胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素在膿毒癥患者血清中的表達(dá)及臨床意義

陳晶瑩 羅惠君 何文成 張衛(wèi)星 羅華 張聲

【摘要】 目的：探討胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin，TSLP）在膿毒癥患者血清中的表達(dá)及臨床意義。方法：收集2017年1月-2019年10月在本院ICU住院治療的患者80例為研究對象，共分三組，對照組（C組，n=30），膿毒癥組（S組，n=30），膿毒癥休克組（SS組，n=20）。采集所有研究對象入ICU后24 h內(nèi)的臨床資料、檢查結(jié)果及空腹靜脈血5 mL，用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定血清TSLP，IL-6的濃度，分析兩者在膿毒癥患者中的表達(dá)及相關(guān)性。結(jié)果：與C組

患者相比，S組及SS組患者在性別構(gòu)成、年齡、APACHEⅡ評分、白細(xì)胞計數(shù)上差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;S組患者血清PCT濃度與C組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;SS組患者血清PCT濃度顯著高于C組及S組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.000 1）。S組患者血清TSLP的濃度顯著高于C組（P<0.000 1），

IL-6的濃度高于C組（P=0.030）。SS組患者血清TSLP高于S組（P=0.010），IL-6的濃度顯著高于S組（P<0.000 1）。S組患者血清中TSLP的濃度與IL-6的濃度呈明顯正相關(guān)（r=0.61，P<0.01）。結(jié)論：TSLP在膿毒癥患者血清中表達(dá)增高，且與膿毒癥的嚴(yán)重程度相關(guān)，提示TSLP參與膿毒癥的發(fā)病機(jī)制。

【關(guān)鍵詞】 膿毒癥 膿毒癥休克 胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素

Expression and Clinical Significance of Thymic Stromal Lymphopoietin in Serum of Patients with Sepsis/CHEN Jingying， LUO Huijun， HE Wencheng， ZHANG Weixing， LUO Hua， ZHANG Sheng. //Medical Innovation of China， 2021， 18（07）： -118

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of thymic stromal Lymphopoietin （TSLP） in serum of patients with sepsis. Method： Eighty patients admitted to ICU of our hospital from January 2017 to October 2019 were selected and divided into three groups： control group （group C， n=30）， septic group （group S， n=30） and septic shock group （group SS， n=20）. Clinical and examination data and 5 mL venous blood of the patients were collected within 24 hours after be admitted to ICU. The serum levels of TSLP and IL-6 were measured by double antibody sandwich enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. The expressions and correlation of TSLP and IL-6 in septic patients were analyzed. Result： Compared with group C， there were no significant differences in gender composition， age， APACHEⅡ score and white blood cell count between group S and group SS （P>0.05）; there was no significant difference in serum PCT concentration between group S and group C （P>0.05）; the serum PCT concentration in group SS was significantly higher than that in group C and group S （P<0.000 1）. The concentration of serum TSLP in group S was significantly higher than that in group C （P<0.000 1），

and the concentration of IL-6 in group S was higher than that in group C （P=0.030）. The serum TSLP of group SS was higher than that of group S （P=0.010）， and the concentration of IL-6 was significantly higher than that of group S （P<0.000 1）. There was a positive correlation between TSLP and IL-6 in group S （r=0.61， P<0.01）. Conclusion： The expression of TSLP in the serum of patients with sepsis is increased and related to the severity of sepsis， which suggests that TSLP may be involved in the pathogenesis of sepsis.

