• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    糖皮質(zhì)激素對晶狀體上皮細(xì)胞生物學(xué)功能調(diào)控作用的生物信息學(xué)分析

    2021-05-12 00:43:48閆楚凡韓笑張勁松
    中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志 2021年4期
    關(guān)鍵詞:差異基因晶狀體皮質(zhì)激素

    閆楚凡 韓笑 張勁松

    中國醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院眼科,沈陽 110059

    糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障多見于全身或局部長期使用糖皮質(zhì)激素者,其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。許多生物學(xué)過程被證明與糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的發(fā)生相關(guān),如細(xì)胞分化異常和糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor,GR)的激活等[1-3];糖皮質(zhì)激素還導(dǎo)致晶狀體中E鈣黏附蛋白和N鈣黏附蛋白的表達(dá)量下降,而細(xì)胞黏附在晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelial cells,LECs)的正常分化和遷移中有重要作用[4]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一種長度為18~22個核苷酸的非編碼RNA,與基因的3’端非翻譯區(qū)結(jié)合,通過抑制基因的轉(zhuǎn)錄來影響蛋白的表達(dá)。既往研究發(fā)現(xiàn),miR-29a可以靶向抑制GR mRNA的表達(dá),同時其本身的表達(dá)量又依賴于GR的激活,形成一個負(fù)反饋回路,這個特點(diǎn)在糖皮質(zhì)激素治療過程中有助于減緩GR水平的逐漸降低[5],這為糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的治療提供了新的思路。目前關(guān)于miRNA與糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的研究尚未見報道。本研究基于生物信息學(xué)方法分析經(jīng)地塞米松處理的LECs中差異基因的表達(dá)及其相關(guān)的生物學(xué)功能,篩選并驗(yàn)證hub基因的表達(dá),預(yù)測與其最有可能相關(guān)的miRNA,以期為白內(nèi)障的治療提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1細(xì)胞來源 人LECs細(xì)胞株HLE-B3細(xì)胞購自美國ATCC公司。

    1.1.2主要試劑及儀器 地塞米松、Trixon X-100(北京索萊寶科技有限公司);二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)(美國Sigma公司);MEM培養(yǎng)液、胰蛋白酶、磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)(江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司);胎牛血清(澳洲AusGeneX公司);青鏈霉素混合液(美國HyClone公司);RNA iso Plus、實(shí)時熒光定量PCR試劑盒(日本TaKaRa公司);質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛(武漢博士德生物工程有限公司);甘氨酸(大連美侖生物技術(shù)有限公司);mRNA引物(武漢金開瑞生物工程有限公司);EdU細(xì)胞增生檢測試劑盒(廣州銳博科技有限公司)。PCR逆轉(zhuǎn)錄儀(美國Bio-Rad公司);實(shí)時熒光定量PCR儀(美國Applied Biosystem公司);熒光顯微鏡(日本Olympus公司)。

    1.2 不同生物信息學(xué)方法對地塞米松處理的HLE-B3細(xì)胞生物學(xué)功能的評估

    1.2.1GEO2R法分析HLE-B3細(xì)胞差異基因 從公開數(shù)據(jù)庫GEO中下載GSE3040數(shù)據(jù)集,該數(shù)據(jù)集由Gupta等[6]上傳。該數(shù)據(jù)集中,用DMSO處理的HLE-B3細(xì)胞設(shè)置為對照組,經(jīng)過1 μmol/L地塞米松處理16 h的HLE-B3細(xì)胞設(shè)置為實(shí)驗(yàn)組,每組3個樣本。通過Affymetrix Human Genome U133A Array平臺,得到不同樣本間基因表達(dá)數(shù)據(jù)。參照文獻(xiàn)[7]的方法,利用GEO數(shù)據(jù)庫的生信分析工具GEO2R,以倍數(shù)變化>2、P值<0.05為條件篩選分析2個組間差異基因的表達(dá)。利用graphGP網(wǎng)站(https://www.ehbio.com/ImageGP/),以logFC為橫坐標(biāo)、-log10(Pvalue)為縱坐標(biāo)繪制該數(shù)據(jù)集差異基因的火山圖。藍(lán)色代表下調(diào)基因,紫色代表上調(diào)基因,黃色代表表達(dá)無差異的基因。

    1.2.2利用Metascape網(wǎng)站進(jìn)行差異基因功能富集分析 打開Metascape網(wǎng)站(http://metascape.org/gp/index.html/)[8],將之前得到的差異基因名稱或者基因ID輸入基因列表并提交,即可獲取功能富集柱圖。所有富集到的詞條來源于GO生物學(xué)過程、KEGG通路、Reactome基因集、Canonical通路及CORUM。收集P值<0.01、最小計(jì)數(shù)為3、富集因子>1.5的項(xiàng),并根據(jù)成員的相似性進(jìn)行分組。在對豐富項(xiàng)進(jìn)行層次聚類時,采用Kappa分?jǐn)?shù)作為一致性度量,一致性>0.3的子樹作為1個聚類,選擇集群中最具統(tǒng)計(jì)意義的術(shù)語來表示集群。

