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    糖皮質(zhì)激素對晶狀體上皮細(xì)胞生物學(xué)功能調(diào)控作用的生物信息學(xué)分析

    2021-05-12 00:43:48閆楚凡韓笑張勁松
    中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志 2021年4期
    關(guān)鍵詞:差異基因晶狀體皮質(zhì)激素

    閆楚凡 韓笑 張勁松

    中國醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院眼科,沈陽 110059

    糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障多見于全身或局部長期使用糖皮質(zhì)激素者,其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。許多生物學(xué)過程被證明與糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的發(fā)生相關(guān),如細(xì)胞分化異常和糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor,GR)的激活等[1-3];糖皮質(zhì)激素還導(dǎo)致晶狀體中E鈣黏附蛋白和N鈣黏附蛋白的表達(dá)量下降,而細(xì)胞黏附在晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelial cells,LECs)的正常分化和遷移中有重要作用[4]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一種長度為18~22個核苷酸的非編碼RNA,與基因的3’端非翻譯區(qū)結(jié)合,通過抑制基因的轉(zhuǎn)錄來影響蛋白的表達(dá)。既往研究發(fā)現(xiàn),miR-29a可以靶向抑制GR mRNA的表達(dá),同時其本身的表達(dá)量又依賴于GR的激活,形成一個負(fù)反饋回路,這個特點(diǎn)在糖皮質(zhì)激素治療過程中有助于減緩GR水平的逐漸降低[5],這為糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的治療提供了新的思路。目前關(guān)于miRNA與糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的研究尚未見報道。本研究基于生物信息學(xué)方法分析經(jīng)地塞米松處理的LECs中差異基因的表達(dá)及其相關(guān)的生物學(xué)功能,篩選并驗(yàn)證hub基因的表達(dá),預(yù)測與其最有可能相關(guān)的miRNA,以期為白內(nèi)障的治療提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1細(xì)胞來源 人LECs細(xì)胞株HLE-B3細(xì)胞購自美國ATCC公司。

    1.1.2主要試劑及儀器 地塞米松、Trixon X-100(北京索萊寶科技有限公司);二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)(美國Sigma公司);MEM培養(yǎng)液、胰蛋白酶、磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)(江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司);胎牛血清(澳洲AusGeneX公司);青鏈霉素混合液(美國HyClone公司);RNA iso Plus、實(shí)時熒光定量PCR試劑盒(日本TaKaRa公司);質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛(武漢博士德生物工程有限公司);甘氨酸(大連美侖生物技術(shù)有限公司);mRNA引物(武漢金開瑞生物工程有限公司);EdU細(xì)胞增生檢測試劑盒(廣州銳博科技有限公司)。PCR逆轉(zhuǎn)錄儀(美國Bio-Rad公司);實(shí)時熒光定量PCR儀(美國Applied Biosystem公司);熒光顯微鏡(日本Olympus公司)。

    1.2 不同生物信息學(xué)方法對地塞米松處理的HLE-B3細(xì)胞生物學(xué)功能的評估

    1.2.1GEO2R法分析HLE-B3細(xì)胞差異基因 從公開數(shù)據(jù)庫GEO中下載GSE3040數(shù)據(jù)集,該數(shù)據(jù)集由Gupta等[6]上傳。該數(shù)據(jù)集中,用DMSO處理的HLE-B3細(xì)胞設(shè)置為對照組,經(jīng)過1 μmol/L地塞米松處理16 h的HLE-B3細(xì)胞設(shè)置為實(shí)驗(yàn)組,每組3個樣本。通過Affymetrix Human Genome U133A Array平臺,得到不同樣本間基因表達(dá)數(shù)據(jù)。參照文獻(xiàn)[7]的方法,利用GEO數(shù)據(jù)庫的生信分析工具GEO2R,以倍數(shù)變化>2、P值<0.05為條件篩選分析2個組間差異基因的表達(dá)。利用graphGP網(wǎng)站(https://www.ehbio.com/ImageGP/),以logFC為橫坐標(biāo)、-log10(Pvalue)為縱坐標(biāo)繪制該數(shù)據(jù)集差異基因的火山圖。藍(lán)色代表下調(diào)基因,紫色代表上調(diào)基因,黃色代表表達(dá)無差異的基因。

