基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)聯(lián)合GEO芯片探討金雀異黃素治療子宮內(nèi)膜癌的機制

徐信　薛曉鷗　宗春曉　王謙　邵晨曦　范夢騰　謝偉

〔摘要〕 目的 采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)聯(lián)合GEO數(shù)據(jù)庫差異基因分析的方法，探討金雀異黃素（genistein）治療子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma， EC）的潛在作用機制。方法 依托TCMSP等8個數(shù)據(jù)庫獲得金雀異黃素的靶標(biāo)基因，并通過Uniport蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫進行名稱規(guī)范;然后，運用GEO數(shù)據(jù)庫獲取子宮內(nèi)膜癌GSE17025數(shù)據(jù)集，并運用R語言獲取其差異表達(dá)的基因;進而，作金雀異黃素靶標(biāo)基因與子宮內(nèi)膜癌差異基因的映射集合，再將交集靶點提交至STRING平臺獲得蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，并采用Cytoscape 3.7.2進行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，篩選重要靶點;最后，對交集靶點進行GO注釋和KEGG富集分析。結(jié)果 金雀異黃素作用于70個交集靶點發(fā)揮對子宮內(nèi)膜癌的治療作用，其中重要靶點有STAT3、BIRC5、MKI67等基因，主要富集在IL-17（IL-17 signaling pathways）、p53（p53 signaling pathway）、TGF-β（TGF-beta signaling pathway）等多條信號通路上。結(jié)論 金雀異黃素通過多靶點、多途徑治療子宮內(nèi)膜癌，其可能是通過IL-17、p53、TGF-β等信號通路發(fā)揮治療作用。此研究為深入闡釋金雀異黃素治療子宮內(nèi)膜癌的臨床研究及進一步實驗驗證提供了思路。

〔關(guān)鍵詞〕 金雀異黃素;子宮內(nèi)膜癌;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);分子作用機制;GEO芯片

〔中圖分類號〕R285? ? ? ?〔文獻標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2020.12.022

〔Abstract〕 Objective To explore the potential mechanism of genistein in the treatment of endometrial carcinoma （EC） by network pharmacology and differentially expressed genes （DEGs） of GEO chip. Methods The TCMSP database and other 7 databases were used to obtain the target genes of genistein， and the target protein name was transformed into the target gene name by the Uniport protein database; the GEO chip was used to obtain the EC GSE17025 data set， and the R language was used to obtain its differentially expressed genes; furthermore， the mapping collection of genistein target genes and EC differential genes was made， and then the intersection targets were submitted to the STRING platform to obtain the protein interaction network. The Cytoscape 3.7.2 was used to perform network topology analysis to screen important targets; finally， GO annotation and KEGG enrichment analysis were performed on the intersection target. Results Genisteine acted on 70 intersection targets to play a therapeutic role on EC. Among them， STAT3， BIRC5 and MKI67 and other genes were important targets， which were enriched in IL-17 signaling pathways， p53 signaling pathway and TGF-β signaling pathway. Conclusion Genistein can treat EC by multi-target and multi-channel， which may play a therapeutical effect through IL-17， p53， TGF-β and other signal pathways. This study provides an idea for in-depth explanation of the clinical research and further experimental verification of genistein in the treatment of EC.

〔Keywords〕 genistein; endometrial carcinoma; network pharmacology; molecular mechanism; GEO chip

子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma， EC），又稱子宮體癌，是來源于子宮內(nèi)膜的上皮性惡性腫瘤[1]。據(jù)美國癌癥協(xié)會2019年公布的最新數(shù)據(jù)，子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率仍高居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第一位[2]，發(fā)病率呈上升態(tài)勢，年齡日趨年輕化，死亡率也呈逐步上升趨勢[3]，手術(shù)治療仍是其治療的主要手段，然而，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，同時也嚴(yán)重破壞了婦女的生育力[4]。在我國全面開放二胎政策及發(fā)病年齡日趨年輕的背景下，越來越多的患者迫切要求保留生育力[5]，目前對于EC的防治尚缺乏有效的措施和藥物，因此，尋找與EC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的潛在靶標(biāo)及安全有效的靶向治療藥物具有重要的價值。

