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    MEBT/MEBO 聯(lián)合脂肪源性干細(xì)胞治療慢性難愈合創(chuàng)面的療效研究

    2021-05-08 08:58:20梁紅偉王廷金
    中國燒傷創(chuàng)瘍雜志 2021年2期
    關(guān)鍵詞:充質(zhì)源性干細(xì)胞

    段 瓊 王 劍 梁紅偉 王廷金

    國際創(chuàng)傷愈合聯(lián)盟將慢性難愈合創(chuàng)面定義為無法通過正常、 有序、 及時的修復(fù)過程愈合的創(chuàng)面或經(jīng)修復(fù)也未能恢復(fù)解剖和功能完整狀態(tài)的創(chuàng)面[1]。慢性難愈合創(chuàng)面的形成機(jī)制較為復(fù)雜, 患者年齡較大、 基礎(chǔ)疾病較多、 創(chuàng)面反復(fù)感染等均可導(dǎo)致創(chuàng)面組織內(nèi)的潛能再生細(xì)胞不足或無法被激活而形成難愈合創(chuàng)面[2-3]。 目前, 隨著細(xì)胞和分子生物學(xué)以及再生醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展, 具有再生功能的脂肪源性干細(xì)胞及具有激活創(chuàng)面再生潛能的燒傷創(chuàng)瘍再生醫(yī)療技術(shù)(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment, MEBT/MEBO) 的基礎(chǔ)與臨床研究逐漸成為國內(nèi)外研究的熱點, 并逐漸被應(yīng)用于慢性難愈合創(chuàng) 面 的 臨 床 治 療[4-5], 但 脂 肪 源 性 干 細(xì) 胞 與MEBT/MEBO 聯(lián)合應(yīng)用的研究報道較少。 故筆者于本研究中對比觀察了MEBT/MEBO 聯(lián)合脂肪源性干細(xì)胞對慢性難愈合創(chuàng)面療效的影響, 現(xiàn)報道如下。

    1 臨床資料

    1.1 一般資料

    選取2017 年9 月至2019 年8 月鄭州人民醫(yī)院收治的72 例慢性難愈合創(chuàng)面患者作為研究對象,并按照隨機(jī)數(shù)表法將其隨機(jī)分為研究組與對照組,每組36 例。 兩組患者性別、 年齡、 創(chuàng)面面積等一般資料對比,P均>0.05, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義, 具有可比性(表1)。 本研究經(jīng)鄭州人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn), 且所有患者均簽署了知情同意書。

    表1 兩組慢性難愈合創(chuàng)面患者一般資料對比Table 1 Comparison of general data of patients with chronic refractory wounds between the two groups

    1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

    納入標(biāo)準(zhǔn): (1) 符合慢性難愈合創(chuàng)面的診斷標(biāo)準(zhǔn); (2) 糖尿病患者空腹血糖穩(wěn)定在正常范圍內(nèi), 血管性疾病患者血管未完全閉塞, 放射性潰瘍患者已結(jié)束放療或接觸射線, 感染性創(chuàng)面患者感染已得到控制; (3) 對本研究知情, 并自愿簽署知情同意書。 排除標(biāo)準(zhǔn): (1) 合并有心、 肝、 腎等重要臟器功能衰竭; (2) 合并有惡性腫瘤、 白塞氏病、 嚴(yán)重貧血、 克隆氏病、 嚴(yán)重自身免疫性疾病等; (3) 妊娠期或哺乳期婦女; (4) 入選前3 個月內(nèi)使用過皮質(zhì)類固醇激素、 免疫抑制劑等治療。

    2 方法

    2.1 脂肪源性干細(xì)胞的制備

    患者供脂局部麻醉10 min 后, 將針孔直徑為3.0 mm、 側(cè)孔直徑為1.0 mm 的多側(cè)孔吸脂針與20 mL注射器連接, 放射狀抽吸脂肪顆粒; 抽吸完畢后將注射器直立于冰水混合液中靜置10 min, 棄去液體, 上層脂肪組織1200 g 離心3 min 后, 再次棄去上清液, 保留脂肪組織; 離心后脂肪組織內(nèi)加入0.1%的Ⅰ型膠原蛋白酶消化60 min, 待組織成糊狀后加入磷酸鹽緩沖液終止消化; 吹打后用70 μm濾網(wǎng)過濾, 濾液2500 g 離心10 min, 棄去上清液后加入10%胎牛血清培養(yǎng)備用。