    1.2.2利用Metascape網(wǎng)站進(jìn)行差異基因功能富集分析 打開Metascape網(wǎng)站(http://metascape.org/gp/index.html/)[8],將之前得到的差異基因名稱或者基因ID輸入基因列表并提交,即可獲取功能富集柱圖。所有富集到的詞條來源于GO生物學(xué)過程、KEGG通路、Reactome基因集、Canonical通路及CORUM。收集P值<0.01、最小計(jì)數(shù)為3、富集因子>1.5的項(xiàng),并根據(jù)成員的相似性進(jìn)行分組。在對豐富項(xiàng)進(jìn)行層次聚類時,采用Kappa分?jǐn)?shù)作為一致性度量,一致性>0.3的子樹作為1個聚類,選擇集群中最具統(tǒng)計(jì)意義的術(shù)語來表示集群。

    1.2.3作圖法分析hub基因 利用STRING數(shù)據(jù)庫(v10.5,https://string-db.org/cgi/input.pl)獲得差異基因相互關(guān)系數(shù)據(jù),將其導(dǎo)入cytoscape軟件[9],分析并制作蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖,在cytoscape中安裝cytohubba app,選擇MCC方法分析前25位hub基因及其相互關(guān)系,顏色越深表示基因重要性越高。

    1.2.4mirCode預(yù)測與hub基因相關(guān)的miRNA 在mirCode數(shù)據(jù)庫(http://www.mircode.org)[10]中下載已知的高度保守的miRNA數(shù)據(jù)集,篩選出可能與前10個hub基因有調(diào)控關(guān)系的miRNA,利用cytoscape軟件,制作出預(yù)測的hub基因與miRNA的調(diào)控網(wǎng)狀圖。藍(lán)色六邊形點(diǎn)代表篩選出的關(guān)鍵hub基因,紫色圓點(diǎn)是與其相關(guān)的miRNA。

    1.3 地塞米松處理后HLE-B3細(xì)胞生物學(xué)功能變化的離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

    1.3.1細(xì)胞培養(yǎng)及分組 將凍存的HLE-B3細(xì)胞從-80 ℃冰箱中取出,迅速將凍存管放到37 ℃水浴鍋中輕輕搖晃解凍1~2 min,置于低速離心機(jī)中,離心半徑16 cm,1 000 r/min離心3 min,棄上清液。用1 ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并將其均勻接種于直徑6 cm培養(yǎng)皿中,添加3 ml完全培養(yǎng)基。置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2溫箱中培養(yǎng),待細(xì)胞融合至80%~90%時用胰蛋白酶消化并1∶ 3傳代。取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞(第3代及以后的細(xì)胞),分別加入1 μmol/L DMSO和1 μmol/L地塞米松,置于37 ℃、5% CO2溫箱中培養(yǎng)16 h,作為對照組和實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    1.3.2EdU實(shí)驗(yàn)檢測HLE-B3細(xì)胞增生情況 取處于對數(shù)生長期的HLE-B3細(xì)胞接種至96孔板中,分別設(shè)置實(shí)驗(yàn)組和對照組,每組3個復(fù)孔。用完全培養(yǎng)基按1 000∶ 1稀釋EdU溶液,終濃度為50 μmol/L,每孔加入100 μl該培養(yǎng)基,溫箱孵育2 h,棄培養(yǎng)液,PBS清洗2次,每次5 min。每孔加入4%多聚甲醛50 μl室溫下固定30 min,棄固定液,每孔加入質(zhì)量濃度2 mg/ml甘氨酸50 μl,脫色搖床孵育5 min后棄液,每孔加入100 μl PBS,脫色搖床清洗5 min后棄液。每孔加入100 μl體積分?jǐn)?shù)0.5% TrixonX-100脫色搖床孵育10 min,PBS清洗1次,5 min。每孔加入100 μl Apollo染色反應(yīng)液,避光室溫?fù)u床孵育30 min后棄液(之后步驟均避光進(jìn)行),每孔加入0.5% Trixon X-100各100 μl,搖床清洗2次,每次10 min。每孔加入100倍稀釋Hoechst33342各50 μl,室溫下孵育5 min復(fù)染核,PBS清洗3次,每次5 min。熒光顯微鏡下觀察染色情況,綠色熒光染色細(xì)胞為增生期細(xì)胞,藍(lán)色熒光染色細(xì)胞為活細(xì)胞。細(xì)胞增生率=增生期細(xì)胞數(shù)/活細(xì)胞數(shù)×100%。

    1.3.3實(shí)時熒光定量PCR檢測hub基因相對表達(dá)量 采用Trizol法分別提取實(shí)驗(yàn)組和對照組HLE-B3細(xì)胞的RNA,分光光度計(jì)測定RNA的濃度和純度,將其逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,前10個hub基因的引物序列見表1。采用TB GreenTM Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR實(shí)驗(yàn),按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)條件:96 ℃預(yù)變性30 s;95 ℃變性5 s,60 ℃退火延伸34 s,共40個循環(huán),添加熔解曲線。以GAPDH為內(nèi)參,采用2-△△Ct法計(jì)算目的基因的相對表達(dá)量。

