xì)胞壁的生物合成，這與我們的研究結(jié)果相符［2］。蟲(chóng)草素對(duì)3種G-菌的抑制效果較差，這一差異可能與兩類細(xì)菌結(jié)構(gòu)組成有關(guān)。大多數(shù)G+菌如枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌都被厚厚的肽聚糖細(xì)胞壁所包裹，它對(duì)小分子的擴(kuò)散幾乎沒(méi)有阻力。而像大腸桿菌和銅綠假單胞菌這樣的G-菌被額外的脂多糖外膜包圍，它是防止脂溶性抗生素快速滲透的有效屏障［4］。此外，G-菌還具備外排泵，抗菌藥物進(jìn)入后會(huì)被感知并排出，這在一定程度上也增加了G-菌的耐藥性［28］。研究中發(fā)現(xiàn)3種G-菌經(jīng)高濃度蟲(chóng)草素處理后，部分菌體表面出現(xiàn)了輕微的破損，推測(cè)進(jìn)一步提高蟲(chóng)草素濃度可能對(duì)G-菌也起到一定的抑菌效果，但由于蟲(chóng)草素在常溫下的溶解度有限［29］，繼續(xù)提高濃度后會(huì)有不溶性顆粒析出從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，另外過(guò)高濃度的蟲(chóng)草素也不適用正常的實(shí)驗(yàn)及應(yīng)用范圍，因此，本研究未對(duì)超濃度范圍蟲(chóng)草素進(jìn)一步探究。蟲(chóng)草素作為一種新型的廣譜抗菌素，在食藥保健領(lǐng)域日益引起重視，本研究初步獲得蟲(chóng)草素對(duì)常見(jiàn)細(xì)菌的抗菌譜及選擇性，分析了抑菌機(jī)理，但其具體的作用靶標(biāo)和抑菌機(jī)理及運(yùn)用到實(shí)際的抗菌治療中還需更深入的研究。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)探究了蟲(chóng)草素對(duì)6種常見(jiàn)細(xì)菌的抑菌性能，結(jié)果表明在溶解度范圍內(nèi)蟲(chóng)草素對(duì)供試菌的抑菌效果具有選擇性，對(duì)3種G+菌有抑制效果，而對(duì)供試G-菌抑制效果不明顯。蟲(chóng)草素能能嚴(yán)重破壞供試G+菌的壁膜系統(tǒng)，造成胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)的大量流失，影響菌體的正常生命進(jìn)程。供試G-菌經(jīng)高濃度蟲(chóng)草素處理后，部分菌體表面出現(xiàn)輕微破損并伴隨紫外吸收物質(zhì)的泄露，但細(xì)菌的整體生長(zhǎng)進(jìn)程不受影響。