不同相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸對還原型谷胱甘肽透皮吸收的影響

唐澤嚴(yán)，郭學(xué)平，溫喜明，王玉玲*，呂慧俠**

（1中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥劑系，南京211198；2山東華熙海御生物醫(yī)藥有限公司，濟(jì)南250010）

透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）又稱玻尿酸，是由D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺組成的雙糖單位的糖胺聚糖。D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺之間由β-1，3-配糖鍵相連，雙糖單位之間則由β-1，4-配糖鍵相連。HA的相對分子質(zhì)量可由5 000～2×107Da之多，因其獨特的保濕（可以吸收其質(zhì)量1 000倍的水分）、潤滑和促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)等功能［1-2］，HA已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和化妝品領(lǐng)域，發(fā)揮其美容保健、關(guān)節(jié)腔潤滑以及組織再生等功能［3］。此外還有報道表明，HA可以促進(jìn)某些藥物的經(jīng)皮吸收，Son等［4］用低相對分子質(zhì)量透明質(zhì)酸結(jié)合十二烷胺包裹吲哚菁綠制備成水凝膠后，增強了離體豬皮角質(zhì)層、活性表皮層和真皮層中的滯留。Yue等［5］用改良的透明質(zhì)酸制備負(fù)載布比卡因的納米脂質(zhì)體，體外皮膚滲透實驗表明，72 h內(nèi)相比于對照組經(jīng)皮透過量提高了2.5倍。

還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）是一種含γ-酰胺鍵和巰基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成。GSH存在于機體的每一個細(xì)胞中，半胱氨酸上的巰基能與某些藥物和毒素（如自由基、芥子氣和各種鉛汞砷等重金屬）等結(jié)合，發(fā)揮解毒的作用；GSH還能幫助人體保持機體正常的免疫系統(tǒng)功能；并且由于其抗氧化能力，還被應(yīng)用于化妝品中發(fā)揮美白祛斑抗過敏的功效［6-8］。但由于GSH水溶性好（50 mg/mL），油水分配系數(shù)低（lg P=-0.87），難以透過皮膚角質(zhì)層的特點，其在經(jīng)皮給藥領(lǐng)域研究較少。

與透皮給藥系統(tǒng)（發(fā)揮全身作用的藥物制劑）不同的是，治療局部皮膚疾病的藥物，如治療皮膚癬的抗真菌類藥物，希望其可以更多的進(jìn)入角質(zhì)層，并儲留于角質(zhì)層中發(fā)揮抗真菌的作用，并且藥物盡可能少的進(jìn)入真皮，被毛細(xì)血管吸收進(jìn)入全身血液循環(huán)，從而可以盡可能少的產(chǎn)生全身副作用；對于作用于皮膚不同層次的化妝品中功效成分，如保濕劑則可能希望藥物在角質(zhì)層中儲留發(fā)揮保濕作用，美白成分則作用于基底層中的黑色素細(xì)胞，營養(yǎng)和抗皺類成分則盡可能的停留于真皮中。目前大多關(guān)于經(jīng)皮給藥的研究更多的是關(guān)注難溶性的藥物或功效成分，如何采用新制劑或新劑型［9-14］，促進(jìn)其的透皮吸收，但對于藥物在皮膚不同層次中的儲留情況，則少有報道。而在外用制劑和化妝品中，又常常會加入海藻糖、透明質(zhì)酸等多糖或纖維素衍生物，作為增稠劑或保濕劑使用。這些成分的加入，對于水溶性藥物，兩者之間是否存在相互作用，是否會改變這些水溶性藥物的透皮吸收行為，值得研究。本研究以水溶性好、難透皮吸收的GSH為模型，考察不同相對分子質(zhì)量的HA對GSH在離體鼠皮的皮膚滲透與儲留的影響，并采用分子對接AutoDock和傅里葉衰減全反射紅外光譜、HE切片染色等方法探討HA與GSH的相互作用以及HA對皮膚結(jié)構(gòu)的影響，從而為HA等水溶性多糖材料在外用制劑或化妝品中對藥物的經(jīng)皮滲透和儲留的影響提供一定的借鑒。