    表1 糖皮質(zhì)激素處理HLE-B3細(xì)胞中排名前10位hub基因的引物序列Table 1 The primer sequence of top 10 hub genes in glucocorticoid treated HLE-B3 cells引物名稱序列(5’-3’)SST正向:CTCCCTCGGACCCCAGACTC反向:AGGGCATCATTCTCCGTCTGGCXCL8正向:AGCTCTGTGTGAAGGTGCAGT反向:TGGGGTGGAAAGGTTTGGAGTGRM1正向:CCTCTGATGTTGTCCGCATGC反向:CCCCTGCCTTCTTTCTTCGGAGNRH1正向:TCTACTGACTTGGTGCGTGGA反向:CGTTGGGTTTCTGCCAGTTGACXCL5正向:GCTGCGTTGCGTTTGTTTACA反向:CGTTCTTCAGGGAGGCTACCAGRK5正向:GACCCTCCCTTCGTTCCAGAC反向:ATTGACGCCCTTCACAGTGGAPPBP正向:GGAAGTGATCGGGAAAGGAAC反向:ATCTGGGTCCAGGCAGATTTTCX3CR1正向:ACAGCAAGAAGCCCAAGAGTG反向:AGGGCAAAGTGGCTACAAACAPYY正向:AGGAGCTGAACCGCTACTACG反向:GGGGAAGAACGTTTTGGAAAGEDNRA正向:GATCACCGTCCTCAACCTCTG反向:AAAGGAATCCCAATTCCCTGA

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 23.0和Graphpad Prism 5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及作圖。計(jì)量資料的數(shù)據(jù)經(jīng)K-S檢驗(yàn)證實(shí)呈正態(tài)分布,以mean±SD表示;實(shí)驗(yàn)組和對照組中的SST、CXCL8、GRM1、GNRH1、CXCL5、PPBP、CX3CR1、PYY、EDNRA、GRK5的mRNA相對表達(dá)量差異比較,以及HLE-B3細(xì)胞增生值差異比較均采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 地塞米松作用后LECs中差異基因的篩選

    通過GEO2R分析數(shù)據(jù),得到341個差異基因,其中上調(diào)基因?yàn)?00個,下調(diào)基因?yàn)?1個。下調(diào)基因中差異最顯著的5個基因是SLC12A1、MED13L、ALDH5A1、SLC15A3和WWC1基因;上調(diào)基因中差異最顯著的5個基因是SCNN1A、ANKRD36、FKBP5、PYY和ADH1B基因(圖1)。

    圖1 HLE-B3細(xì)胞差異基因表達(dá)火山圖 藍(lán)色代表在糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障中表達(dá)下調(diào)的基因,紫色代表糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障中表達(dá)上調(diào)的基因,黃色代表表達(dá)無差異的基因Figure 1 Volcano plot of differentially expressed genes in HLE-B3 cell Blue spots represented the down-regulated genes and purple spots represented the up-regulated genes,and yellow spots represented the genes without statistic difference in expression level in glucocorticoid induced cataract

    2.2 地塞米松作用后2個組HLE-B3細(xì)胞增生值比較

    HLE-B3細(xì)胞差異基因生物學(xué)功能富集分析列出了341個差異表達(dá)基因富集量最多的前20個詞條,結(jié)果顯示富集量最大的是對HLE-B3細(xì)胞增生的負(fù)向調(diào)節(jié)[-log10(P)=5.73],第2和第3分別是細(xì)胞對脂多糖的反應(yīng)[-log10(P)=5.14]和細(xì)胞外基質(zhì)的降解[-log10(P)=5.12](圖2)。EdU細(xì)胞增生實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增生率為(8.09±0.20)%,明顯低于對照組的(39.63±0.80)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=38.43,P<0.01)(圖3)。

    圖2 HLE-B3細(xì)胞差異基因生物學(xué)功能富集分析 列出341個差異基因富集到的前20個詞條Figure 2 Functional enrichment analysis of differentially expressed genes in HLE-B3 cell The top 20 terms in functional enrichment analysis among 341 differentially expressed genes