    1.2.3作圖法分析hub基因 利用STRING數(shù)據(jù)庫(v10.5,https://string-db.org/cgi/input.pl)獲得差異基因相互關(guān)系數(shù)據(jù),將其導(dǎo)入cytoscape軟件[9],分析并制作蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖,在cytoscape中安裝cytohubba app,選擇MCC方法分析前25位hub基因及其相互關(guān)系,顏色越深表示基因重要性越高。

    1.2.4mirCode預(yù)測與hub基因相關(guān)的miRNA 在mirCode數(shù)據(jù)庫(http://www.mircode.org)[10]中下載已知的高度保守的miRNA數(shù)據(jù)集,篩選出可能與前10個hub基因有調(diào)控關(guān)系的miRNA,利用cytoscape軟件,制作出預(yù)測的hub基因與miRNA的調(diào)控網(wǎng)狀圖。藍(lán)色六邊形點(diǎn)代表篩選出的關(guān)鍵hub基因,紫色圓點(diǎn)是與其相關(guān)的miRNA。

    1.3 地塞米松處理后HLE-B3細(xì)胞生物學(xué)功能變化的離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

    1.3.1細(xì)胞培養(yǎng)及分組 將凍存的HLE-B3細(xì)胞從-80 ℃冰箱中取出,迅速將凍存管放到37 ℃水浴鍋中輕輕搖晃解凍1~2 min,置于低速離心機(jī)中,離心半徑16 cm,1 000 r/min離心3 min,棄上清液。用1 ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并將其均勻接種于直徑6 cm培養(yǎng)皿中,添加3 ml完全培養(yǎng)基。置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2溫箱中培養(yǎng),待細(xì)胞融合至80%~90%時用胰蛋白酶消化并1∶ 3傳代。取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞(第3代及以后的細(xì)胞),分別加入1 μmol/L DMSO和1 μmol/L地塞米松,置于37 ℃、5% CO2溫箱中培養(yǎng)16 h,作為對照組和實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    1.3.2EdU實(shí)驗(yàn)檢測HLE-B3細(xì)胞增生情況 取處于對數(shù)生長期的HLE-B3細(xì)胞接種至96孔板中,分別設(shè)置實(shí)驗(yàn)組和對照組,每組3個復(fù)孔。用完全培養(yǎng)基按1 000∶ 1稀釋EdU溶液,終濃度為50 μmol/L,每孔加入100 μl該培養(yǎng)基,溫箱孵育2 h,棄培養(yǎng)液,PBS清洗2次,每次5 min。每孔加入4%多聚甲醛50 μl室溫下固定30 min,棄固定液,每孔加入質(zhì)量濃度2 mg/ml甘氨酸50 μl,脫色搖床孵育5 min后棄液,每孔加入100 μl PBS,脫色搖床清洗5 min后棄液。每孔加入100 μl體積分?jǐn)?shù)0.5% TrixonX-100脫色搖床孵育10 min,PBS清洗1次,5 min。每孔加入100 μl Apollo染色反應(yīng)液,避光室溫?fù)u床孵育30 min后棄液(之后步驟均避光進(jìn)行),每孔加入0.5% Trixon X-100各100 μl,搖床清洗2次,每次10 min。每孔加入100倍稀釋Hoechst33342各50 μl,室溫下孵育5 min復(fù)染核,PBS清洗3次,每次5 min。熒光顯微鏡下觀察染色情況,綠色熒光染色細(xì)胞為增生期細(xì)胞,藍(lán)色熒光染色細(xì)胞為活細(xì)胞。細(xì)胞增生率=增生期細(xì)胞數(shù)/活細(xì)胞數(shù)×100%。

    1.3.3實(shí)時熒光定量PCR檢測hub基因相對表達(dá)量 采用Trizol法分別提取實(shí)驗(yàn)組和對照組HLE-B3細(xì)胞的RNA,分光光度計(jì)測定RNA的濃度和純度,將其逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,前10個hub基因的引物序列見表1。采用TB GreenTM Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR實(shí)驗(yàn),按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)條件:96 ℃預(yù)變性30 s;95 ℃變性5 s,60 ℃退火延伸34 s,共40個循環(huán),添加熔解曲線。以GAPDH為內(nèi)參,采用2-△△Ct法計(jì)算目的基因的相對表達(dá)量。

