• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    QuEChERS-dSPE-UPLC-MS/MS篩查中藥材地龍中41種獸藥殘留

    2021-04-19 11:37:08許曉輝王小喬黨子龍朱仁愿張虹艷李晨曦潘秀麗
    中國獸藥雜志 2021年3期
    關鍵詞:源性中藥材獸藥

    許曉輝,王小喬*,黨子龍,朱仁愿,張虹艷,李晨曦,潘秀麗,李 赟

    (1.蘭州市食品藥品檢驗檢測研究院,蘭州 730050; 2. 蘭州大學第一醫(yī)院藥劑科,蘭州 730000)

    中藥材分為植物源性中藥材和動物源性中藥材,動物源性中藥材是指動物整體、器官、生理或病理產物等供藥用的部分?!吨袊幍洹?020年版收載了55種動物源性中藥材,常見的有麝香、牛黃、地龍、海螵蛸、鹿角等[1-3]。然而,多數(shù)動物源性中藥材大多數(shù)是以農戶為單位人工養(yǎng)殖,在養(yǎng)殖過程中,缺乏對中藥材外源性風險因子的認識,使用抗菌劑、抗生素和激素等獸藥用于動物疾病防治、促進生長發(fā)育和提高飼料轉化率。不合理使用獸藥使藥物在動物體內難以排泄,逐漸積累,患者通過服用中藥材致使獸藥轉移到體內,對人體器官造成危害,嚴重威脅到身體健康和生命安全。目前,動物源性產品獸藥殘留已成為全球關注的焦點,為保護公眾健康,大多數(shù)國家和地區(qū)對動物源性產品中獸藥殘留進行監(jiān)管,并發(fā)布了相關法規(guī)制度。我國農業(yè)農村部、國家衛(wèi)生健康委員會和國家市場監(jiān)督管理總局在2019年聯(lián)合發(fā)布了《GB 31650-2019 食品安全國家標準 食品中獸藥最大殘留限量》[4],該標準規(guī)定了動物源性食品中獸藥殘留的最大限值,但不涉及動物源性中藥材;US FDA于2015年6月通過獸藥飼料指令頒布了管控微生物藥物使用的法規(guī)[5];歐盟頒布了法規(guī)2014/0247(COD),旨在達成影響評估所確定的目標,并解決抗生素耐藥性帶來的公共健康風險問題[6]。從國家監(jiān)管部門對動物源性食品中獸藥殘留的市場監(jiān)督抽檢結果來看,獸藥殘留仍是影響動物源性食品質量安全的重要風險因子[7],因此,對于與動物源性食品來源相似的動物源性中藥材,同樣存在獸藥殘留問題。近年來,多類別多殘留分析方法因為可以擴大檢測范圍并提高實驗室效率而在檢測中越來越受青睞[8-10],因此,本文建立了一種超高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質譜法測定地龍中多類別多組分獸藥殘留的方法,根據化合物質譜響應、峰型以及加標回收率,淘汰不出峰、響應低及加標回收率不理想的獸藥,最終篩選出適合本方法良好測定的7大類41種獸藥,測定項目涉及到磺胺類、喹諾酮類、硝基咪唑類、抗病毒類、糖皮質激素類、非甾體抗炎類和鎮(zhèn)靜安眠類。

    1 材料與方法

    1.1 儀器 1290-6460超高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀:配有電噴霧離子源(美國安捷倫有限公司);分析天平:感量0.1 mg和0.01 g(梅特勒);真空泵(天津市津騰實驗設備有限公司);移液器:20 μL、100 μL、1 mL(德國Eppendorf公司);渦旋混合器(美國Scientific);離心機(德國Eppendorf公司);超聲波清洗器(寧波新芝有限公司);容量瓶(天玻儀器有限公司)。

    1.2 試劑 超純水(美國Millipore公司);乙腈(色譜純,德國Merck公司),甲酸、乙酸銨(色譜純,東京化成工業(yè)株式會社);dSPE EMR-Lipid凈化管(美國安捷倫公司);氯化鈉(國藥集團化學試劑有限公司); 硫酸鈉(國藥集團化學試劑有限公司);乙二胺四乙酸二鈉(國藥集團化學試劑有限公司);磷酸氫二鈉(國藥集團化學試劑有限公司);檸檬酸(國藥集團化學試劑有限公司)。對照品,恩諾沙星、地美硝唑、磺胺甲惡唑、磺胺氯噠嗪、磺胺喹沙啉、磺胺甲基嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、金剛烷胺均購于Dr.Ehrenstorfer GmbH,環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、地塞米松、可的松、曲安奈德、氟米松、甲硝唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺嘧啶、甲氧芐啶、保泰松、吲哚美辛、吡羅昔康、氨基比林、三唑侖、硝西泮、勞拉西泮、馬來酸咪達唑侖、阿普唑侖、氯硝西泮、艾司唑侖、奧沙西泮、地西泮均購自中國食品藥品檢定研究院,洛硝噠唑、羥基甲硝唑、羥甲基甲硝咪唑購自WITEGA,沙拉沙星、磺胺間甲氧嘧啶均購自Bepure,金剛乙胺購自TRC,具體信息見表1。供試樣品購買于中藥材市場和藥店。