[Key words] Sepsis Septic shock Thymic stromal lymphopoietin

First-authors address： Peking University Shenzhen Hospital， Shenzhen 518035， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.07.028

膿毒癥是由宿主對感染的反應(yīng)失調(diào)，引起的一系列病理、生理和生化異常，導(dǎo)致危及生命的器官功能障礙[1]，全世界每年約有530萬人死于膿毒癥[2]，是一個嚴(yán)重危及公共健康的問題，其患病率及死亡率極高，是一種異質(zhì)性綜合征[3]，發(fā)病機(jī)制尚未明確。胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin，TSLP）是白介素-2細(xì)胞因子家族的一員，1994年由Friend等[4]在小鼠胸腺基質(zhì)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，是IL-7中的細(xì)胞因子，可以刺激Th2細(xì)胞反應(yīng)，參與炎癥反應(yīng)過程。近年TSLP在感染、變態(tài)反應(yīng)性疾病及腫瘤等多種疾病中受到廣泛關(guān)注，有研究發(fā)現(xiàn)在大鼠膿毒癥的發(fā)生發(fā)展過程中，TSLP可以介導(dǎo)宿主骨髓細(xì)胞產(chǎn)生前炎細(xì)胞因子引起全身炎癥反應(yīng)失調(diào)，下調(diào)TSLP作用可以改善膿毒癥的急性炎癥反應(yīng)，減少繼發(fā)的多器官衰竭[5-7]。人外周血CD14+CD1c+細(xì)胞亞群培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)在LPS刺激下表達(dá)TSLPR水平升高[8]，但TSLP在膿毒癥患者中的具體表達(dá)情況報道較少。本研究通過檢測膿毒癥患者血清中TSLP的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討TSLP與膿毒癥發(fā)病的相關(guān)性，為膿毒癥臨床診治提供更多的參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月-2019年10月在本院ICU住院治療的患者80例為研究對象，其中男48例，女32例，共分三組，對照組（C組，n=30），膿毒癥組（S組，n=30）、膿毒癥休克組（SS組，n=20）。膿毒癥及膿毒癥休克診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《第三屆國際膿毒癥與膿毒癥休克定義共識Sepsis 3.0》關(guān)于膿毒癥及膿毒癥休克的最新診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）自身免疫性疾病;（2）過敏性疾病;（3）自身炎癥性疾病;（4）惡性腫瘤;（5）AIDS;（6）近期接受免疫抑制治療的患者。本研究通過本院倫理委員會批準(zhǔn)，所有入組患者或授權(quán)家屬簽署知情同意書。

1.2 方法 采集所有研究對象入ICU 24 h內(nèi)的臨床資料及空腹靜脈血。（1）一般資料：性別、年齡、基礎(chǔ)疾病、意識狀態(tài)、生命體征（體溫、脈搏、呼吸、血壓）等。（2）輔助檢查：血氣分析、生化檢查（血細(xì)胞分析、離子、肝腎功能、PCT）及影像學(xué)檢查，根據(jù)臨床資料及檢查結(jié)果計算APACHE Ⅱ評分。（3）采集患者空腹靜脈血5 mL，離心后留取血清，置于-80 ℃冰箱備用。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定血清TSLP、IL-6的濃度，試劑盒購自PeproTech及Mabtech公司，所有試驗步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用Graphpad軟件進(jìn)行分析及作圖，計量數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布用（x±s）表示，比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），多組間兩兩比較用LSD檢驗;非正態(tài)分布用中位數(shù)M（P25，P75）表示，比較采用非參數(shù)Kruskal-Wallis秩和檢驗，組間有統(tǒng)計學(xué)差異進(jìn)一步用Dunn法進(jìn)行多重比較;采用Spearman相關(guān)進(jìn)行相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組臨床資料比較 與C組患者相比，S組及SS組患者在性別構(gòu)成、年齡、APACHEⅡ評分、白細(xì)胞計數(shù)上差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;S組患者血清PCT濃度與C組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;SS組患者血清PCT濃度顯著高于C組及S組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.000 1）。見表1。

2.2 各組患者血清中TSLP、IL-6的濃度水平比較 S組患者血清TSLP的濃度顯著高于C組（P<0.000 1），IL-6的濃度高于C組（P=0.030）。SS組患者血清TSLP高于S組（P=0.010），IL-6的濃度顯著高于膿毒癥組（P<0.000 1）。見表2、圖1。

