雌性母鼠高脂肪暴露對子代糖脂代謝、卵巢功能的影響及與多囊卵巢綜合征發(fā)病的關(guān)系研究*

古蘭·托合提木拉提，葉爾努爾·吐蘇甫汗，馬玉蘭，瑪依努爾·尼亞孜

（1.新疆自治區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)院 生殖醫(yī)學(xué)科，新疆 烏魯木齊830001；2.新疆醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院 影像中心，新疆 烏魯木齊830063）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）在育齡婦女中發(fā)病率為5%～10%，是引起不孕、月經(jīng)異常等的主要原因[1]。由于PCOS 內(nèi)分泌異常涉及卵巢、下丘腦、腎上腺、垂體等多個器官，其生化改變、發(fā)病機制、臨床表現(xiàn)異質(zhì)性較高，確切病因尚未闡明[2]。最近一項研究發(fā)現(xiàn)，維吾爾族女性患者BMI 較高、體內(nèi)具有高雄激素的表現(xiàn)者，后代更易患PCOS，提示肥胖與PCOS 發(fā)病率有關(guān)，但其發(fā)病機制尚不明確[3-4]。目前關(guān)于PCOS的研究較多，但主要基于在不孕門診就診的育齡期女性，對青春期患者關(guān)注不足，且受倫理的限制，對宮內(nèi)環(huán)境因素致病作用的報道較少。本研究探討異常糖、脂代謝對子代小鼠卵巢功能與PCOS 發(fā)病率的機制與相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 主要試劑、儀器

Trizol （北京艾德萊生物科技有限公司），M-MLV Reverse Transcriptase （RNase H）、5×RT Reaction Buffer、ddH2O （DNase/RNase Free）（美國Genecopoeia 公司），RNase Inhibitor、dNTP Mixture（北京全氏金生物技術(shù)有限公司），50×ROX Reference Dye、2×All-in-one tm qPCR Mix （美國VAZYME 公司），Ex Taq TM、DL2000 DNA Marker（日本TaKaRa 株式會社），引物由北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司合成；760型全自動生化檢測儀（日本日立株式會社），快速血糖儀（瑞士羅氏公司），離心機（美國Eppendorf 公司），電子秤（上海呈豐衡器有限公司），RM 2016 輪轉(zhuǎn)式病理切片機（德國Leica 公司），切片刀（日本羽毛公司，R35一次性刀片），JK-6 生物組織攤烤片機（武漢俊杰電子有限公司），載玻片及蓋玻片（江蘇世泰實驗器材有限公司），BX53 型生物顯微鏡（日本奧林巴斯株式會社），QuantStudio 6 型實時熒光定量PCR 儀（美國ABI 公司），分光光度計（上海舜宇恒科學(xué)儀器有限公司），電熱恒溫水浴鍋（北京市長風(fēng)儀器儀表有限公司），微波爐（韓國LG 公司），AJY-0501 型超級純水儀（美國艾科浦公司），pH 計（德國Metter-Toledo GmbH 公司），電子天平稱（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），紫外分析儀（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）。

1.2 實驗動物

4 周齡SD 鼠（新疆醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心）[實驗動物許可證號：SCXK（新）20130001]。SD鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，按雌雄3∶1 合籠，環(huán)境溫度20～23℃,濕度40%～60%，自由進水，每日光照12 h，噪音＜60 dB。次日清晨觀察各籠雌鼠有無陰道栓脫落，如同一載玻片有3 處不同視野發(fā)現(xiàn)精子計為陽性，當(dāng)日記為妊娠第1 天，未妊娠者繼續(xù)合籠飼養(yǎng)，合籠2 周未妊娠者放棄。期間給予的普通飼料購自新疆醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心，熱量分配：糖類62%、脂肪13%、蛋白質(zhì)25%。

1.3 分組

雌鼠受孕后隨機分為宮內(nèi)高脂肪膳食組（HFI組）、宮內(nèi)及哺乳期高脂肪膳食組（HFII 組）和正常膳食組（NC 組），每組15 只。NC 組全程給予普通飼料，HFI 組妊娠期給予高脂肪飼料，HFII 組妊娠期、哺乳期均給予高脂肪飼料。飼料均購自新疆醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心，普通飼料的熱量分配：糖類62%、脂肪13%、蛋白質(zhì)25%，常溫保存。高脂肪飼料的熱量分配：糖類20%、脂肪60%、蛋白質(zhì)20%，置入-20℃冰箱保存。