    表1 糖皮質(zhì)激素處理HLE-B3細(xì)胞中排名前10位hub基因的引物序列Table 1 The primer sequence of top 10 hub genes in glucocorticoid treated HLE-B3 cells引物名稱序列(5’-3’)SST正向:CTCCCTCGGACCCCAGACTC反向:AGGGCATCATTCTCCGTCTGGCXCL8正向:AGCTCTGTGTGAAGGTGCAGT反向:TGGGGTGGAAAGGTTTGGAGTGRM1正向:CCTCTGATGTTGTCCGCATGC反向:CCCCTGCCTTCTTTCTTCGGAGNRH1正向:TCTACTGACTTGGTGCGTGGA反向:CGTTGGGTTTCTGCCAGTTGACXCL5正向:GCTGCGTTGCGTTTGTTTACA反向:CGTTCTTCAGGGAGGCTACCAGRK5正向:GACCCTCCCTTCGTTCCAGAC反向:ATTGACGCCCTTCACAGTGGAPPBP正向:GGAAGTGATCGGGAAAGGAAC反向:ATCTGGGTCCAGGCAGATTTTCX3CR1正向:ACAGCAAGAAGCCCAAGAGTG反向:AGGGCAAAGTGGCTACAAACAPYY正向:AGGAGCTGAACCGCTACTACG反向:GGGGAAGAACGTTTTGGAAAGEDNRA正向:GATCACCGTCCTCAACCTCTG反向:AAAGGAATCCCAATTCCCTGA

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 23.0和Graphpad Prism 5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及作圖。計(jì)量資料的數(shù)據(jù)經(jīng)K-S檢驗(yàn)證實(shí)呈正態(tài)分布,以mean±SD表示;實(shí)驗(yàn)組和對照組中的SST、CXCL8、GRM1、GNRH1、CXCL5、PPBP、CX3CR1、PYY、EDNRA、GRK5的mRNA相對表達(dá)量差異比較,以及HLE-B3細(xì)胞增生值差異比較均采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 地塞米松作用后LECs中差異基因的篩選

    通過GEO2R分析數(shù)據(jù),得到341個差異基因,其中上調(diào)基因?yàn)?00個,下調(diào)基因?yàn)?1個。下調(diào)基因中差異最顯著的5個基因是SLC12A1、MED13L、ALDH5A1、SLC15A3和WWC1基因;上調(diào)基因中差異最顯著的5個基因是SCNN1A、ANKRD36、FKBP5、PYY和ADH1B基因(圖1)。

    圖1 HLE-B3細(xì)胞差異基因表達(dá)火山圖 藍(lán)色代表在糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障中表達(dá)下調(diào)的基因,紫色代表糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障中表達(dá)上調(diào)的基因,黃色代表表達(dá)無差異的基因Figure 1 Volcano plot of differentially expressed genes in HLE-B3 cell Blue spots represented the down-regulated genes and purple spots represented the up-regulated genes,and yellow spots represented the genes without statistic difference in expression level in glucocorticoid induced cataract

    2.2 地塞米松作用后2個組HLE-B3細(xì)胞增生值比較

    HLE-B3細(xì)胞差異基因生物學(xué)功能富集分析列出了341個差異表達(dá)基因富集量最多的前20個詞條,結(jié)果顯示富集量最大的是對HLE-B3細(xì)胞增生的負(fù)向調(diào)節(jié)[-log10(P)=5.73],第2和第3分別是細(xì)胞對脂多糖的反應(yīng)[-log10(P)=5.14]和細(xì)胞外基質(zhì)的降解[-log10(P)=5.12](圖2)。EdU細(xì)胞增生實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增生率為(8.09±0.20)%,明顯低于對照組的(39.63±0.80)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=38.43,P<0.01)(圖3)。

    圖2 HLE-B3細(xì)胞差異基因生物學(xué)功能富集分析 列出341個差異基因富集到的前20個詞條Figure 2 Functional enrichment analysis of differentially expressed genes in HLE-B3 cell The top 20 terms in functional enrichment analysis among 341 differentially expressed genes

    圖3 EdU細(xì)胞增生實(shí)驗(yàn)檢測地塞米松對HLE-B3細(xì)胞增生的調(diào)控作用 A:實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞染色(標(biāo)尺=100 μm) 藍(lán)色代表細(xì)胞核,綠色代表增生期細(xì)胞 B:實(shí)驗(yàn)組與對照組LECs增生率比較 與對照組比較,aP<0.01(獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),n=3)Figure 3 The effect of dexamethasone on HLE-B3 cell proliferation tested by EdU proliferation assay A:Staining results of the experimental group and control group(bar=100 μm) Blue spots represented cell nuclei,and green spots represented cells in proliferation B:Comparison of LECs proliferation rate between the two groups Compared with the control group,aP<0.01(Independent-samples t test,n=3)