EC的發(fā)生、發(fā)展是極其復(fù)雜的病理生理過程，并受多因素、多途徑調(diào)節(jié)。近年來，隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展，大量基因表達(dá)信息得以挖掘[6]?；虮磉_(dá)數(shù)據(jù)庫（Gene Expression Omnibus database， GEO）存儲了海量的高通量測序微陣列信息。通過對GEO的目標(biāo)數(shù)據(jù)進行挖掘、整合及分析，能快速有效篩選與疾病相關(guān)的差異表達(dá)基因（differentially expressed genes， DEGs），為各種疾病的研究提供重要線索[7-8]。

金雀異黃素（genistein， GST），又名染料木黃酮，是大豆來源的異黃酮，它具有弱的雌激素作用，具有緩解更年期癥狀、抗腫瘤等活性[9-10]。本課題組在前期體外實驗中發(fā)現(xiàn)[11-12]，GST能通過調(diào)節(jié)ERα及ERβ的表達(dá)，改變ERα/ERβ的比例，從而抑制子宮內(nèi)膜癌HEC-1B及Ishikawa細(xì)胞株增殖，誘導(dǎo)其凋亡，但隨著研究的深入，高劑量的GST并不遵循雌激素受體途徑發(fā)揮抑瘤作用[13]，與此同時，臨床的其他報道也都大多集中在單靶點、單機制的境況。故本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合GEO數(shù)據(jù)庫差異基因的分析方法，針對金雀異黃素治療EC的靶點和機制進行探索，從微觀角度闡釋其多靶點、多環(huán)節(jié)、多效應(yīng)的科學(xué)內(nèi)涵。

1 資料與方法

1.1? 金雀異黃素潛在靶標(biāo)預(yù)測及ADME特性

以金雀異黃素的英文關(guān)鍵詞“genistein”或其2D Structure，對8個數(shù)據(jù)庫進行全面系統(tǒng)地檢索，進而獲得金雀異黃素的作用靶標(biāo)。8個數(shù)據(jù)庫分別為中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺（TCMSP， http：//tcmspw.com/tcmsp.php）、Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫（http：//www.swisstargetprediction.ch/）、中醫(yī)百科全書（ETCM， http：//www.tcmip.cn/ETCM/）、美國比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫（CTD， http：//ctdbase.org/）、DrugBank數(shù)據(jù)庫（https：//go.drugbank.com/）、STITCH數(shù)據(jù)庫（http：//stitch.embl.de/）、ZINK數(shù)據(jù)庫（https：//zinc.docking.org/）、藥物靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫（TTD， http：//bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/）。各個數(shù)據(jù)庫搜集的靶點存在命名不規(guī)范的問題，進一步利用UniProt蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，將獲得的蛋白名稱轉(zhuǎn)化為其官方名稱（Official Symbol）并限定物種為“Homo Sapiens”。

ADME是指藥物發(fā)揮藥效，需克服藥代動力學(xué)屏障，所包含的吸收（absorption）、分布（distribution）、代謝（metabolism）、排泄（excretion）過程[14]。采用TCMSP數(shù)據(jù)庫的ADME預(yù)測功能，得到金雀異黃素的藥代動力學(xué)特性，包括口服生物利用度（oral bioavailability， OB）、類藥性（Drug-likeness， DL）、小腸上皮細(xì)胞滲透性（Caco-2 permeability）等[15]。其中，DL是藥物設(shè)計中的一個定性概念，用于評估化合物是否有可能成藥，有助于優(yōu)化藥物動力學(xué)和藥物性質(zhì)，如溶解度和化學(xué)穩(wěn)定性[16]，一般認(rèn)為DL>0.18即具有很好的類藥性。

1.2? GEO 數(shù)據(jù)庫提取子宮內(nèi)膜癌差異表達(dá)基因

以美國國家生物技術(shù)信息中心（National Center for Biotechnology Information Search database， NCBI）的基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫（Gene Expression Omnibus database，

GEO）檢索子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)數(shù)據(jù)集，設(shè)置“Organism”為“Homo sapiens”，經(jīng)過瀏覽題目、設(shè)計方案及樣本信息等，最終確定由Risinger JH等提交的GSE17025基因數(shù)據(jù)集，該數(shù)據(jù)集納入子宮內(nèi)膜癌患者樣本91例，以12例正常的子宮內(nèi)膜樣本（取自絕經(jīng)后的受試者）作為對照。進一步運用R語言的limma軟件包[17]（http：//www.bioconductor.org/packages/release/bioc/html/limma.html）進行差異基因表達(dá)的分析，篩選標(biāo)準(zhǔn)：adjust P<0.01且|logFC|≥2。