1.4 方法

每天觀察雌鼠妊娠及產(chǎn)子情況。出生后每周測仔的體重，第3 周時離乳并雌雄分籠，棄雄仔。每籠養(yǎng)5～6 只，第4 周起檢查雌仔陰道細胞涂片，1 次/d，直至實驗結(jié)束。操作方法：用沾有生理鹽水的棉簽，于每日早晨輕輕插入大鼠陰道后緩慢轉(zhuǎn)動，獲取黏液標(biāo)本，細胞涂片，自然干燥。使用瑞士姬姆薩染色，鏡下觀察。動情前期：可見大量圓形有核上皮細胞，少量角化上皮細胞；動情期：可見大量角化上皮細胞，少量圓形有核上皮細胞；動情后期：可見角化上皮細胞及大量白細胞。動情間期：可見少量白細胞，有核扁平上皮細胞及少量黏液。

1.4.1 空腹血糖、血清胰島素測定各組雌仔6 周時夜間禁食12 h，次日行尾部取血1 ml，即刻采用血糖儀及配套試紙測定靜脈全血葡萄糖水平為空腹血糖（fasting blood glucose concentration, FBG）。取血后4℃下靜置1 h，以5 000 r/min 離心5 min，取上清，-80℃冷藏，采用雙抗體夾心ELISA 法測血清空腹胰島素水平（fasting serum insulin concentration, FINS）。計算胰島素敏感指數(shù)（insulin sensitivity index, ISI）：ISI=1/（FBG×FINS），胰島素抵抗指數(shù)（homeostasis model assessment -insulin resistance index, HOMA-IR）=（FBG×FINS）/22.5。采用全自動生化分析儀測定甘油三酯（Triglyceride,TG）水平。

進行靜脈糖耐量試驗（IPGTT）和胰島素釋放試驗（IRT），用20%葡萄糖按2 g/kg 腹腔注射，葡萄糖負荷15 min、30 min、60 min 及120 min 后，取尾靜脈血0.5 ml，即刻測血糖、胰島素水平。

1.4.2 動物處理、生殖內(nèi)分泌水平檢測10%水合氯醛（4 ml/kg）腹腔注射麻醉后，開腹，迅速取卵巢組織，用電子天平秤測量卵巢濕重，并計算臟器系數(shù)，臟器系數(shù)= 臟器的重量（g）/體 重（100 g），再置于4%多聚甲醛中固定。常規(guī)脫水，石蠟包埋，5μm 厚度切片，常規(guī)脫蠟，水化，蘇木精5 min，伊紅襯染2 min，脫水，透明，封片，顯微鏡下觀察各組大鼠的卵巢形態(tài)學(xué)變化。

暴露胸部，注射器在心臟取血，分離血清，置于-20℃保存待測。采用放射免疫法測定血清雌激素（E2）、孕激素（P）、促黃體生成素（LH）、睪酮（T）水平。

1.4.3 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測脂肪組織雄激素轉(zhuǎn)化酶的表達取皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪組織，通過實時熒光聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測雄激素轉(zhuǎn)化酶3β 羥類固醇脫氫酶1（3β-HSD1）、3β 羥類固醇脫氫酶2（3β-HSD2）、3β 羥類固醇脫氫酶5（3β-HSD5）、17β 羥類固醇脫氫酶1（17β-HSD1）、5ɑ 還原酶1（5ɑ-R1）mRNA 相對表達量。