    脂肪源性干細(xì)胞制備成功標(biāo)準(zhǔn): 經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面抗CD34 為陽性、 抗CD45 為陰性;經(jīng)成骨誘導(dǎo)分化后, 細(xì)胞由長梭形逐漸變?yōu)槎噙呅巍?不規(guī)則形, 且逐漸呈簇狀生長, 聚集成團(tuán), 4周時可見明顯鈣結(jié)節(jié)形成, 鏡下可見紅色鈣結(jié)節(jié);經(jīng)成脂誘導(dǎo)后, 細(xì)胞生長緩慢, 逐漸由長梭形變?yōu)槎噙呅巍?圓形、 橢圓形, 細(xì)胞體積減小, 且細(xì)胞漿內(nèi)逐漸出現(xiàn)脂滴并聚集, 4 周時大部分細(xì)胞被誘導(dǎo)成脂肪樣細(xì)胞, 可見明顯脂肪形成。

    2.2 局部治療

    對照組: 創(chuàng)面經(jīng)徹底清創(chuàng)后均勻涂抹濕潤燒傷膏(moist exposed burn ointment, MEBO), 并填塞或覆蓋MEBO 藥紗, 無菌敷料包扎, 每天換藥1次, 直至創(chuàng)面完全愈合。

    研究組: 創(chuàng)面經(jīng)徹底清創(chuàng)后均勻涂抹MEBO,并填塞或覆蓋MEBO 藥紗, 無菌敷料包扎, 每天換藥1 次; 待創(chuàng)面無壞死組織和明顯感染后, 創(chuàng)面基底及創(chuàng)周皮下注射脂肪源性干細(xì)胞0.2 mL/cm2,然后繼續(xù)予以MEBO 換藥治療, 直至創(chuàng)面完全愈合。

    2.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

    對比觀察治療第4、 8 周時兩組患者的臨床療效及創(chuàng)面最終愈合時間。 臨床療效評價標(biāo)準(zhǔn): 痊愈, 創(chuàng)面完全愈合; 顯效, 創(chuàng)面愈合率≥80%; 有效, 創(chuàng)面愈合率≥50%且<80%; 無效, 創(chuàng)面愈合率<50%。 創(chuàng)面愈合率= (創(chuàng)面原始面積-創(chuàng)面殘余面積) /創(chuàng)面原始面積× 100%; 總有效率=(痊愈例數(shù)+顯效例數(shù)+有效例數(shù)) /總例數(shù)×100%。

    2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

    采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析, 其中計數(shù)資料以頻數(shù)或百分比表示, 采用卡方檢驗或等級資料的秩和檢驗; 符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s) 表示, 組間兩兩比較采用獨(dú)立樣本t檢驗; 均以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    3 結(jié)果

    治療第4 周, 研究組患者中創(chuàng)面痊愈5 例、 顯效19 例、 有效10 例、 無效2 例, 治療總有效率為94.4%, 明顯優(yōu)于對照組患者的創(chuàng)面痊愈1 例、 顯效9 例、 有效12 例、 無效14 例, 治療總有效率61.1% (Z=-3.832,P<0.001)。

    治療第8 周, 研究組患者中創(chuàng)面痊愈26 例、顯效7 例、 有效3 例, 治療總有效率為100%, 明顯優(yōu)于對照組患者的創(chuàng)面痊愈8 例、 顯效11 例、有效17 例, 治療總有效率100% (Z=-4.463,P<0.001)。

    最終兩組患者創(chuàng)面均完全愈合, 其中研究組患者創(chuàng)面愈合時間為(39.85 ±22.48) d, 明顯短于對照組患者的創(chuàng)面愈合時間 (67.66 ± 31.89) d(t=4.277,P<0.001)。