    2.3 地塞米松作用后2個組HLE-B3細(xì)胞中hub基因mRNA相對表達(dá)量比較

    排名前10位的hub基因分別為SST、CXCL8、GRM1、GNRH1、CXCL5、PPBP、CX3CR1、PYY、EDNRA和GRK5基因,其中唯一下調(diào)的是GRK5基因,其余表達(dá)均上調(diào)(圖4)。實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示,在得到的10個hub基因中,實(shí)驗(yàn)組HLE-B3細(xì)胞中SST、CXCL8、GRM1、PYY和EDNRA mRNA相對表達(dá)量較對照組明顯升高,CXCL5和GRK5 mRNA的相對表達(dá)量較對照組明顯降低,2個組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);2個組GNRH1、PPBP和CX3CR1 mRNA相對表達(dá)量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)(表2)。

    圖4 hub基因及蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖 A:糖皮質(zhì)激素處理HLE-B3細(xì)胞中的hub基因 基因的顏色由紅變黃,代表重要性逐漸降低 B:差異基因的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖 紫色的點(diǎn)代表在糖皮質(zhì)激素處理HLE-B3細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)的基因,藍(lán)色的點(diǎn)代表表達(dá)下調(diào)的基因 圖5 與hub基因相關(guān)的miRNAs 藍(lán)色六邊形點(diǎn)代表篩選出的hub基因,紫色圓點(diǎn)代表與其相關(guān)的miRNAFigure 4 Hub genes and protein-protein interaction network A:Hub genes in glucocorticoid treated HLE-B3 cells The spots color changed from red to yellow,which meant the importance of genes gradually decreased B:Protein-protein interaction network of differentially expressed genes Purple spots represented the up-regulated genes and blue spots represented the down-regulated genes in the glucocorticoid-treated HLE-B3 cells Figure 5 The miRNAs associated with hub genes The blue hexagons represented hub genes,and purple spots represented miRNAs related to them

    表2 2個組HLE-B3細(xì)胞中前10位hub基因mRNA相對表達(dá)量比較(mean±SD)Table 2 Comparison of the relative mRNA expression levels of top 10 hub genes in HLE-B3 cells between the two groups (mean±SD)組別樣本量不同基因mRNA相對表達(dá)量SSTCXCL8GRM1GNRH1CXCL5GRK5PPBPCX3CR1PYYEDNRA對照組31.02±0.131.00±0.061.00±0.061.03±0.161.00±0.061.02±0.151.06±0.251.00±0.011.36±0.081.05±0.21實(shí)驗(yàn)組32.09±0.121.53±0.112.08±0.350.60±0.030.47±0.120.26±0.020.80±0.020.97±0.044.35±0.097.17±1.56t值5.9924.1683.0412.5694.0515.1141.0260.79225.1903.882P值0.0040.0140.0380.0600.0150.0070.3630.473<0.010.017 注:獨(dú)立樣本t檢驗(yàn) Note:Independent-samples t test

    2.4 HLE-B3細(xì)胞中與hub基因相關(guān)的miRNA預(yù)測

    mirCode預(yù)測結(jié)果顯示,與hub基因關(guān)聯(lián)最密切的前6位miRNA分別是miR-15abc、miR-214、miR-23abc、miR-129-5p、miR-132和miR-24(圖5)。

    3 討論

    隨著糖皮質(zhì)激素越來越廣泛地應(yīng)用于臨床,糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障患病人數(shù)也逐漸增多,早在1960年就有研究者發(fā)現(xiàn)在長期使用糖皮質(zhì)激素治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者中,有39%在治療過程中出現(xiàn)后囊下白內(nèi)障[11]。單一的基因表達(dá)差異不足以解釋疾病形成的原因。本研究通過高通量測序獲得基于糖皮質(zhì)激素作用于人HLE-B3細(xì)胞的差異基因,從而模擬糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的發(fā)病過程中基因表達(dá)的數(shù)據(jù)。利用現(xiàn)有的生物分析工具,分析出大量有表達(dá)差異的基因及其之間的相互作用關(guān)系,以及具體影響了哪些生物學(xué)功能。

    既往研究多認(rèn)為,糖皮質(zhì)激素通過促進(jìn)LECs向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,從而導(dǎo)致后囊下白內(nèi)障的形成,且其發(fā)生率隨著糖皮質(zhì)激素劑量的增加而升高[12]。本研究通過差異基因的功能富集分析發(fā)現(xiàn),1 μmol/L地塞米松很可能會抑制HLE-B3細(xì)胞的增生,并通過EdU實(shí)驗(yàn)證實(shí)了這一點(diǎn)。之前有研究表明低濃度(100 nmol/L)的地塞米松可以促進(jìn)LECs的增生[3],由此可以推測隨著地塞米松濃度的增加,其逆轉(zhuǎn)了對細(xì)胞增生的調(diào)控作用。晶狀體由LECs和其分化而來的纖維細(xì)胞構(gòu)成,后囊下白內(nèi)障主要由LECs過度增生及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化異常造成。既往研究發(fā)現(xiàn)地塞米松能夠抑制鼠晶狀體上皮外植體中LECs的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[13],本研究發(fā)現(xiàn)地塞米松能夠抑制LECs增生,因此其有可能應(yīng)用于白內(nèi)障的治療。