1.3? PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?/p>

為明晰差異基因與金雀異黃素靶點之間的相互作用，利用R語言將二者取交集并繪制維恩圖，從而確定二者的映射靶點，并提交至STRING 11.0在線平臺（https：//string-db.org），生物種類設(shè)置為“Homo sapiens”，最小互相作用閾值設(shè)定為“high confidence”（置信度>0.7），其余為默認(rèn)設(shè)置，構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（protein-protein interaction，PPI）模型[18]。得到的PPI網(wǎng)絡(luò)通過Cytoscape 3.7.2軟件進行可視化呈現(xiàn)及分析，使用內(nèi)置的“CytoNCA”模塊計算網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，并以連接度值（Degree）作為節(jié)點重要性的量化參考，進而篩選其重要靶標(biāo)。

1.4? GO功能富集分析

將金雀異黃素與內(nèi)膜癌差異基因的交集靶點，利用生物學(xué)信息注釋數(shù)據(jù)庫[19]（DAVID， https：//david.

ncifcrf.gov/summary.jsp， Version 6.8）進行GO富集分析（P<0.01），尋找出參與調(diào)控的信號通路及相關(guān)生物學(xué)過程，并以R語言繪制條形圖及氣泡圖。其中GO富集分析涵蓋分子功能（molecular function， MF），細(xì)胞組分（cellular component， CC）和生物過程（biological proess， BP）3個部分[20]。

1.5? KEGG通路富集分析

通過Cytoscape 3.7.2中的ClueGO插件，對金雀異黃素與內(nèi)膜癌差異基因的交集靶點進行KEGG信號通路（P<0.05）富集分析。

2 結(jié)果

2.1? 金雀異黃素潛在靶標(biāo)預(yù)測及ADME特性

通過TCMSP、Swiss Target Prediction、ETCM等8個數(shù)據(jù)庫，全面細(xì)致地獲得金雀異黃素的潛在靶標(biāo)，其中TCMSP獲得97個，Swiss Target Prediction獲得101個，ETCM獲得56個，DrugBank獲得13個，STICH獲得10個，ZINK獲得21個，CTD獲得830個，TTD獲得1個，靶標(biāo)名稱經(jīng)由UniProt蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫規(guī)范，及合并去重最終為879個。并基于TCMSP數(shù)據(jù)庫獲得金雀異黃素DL、Caco-2、OB等ADME參數(shù)信息，結(jié)果顯示其DL值為0.21。見圖1。

2.2? 子宮內(nèi)膜癌差異表達(dá)基因

基于GEO數(shù)據(jù)庫獲得GSE17025基因微陣列，與健康對照組比較，子宮內(nèi)膜癌患者中930個基因存在差異表達(dá)，其中，580個表達(dá)上調(diào)（圖中紅色三角），350個表達(dá)下調(diào)（圖中綠色方形）。見圖2。

2.3? PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?/p>

將挖掘得到的差異表達(dá)基因靶點與金雀異黃素基因靶點，利用R語言相映射篩選出70個交集靶點，見圖3。進而將交集靶點信息提交至STRING 數(shù)據(jù)庫，設(shè)置生物種類為“Homo sapiens”，最小互相作用閾值設(shè)定為“high confidence”（置信度>0.7），得到的PPI網(wǎng)絡(luò)圖通過Cytoscape 3.7.2軟件及內(nèi)置的CytoNCA模塊進行可視化呈現(xiàn)及網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?。此PPI網(wǎng)絡(luò)中共涉及50個節(jié)點，142條邊，進一步根據(jù)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)對節(jié)點重要度進行排序，以Degree>10為篩選條件，排名依次為STAT3、BIRC5、MKI67、MMP9、CDC20、CCNB2、NCAPG、CENPF、ASPM、KIF20A、PBK、TOP2A、DLGAP5、RRM2，這些蛋白與其他蛋白相互作用更強，在網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，說明金雀異黃素可能主要通過這些蛋白發(fā)揮對子宮內(nèi)膜癌的潛在治療作用。見圖4。