取-80℃冰箱保存的新鮮冷凍組織，重量約為100 mg，加入1 ml Trizol 試劑，用勻漿器研磨成漿，移至無RNase 的1.5 ml EP 管中，裂解10 min。加入200 μl 氯仿，劇烈顛倒混勻數(shù)次，室溫放置5 min。4℃、 12 000 r/min 離心15 min， 可見分成上（RNA）、中（蛋白）、下（DNA）三相。轉(zhuǎn)移上層水相（約400 μl）于另一新1.5 ml EP 管中，加入400 μl 異丙醇，混勻后室溫靜置10 min。4℃、12 000 r/min 離心10 min，管底可見白色的RNA 沉淀。棄上清，加入無RNase 的75%乙醇1 ml，渦旋混勻后，4℃、10 000 r/min 離心5 min，并重復(fù)1次。棄上清，空氣中干燥RNA 沉淀5～10 min，將沉淀溶于20 μl 的DEPC 水中。取溶解后的RNA 2 μl 用微量分光光度計測定OD260、OD280，計算OD260/OD280 值和RNA的純度、濃度。根據(jù)OD260/OD280 估測RNA 質(zhì)量，比值在1.8～2.0 滿足實驗要求。將總RNA 放于-80℃冰箱內(nèi)保存以備用。 qRT-PCR 引物序列見表1， 取上述RNA 3.199 μg，加入寡聚核苷酸引物2 μl、濃度均為2.5 mmol/L 的脫氧核糖核苷三磷酸混合物4 μl、PCR 緩沖液4 μl、逆轉(zhuǎn)錄酶1 μl、RNA 抑 制 劑0.5 μl，加入無RNA 酶水至20 μl 進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，反應(yīng)條件：25℃溫育5 min，50℃溫育15 min，85℃加熱5 min，4℃冷卻10 min。取上述cDNA 4 μl，加入上下游引物各0.4 μl、SYBR Green（熒光插入染料）/熒光素qPCR 預(yù)混液10 μl、水5.2 μl，進行qRT-PCR，檢測各目的基因相對表達量。反應(yīng)條件：50℃預(yù)變性2 min，95℃變性10 min，95℃退火30 s，60℃延伸30 s，共40 個循環(huán)。繪制熔解曲線，最終數(shù)據(jù)以2-△△Ct法分析。

表1 引物序列

1.5 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計雌鼠一般情況，比較各組子代小鼠各階段陰道涂片在性周期中占比，比較FBG、FINS、ISI、HOMA-IR、TG 水平，比較IPGTT、IRT 試驗結(jié)果，比較卵巢形態(tài)與臟器指數(shù)，比較動情間期生殖內(nèi)分泌，分析發(fā)生PCOS 的影響因素。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用單因素方差分析或重復(fù)測量設(shè)計的方差分析，進一步的兩兩比較用LSD-t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗；影響因素的分析采用多因素Logistic回歸模型。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 雌鼠一般情況

4 周齡SD 雌鼠54 只及雄鼠18 只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，45 只雌鼠成功妊娠。HFI 組共產(chǎn)雌仔42 只，HFII 組共產(chǎn)雌仔48 只，NC 組共產(chǎn)雌仔50 只，最終各組均隨機納入15 只雌仔作為實驗對象。各組小鼠實驗過程中均發(fā)育良好，體毛潤澤，行為無明顯差異，反應(yīng)靈活。

2.2 各組雌仔陰道涂片在性周期中占比比較

各組雌仔動情前期、動情期、動情間期占比比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），HFI 組、HFII 組動情期較NC 組長（P＜0.05），HFII 組較HFI組長（P＜0.05）。見表2。

表2 各組子代小鼠陰道涂片在性周期中占比比較 （n=15，±s）

表2 各組子代小鼠陰道涂片在性周期中占比比較 （n=15，±s）

注：①與NC組比較，P ＜0.05；②與HFI組比較，P ＜0.05。

組別動情間期動情前期動情期HFI組HFII組NC組F 值0.42±0.02 0.33±0.01①0.47±0.0 251.667 0.18±0.01①0.14±0.01①②0.25±0.02 232.500 0.40±0.05①0.53±0.06①②0.28±0.04 91.364 P 值①②2 0.000 0.000 0.000

2.3 各組雌仔FBG、FINS、ISI、HOMA-IR及TG比較

各組雌仔FBG、FINS、ISI、HOMA-IR 及TG 比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），HFI 組、HFII 組FBG、FINS、HOMA-IR、TG 水平較NC 組高，ISI 較NC 組低（P＜0.05）；HFII 組FBG、FINS、HOMAIR、TG 水平較HFI 組高，ISI 較HFI 組低（P＜0.05）。見表3。

表3 各組雌仔FBG、FINS、ISI、HOMA-IR及TG比較 （n=15，±s）

表3 各組雌仔FBG、FINS、ISI、HOMA-IR及TG比較 （n=15，±s）

注：①與NC組比較，P ＜0.05；②與HFI組比較，P ＜0.05。

TG/（mmol/L）組別FBG/（mmol/L）FINS/（mIU/L）ISI HOMA-IR 1.09±0.23①1.62±0.35①②0.70±0.12 50.556 0.000 HFI組HFII組NC組F 值P 值4.61±0.41①6.41±0.46①②3.79±0.36 158.700 0.000 20.45±2.02①23.91±2.15①②18.86±1.64 26.335 0.000 0.011±0.001①0.007±0.001①②0.014±0.001 185.000 0.000 4.19±0.04①6.81±0.04①②3.18±0.03 38526.95 0.000