1材料

1.1 藥品與試劑

還原型谷胱甘肽（阿拉丁生化科技股份有限公司，批號：K1728038，純度：98%），透明質(zhì)酸7K、42K、360K、920K（相對分子質(zhì)量分別為7×103、4.2×104、3.6×105、9.2×105華熙生物科技股份有限公司，批號：1810071），透明質(zhì)酸90K（相對分子質(zhì)量分別為9×104大連美倫生物，批號：M0504A），5，5′-二硫雙-2-硝基苯甲酸（阿拉丁，批號E1922062），磷酸二氫鉀（江蘇永華化學(xué)科技，批號：20190103），氯化鈉（廣東西隴科學(xué)，批號：190305-1），實驗用水為超純水，其他試劑均為市售分析純。

1.2儀器

LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；LOGAN干加熱透皮擴散儀DHC-6TD（美國祿亙儀器公司）；RYJ-12B型藥物透皮擴散試驗儀（上海黃海藥檢儀器公司）；高通量組織研磨儀（南京貝蒂實驗儀器公司）；雷磁PHS-3CpH計（上海儀電科學(xué)儀器公司）；D3024R高速離心機（北京大龍實驗儀器公司）；Vortex 2圓周震蕩器（德國IKA公司）；Vertex 70傅里葉變換全反射光譜儀（德國布魯克公司）。

1.3動物

SD大鼠［許可證號碼：SCXK（滬）：2018-0006］由南京青龍山動物繁育場提供，所有動物實驗操作均符合中國藥科大學(xué)倫理委員會標(biāo)準(zhǔn)；實驗動物從業(yè)人員上崗證號：220193856。

2方 法

2.1 GSH含量測定方法學(xué)的建立

2.1.1 GSH柱前衍生化 采用5，5′-二硫雙-2-硝基苯甲酸（DTNB）衍生化試劑與GSH進(jìn)行反應(yīng)，再通過HPLC測定了透皮吸收液與皮膚組織中的GSH［15］。樣品中GSH的巰基與DNTB反應(yīng)生成衍生化產(chǎn)物，在偏酸性流動相中，在紫外區(qū)有吸收，利用紫外檢測器能夠靈敏的檢出良好的色譜峰，借此可以鑒定GSH的含量［16］。

2.1.2 色譜條件 色譜柱：島津Shim-pack GISC18色譜柱。流動相為二元梯度流動相體系A(chǔ)：0.025%磷酸二氫鉀（pH 3.8）；B：甲醇，梯度洗脫程序：12%B（0～3 min）→8%B（3.01～4.5 min）→40%B（8.5～15 min）→12%B（15.01～20 min）；流速1 mL/min（0～3 min）→0.6 mL/min（3.01～4.5 min）→0.8 mL/min（8.5 min）→1 mL/min（15～20 min）。進(jìn)樣量20μL，柱溫為39℃，檢測波長：330 nm。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密稱取GSH 10.13 mg，置于10 mL量瓶中，空白皮膚接受液溶解并稀釋至刻度，搖勻，制備成儲備液。分別精密量取0.1、0.5、1、2、5 mL儲備液，置于10 mL量瓶中，用空白皮膚接受液定容，得到1.01、5.07、10.13、20.26、50.65μg/mL的對照品溶液。精密量取上述對照品溶液1 mL，加入100μg/mL DTNB溶液1 mL并渦旋3 min，取反應(yīng)液20μL分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以GSH質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。取2.2 cm2皮膚剪碎加入20.26、50.65、202.6、506.5、1 013.00μg/mL GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，液氮冷凍后勻漿，12 000 r/min高速冷凍離心12 min，取勻漿液500μL，加入甲醇沉淀劑500μL，于12 000 r/min高速冷凍離心12 min。再取上清液500μL最后加入1 mg/mL DTNB衍生化試劑0.5 mL渦旋反應(yīng)3 min，取反應(yīng)液20μL分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以GSH質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。

2.1.4 溶液穩(wěn)定性 取質(zhì)量濃度為50.65μg/mL的GSH對照品儲備液1 mL，與TNB 1 mL反應(yīng)后在1、2、4、6、12、24 h分別進(jìn)樣20μL，記錄色譜峰面積，與0 h峰面積進(jìn)行比較，計算RSD。