2.4? GO功能富集分析

將預(yù)測的金雀異黃素治療子宮內(nèi)膜癌的70個交集靶點，提交至DAVID數(shù)據(jù)庫中進行GO功能富集分析，設(shè)置pvalue≤0.01得到條目70條，涵蓋生物過程（BP）44條，細(xì)胞組成（CC）10條，分子功能（MF）17條。GO生物學(xué)功能富集分析表明了金雀異黃素治療子宮內(nèi)膜癌的藥效機制，主要涉及RNA聚合酶II啟動子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、凋亡、凋亡過程的負(fù)調(diào)控、藥物反應(yīng)等生物過程;細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等重要的細(xì)胞組分;蛋白結(jié)合、酶結(jié)合等分子功能。以R語言將GO富集分析結(jié)果繪制條形圖，僅展示BP、CC、MF排名前10的生物學(xué)功能，見圖5。

2.5? KEGG通路富集分析

將預(yù)測的金雀異黃素治療EC的70個交集靶點，以Cytoscape 3.7.2中的ClueGO插件進行KEGG通路富集分析，設(shè)置pvalue≤0.05，得到21條相關(guān)通路，從圖中可以看出IL-17（IL-17 signaling pathways）、p53（p53 signaling pathway）、TGF-β（TGF-beta signaling pathway）信號通路為其主要富集的通路，所涵蓋交集靶點的數(shù)目較多且P值較低，說明金雀異黃素治療子宮內(nèi)膜癌可能主要通過這些信號通路發(fā)揮調(diào)控作用，其中IL-17 signaling pathways不僅涵蓋交集靶標(biāo)數(shù)量最多，且與其他信號通路交互作用也最多。見圖6，表1。

3 討論

天然產(chǎn)物是發(fā)掘抗癌藥物的重要源泉，紫杉醇、喜樹堿、長春堿及人參皂苷Rg3等植物源性化學(xué)分子已廣泛應(yīng)用于癌癥臨床治療[21]。金雀異黃素是自然界廣泛分布的天然異黃酮類物質(zhì)，多項研究[9，11-12]表明其抗癌活性明顯，本課題組前期的基礎(chǔ)研究也發(fā)現(xiàn)，金雀異黃素通過上調(diào)ERα、下調(diào)ERβ的表達(dá)，進而升高ERα/ERβ的比值，發(fā)揮抑制子宮內(nèi)膜癌HEC-1B及Ishikawa細(xì)胞株的活力和增殖。高偉敏等[22]的研究表明，金雀異黃素可在腫瘤細(xì)胞中減少Bcl-2蛋白表達(dá)的同時上調(diào)Bax的表達(dá)，使Bax/Bcl-2比值顯著增高，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡[6]。研究熱點多集中在單一機制的體外基礎(chǔ)實驗上，不足以系統(tǒng)揭示金雀異黃素抗子宮內(nèi)膜癌的復(fù)雜機制。故本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)聯(lián)合GEO的差異基因分析的方法，試圖闡釋金雀異黃素治療EC的靶點及機制?，F(xiàn)討論如下：

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作為新興藥理學(xué)研究方法，它涵蓋了系統(tǒng)生物學(xué)、計算生物學(xué)和網(wǎng)絡(luò)分析等多學(xué)科技術(shù)，具有整體性及系統(tǒng)性的特點[23]，顛覆了既往單靶點機制通路難以詮釋藥物多靶點協(xié)同作用的狀況?；虻牟町惐磉_(dá)分析是在轉(zhuǎn)錄組學(xué)水平上鑒別組織間或細(xì)胞基因表達(dá)差異的技術(shù)，是生物信息學(xué)領(lǐng)域重要的分析手段之一[24]。本研究基于開源GEO數(shù)據(jù)庫，經(jīng)匹配篩選后獲得編號為GSE17025高通量數(shù)據(jù)集，該數(shù)據(jù)集來源于91個子宮內(nèi)膜癌樣本和12個正常內(nèi)膜樣本，經(jīng)以R語言分析后，獲得930個差異表達(dá)的基因。本數(shù)據(jù)集樣本量大，且來源于人體組織，更真實準(zhǔn)確的子宮內(nèi)膜癌患者差異基因的表達(dá)信息。

金雀異黃素經(jīng)TCMSP數(shù)據(jù)庫獲得其ADME參數(shù)，王永華等[15]通過計算TCMSP數(shù)據(jù)庫中所包含的全部化學(xué)成分的類藥性，得出DL>0.18的分子具有較好的類藥性，由圖1（A）可知金雀異黃素的DL值為0.21，表明其可以作為一個良好的藥物候選分子。