    已有研究發(fā)現(xiàn),SST基因在糖尿病視網(wǎng)膜病變和黃斑水腫患者玻璃體中表達(dá)減低[14-15];CXCL8基因在糖尿病視網(wǎng)膜病變患者房水中的表達(dá)水平遠(yuǎn)高于無視網(wǎng)膜病變糖尿病患者,它能介導(dǎo)白細(xì)胞的激活與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附[16];CXCL5基因在干眼患者淚液中的表達(dá)量升高[17];GRK5基因可以促進(jìn)視紫紅質(zhì)磷酸化,導(dǎo)致夜盲[18];PPBP基因的表達(dá)量在視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞患者玻璃體中顯著升高[19];CX3CR1基因可以調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的光感受器的退化,是視網(wǎng)膜色素變性的潛在治療靶點(diǎn)[20-21];阻斷EDNRA基因可以抑制病理性新生血管生成,并提高早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變患者的視力[22];但GRM1、GNRH、PYY和F2RL3尚未見在眼科學(xué)領(lǐng)域的研究報道。本研究中排名前10位的hub基因在白內(nèi)障以及糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障中均無具體研究,它們能否延緩疾病的發(fā)生或治療糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障還有待進(jìn)一步探討;同時,糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的hub基因多與視網(wǎng)膜疾病相關(guān),2種疾病之間是否有相互關(guān)系,目前仍不清楚。

    許多研究發(fā)現(xiàn),miRNA在疾病的發(fā)生和發(fā)展中十分重要,目前一些miRNA相關(guān)藥物已進(jìn)入臨床前試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)階段,如miR-34模擬物用于治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤已進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)階段,它還可以抑制肺癌、肝癌的生長[23]。在小鼠非小細(xì)胞肺癌模型中發(fā)現(xiàn),miR-200模擬物可以增強(qiáng)輻射敏感度并延長小鼠的生存時間[24],提示miRNA可以作為治療疾病的新靶點(diǎn)。本研究預(yù)測出與hub基因相關(guān)的miRNA目前均未在激素性白內(nèi)障中有具體研究,但在高糖誘導(dǎo)的LECs上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化模型中,miR-214的表達(dá)量顯著下降,山奈酚和lncRNA PVT1都可以通過靶向調(diào)節(jié)miR-214來調(diào)控LECs的增生和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[25-26];經(jīng)過正常晶狀體與白內(nèi)障晶狀體測序?qū)Ρ群蟀l(fā)現(xiàn),miR-23在透明晶狀體中的表達(dá)水平高于白內(nèi)障晶狀體[27];過表達(dá)miR-24直接作用于p53基因,促進(jìn)LECs凋亡[28]。

    綜上所述,本研究篩選了糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障模型中的差異基因并進(jìn)行了功能富集分析,發(fā)現(xiàn)1 μmol/L地塞米松能夠顯著抑制HLE-B3細(xì)胞增生,通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證前10位hub基因中有6個與分析結(jié)果相符,同時預(yù)測了與糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障最有可能相關(guān)的6個miRNA,可以作為下一步研究糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的具體指標(biāo)。需要說明的是,本研究為離體細(xì)胞學(xué)研究,并非來自在體模型,如動物模型和人體標(biāo)本研究,研究結(jié)果是否與在體研究一致尚不清楚,仍需進(jìn)一步研究。