2.1.5 進(jìn)樣精密度 取質(zhì)量濃度為50.65μg/mL的GSH對照品儲備液，與1 mL DTNB反應(yīng)后，連續(xù)6次注入色譜儀（n=6），記錄峰面積，計算RSD。

2.1.6 回收率 取數(shù)份2.2 cm2空白皮膚剪碎，分別加入高、中、低3種質(zhì)量濃度（1 013.00、506.50、200.65μg/mL）對照品溶液，每個質(zhì)量濃度配備3份（n=3）。勻漿操作參考“2.1.3”項下，測定藥物含量，計算提取回收率。

2.2 不同相對分子質(zhì)量HA對GSH體外透皮吸收與皮膚不同層次儲留性能的影響

2.2.1 GSH在離體皮膚中的透皮吸收 將處理好的鼠皮從冰箱中取出，用生理鹽水泡至室溫，切割并固定在擴散池上。真皮一側(cè)與接收液接觸，角質(zhì)層面向供給池。磁力攪拌速度為400 r/min，水浴溫度為（32±0.5）℃。接收池加入生理鹽水溶液6.5 mL，供給池分別加入含有1%的7K、42K、90K、360K、920K相對分子質(zhì)量的HA與GSH（0.125 mmol/mL）的溶液2 mL，分別于1、2、4、6、8、10、12 h時從接收池中取出接受液1 mL，同時向接受池中補加等量的接收液。取出1 mL接收液后加入DTNB溶液1 mL反應(yīng)渦旋反應(yīng)3 min，進(jìn)樣前0.45μm微孔濾膜過濾。

2.2.2 不同層次離體皮膚中GSH儲留量 與“2.2.1”項下相同方法處理皮膚和給予相同樣品后，分別于1、4、8、12 h取出皮膚，用生理鹽水清洗皮膚3次后用膠帶粘貼法［17-18］粘貼表皮20次，將角質(zhì)層部分粘下，并將膠帶置于20 mL生理鹽水中浸泡提取12 h，取提取液2 mL高速離心，再取1 mL上清液與1 mL 1 mg/mL DTNB衍生化試劑渦旋反應(yīng)3 min，進(jìn)樣前0.45μm微孔濾膜過濾。除角質(zhì)層外的活性真皮部分剪碎后加入生理鹽水溶液1 mL，液氮冷凍后勻漿，12 000 r/min高速冷凍離心12 min，取勻漿液500μL，加入500μL甲醇溶液，于12 000 r/min高速冷凍離心12 min。再取上清液500μL最后加入1 mg/mL的DTNB衍生化試劑0.5 mL渦旋反應(yīng)3 min，進(jìn)樣前0.45μm微孔濾膜過濾。

2.3 HA影響藥物經(jīng)皮吸收的機制研究

2.3.1 分子對接 利用分子對接軟件AutoDock進(jìn)一步研究HA單體與GSH的相互作用，從而進(jìn)一步解釋HA對GSH透皮吸收行為產(chǎn)生影響的原因。使用ChemDraw畫出HA和GSH結(jié)構(gòu)式，并進(jìn)行MM2運算使其能量優(yōu)化。使用AutoDockTools對GSH與HA進(jìn)行分子模擬，AutoDock的拉馬克遺傳算法（Lamarckian genetic algorithm，LGA），可以識別分子間的相互作用力，從而計算出可能的構(gòu)象。進(jìn)一步判斷兩分子間的相互作用。

2.3.2 全反射傅里葉變換紅外光譜（ATR-FTIR）取0.25 cm2皮膚置于0.2%胰酶磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）的24孔板中，真皮面與底部接觸，于37℃經(jīng)8 h孵育，直到真皮部分被移除。用棉簽將角質(zhì)層從糊狀物中分離，將分離的角質(zhì)層用水清洗，在真空干燥器中干燥24 h干燥后即可得分離的角質(zhì)層［19］。分別取大小適宜的干燥角質(zhì)層片，分別置于6孔板內(nèi)。對照組（生理鹽水溶液），處方組（1%不同相對分子質(zhì)量的HA生理鹽水溶液）。分別取干燥角質(zhì)層片至于3 mL各組對應(yīng)的溶液中，室溫條件下孵育12 h后，用蒸餾水清洗掉角質(zhì)層片上的殘留溶劑，放置于真空干燥（硅膠）干燥12 h，干燥后的角質(zhì)層片采用衰減全反射傅里葉變換紅外光譜（ATR-FTIR）進(jìn)行掃描測定，儀器參數(shù)設(shè)置為：分辨率2 cm-1，掃描次數(shù)100，掃描范圍為650～4 000 cm-1［20］。