進一步通過對8個數(shù)據(jù)庫檢索金雀異黃素的潛在靶標(biāo)，各個數(shù)據(jù)庫通過文本挖掘、藥效集團匹配、疾病臨床資料、實驗驗證等知識發(fā)現(xiàn)技術(shù)獲得靶標(biāo)，通過以上獲得了較為細(xì)致且全面879個金雀異黃素的靶標(biāo)。進而通過R語言獲得差異基因與金雀異黃素70個交集靶點，經(jīng)構(gòu)建的PPI網(wǎng)絡(luò)及CytoNCA模塊進行拓?fù)鋮?shù)分析，金雀異黃素可能主要通過STAT3、BIRC5、MKI67、MMP9、CDC20、CCNB2、NCAPG、CENPF、ASPM、KIF20A、PBK、TOP2A、DLGAP5、RRM2等基因發(fā)揮對子宮內(nèi)膜癌的潛在治療作用。其中，STAT3、BIRC5、MKI67、MMP9、CDC20、ASPM和TOP2A已被證明與EC密切相關(guān)。STAT3[25]、MMP9[26]在子宮內(nèi)膜癌中呈現(xiàn)高表達(dá)，發(fā)揮癌基因的功能，且與病理分級、臨床分期等密切相關(guān)。BIRC5是Survivin的編碼基因，Survivin是近年來發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白，促進腫瘤的增殖并抑制其凋亡[27]，但BIRC5與子宮內(nèi)膜癌的直接機制尚未報道。MKI67即Ki67，多項報道其在EC患者呈高表達(dá)，對子宮內(nèi)膜癌的診斷及預(yù)后具有重要意義[28-30]。ASPM[31]、 CDC20[32]可以作為臨床獨立預(yù)測的預(yù)后指標(biāo)及治療的潛在靶基因。Fuminori Ito[33]發(fā)現(xiàn)TOP2A過表達(dá)的患者預(yù)后較不表達(dá)TOP2A的患者差，并且TOP2A可能是接受輔助紫杉醇-鉑類方案治療EC的生物標(biāo)志物。并且回溯GSE17025基因微陣列，以上7個基因也均在EC中表達(dá)上調(diào)，與本次研究結(jié)果相符合。但CCNB2、NCAPG、CENPF、KIF20A、PBK、DLGAP5和RRM2雖與多種腫瘤的發(fā)生及進展密切相關(guān)，但與EC的關(guān)系尚不明確，值得進一步深入研究。

此外GO功能富集分析表明金雀異黃素治療EC藥效機制，主要涉及RNA聚合酶II啟動子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、凋亡、凋亡過程的負(fù)調(diào)控、藥物反應(yīng)等生物過程;細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等重要的細(xì)胞組分;蛋白結(jié)合、酶結(jié)合等分子功能。ClueGO的KEGG通路富集結(jié)果表明，金雀異黃素主要通過IL-17（IL-17 signaling pathways）、p53（p53 signaling pathway）、TGF-β（TGF-beta signaling pathway）等信號通路發(fā)揮藥效機制。其中，IL-17 signaling pathways不僅涵蓋交集靶標(biāo)數(shù)量最多，且與其他信號通路交互作用也最多，如Toll樣受體、TNF和AGE-RAGE等信號通路，多項研究亦發(fā)現(xiàn)，IL-17在EC呈高表達(dá)[34-36]， 并能使HEC-1-B細(xì)胞的活力、遷移和侵襲明顯增強。p53蛋白[37-39]主要存在于子宮內(nèi)細(xì)胞核內(nèi)部，結(jié)構(gòu)上含有脯氨酸及多重絲氨酸結(jié)構(gòu)，其能夠通過結(jié)合下游糖蛋白配體，進而促進信號通路的激活，促進子宮內(nèi)內(nèi)膜癌細(xì)胞的持續(xù)性浸潤和轉(zhuǎn)移過程，突變的p53可直接反映子宮內(nèi)膜癌的惡性程度，可作為獨立的生物學(xué)標(biāo)志物。TGF-β[40-41]是作用于上皮細(xì)胞的重要生長因子之一，具有多重生理功能，在調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、遷移和凋亡中扮演重要角色，在腫瘤的惡性生物學(xué)行為中的起雙向調(diào)節(jié)作用，在EC發(fā)展的早期主要發(fā)揮抑制性效應(yīng)，而在EC的進展期及晚期主要發(fā)揮促進作用，主要表現(xiàn)為促進腫瘤細(xì)胞增殖、突變，抑制機體抗腫瘤免疫反應(yīng)等。

