GC法測定鹽酸那拉曲坦起始原料吲哚-5-甲醛中的殘留溶劑

程閩玥，王迪，金祥飛，沈衛(wèi)陽（.中國藥科大學理學院，南京 20009；2.藥物質(zhì)量與安全預(yù)警教育部重點實驗室，南京 20009）

偏頭痛是一種臨床常見的慢性反復(fù)發(fā)作性神經(jīng)系統(tǒng)疾病[1-2]。那拉曲坦（naratriptan，商品名為Amerge）是英國葛蘭素史克公司開發(fā)的高選擇性5-HT1D/1B 受體激動劑，屬于第2 代曲坦類藥物，對于急性偏頭痛的治療效果良好[3-4]。本品在國內(nèi)尚未進口，亦未國產(chǎn)化[5]，其合成路線眾多[6-7]，其中一條工藝路線以5-鹵代吲哚為起始原料經(jīng)氰化、還原得到吲哚-5-甲醛，因有商品化的吲哚-5-甲醛，故可以吲哚-5-甲醛為關(guān)鍵起始原料，該路線具有原料易得，成本較低，步驟較短，更適合工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點。吲哚-5-甲醛在合成過程中，使用了乙醇、甲苯、吡啶、二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基乙酰胺（DMA）和乙酸等有機溶劑。人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）按照殘留溶劑毒性大小將其分成四類，并制訂了相應(yīng)的限度[8-9]。由于藥品質(zhì)量水平具有相對性和傳遞性，起始物料作為化學合成原料藥工藝與藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP） 的起始點，其本身質(zhì)量的優(yōu)劣將對終端原料藥的質(zhì)量產(chǎn)生影響[10]，故應(yīng)對其質(zhì)量進行控制，目前尚未見吲哚-5-甲醛中殘留溶劑測定方法的文獻報道。參考化學藥物殘留溶劑研究[11-13]，本文建立了可同時測定吲哚-5-甲醛中6 種有機溶劑的GC 法，操作簡便、靈敏度高、結(jié)果準確，為吲哚-5-甲醛的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GC-2010Plus 氣相色譜儀（配有AOC-20i ＋s型自動進樣器和氫火焰離子化檢測器，日本島津公司）；BSA 124S 電子分析天平、BT 25S 電子分析天平（賽多利斯科學儀器有限公司）。

1.2 試藥

吲哚-5-甲醛（宜興中宇藥化技術(shù)有限公司，批 號：20180501、20190301、20190801，純 度：99.2%）；乙醇（色譜純）、吡啶（無水級）[阿拉丁試劑（上海）有限公司]；甲苯（分析純，南京化學試劑股份有限公司）；DMF（分析純，上海凌峰化學試劑有限公司）；DMA（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；乙酸（分析純，南京化學試劑股份有限公司）；二甲基亞砜[DMSO，GC 測定純度≥99.8%，阿拉丁試劑（上海）有限公司]。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-WAX 毛細管色譜柱（固定液為聚乙二醇，30 m×0.25 mm，0.25 μm）；檢測器：氫火焰離子化檢測器（FID）；進樣口溫度：200℃；檢測器溫度：250℃；程序升溫（起始溫度為60℃，維持4 min；以40℃·min－1的速率升溫至140℃，維持4 min；再以50℃·min－1的速率升至200℃，維持4 min）；載氣：氮氣；流速：1.0 mL·min－1；分流比：20∶1；進樣方式：溶液直接進樣。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 精密稱取乙醇、甲苯、吡啶、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺和乙酸適量，用二甲基亞砜溶解并稀釋成每1 mL 中含乙醇2000 μg、甲苯356 μg、吡啶80 μg、二甲基甲酰胺352 μg、二甲基乙酰胺436 μg 和乙酸2000 μg 的混合儲備液。精密量取1 mL，置10 mL 量瓶中，用DMSO 稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取吲哚-5-甲醛約0.4 g，精密稱定，置10 mL 量瓶中，用DMSO 溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

分別量取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液和空白溶劑（DMSO）進樣，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1，空白溶劑色譜峰不干擾各有機溶劑的測定，各有機溶劑色譜峰之間分離良好。

圖1 空白溶劑（A）、混合對照品溶液（B）和供試品溶液（C）氣相色譜圖Fig 1 GC chromatogram of blank solution（A），mixed control solution（B）and sample solution（C）

2.4 線性關(guān)系考察

取混合儲備液適量并稀釋成系列質(zhì)量濃度溶液（乙醇、甲苯、吡啶、DMF、DMA、乙酸均為限度濃度的0.1、0.3、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0倍）。精密量取各系列質(zhì)量濃度溶液，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以各成分色譜峰面積（A）為縱坐標，質(zhì)量濃度（C）為橫坐標，分別進行線性回歸，結(jié)果見表1。

2.5 定量限與檢測限

精密量取“2.4”項下濃度最低的溶液適量，進行系列稀釋后按照“2.1”項下色譜條件進樣測定，以各色譜峰的信噪比S/N＝3 計算各成分的檢測限（LOD），以S/N＝10 計算定量限（LOQ），結(jié)果見表1。