2.3.3 HE染色法研究HA對皮膚微觀結(jié)構(gòu)的影響 分別設(shè)置空白組，1%的不同相對分子質(zhì)量的生理鹽水HA溶液組。雄性大鼠烏拉坦麻醉后小心剃去腹部毛使皮膚暴露，大鼠腹部分別給予上述6組樣品100μL，8 h后處死大鼠，剝?nèi)〗?jīng)上述樣品涂布的皮膚，除去皮下脂肪，用生理鹽水清洗后置于4%多聚甲醛中固化24 h。依次將樣品脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、烘干、脫蠟后，HE染色脫水透明封片。

3結(jié)果

3.1 GSH方法學(xué)

3.1.1 GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線 實驗結(jié)果表明，GSH在皮膚接收液中線性關(guān)系良好，其線性回歸方程為A=16 598c+5 257.4（r2=0.999 5）。在皮膚真皮勻漿液中GSH線性關(guān)系良好，其線性回歸方程為A=5 360c-56 575（r2=0.999 5）。

3.1.2 穩(wěn)定性 結(jié)果表明24 h內(nèi)不同時間點的峰面積RSD為2.63%（n=6），表明GSH在透皮接受液生理鹽水中穩(wěn)定性良好。

3.1.3 精密度 結(jié)果表明日內(nèi)精密度峰面積RSD分別為2.00%和0.95%（n=6），說明該儀器進(jìn)樣精密度良好。

3.1.4 回收率 結(jié)果表明皮膚勻漿高中低濃度GSH回收率分別為91.95%、95.85%、100.23%，RSD分別為0.41%、1.03%、1.27%（n=3），方法符合要求。

3.1.5 GSH在離體皮膚中的透皮吸收量 如圖1-A所示，GSH組12 h藥物累計透過量為125.81μg/cm2，而添加HA后的各組，GSH的透皮吸收均有所下降，7K、42K、90K、360K、920K組分別為92.03±6.64、61.12±4.12、35.21±3.19、29.93±7.58、16.04±3.63μg/cm2，統(tǒng)計學(xué)分析表明，游離GSH組與加了低相對分子質(zhì)量7 000的HA組相比沒有顯著差異，與其他組相比則均有顯著性差異（P＜0.05）。表明高相對分子質(zhì)量HA可以阻礙GSH的透皮吸收，但7 000以下的低相對分子質(zhì)量HA則沒有影響。HA相對分子質(zhì)量越大，GSH的經(jīng)皮透過量越少，這可能與相對分子質(zhì)量增加，HA溶液的黏度增加，阻礙了藥物的經(jīng)皮滲透有關(guān)［21］。

3.1.6 不同層次離體皮膚中GSH儲留量 不同GSH與HA組處理大鼠皮12 h后，皮膚角質(zhì)層與真皮層藥物滯留結(jié)果如圖1所示。從圖1-B，1-C可以看出，相對分子質(zhì)量為7 000，42 000，90 000的HA在角質(zhì)層中對GSH均有顯著性促進(jìn)儲留的作用，儲留的GSH的量分別為對照組1.76、1.66和2.24倍，說明低相對分子質(zhì)量HA可能借助其對皮膚的水合作用，也可能與GSH相互作用增強了其在角質(zhì)層的滯留。在大鼠活性表皮和真皮層中GSH的儲留量分別為對照組的1.52、0.92和0.64倍，相對分子質(zhì)量最小的HA（7K）在活性表皮和真皮層的滯留量，與對照組和中高相對分子質(zhì)量HA（90K、360K、920K）組相比有顯著性差異，表明低相對分子質(zhì)量HA能在一定程度上促進(jìn)藥物進(jìn)入真皮深處。但是高相對分子質(zhì)量HA（360K，920K）在角質(zhì)與真皮12 h中的滯留分別僅為對照組的0.36，0.28；0.36，0.21倍，說明高相對分子質(zhì)量HA可能由于其黏度過大，使GSH束縛在其空間結(jié)構(gòu)中，限制了藥物的滲透?？傮w來說（圖1-D），高相對分子質(zhì)量HA不利于GSH的滲透和滯留，低相對分子質(zhì)量HA能夠幫助其更好的進(jìn)入角質(zhì)以及更深處。