綜上，本研究運用現(xiàn)代信息技術(shù)，將隱性的知識顯性化，系統(tǒng)挖掘金雀異黃素治療EC的作用靶點及潛在作用機制，為進一步深入闡釋其機制，及臨床研究和實驗驗證提供了思路。但基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、GEO數(shù)據(jù)庫差異基因分析技術(shù)本身的局限性等多方面因素，得出的結(jié)論有待后續(xù)臨床及實驗的進一步驗證與完善。

參考文獻

[1] ZHU Y M， SHI L， CHEN P， et al. Identification of six candidate genes for endometrial carcinoma by bioinformatics analysis[J]. World Journal of Surgical Oncology， 2020， 18（1）： 161.

[2] MILLER K D， NOGUEIRA L， MARIOTTO A B， et al. Cancer treatment and survivorship statistics， 2019[J]. CA： a Cancer Journal for Clinicians， 2019， 69（5）： 363-385.

[3] GAO L L， NIE X， ZHANG W C， et al. Identification of long noncoding RNA RP11-89K21.1 and RP11-357H14.17 as prognostic signature of endometrial carcinoma via integrated bioinformatics analysis[J]. Cancer Cell International， 2020， 20（6）： 7-34.

[4] TERZIC M， NORTON M， TERZIC S， et al. Fertility preservation in endometrial cancer patients： Options， challenges and perspectives[J]. Ecancermedicalscience， 2020， 14： 1030.

[5] 陳子江.“二孩”生育政策后再生育的臨床思考[J].山東大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2017，55（1）：1-4.

[6] ALBERTSON D G， PINKEL D. Genomic microarrays in human

genetic disease and cancer[J]. Human Molecular Genetics， 2003， 12（suppl 2）： 145-152.

[7] 全東令，陳? 凱，管怡晴，等.乳腺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移相關(guān)差異基因GEO芯片分析[J].中華腫瘤防治雜志，2020，27（1）：27-34，46.

[8] 向? 虹，陽小胡，艾亮霞，等.脫發(fā)相關(guān)差異表達(dá)基因的生物信息學(xué)分析[J].遺傳，2020，42（2）：172-182.

[9] 李? 晶，徐海榮.對金雀異黃素抗腫瘤作用的研究[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2019，17（18）：36-38.

[10] 盛連兵，孫? 凱，劉海萍，等.金雀異黃素調(diào)控Egr1/PTEN信號通路誘導(dǎo)卵巢癌SKOV3細(xì)胞凋亡的實驗研究[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志，2017，18（4）：341-344.

[11] 劉小麗，薛曉鷗，唐炳華，等.金雀黃素對HEC-1B細(xì)胞增殖及熒光素酶報告基因表達(dá)影響的研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2011， 34（4）：236-240.

[12] 王? 越，薛曉鷗.染料木黃酮抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1B增殖作用的研究[J].錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2006，27（5）：34-36.

[13] 程? 冉，劉小麗，薛曉鷗，等.高、低濃度金雀異黃素對Ishikawa細(xì)胞生長及ERα/ERβ蛋白比值的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2018，

41（11）：935-942.

[14] 章? 亮，陳澤慧，陳韓英，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的白屈菜抗腫瘤分子機制研究[J].中草藥，2018，49（3）：646-657.

[15] RU J L， LI P， WANG J N， et al. TCMSP： a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines[J]. Journal of Cheminformatics， 2014， 6（1）：1-6.

[16] 梁學(xué)振，駱? 帝，許? 波，等.葛根素治療骨質(zhì)疏松癥的生物信息學(xué)分析[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2019，37（11）：2628-2631.

[17] RITCHIE M E， PHIPSON B， WU D， et al. Limma Powers differential expression analyses for RNA-sequencing and microarray studies[J]. Nucleic Acids Research， 2015， 43（7）： e47.

[18] SZKLARCZYK D， GABLE A L， LYON D， et al. STRING v11： Protein-protein association networks with increased coverage， supporting functional discovery in genome-wide experimental datasets[J]. Nucleic Acids Research， 2019， 47（D1）： D607-D613.