    4 討論

    創(chuàng)面愈合是一個有序而復(fù)雜的生物學(xué)過程, 包括止血期、 炎癥期、 增生期和組織重構(gòu)期4 個時期, 創(chuàng)面感染、 組織缺血、 反復(fù)創(chuàng)傷、 異物或壞死組織的存在以及合并免疫缺陷或營養(yǎng)不良等疾病均可影響某個愈合時期而導(dǎo)致創(chuàng)面遷延不愈形成慢性難愈合創(chuàng)面[6-7]。 相關(guān)研究顯示, 細(xì)胞再生能力受限、 缺乏有效刺激肉芽組織和血管新生的生物活性因子是慢性難愈合創(chuàng)面難愈的主要分子生物學(xué)作用機(jī)制[8]。

    近年來部分研究證實, 脂肪中含有的大量間充質(zhì)干細(xì)胞具有體外增殖及多重分化潛能, 且可分泌血管內(nèi)皮生長因子 (vascular endothelial growth factor, VEGF)、 堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)、 肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor, HGF) 等多種細(xì)胞因子,進(jìn)而促進(jìn)創(chuàng)面愈合[9-10]; MEBT/MEBO 的核心藥物MEBO 內(nèi)含有的有效成分可激活創(chuàng)面組織內(nèi)的潛能再生細(xì)胞, 并將其轉(zhuǎn)化為干細(xì)胞, 再在原位增殖、分化為創(chuàng)面各層組織細(xì)胞, 原位再生修復(fù)創(chuàng)面[11-13]。 本研究中筆者將MEBT/MEBO 與脂肪源性干細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用于慢性難愈合創(chuàng)面的治療, 結(jié)果顯示, 研究組患者的臨床療效明顯優(yōu)于對照組、 創(chuàng)面愈合時間明顯短于對照組。 可見, MEBT/MEBO與脂肪源性干細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用更有利于創(chuàng)面的愈合。MEBO 內(nèi)含有的有效成分可與創(chuàng)面壞死組織發(fā)生水解、 酶解、 酸敗、 皂化、 酯化和脂化等一系列生物化學(xué)反應(yīng), 無損傷地液化排除創(chuàng)面壞死組織, 將創(chuàng)面置于生理性濕潤環(huán)境內(nèi), 以利于創(chuàng)面的再生修復(fù); 可激活創(chuàng)面組織內(nèi)的潛能再生細(xì)胞, 并將其轉(zhuǎn)化為干細(xì)胞, 再在原位增殖、 分化為創(chuàng)面各層組織細(xì)胞, 再生修復(fù)創(chuàng)面[14]。 然而, 部分慢性難愈合創(chuàng)面中缺乏具有再生潛能的干細(xì)胞或脂肪細(xì)胞等活組織細(xì)胞[15], 故修復(fù)時間相對較長。 而間充質(zhì)干細(xì)胞來源于中胚層, 傳統(tǒng)觀點認(rèn)為其分化能力僅局限于中胚層來源組織, 但最近部分研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)通過基因重編程和相應(yīng)誘導(dǎo)劑可使其向脂肪細(xì)胞、 成骨細(xì)胞、 軟骨細(xì)胞、 多巴胺能神經(jīng)元、 淋巴管內(nèi)皮樣細(xì)胞等多胚層組織轉(zhuǎn)化, 而且能夠分泌部分細(xì)胞因子參與各個時期的創(chuàng)面修復(fù)過程[16]。 向創(chuàng)面組織中注射間充質(zhì)干細(xì)胞可解決創(chuàng)面組織中缺乏具有再生潛能的干細(xì)胞或脂肪細(xì)胞等活組織細(xì)胞的問題, 并配以MEBT/MEBO 聯(lián)合應(yīng)用, MEBO 可為間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖分化提供良好的生理環(huán)境, 且其內(nèi)含有的碳水化合物、 脂肪酸、 氨基酸、 維生素等成分, 還可為間充質(zhì)干細(xì)胞提供充足的營養(yǎng)物質(zhì),以確保其正常發(fā)揮干細(xì)胞的再生修復(fù)功能[17]。

    綜上所述, MEBT/MEBO 與脂肪源性干細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用可有效促進(jìn)慢性難愈合創(chuàng)面的愈合, 療效顯著。 另外, 脂肪來源廣泛, 取材方便, 對供區(qū)損傷極小, 且倫理學(xué)限制較少; 采用自體或配型相近的脂肪源性干細(xì)胞可避免或減少免疫排斥反應(yīng), 具有較大的臨床應(yīng)用前景, 值得進(jìn)一步深入研究探討。

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