2.4 各組雌仔IPGTT 不同時間點血糖、胰島素比較

各組雌仔IPGTT 15 min、 30 min、 60 min 和120 min 的血糖、胰島素比較，經(jīng)重復(fù)測量設(shè)計的方差分析，結(jié)果：①不同時間點間血糖、胰島素有差異（F=67.661 和10.505，均P=0.000）；②各組血糖、胰島素有差異（F=84.139 和16.942，均P=0.000）。③各組血糖、胰島素變化趨勢有差異（F=51.333 和15.264，均P=0.000）。見表4、5 和圖1、2。

表4 各組雌仔不同時間點血糖比較 （n=15，mmol/L，±s）

表4 各組雌仔不同時間點血糖比較 （n=15，mmol/L，±s）

組別15 min 30 min 60 min 120 min HFI組HFII組NC組11.96±1.23 14.94±1.42 9.89±0.87 9.46±0.86 12.01±1.28 7.41±0.68 7.85±0.74 10.01±1.30 4.88±0.90 5.31±0.70 7.51±1.05 4.38±0.82

表5 各組雌仔不同時間點胰島素比較 （n=15，mIU/L，±s）

表5 各組雌仔不同時間點胰島素比較 （n=15，mIU/L，±s）

組別15 min 30 min 60 min 120 min HFI組HFII組NC組22.17±2.15 21.34±1.98 18.86±2.04 38.79±2.67 43.86±3.39 30.55±3.42 28.44±1.74 31.39±2.85 25.81±3.09 22.79±1.62 24.13±2.13 20.06±2.35

2.5 各組雌仔卵巢形態(tài)

NC 組卵巢組織形態(tài)、卵泡正常；HFI 組、HFII 組均可見卵巢組織形態(tài)學(xué)出現(xiàn)異常變化，白膜增厚，黃體減少，多個不同發(fā)育階段的卵泡及囊性卵泡。NC 組雌仔卵巢臟器系數(shù)為（1.58±0.13）×10-3，HFI 組為（2.40±0.14）×10-3，HFII組為（3.34±0.16）×10-3，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=562.029，P=0.000），HFI 組、HFII 組較NC 組大， 且HFII 較HFI組大（P＜0.05）。見圖3。

圖1 各組雌仔不同時間點血糖變化趨勢

圖2 各組雌仔不同時間點胰島素變化趨勢

2.6 各組雌仔動情間期生殖內(nèi)分泌水平比較

各組雌仔血清E2、LH 及T 比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），HFI 組、HFII 組血清E2、LH 較NC 組低，血清T 較NC 組高（P＜0.05），HFII 組血清E2、LH 較HFI 組低，血清T 較HFI 組高（P＜0.05）。各組雌仔血清P 比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表6。

2.7 各組雌仔脂肪組織雄激素轉(zhuǎn)化酶水平比較

各組雌仔3β-HSD1、3β-HSD2、3β-HSD5、17β-HSD1 及5ɑ-R1 mRNA 相對表達量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），HFI 組、HFII 組較NC 組高（P＜0.05），HFII 組較HFI 組高（P＜0.05）。見表7。

2.8 PCOS影響因素的多因素Logistic分析結(jié)果

以是否發(fā)生PCOS 作為因變量，以FBG、FINS、ISI、HOMA-IR、TG、E2、LH、T 作為自變量，進行多因素一般Logistic 回歸分析。結(jié)果顯示：E2 水平是PCOS 的保護因素（P＜0.05），F(xiàn)BG、TG 及T 水平是PCOS的危險因素（P＜0.05）。見表8。

表6 各組雌仔動情間期生殖內(nèi)分泌水平比較 （n=15，±s）

表6 各組雌仔動情間期生殖內(nèi)分泌水平比較 （n=15，±s）

注：①與NC組比較，P ＜0.05；②與HFI組比較，P ＜0.05。

組別T/（ng/ml）E2/（pmol/L）P/（nmol/L）LH/（u/L）HFI組HFII組NC組F 值P 值7.98±0.48①9.98±0.60①②5.85±0.54 217.634 0.000 19.77±5.26①15.83±4.37①②26.47±4.19 20.245 0.000 415.29±18.73 420.03±22.06 418.55±20.45 0.211 0.811 2.02±0.44①1.49±0.51①②3.15±0.46 48.625 0.000