[19] HUANG D W， SHERMAN B T， LEMPICKI R A. Systematic and integrative analysis of large gene lists using DAVID bioinformatics resources[J]. Nature Protocols， 2009， 4（1）： 44-57.

[20] 馬曉茹，周維維，張閃閃，等.基于系統(tǒng)藥理學(xué)方法篩選抗急性髓系白血病的中藥活性分子[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2017，23（5）： 196-202.

[21] 李? 瀅，張紫薇，李曉巖.新型天然生物堿抗癌機制研究進展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2016，28（11）：1850-1855.

[22] 高偉敏，檀艷麗，薛? 娟，等.Genistein對結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29增殖、凋亡的影響及機制探討[J].山東醫(yī)藥，2012，52（14）：31-32.

[23] 秦春艷.miR-129-5p和STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2020，28（16）：2870-2875.

[24] 華金仁，曾? 丹，潘? 玫.MMP9在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代醫(yī)院，2019，19（11）：1697-1699，1702.

[25] 別延紅，李? 納，吳又明，等.轉(zhuǎn)錄因子增強子結(jié)合蛋白-4基因沉默對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞凋亡的影響[J].山東醫(yī)藥，2017，57（2）：5-9.

[26] 王彥秋，郟愛華，段麗艷.子宮內(nèi)膜癌中FasL和Ki67的表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2019，27（11）：1979-1983.

[27] 高? 雅.Ki67蛋白與HAND2蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義[D].太原：山西醫(yī)科大學(xué)，2019.

[28] 趙? 丹.Ki67、p53在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性研究及其臨床意義[D].邯鄲：河北工程大學(xué)，2019.

[29] ZHOU J W， WANG H， SUN W， et al. ASPM is a predictor of overall survival and has therapeutic potential in endometrial cancer.[J]. American journal of translational research， 2020， 12（5）： 1942-1953.

[30] BERG A， GULATI A， YTRE-HAUGE S， et al. Preoperative imaging markers and PDZ-binding kinase tissue expression predict low-risk disease in endometrial hyperplasias and low grade cancers[J]. Oncotarget， 2017， 8（40）： 68530-68541.

[31] ITO F， FURUKAWA N， NAKAI T. Evaluation of TOP2A as a predictive marker for endometrial cancer with taxane-containing adjuvant chemotherapy[J]. International Journal of Gynecological Cancer： Official Journal of the International Gynecological Cancer Society， 2016， 26（2）： 325-330.

[32] 唐婷婷，趙曼曼.調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及白細(xì)胞介素17在子宮內(nèi)膜癌患者中的表達(dá)及意義[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2019，57（27）：33-35.

[33] 佟鳳嬌，馬思琪，周? 峰，等.Interleukin-17、Insulin對子宮內(nèi)膜癌HEC-1-A細(xì)胞增殖和遷移的影響[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2019，46（12）：2287-2291.

[34] 肖? 慶，劉? 莉，胡雅君，等.IL-17通過抑制miR-195-5p表達(dá)促進子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移[J].中國病理生理雜志，2019，35（6）： 1063-1068.

[35] STAVROPOULOS A， VARRAS M， VASILAKAKI T， et al. Expression of anti-apoptotic protein survivin in human endometrial carcinoma： Clinical and pathological associations as a separate factor and in combination with concomitant PTEN and p53 expression[J]. Oncology Letters， 2020， 20（2）： 1033-1054.

[36] LIU L， YU Z Y， YU T T， et al. A Slug-dependent mechanism is responsible for tumor suppression of p53-stabilizing compound CP-31398 in p53-mutated endometrial carcinoma[J]. Journal of Cellular Physiology， 2020， 235（11）： 8768-8778.

[37] 汪? 泉.p53和Ki-67與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征的關(guān)系研究[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2020，26（21）：163-164.

[38] 秦廷芹，袁? 芳，王? 蓁，等.IL-23與TGF-β在子宮內(nèi)膜癌患者癌組織及外周血中的表達(dá)及其意義[J].精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)雜志，2020，35（3）：230-233，236.

[39] 端? 婭，陳? 穎.轉(zhuǎn)化生長因子β1在子宮內(nèi)膜異位癥和子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)[J].云南醫(yī)藥，2019，40（2）：164-166.