2.3 S組患者血清中TSLP、IL-6濃度的相關(guān)性分析 采用Spearman相關(guān)分析，結(jié)果顯示，在膿毒癥組患者血清中TSLP的濃度與IL-6的濃度呈明顯正相關(guān)（r=0.61，P<0.01）。見圖2。

3 討論

膿毒癥是宿主對感染的反應(yīng)失調(diào)而致的危及生命的器官功能障礙，是重要的世界性公共衛(wèi)生問題，伴有嚴(yán)重的循環(huán)障礙、細(xì)胞代謝紊亂的膿毒癥休克使其病死率及致殘率進(jìn)一步升高，再次住院的風(fēng)險率也顯著增加[9]。其具體發(fā)病機(jī)制不十分清楚，與機(jī)體的炎癥反應(yīng)失調(diào)有關(guān)，目前認(rèn)為在膿毒癥早期即存在促炎因子與抗炎因子的反應(yīng)失衡，進(jìn)而引發(fā)序貫的器官功能障礙。

本研究的臨床資料分析發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，膿毒癥組及膿毒癥休克組患者在性別、年齡、APACHEⅡ評分、白細(xì)胞計數(shù)及PCT水平上比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。與文獻(xiàn)[10]結(jié)論不同，既往研究顯示年齡、白細(xì)胞計數(shù)、APACHEⅡ評分及PCT水平在膿毒癥組明顯高于對照組，結(jié)論的差異考慮與對照組的選擇有關(guān)。既往研究的對照組選擇為同期體檢中心的健康體檢者，而本研究的對照組皆為ICU的住院患者，顯而易見ICU的患者無論在年齡、感染及病情的嚴(yán)重程度上都會明顯高于健康對照組。且本研究所選的對照組患者大多為腦出血患者，其應(yīng)激反應(yīng)及昏迷程度高，亦包括部分未達(dá)到膿毒癥診斷標(biāo)準(zhǔn)的輕度感染患者，由于其他危重情況入住ICU，如急性心功能不全、AECOPD等。因此本研究的對照組患者在白細(xì)胞計數(shù)及APACHEⅡ評分方面整體偏高，與膿毒癥組及膿毒癥休克組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。APACHEⅡ評分于1985年制定，用于危重癥患者病情嚴(yán)重程度的評估，與患者預(yù)后直接相關(guān)，評分越高預(yù)后越差，死亡率也越高，至今仍是ICU患者危重程度的重要評分之一[11]。PCT是降鈣素的前體，輕微或局限性的感染PCT正?；蜉p微升高，在嚴(yán)重的細(xì)菌性感染、膿毒癥的早期可急劇升高[12]，在膿毒癥的診斷上有一定的參考價值，準(zhǔn)確性和特異性均高于CRP[13]，在指導(dǎo)危重癥患者的抗生素治療及降低死亡率方面有重要作用[14]。但本研究結(jié)果顯示，APACHEⅡ評分和PCT在膿毒癥患者組并不高于對照組即入住ICU的非膿毒癥患者，也進(jìn)一步說明作為患者危重程度的重要評分之一的APACHEⅡ評分，并非是膿毒癥患者的特異性評分，同時提示PCT雖然在感染性疾病的診療中具有重要意義，但其影響因素較多，在重癥患者中會有相應(yīng)的升高，在膿毒癥的早期診斷中可能具有一定的局限性。本研究發(fā)現(xiàn)膿毒癥休克組患者APACHEⅡ評分顯著高于對照組及膿毒癥組也進(jìn)一步證明了膿毒癥休克患者的危重程度進(jìn)一步增加，預(yù)后更差，死亡風(fēng)險亦會相應(yīng)上升，在診治上也給臨床帶來了更大的困難和挑戰(zhàn)。膿毒癥休克組患者血清PCT的濃度亦顯著高于對照組和膿毒癥組，甚至高于100 ng/mL，與患者嚴(yán)重的全身細(xì)菌性感染及膿毒癥休克一致，也進(jìn)一步證明PCT的濃度與膿毒癥的輕重程度相關(guān)，是評估膿毒癥嚴(yán)重程度的一個重要指標(biāo)。