    圖3 EdU細(xì)胞增生實(shí)驗(yàn)檢測地塞米松對HLE-B3細(xì)胞增生的調(diào)控作用 A:實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞染色(標(biāo)尺=100 μm) 藍(lán)色代表細(xì)胞核,綠色代表增生期細(xì)胞 B:實(shí)驗(yàn)組與對照組LECs增生率比較 與對照組比較,aP<0.01(獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),n=3)Figure 3 The effect of dexamethasone on HLE-B3 cell proliferation tested by EdU proliferation assay A:Staining results of the experimental group and control group(bar=100 μm) Blue spots represented cell nuclei,and green spots represented cells in proliferation B:Comparison of LECs proliferation rate between the two groups Compared with the control group,aP<0.01(Independent-samples t test,n=3)

    2.3 地塞米松作用后2個組HLE-B3細(xì)胞中hub基因mRNA相對表達(dá)量比較

    排名前10位的hub基因分別為SST、CXCL8、GRM1、GNRH1、CXCL5、PPBP、CX3CR1、PYY、EDNRA和GRK5基因,其中唯一下調(diào)的是GRK5基因,其余表達(dá)均上調(diào)(圖4)。實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果顯示,在得到的10個hub基因中,實(shí)驗(yàn)組HLE-B3細(xì)胞中SST、CXCL8、GRM1、PYY和EDNRA mRNA相對表達(dá)量較對照組明顯升高,CXCL5和GRK5 mRNA的相對表達(dá)量較對照組明顯降低,2個組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05);2個組GNRH1、PPBP和CX3CR1 mRNA相對表達(dá)量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)(表2)。

    圖4 hub基因及蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖 A:糖皮質(zhì)激素處理HLE-B3細(xì)胞中的hub基因 基因的顏色由紅變黃,代表重要性逐漸降低 B:差異基因的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖 紫色的點(diǎn)代表在糖皮質(zhì)激素處理HLE-B3細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)的基因,藍(lán)色的點(diǎn)代表表達(dá)下調(diào)的基因 圖5 與hub基因相關(guān)的miRNAs 藍(lán)色六邊形點(diǎn)代表篩選出的hub基因,紫色圓點(diǎn)代表與其相關(guān)的miRNAFigure 4 Hub genes and protein-protein interaction network A:Hub genes in glucocorticoid treated HLE-B3 cells The spots color changed from red to yellow,which meant the importance of genes gradually decreased B:Protein-protein interaction network of differentially expressed genes Purple spots represented the up-regulated genes and blue spots represented the down-regulated genes in the glucocorticoid-treated HLE-B3 cells Figure 5 The miRNAs associated with hub genes The blue hexagons represented hub genes,and purple spots represented miRNAs related to them

    表2 2個組HLE-B3細(xì)胞中前10位hub基因mRNA相對表達(dá)量比較(mean±SD)Table 2 Comparison of the relative mRNA expression levels of top 10 hub genes in HLE-B3 cells between the two groups (mean±SD)組別樣本量不同基因mRNA相對表達(dá)量SSTCXCL8GRM1GNRH1CXCL5GRK5PPBPCX3CR1PYYEDNRA對照組31.02±0.131.00±0.061.00±0.061.03±0.161.00±0.061.02±0.151.06±0.251.00±0.011.36±0.081.05±0.21實(shí)驗(yàn)組32.09±0.121.53±0.112.08±0.350.60±0.030.47±0.120.26±0.020.80±0.020.97±0.044.35±0.097.17±1.56t值5.9924.1683.0412.5694.0515.1141.0260.79225.1903.882P值0.0040.0140.0380.0600.0150.0070.3630.473<0.010.017 注:獨(dú)立樣本t檢驗(yàn) Note:Independent-samples t test

    2.4 HLE-B3細(xì)胞中與hub基因相關(guān)的miRNA預(yù)測

    mirCode預(yù)測結(jié)果顯示,與hub基因關(guān)聯(lián)最密切的前6位miRNA分別是miR-15abc、miR-214、miR-23abc、miR-129-5p、miR-132和miR-24(圖5)。

    3 討論

    隨著糖皮質(zhì)激素越來越廣泛地應(yīng)用于臨床,糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障患病人數(shù)也逐漸增多,早在1960年就有研究者發(fā)現(xiàn)在長期使用糖皮質(zhì)激素治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者中,有39%在治療過程中出現(xiàn)后囊下白內(nèi)障[11]。單一的基因表達(dá)差異不足以解釋疾病形成的原因。本研究通過高通量測序獲得基于糖皮質(zhì)激素作用于人HLE-B3細(xì)胞的差異基因,從而模擬糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的發(fā)病過程中基因表達(dá)的數(shù)據(jù)。利用現(xiàn)有的生物分析工具,分析出大量有表達(dá)差異的基因及其之間的相互作用關(guān)系,以及具體影響了哪些生物學(xué)功能。