Figure 1 In vitro transdermal profiles of glutathione(GSH)permeated through rat skin(A)and retention amount of GSH in the stratum corneum of rat skin(B),epidermis and dermis of rat skin(C)and in the wholerat skin（D）(xˉ±s,n=3)HA:Hyaluronic acid*P＜0.05 vs GSH control group

3.2 ATR-FTIR對角質(zhì)層的影響

表1為不同相對分子質(zhì)量HA對大鼠皮膚角質(zhì)層脂質(zhì)以及角蛋白振動峰的位移變化，由表中數(shù)據(jù)可以看出，生理鹽水對照組的脂質(zhì)吸收峰為2 918.1和2 850.6 cm-1。而與對照組脂質(zhì)吸收峰相比，高相對分子質(zhì)量HA（360K，920K）對于脂質(zhì)的影響較小，中相對分子質(zhì)量與低相對分子質(zhì)量HA（7K，42K，90K）均向長波方向移動，其中1%90K HA脂質(zhì)峰位分別增加了4.2，2.2 cm-1，表明HA對脂質(zhì)有一定的相互作用。對照組角蛋白NH-C=OⅠ、Ⅱ峰位分別為1 649.1，1 542.9 cm-1，與對照組相比，不同相對分子質(zhì)量透HA的峰位均向短波方向移動，其中1%7K HA與1%42K HA最為顯著，角蛋白峰位分別減少了5.4，3.3 cm-1與5.1，1.0 cm-1。這說明低相對分子質(zhì)量HA能夠使皮膚角質(zhì)層中的角蛋白α-螺旋結(jié)構(gòu)減少，轉(zhuǎn)變?yōu)棣?片層與無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)［22］，因此HA可以使得角蛋白堆積變得疏松，角質(zhì)層對透皮藥物的阻礙減小來達(dá)到促滲目的。

3.3 HE染色

HE染色結(jié)果見圖2。8 h后生理鹽水組的皮膚結(jié)構(gòu)完整。被覆鱗狀上皮完整，角質(zhì)層完好無損，呈帶狀均勻分布在活性表皮之上，無角質(zhì)層脫落或游離，膠原纖維束緊密排列；而不同相對分子質(zhì)量HA組皮膚角化層結(jié)構(gòu)不完整，疏松，脫離增厚現(xiàn)象較明顯，一些區(qū)域外層的角質(zhì)呈帶狀游離分布，間隙變大，并且HA相對分子質(zhì)量越低，其水合作用越強，角質(zhì)層越疏松，但除角質(zhì)層外對其他皮膚結(jié)構(gòu)則無明顯影響。表明了HA可以增加皮膚角質(zhì)層的水合作用，從而增大了角質(zhì)層的細(xì)胞間隙。研究表明，低相對分子質(zhì)量的HA可以通過受體介導(dǎo)（CD44）等作用進(jìn)入皮膚中，Zhang等［23］證實了炎癥性銀屑病皮膚中過度表達(dá)的CD44蛋白可作為透明質(zhì)酸載體的潛在靶點，以增加藥物在皮膚中的蓄積。當(dāng)HA進(jìn)入角質(zhì)層后，因角質(zhì)層含水量比真皮層低（角質(zhì)層含水量一般為15%～20%，而真皮層則含70%），因此其增加角質(zhì)層的水合作用比較明顯。而相對分子質(zhì)量越高，進(jìn)入皮膚能力越差，因此顯示出從圖2-B到圖2-F的差異性。

Table1 Effect of HA with different relativemolecular weight on theshift of lipid and keratin vibration peak in rat skin stratumcorneum