表7 各組雌仔脂肪組織雄激素轉(zhuǎn)化酶水平比較 （n=15，±s）

表7 各組雌仔脂肪組織雄激素轉(zhuǎn)化酶水平比較 （n=15，±s）

組別3β-HSD1 3β-HSD2 3β-HSD5 17β-HSD1 5ɑ-R1 HFI組HFII組NC組F值P值1.35±0.12 1.67±0.14 1.01±0.11 106.334 0.000 1.56±0.11 1.97±0.13 0.99±0.08 307.924 0.000 1.50±0.22 2.05±0.34 1.13±0.20 47.272 0.000 1.74±0.04 2.32±0.05 1.00±0.02 4377.33 0.000 1.61±0.11 2.21±0.10 1.03±0.04 861.013 0.000

表8 PCOS影響因素的多因素Logistic分析參數(shù)

3 討論

PCOS 不僅可造成不孕，亦會增加糖尿病、妊娠期糖尿病、心血管疾病、子宮內(nèi)膜癌等發(fā)病風(fēng)險，因此研究其發(fā)病機制，對盡早發(fā)現(xiàn)、干預(yù)，并改善子代的代謝狀態(tài)，保障子代的生殖健康意義重大[5-6]。而復(fù)制符合本研究需要的動物模型是決定本研究能否成功的關(guān)鍵問題之一。前期的實驗發(fā)現(xiàn)，高脂肪飲食中的脂肪含量高，小鼠的攝食量不高，且胎仔的死產(chǎn)率高，不能有效地復(fù)制模型，因而在本次實驗中，改進了飲食結(jié)構(gòu)，提供脂肪配方比例為60%的高脂飼料，既能保證高脂肪成分含量，又改善攝入飼料的口感，并聯(lián)合具有國際AAALAC 認證動物實驗中心的新疆醫(yī)科大學(xué)，解決了模型復(fù)制的困難，為實驗順利實施提供了堅實的基礎(chǔ)。

以往有研究指出，高脂飲食引起的PCOS 大鼠，血清FBG、FINS、HOMA-IR 高于正常大鼠[7]。XUE 等[8]對PCOS 大鼠應(yīng)用降糖藥物二甲雙胍，發(fā)現(xiàn)大鼠多囊、高胰島素血癥的癥狀得到改善，從側(cè)面反映FBG 與PCOS 發(fā)病有關(guān)。VONICA 等[9]納入了15 例患有PCOS 的白人婦女和15 例年齡匹配的白人健康婦女，使用超高效液相色譜-四極桿飛行時間電噴霧質(zhì)譜法進行脂質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)高TG 是區(qū)分PCOS、健康女性的有效指標(biāo)，提示TG 亦與PCOS 有關(guān)。但母親攝食高脂飲食對子代糖、脂代謝及PCOS 發(fā)生的影響尚不明確。本研究發(fā)現(xiàn)NC組、HFI 組、HFII 組FBG、FINS、HOMA-IR、TG依次增高，ISI 依次降低，且與NC 組相比，IPGTT及IRT 試驗后，HFI 組、HFII 組15 min、30 min 后血糖、胰島素較高，且血糖、胰島素高峰值增大，下降緩慢，曲線下面積較大，表明母親高脂飲食可影響雌性子代糖和脂代謝、胰島β 細胞的功能。ZHANG 等[10]研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期糖尿病大鼠的子代ISI 降低，HOMA-IR 增加。有觀點認為，造成這一結(jié)果的原因是高脂飲食導(dǎo)致宮內(nèi)高糖環(huán)境損傷子代胰島細胞，加之子代出生后自身的葡萄糖水平對胰島細胞刺激不夠，致胰島細胞生長發(fā)育受限，從而影響糖、脂代謝[11-13]。亦有報道指出，宮內(nèi)高糖可影響后代基因甲基化、組蛋白翻譯和修飾，而基因甲基化、組蛋白翻譯和修飾是最基礎(chǔ)的基因表觀遺傳學(xué)修飾途徑，可保持染色體穩(wěn)定性，表觀遺傳修飾引起的“代謝性記憶”即使在后續(xù)血糖控制達標(biāo)后，仍持續(xù)啟動，并介導(dǎo)核內(nèi)基因表達譜異常，從而從基因水平影響糖、脂代謝[14-16]。