本研究采集的是入ICU患者24 h內(nèi)的空腹靜脈血，發(fā)現(xiàn)膿毒癥組患者血清TSLP的濃度顯著高于對照組，IL-6的濃度高于對照組，說明TSLP和IL-6在膿毒癥的早期濃度即明顯升高，且TSLP升高較IL-6更加顯著。TSLP是IL-2細(xì)胞因子家族成員之一，可以刺激Th2細(xì)胞反應(yīng)，引起反應(yīng)失調(diào)和多器官系統(tǒng)功能不全。膿毒癥早期TSLP在微生物、促炎細(xì)胞因子以及損傷等多種刺激因素作用下由上皮細(xì)胞大量產(chǎn)生。筆者既往研究發(fā)現(xiàn)膿毒癥早期患者血清中TSLP的濃度升高，且與膿毒癥患者的預(yù)后呈正相關(guān)，是預(yù)后不良的獨立因素之一[15]。Kuethe等[16]發(fā)現(xiàn)大鼠盲腸結(jié)扎穿孔（CLP）后6 h TSLP迅速升高，預(yù)先抗TSLP抗體中和TSLP可以增加TNF-α的濃度及中性粒細(xì)胞的數(shù)量，降低大鼠體內(nèi)的細(xì)菌負(fù)荷及死亡率，說明TSLP可能通過鈍化中性粒細(xì)胞的反應(yīng)性導(dǎo)致膿毒癥的發(fā)生發(fā)展。IL-6在機(jī)體受到炎癥刺激時可由T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生，是急性炎癥反應(yīng)的重要因子之一。文獻(xiàn)[17]發(fā)現(xiàn)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的膿毒癥大鼠IL-6水平增高，提前給予淀粉樣蛋白后IL-6水平下降，可以減輕膿毒癥大鼠的臨床嚴(yán)重程度，提高生存率。IL-6有助于宿主防御感染和組織損傷，但過度合成會加重全身炎癥反應(yīng)，是細(xì)胞因子風(fēng)暴中重要因子之一，有研究發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素-6阻斷法可治療膿毒癥、巨噬細(xì)胞活化綜合征和噬血細(xì)胞性淋巴組織增多癥[18]。本研究亦發(fā)現(xiàn)膿毒癥休克組患者血清TSLP、IL-6的濃度均高于膿毒癥組，說明TSLP、IL-6的濃度與膿毒癥的嚴(yán)重程度相關(guān)。

以往在膠原蛋白誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎大鼠模型中，TSLP受體缺失型大鼠局部的促炎因子及分解代謝介質(zhì)濃度均減低，包括IL-1β、IL-6、BFGF等，說明TSLP及其受體通過T細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)參與了關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制[19]。本研究亦發(fā)現(xiàn)膿毒癥患者血清TSLP的濃度升高與IL-6濃度升高呈正相關(guān)，提示TSLP與IL-6協(xié)同促進(jìn)T細(xì)胞增殖，參與膿毒癥的炎癥反應(yīng)。但同時近年研究也發(fā)現(xiàn)，由于有關(guān)IL-6的臨床研究在診斷閾值、膿毒癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)、感染源等諸多方面存在差異，使其在成人危重患者膿毒癥診斷中的意義具有一定的局限性，TSLP可能成為早期診斷膿毒癥的重要指標(biāo)[20]。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)TSLP在膿毒癥患者早期血清中表達(dá)增高，且與膿毒癥的嚴(yán)重程度相關(guān)，提示TSLP參與膿毒癥的發(fā)病機(jī)制，可能成為膿毒癥早期診斷的敏感指標(biāo)之一。

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（收稿日期：2020-06-15） （本文編輯：周亞杰）