表1 回歸方程、線性范圍、檢測限及定量限結(jié)果Tab 1 Regression equation，linearity，LOD and LOQ

2.6 精密度試驗

2.6.1 進樣精密度 取混合對照品溶液，按“2.1”項下方法連續(xù)測定6 次，記錄峰面積。結(jié)果顯示乙醇、甲苯、吡啶、DMF、DMA 和乙酸峰面積的RSD分別為0.78%、0.70%、1.1%、1.4%、1.6%和1.4%，表明儀器精密度良好。

2.6.2 重復(fù)性試驗 取同一批號吲哚-5-甲醛約0.4 g（批號：20190801），精密稱定，置10 mL 量瓶中，精密移取1 mL“2.2.1”項下的混合儲備液，置同一量瓶中，用DMSO 溶解并稀釋到刻度，搖勻，得測試溶液，平行配制6 份。取混合對照品溶液、供試品溶液和測試溶液分別進樣測定，記錄各組分的峰面積，結(jié)果6 份測試溶液中乙醇、甲苯、吡啶、DMF、DMA、乙酸的平均含量為0.62%（RSD為0.87%）、0.089%（RSD為0.96%）、0.027%（RSD為1.2%）、0.088%（RSD為1.7%）、0.109%（RSD為2.4%）、0.54%（RSD為0.65%），表明本方法的重復(fù)性良好。

2.6.3 中間精密度 照“2.6.2”項下方法配制溶液，在不同時間由另一名分析人員進樣測定，記錄各組分的峰面積，計算含量。結(jié)果顯示，乙醇的平均含量為0.62%，RSD為1.7%；甲苯的平均含量為0.088%，RSD為1.6%；吡啶的平均含量 為0.027%，RSD為2.2%；DMF的平均含量為0.088%，RSD為2.0%；DMA 的平均 含量為0.11%，RSD為2.3%；乙酸的平均含量為0.54%，RSD為2.0%，表明該方法中間精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取混合對照品溶液，室溫放置，分別在0、4、6、8、10、12 h 進樣測定，記錄各組分的峰面積，計算乙醇、甲苯、吡啶、DMF、DMA 和乙酸色譜峰面積的RSD分別為1.5%、3.4%、2.6%、2.7%、2.9%和4.2%，表明混合對照品溶液在室溫條件下放置12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗

取樣品約0.4 g（批號：20190801），精密稱定9份，分別置10 mL 量瓶中，分別精密加入0.5、1.0、1.5 mL 混合對照品儲備液，每個濃度平行配制3份，進樣測定，記錄各色譜峰面積，計算回收率，結(jié)果乙醇、甲苯、吡啶、DMF、DMA、乙酸的平均回收率在97.4%～98.5%，RSD在0.88%～6.1%，符合方法學測定要求。

2.9 色譜條件耐用性試驗

按“2.2.1”項下方法制備混合對照品溶液，分別考察起始柱溫[（60±5）℃]、進樣口溫度[（200±10）℃]、檢測器溫度[（250±10）℃]對試驗的影響，結(jié)果顯示上述條件的變動對結(jié)果影響較小，表明該方法耐用性良好。

取吲哚-5-甲醛樣品（批號：20190801）約0.4 g，精密稱定。按“2.8”項下100%水平配制的樣品溶液，分別考察起始柱溫[（60±5）℃]、進樣口溫度[（200±10）℃]、檢測器溫度[（250±10）℃]條件對試驗結(jié)果的影響，結(jié)果加樣溶液中乙醇、甲苯、吡啶、DMF、DMA、乙酸加樣回收率的RSD分別為1.1%、0.73%、1.8%、1.5%、2.6%、2.4%，結(jié)果顯示試驗條件的變動對測定結(jié)果影響較小，該方法耐用性良好。

2.10 樣品測定

取3 批吲哚-5-甲醛，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，計算各殘留溶劑的含量，結(jié)果見表2。樣品中有乙醇與吡啶殘留，但含量均未超過《中國藥典》2020年版四部通則[14]中對各殘留溶劑的限度規(guī)定要求。

表2 樣品中殘留溶劑測定結(jié)果(n ＝3，%)Tab 2 Determination of residual solvents in samples (n ＝3，%)

3 討論

3.1 進樣方式的選擇

本法測定的6 種有機溶劑的沸點差別較大，其中DMF 與DMA 的沸點較高，不適合采用頂空進樣。為了同時測定6 種殘留溶劑，本試驗采用溶液直接進樣方式，該法簡單直接，適合于不同沸點溶劑的分析測定。

3.2 溶劑的選擇

DMSO 沸點較高，在本方法中不會干擾其他有機溶劑的測定，且與本試驗所測定的6 種有機溶劑均能互溶，因此選擇DMSO 作為溶劑。

3.3 色譜條件的考察

本試驗選用DB-WAX 毛細管色譜柱（固定液為聚乙二醇；30 m×0.25 mm，0.25 μm），此色譜柱對極性有機溶劑有較好的適用性。待測成分沸點差別較大，為了使各成分之間良好分離，采用程序升溫的方法，并對升溫條件進行優(yōu)化，6種有機溶劑均得到良好分離，互不干擾。相比于HP-FFAP（固定液為硝基對苯二甲酸改性的聚乙二醇，30 m×0.25 mm，0.25 μm），DMF、DMA等物質(zhì)的峰形在DB-WAX 柱上更佳。