同時本研究還發(fā)現(xiàn)，HFI 組、HFII 組動情期較NC 組長，動情前期、動情間期較NC 組短，卵巢臟器系數(shù)、血清T 值較NC 組大，血清E2、LH 水平較NC 組低，提示糖、脂代謝異?？捎绊懧殉补δ?，這可能是其介導(dǎo)PCOS 發(fā)生的根本所在。ZHANG等[17]采用脫氫表雄酮注射方法復(fù)制PCOS 模型，發(fā)現(xiàn)加用45%和60%的高脂飲食均可導(dǎo)致雄激素過多、性周期不規(guī)則、多囊卵巢，表明高脂飲食可影響卵巢功能。PATEL 等[18]研究采用高脂飼料喂食青春期前雌性大鼠，發(fā)現(xiàn)大鼠糖耐量和FINS 升高，HE 染色可見囊性卵泡增多、顆粒細胞層減少、卵泡膜細胞層增厚等組織病理學(xué)改變，說明青春期前開始的高脂肪飲食會引起代謝紊亂和卵巢改變，與臨床觀察到的PCOS 患者相似，從側(cè)面支持本研究結(jié)論。卵巢功能異?？赏ㄟ^LH 等生殖內(nèi)分泌激素影響下丘腦-垂體-卵巢軸的正常功能，加重糖、脂代謝異常，糖、脂代謝異常又可影響卵巢功能，從而形成惡性循環(huán)，增加PCOS 發(fā)病風(fēng)險[19]。

PCOS 患者典型癥狀之一是高雄激素血癥，而機體雄激素表達受雄激素轉(zhuǎn)化酶的影響，但現(xiàn)階段關(guān)于PCOS 中雄激素轉(zhuǎn)化酶表達的研究較少。3β-HSD1、3β-HSD2、3β-HSD5、17β-HSD1 及5ɑ-R1 均為雄激素轉(zhuǎn)化酶，其中3β-HSD1、3β-HSD2、3β-HSD5 主要作用是催化脫氫表雄酮向雄烯二酮轉(zhuǎn)化，17β-HSD1 可催化雄烯二酮向睪酮轉(zhuǎn)化，5ɑ-R1 可催化睪酮向雙氫睪酮轉(zhuǎn)化[20]。張哲等[21]研究顯示，17β-HSD1 與E2、LH 的合成具有相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，NC 組、HFI 組和HFII 組3β-HSD1、3β-HSD2、3β-HSD5、17β-HSD1 及5ɑ-R1 mRNA 相對表達量依次升高，提示異常糖、脂代謝可影響雄激素轉(zhuǎn)化酶的表達，這可能是其誘導(dǎo)PCOS 發(fā)生的一個機制。同時本研究還發(fā)現(xiàn)，E2 是PCOS 的相關(guān)保護因素，F(xiàn)BG、TG、T 是PCOS的相關(guān)危險因素，提示以上因素與PCOS 的發(fā)生有關(guān)。詹艷萍等[22]報道顯示，雌鼠妊娠期肥胖是子代成年期發(fā)生PCOS 的一個高風(fēng)險因素，而肥胖可導(dǎo)致糖、脂代謝異常，論證了本研究結(jié)論。以往關(guān)于母代高脂肪暴露對子代糖、脂代謝、卵巢功能、PCOS 發(fā)病率的研究較少，且目前國內(nèi)PCOS 的研究主要基于不孕門診就診的育齡期女性，對青春期患者關(guān)注不足。本研究除觀察宮內(nèi)高脂肪飲食暴露外，還探討了哺乳期高脂肪飲食暴露對幼鼠的影響，可為幼年期干預(yù)、預(yù)防PCOS 提供循證支持，以便盡早發(fā)現(xiàn)、干預(yù)，可能會改善子代的代謝狀態(tài)，保護卵巢功能，保障子代的生殖健康。同時既往采用高脂肪飲食暴露復(fù)制動物模型時，脂肪含量高，小鼠的攝食量不高，模型復(fù)制成功率低，增加了實驗成本，本研究提供脂肪配方比例為60%的高脂飼料，有效解決了造模困難的問題，可為成功復(fù)制動物實驗提供參考。此外，本研究證實，糖、脂代謝異?？捎绊懶奂に剞D(zhuǎn)化酶的表達，佐證了這一結(jié)論的可靠性，為PCOS 靶向干預(yù)提供了有力的證據(jù)。

綜上所述，高脂肪飲食暴露可引起子代糖、脂代謝異常，并導(dǎo)致子代卵巢形態(tài)、功能發(fā)生改變，是子代發(fā)生PCOS 的相關(guān)危險因素，其機制可能與調(diào)控雄激素轉(zhuǎn)化酶的表達有關(guān)。