    利益沖突所有作者均聲明不存在任何利益沖突

    猜你喜歡
    差異基因晶狀體皮質(zhì)激素
    ICR鼠肝和腎毒性損傷生物標(biāo)志物的篩選
    外傷性晶狀體半脫位的CT 表現(xiàn)
    促腎上腺皮質(zhì)激素治療腎病綜合征的研究進(jìn)展
    糖皮質(zhì)激素聯(lián)合特布他林治療慢阻肺急性加重期的臨床效果觀察
    基于RNA 測序研究人參二醇對大鼠心血管內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)的影響 (正文見第26 頁)
    玻璃體切除聯(lián)合晶狀體超聲粉碎在合并晶狀體脫位眼外傷中的應(yīng)用
    人工晶狀體鞏膜縫線固定術(shù)矯正兒童玻璃體切割術(shù)后無晶狀體眼療效分析
    生發(fā)Ⅰ號聯(lián)合局部注射糖皮質(zhì)激素治療斑禿患者禿眉的臨床觀察
    有晶狀體眼ICL植入矯正高度近視
    SSH技術(shù)在絲狀真菌功能基因篩選中的應(yīng)用
    男女高潮啪啪啪动态图| 99国产综合亚洲精品| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产精品女同一区二区软件| 最新中文字幕久久久久| 国产熟女午夜一区二区三区| 在线观看一区二区三区激情| 美国免费a级毛片| 亚洲综合色网址| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 免费人成在线观看视频色| 麻豆乱淫一区二区| 精品第一国产精品| 草草在线视频免费看| a级毛片在线看网站| 少妇高潮的动态图| 国产精品人妻久久久久久| 少妇精品久久久久久久| 亚洲国产色片| 日韩三级伦理在线观看| 2022亚洲国产成人精品| 久久精品人人爽人人爽视色| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 婷婷成人精品国产| 美国免费a级毛片| 我的女老师完整版在线观看| 日本黄大片高清| 成人午夜精彩视频在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 春色校园在线视频观看| 一级片'在线观看视频| 美女大奶头黄色视频| 亚洲第一av免费看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产精品无大码| 精品酒店卫生间| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 99热6这里只有精品| 久久精品国产综合久久久 | 亚洲精品一区蜜桃| 99久国产av精品国产电影| 国产精品人妻久久久影院| 精品熟女少妇av免费看| 熟女av电影| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲国产色片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产成人91sexporn| 久久久久久久久久久久大奶| 日韩一区二区视频免费看| 婷婷色av中文字幕| 热re99久久精品国产66热6| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产精品人妻久久久影院| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲精品美女久久av网站| 另类亚洲欧美激情| 亚洲成人一二三区av| 亚洲国产精品成人久久小说| 黄色毛片三级朝国网站| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 波多野结衣一区麻豆| 在线天堂中文资源库| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产亚洲一区二区精品| 国产成人a∨麻豆精品| 久久热在线av| 国产男女内射视频| 日本色播在线视频| 满18在线观看网站| 色94色欧美一区二区| 久久久欧美国产精品| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 黑人欧美特级aaaaaa片| 超色免费av| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲中文av在线| 成年动漫av网址| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲成国产人片在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 26uuu在线亚洲综合色| 只有这里有精品99| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产视频首页在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 这个男人来自地球电影免费观看 | 最黄视频免费看| 欧美激情 高清一区二区三区| 22中文网久久字幕| 久久婷婷青草| 免费黄网站久久成人精品| 香蕉精品网在线| a级毛色黄片| 亚洲高清免费不卡视频| 久久99热这里只频精品6学生| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲av综合色区一区| 国产精品一区www在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 观看美女的网站| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美国产精品一级二级三级| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲欧洲国产日韩| 男人操女人黄网站| a级毛片在线看网站| 男女啪啪激烈高潮av片| 视频在线观看一区二区三区| 18在线观看网站| 亚洲精品自拍成人| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久久久久久久久人人人人人人| 黄色一级大片看看| 看免费成人av毛片| 久久久久久久久久成人| 精品人妻在线不人妻| 午夜影院在线不卡| 久久婷婷青草| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 最新的欧美精品一区二区| 黑丝袜美女国产一区| 欧美日本中文国产一区发布| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美日本中文国产一区发布| 十八禁网站网址无遮挡| 国产又色又爽无遮挡免| 一级爰片在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 99热这里只有是精品在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产| av女优亚洲男人天堂| 欧美日韩av久久| 99久久精品国产国产毛片| 最后的刺客免费高清国语| 黄片播放在线免费| 久久影院123| √禁漫天堂资源中文www| 国产亚洲欧美精品永久| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲美女视频黄频| 亚洲天堂av无毛| 国产 一区精品| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久久久久久久久成人| 亚洲人成网站在线观看播放| 美女中出高潮动态图| 一个人免费看片子| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 亚洲精品乱久久久久久| 人人妻人人澡人人看| 成人黄色视频免费在线看| 久久99蜜桃精品久久| 精品人妻偷拍中文字幕| 香蕉丝袜av| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久女婷五月综合色啪小说| av有码第一页| 色94色欧美一区二区| 伦理电影大哥的女人| 九草在线视频观看| av女优亚洲男人天堂| 国产综合精华液| 成人漫画全彩无遮挡| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲精品国产av成人精品| 国产 精品1| 久久久久网色| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 