    既往研究多認(rèn)為,糖皮質(zhì)激素通過促進(jìn)LECs向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,從而導(dǎo)致后囊下白內(nèi)障的形成,且其發(fā)生率隨著糖皮質(zhì)激素劑量的增加而升高[12]。本研究通過差異基因的功能富集分析發(fā)現(xiàn),1 μmol/L地塞米松很可能會抑制HLE-B3細(xì)胞的增生,并通過EdU實(shí)驗(yàn)證實(shí)了這一點(diǎn)。之前有研究表明低濃度(100 nmol/L)的地塞米松可以促進(jìn)LECs的增生[3],由此可以推測隨著地塞米松濃度的增加,其逆轉(zhuǎn)了對細(xì)胞增生的調(diào)控作用。晶狀體由LECs和其分化而來的纖維細(xì)胞構(gòu)成,后囊下白內(nèi)障主要由LECs過度增生及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化異常造成。既往研究發(fā)現(xiàn)地塞米松能夠抑制鼠晶狀體上皮外植體中LECs的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[13],本研究發(fā)現(xiàn)地塞米松能夠抑制LECs增生,因此其有可能應(yīng)用于白內(nèi)障的治療。

    已有研究發(fā)現(xiàn),SST基因在糖尿病視網(wǎng)膜病變和黃斑水腫患者玻璃體中表達(dá)減低[14-15];CXCL8基因在糖尿病視網(wǎng)膜病變患者房水中的表達(dá)水平遠(yuǎn)高于無視網(wǎng)膜病變糖尿病患者,它能介導(dǎo)白細(xì)胞的激活與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附[16];CXCL5基因在干眼患者淚液中的表達(dá)量升高[17];GRK5基因可以促進(jìn)視紫紅質(zhì)磷酸化,導(dǎo)致夜盲[18];PPBP基因的表達(dá)量在視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞患者玻璃體中顯著升高[19];CX3CR1基因可以調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的光感受器的退化,是視網(wǎng)膜色素變性的潛在治療靶點(diǎn)[20-21];阻斷EDNRA基因可以抑制病理性新生血管生成,并提高早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變患者的視力[22];但GRM1、GNRH、PYY和F2RL3尚未見在眼科學(xué)領(lǐng)域的研究報道。本研究中排名前10位的hub基因在白內(nèi)障以及糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障中均無具體研究,它們能否延緩疾病的發(fā)生或治療糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障還有待進(jìn)一步探討;同時,糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的hub基因多與視網(wǎng)膜疾病相關(guān),2種疾病之間是否有相互關(guān)系,目前仍不清楚。

    許多研究發(fā)現(xiàn),miRNA在疾病的發(fā)生和發(fā)展中十分重要,目前一些miRNA相關(guān)藥物已進(jìn)入臨床前試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)階段,如miR-34模擬物用于治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤已進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)階段,它還可以抑制肺癌、肝癌的生長[23]。在小鼠非小細(xì)胞肺癌模型中發(fā)現(xiàn),miR-200模擬物可以增強(qiáng)輻射敏感度并延長小鼠的生存時間[24],提示miRNA可以作為治療疾病的新靶點(diǎn)。本研究預(yù)測出與hub基因相關(guān)的miRNA目前均未在激素性白內(nèi)障中有具體研究,但在高糖誘導(dǎo)的LECs上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化模型中,miR-214的表達(dá)量顯著下降,山奈酚和lncRNA PVT1都可以通過靶向調(diào)節(jié)miR-214來調(diào)控LECs的增生和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[25-26];經(jīng)過正常晶狀體與白內(nèi)障晶狀體測序?qū)Ρ群蟀l(fā)現(xiàn),miR-23在透明晶狀體中的表達(dá)水平高于白內(nèi)障晶狀體[27];過表達(dá)miR-24直接作用于p53基因,促進(jìn)LECs凋亡[28]。

    綜上所述,本研究篩選了糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障模型中的差異基因并進(jìn)行了功能富集分析,發(fā)現(xiàn)1 μmol/L地塞米松能夠顯著抑制HLE-B3細(xì)胞增生,通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證前10位hub基因中有6個與分析結(jié)果相符,同時預(yù)測了與糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障最有可能相關(guān)的6個miRNA,可以作為下一步研究糖皮質(zhì)激素性白內(nèi)障的具體指標(biāo)。需要說明的是,本研究為離體細(xì)胞學(xué)研究,并非來自在體模型,如動物模型和人體標(biāo)本研究,研究結(jié)果是否與在體研究一致尚不清楚,仍需進(jìn)一步研究。

    利益沖突所有作者均聲明不存在任何利益沖突

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