3.4 分子對接

由圖3可知，通過200次的構(gòu)象搜索，獲得了HA與GSH相互作用的不同能量構(gòu)象。將接近的構(gòu)象進(jìn)行成簇分析，通過搜索對接結(jié)果可以得出：GSH與HA包合物最優(yōu)構(gòu)象簇A1為63次，第二優(yōu)勢構(gòu)想A2為34次，且最優(yōu)構(gòu)象的結(jié)合能為-2.90 kJ/mol。結(jié)合模式分析顯示，GSH可以與HA結(jié)合形成了5個氫鍵，氫鍵的結(jié)合代表兩者具有較強的相互作用力，這可能也是HA阻礙GSH經(jīng)皮透過的原因之一。

Figure 3 Molecular docking of the lowest docking energy conformation of HA with GSH(A)and energy distribution diagram of molecular docking results(B)

4討論

HA廣泛應(yīng)用于外用制劑中，有報道認(rèn)為其具有一定的藥物經(jīng)皮促滲透作用。Nashchekina等［24］研究表明，低相對分子質(zhì)量HA能夠有效增強在皮層上的遞送。Kim等［25］制備了透明質(zhì)酸/β-葡聚糖納米凝膠，結(jié)果顯示該制劑能夠穿透角質(zhì)層并沉積在真皮中。但這些報道中大部分研究的模型藥物均為難溶性藥物，而水溶性藥物研究較少。因此本研究以水溶性的GSH為模型進(jìn)行考察，并探究不同相對分子質(zhì)量HA對GSH是否具有經(jīng)皮促滲或皮膚儲留作用，以及透明質(zhì)酸在其中的作用機制。

根據(jù)傅里葉全反射紅外光譜結(jié)果，低相對分子質(zhì)量HA作用于角質(zhì)層后，角質(zhì)層角蛋白酰胺峰向低峰位移動，對脂質(zhì)峰位沒有顯著影響。高相對分子質(zhì)量HA作用于角質(zhì)層后角質(zhì)層角蛋白酰胺峰無顯著性影響，脂質(zhì)峰位向高峰位移動。說明HA對皮膚的作用機制主要是其結(jié)合于皮膚后會使皮膚角質(zhì)層結(jié)構(gòu)發(fā)生紊亂，低分子HA主要影響角蛋白，使其從α-螺旋結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)棣?片層結(jié)構(gòu)，中高相對分子質(zhì)量HA主要擾亂角質(zhì)層脂質(zhì)。

GSH與HA的相互作用，通過分子對接研究得到了證實，兩者能形成氫鍵，表明GSH能在制劑中與HA相互作用，使其不易于快速進(jìn)入皮膚。而當(dāng)HA發(fā)揮保濕作用，增加了皮膚的水合度后，藥物與HA的結(jié)合則可以發(fā)揮儲庫作用，緩慢進(jìn)入皮膚角質(zhì)層和真皮層中。

GSH為極性化合物，水溶性好而較難透過皮膚角質(zhì)層。加入HA后，由于HA與GSH強烈的相互作用，阻礙了其快速進(jìn)入皮膚，但低相對分子質(zhì)量的HA則相對于高相對分子質(zhì)量的HA表現(xiàn)出更好的角質(zhì)層和真皮層的藥物儲留作用［26］。已有研究表明，低相對分子質(zhì)量（特別是幾千相對分子質(zhì)量）HA比高相對分子質(zhì)量HA更容易穿透皮膚［27］。因此，低相對分子質(zhì)量HA進(jìn)入皮膚的量比高相對分子質(zhì)量HA更多，與角質(zhì)層蛋白和脂質(zhì)作用更明顯，從而表現(xiàn)出了較好的藥物透皮促進(jìn)或儲留能力。

本研究證實了不同相對分子質(zhì)量的HA對于GSH透皮吸收和皮膚儲留有顯著的影響，并且不同的相對分子質(zhì)量影響不同。這種阻礙藥物透皮吸收、但促進(jìn)皮膚儲留的作用對于皮科制劑和化妝品中的有效成分（如抗皮膚真菌類藥物、防曬、保濕和美白的功效成分等）進(jìn)行配方篩選和研究，發(fā)揮其在不同皮膚層次的藥物療效有一定的指導(dǎo)意義。