美女福利国产在线| 欧美日韩视频精品一区| a级毛片在线看网站| 边亲边吃奶的免费视频| 日本黄大片高清| 男女免费视频国产| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 九九在线视频观看精品| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产成人精品久久久久久| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产免费一级a男人的天堂| 香蕉丝袜av| 亚洲av日韩在线播放| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产极品天堂在线| 国产乱人偷精品视频| 韩国av在线不卡| 少妇熟女欧美另类| 久久精品国产亚洲av天美| 老女人水多毛片| h视频一区二区三区| 日韩电影二区| 免费人成在线观看视频色| h视频一区二区三区| 考比视频在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 色视频在线一区二区三区| 9色porny在线观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 成年人午夜在线观看视频| 在现免费观看毛片| 一二三四在线观看免费中文在 | 国内精品宾馆在线| 欧美人与性动交α欧美软件 | 伦理电影大哥的女人| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 免费观看性生交大片5| 久久热在线av| 黄色毛片三级朝国网站| 好男人视频免费观看在线| 一级毛片我不卡| 女性被躁到高潮视频| 水蜜桃什么品种好| 妹子高潮喷水视频| 18禁观看日本| 少妇精品久久久久久久| 一级爰片在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 成年女人在线观看亚洲视频| 18+在线观看网站| 免费在线观看完整版高清| 在线天堂中文资源库| 制服丝袜香蕉在线| 一区二区三区精品91| av免费在线看不卡| 丰满乱子伦码专区| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 99九九在线精品视频| 日韩免费高清中文字幕av| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产淫语在线视频| 波野结衣二区三区在线| 精品熟女少妇av免费看| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 爱豆传媒免费全集在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 91精品国产国语对白视频| 最近的中文字幕免费完整| 内地一区二区视频在线| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 欧美精品国产亚洲| 视频中文字幕在线观看| 美女内射精品一级片tv| 99热这里只有是精品在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产精品.久久久| 丝袜人妻中文字幕| 国产男人的电影天堂91| 校园人妻丝袜中文字幕| 午夜福利影视在线免费观看| 一级黄片播放器| 亚洲伊人色综图| 国产精品国产av在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲国产精品一区三区| av天堂久久9| av国产久精品久网站免费入址| 一本久久精品| 如何舔出高潮| 亚洲,欧美精品.| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 午夜激情av网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 午夜免费观看性视频| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产一区二区三区av在线| 九色成人免费人妻av| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲四区av| 欧美日韩亚洲高清精品| 在线观看免费视频网站a站| 九九在线视频观看精品| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 黄色视频在线播放观看不卡| 飞空精品影院首页| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产av码专区亚洲av| 视频在线观看一区二区三区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲精品456在线播放app| 一级爰片在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 永久网站在线| 少妇被粗大猛烈的视频| av天堂久久9| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 免费黄网站久久成人精品| 人妻一区二区av| 精品酒店卫生间| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 五月玫瑰六月丁香| 性色avwww在线观看| 成人二区视频| 热99久久久久精品小说推荐| 熟女av电影| 日本免费在线观看一区| 91国产中文字幕| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产1区2区3区精品| 国内精品宾馆在线| 亚洲精品一区蜜桃| 高清毛片免费看| 涩涩av久久男人的天堂| 免费看光身美女| 91国产中文字幕| 91久久精品国产一区二区三区| 在现免费观看毛片| 免费黄频网站在线观看国产| 波野结衣二区三区在线| 久久久久精品久久久久真实原创| 天堂8中文在线网| 又黄又粗又硬又大视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 夜夜爽夜夜爽视频| 免费大片黄手机在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 一级毛片电影观看| 国产在视频线精品| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 亚洲av.av天堂| 看免费av毛片| 久久精品久久久久久久性| h视频一区二区三区| 色94色欧美一区二区| 视频在线观看一区二区三区| 久久精品国产自在天天线| 搡老乐熟女国产| 日韩一区二区三区影片| 色5月婷婷丁香| 黑丝袜美女国产一区| 少妇人妻 视频| 国产高清国产精品国产三级| av国产久精品久网站免费入址| 一边摸一边做爽爽视频免费| tube8黄色片| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美精品一区二区免费开放| 精品一区二区免费观看| av国产精品久久久久影院| 久久99热6这里只有精品| 久久久久久久大尺度免费视频| 午夜福利,免费看| 免费观看在线日韩| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久 成人 亚洲| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲在久久综合| 免费高清在线观看视频在线观看| 成人影院久久| 男人爽女人下面视频在线观看| 91成人精品电影| 亚洲国产精品999| 一区二区三区精品91| 亚洲国产精品一区三区| 少妇 在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 2022亚洲国产成人精品| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 最近中文字幕2019免费版| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 多毛熟女@视频| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久久久久久久久久久大奶| 国产男人的电影天堂91| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲精品456在线播放app| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久久久精品久久久久真实原创| 高清av免费在线| 青春草亚洲视频在线观看| av网站免费在线观看视频| 免费av中文字幕在线| 亚洲人成网站在线观看播放| 看非洲黑人一级黄片| 久久久久精品久久久久真实原创| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 老司机影院成人| 色5月婷婷丁香| 国产成人免费观看mmmm| 美国免费a级毛片| 欧美精品高潮呻吟av久久| 男女边摸边吃奶| 久久午夜综合久久蜜桃| 韩国av在线不卡| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 又大又黄又爽视频免费| 午夜福利视频精品| 久久久国产欧美日韩av| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 波多野结衣一区麻豆| 一二三四中文在线观看免费高清| 乱人伦中国视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 精品久久国产蜜桃| 国产69精品久久久久777片| 夫妻性生交免费视频一级片| 大片电影免费在线观看免费| 婷婷色av中文字幕| 99精国产麻豆久久婷婷| 高清av免费在线| 人妻系列 视频| 黄色一级大片看看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 少妇 在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 搡女人真爽免费视频火全软件| 美女国产高潮福利片在线看| av视频免费观看在线观看| 日本av免费视频播放| 亚洲精品国产av成人精品| 少妇的逼水好多| 搡女人真爽免费视频火全软件| 性色avwww在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 色网站视频免费| 国产精品国产三级国产av玫瑰| www日本在线高清视频| 天天影视国产精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 黄片播放在线免费| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 婷婷成人精品国产| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品三级大全| 欧美成人午夜免费资源| 满18在线观看网站| 看免费av毛片| 日韩视频在线欧美| 看非洲黑人一级黄片| 我要看黄色一级片免费的| 免费在线观看完整版高清| 久久久久久伊人网av| 亚洲五月色婷婷综合| 国产免费现黄频在线看| 久久久国产一区二区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲一码二码三码区别大吗| 青青草视频在线视频观看| 国产色爽女视频免费观看| 黄片无遮挡物在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 成年动漫av网址| 99香蕉大伊视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 看免费成人av毛片| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 韩国av在线不卡| 国产有黄有色有爽视频| 久久久久久久精品精品| 久久婷婷青草| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 最近2019中文字幕mv第一页| 女人久久www免费人成看片| 亚洲内射少妇av| 精品人妻一区二区三区麻豆| 男女啪啪激烈高潮av片| 午夜福利视频精品| 国产精品国产av在线观看| 极品人妻少妇av视频| 少妇人妻精品综合一区二区| 在线天堂最新版资源| 国产成人免费无遮挡视频| 精品人妻在线不人妻| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品久久久久久精品古装| 国产福利在线免费观看视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产av一区二区精品久久| 99久久中文字幕三级久久日本| 性色av一级| 一级片免费观看大全| 久久精品国产综合久久久 | 日韩av免费高清视频| 久久久久久久国产电影| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 制服人妻中文乱码| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲欧洲国产日韩| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 中国三级夫妇交换| 激情视频va一区二区三区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 午夜福利影视在线免费观看| 在线天堂中文资源库| 搡老乐熟女国产| 精品视频人人做人人爽| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 国产在视频线精品| 精品酒店卫生间| 视频中文字幕在线观看| 午夜视频国产福利| 久久久久视频综合| 97在线人人人人妻| 又大又黄又爽视频免费| 在线观看www视频免费| 高清黄色对白视频在线免费看| 在线观看免费高清a一片| 99国产精品免费福利视频| 色哟哟·www| 国产色婷婷99| 色吧在线观看| 亚洲图色成人| 精品国产乱码久久久久久小说| 另类精品久久| 只有这里有精品99| 老司机亚洲免费影院| 成人亚洲精品一区在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 午夜福利,免费看| 久久ye,这里只有精品| 免费人成在线观看视频色| 亚洲伊人久久精品综合| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 久久99蜜桃精品久久| 99热6这里只有精品| 精品福利永久在线观看| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲经典国产精华液单| 久久 成人 亚洲| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品一区二区在线不卡| 精品视频人人做人人爽| 亚洲精品色激情综合| av在线app专区| 亚洲av.av天堂| 日本91视频免费播放| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久精品国产自在天天线| 如何舔出高潮| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久精品久久久久久久性| 一区二区三区精品91| 久久人人爽人人片av| 国产永久视频网站| 狂野欧美激情性bbbbbb| a级毛片在线看网站| 熟女人妻精品中文字幕| 精品熟女少妇av免费看| 国产亚洲精品久久久com| 国产av码专区亚洲av| 成人无遮挡网站| 久久久国产精品麻豆| 久久韩国三级中文字幕| 色94色欧美一区二区| av国产精品久久久久影院| 国产探花极品一区二区| 免费大片18禁| 国产伦理片在线播放av一区| 久久这里只有精品19| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久婷婷青草| 亚洲av福利一区| 精品一区二区三卡| 亚洲av福利一区| 一级爰片在线观看| 国产成人精品婷婷| av视频免费观看在线观看| av一本久久久久| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 一边亲一边摸免费视频| 久久婷婷青草| 男女边吃奶边做爰视频| 国产精品人妻久久久久久| av天堂久久9| 国产又色又爽无遮挡免| 欧美性感艳星| 亚洲精品美女久久av网站| 久久韩国三级中文字幕| 夫妻性生交免费视频一级片| 最后的刺客免费高清国语| 免费观看av网站的网址| av女优亚洲男人天堂| 1024视频免费在线观看| 国产精品久久久久久精品古装| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 精品人妻一区二区三区麻豆|