    表1 對照品信息

    1.3 溶液制備

    1.3.1 EDTA緩沖液制備 檸檬酸8.4 g,磷酸氫二鈉7.1 g,乙二胺四乙酸二鈉 19.5 g,溶于650 mL水中,超聲溶解,即得。

    1.3.2 對照溶液制備 標準儲備溶液:精密稱取41種獸藥殘留對照品10.0 mg,分別置于10 mL棕色容量瓶中,用乙腈溶解,并定容至刻度,配制成濃度為 1 mg/mL的儲備液,置 4 ℃冷藏備用?;旌蠘藴手虚g溶液:分別準確吸取上述標準儲備溶液0.025 mL至25 mL棕色容量瓶中,用乙腈稀釋,并定容至刻度,配制成濃度為 1 μg/mL的混合標準中間液,置 4 ℃冷藏備用。混合標準使用溶液:準確移取上述混合標準中間溶液1.00 mL置于10 mL棕色容量瓶,用乙腈稀釋,并定容至刻度,配制成濃度為 100 ng/mL的混合標準使用溶液。

    1.3.3 陰性樣品溶液的制備 取空白樣品按照“1.4.1供試樣品前處理方法”步驟同法制成空白基質樣品溶液。

    1.4 實驗方法

    1.4.1 供試樣品前處理方法 提?。簻蚀_稱取干燥的供試樣品1.00 g于50 mL離心管中,加入3 mL EDTA緩沖液和陶瓷均質子,渦旋1 min,準確加入10 mL乙腈,渦旋1 min,超聲提取5 min,加入1 g 氯化鈉和4 g 硫酸鈉,充分渦旋2 min,5000 r/min離心10 min,取上清液待凈化。凈化:準確吸取提取步驟所得上清液2.00 mL于 dSPE EMR-Lipid凈化管中,渦旋1 min,5 000 r/min離心10 min,取上層清液過0.22 μm濾膜至進樣瓶中,上液質聯(lián)用儀測定。

    1.4.2 色譜條件 色譜柱:ACQUITY BEH C18柱(1.7 μm,2.1 mm×100 mm);流速:0.3 mL/min;柱溫:35 ℃;進樣量:2 μL;流動相:A為含0.1%甲酸-2 mmol/L乙酸銨的水溶液,B為含0.1%甲酸的乙腈溶液,梯度洗脫程序見表2。

    表2 梯度洗脫程序

    1.4.3 質譜條件 電噴霧離子源(ESI),正離子模式,動態(tài)多反應監(jiān)測(d-MRM),霧化氣N2,干燥氣流速8 L/min,噴霧電壓500 V,氣流溫度325 ℃,毛細管電壓4000V,鞘氣流速12 L/min,鞘氣溫度350 ℃;質譜條件見表3。

    表3 41種獸藥的質譜參數(shù)

    1.5 數(shù)據處理 采用 Agilent MassHunter 工作站軟件進行數(shù)據采集和分析,采用Excel進行數(shù)據統(tǒng)計與計算。

    2 結果與分析

    2.1 前處理條件選擇 本實驗考察的獸藥包括親水性和疏水性藥物,酸性、中性和堿性藥物,這些藥物在適宜的濃度大部分能夠在甲醇和乙腈中溶解,另一方面,流動相的有機相一般都是甲醇和乙腈,考慮到乙腈為中等極性溶劑,與大多數(shù)被測化合物極性接近,且乙腈能使蛋白質變性沉淀,因此選擇乙腈作為提取溶劑。QuEChERS萃取鹽包,內含 4 g 硫酸鈉和1 g 氯化鈉,通過鹽析使樣品中蛋白質沉淀并能去除極性干擾物。dSPE EMR-Lipid 選擇性去除高脂肪基質中主要脂類組分,能夠降低基質效應以增強質譜響應,同時有助于延長色譜柱使用壽命,同時無需活化、清洗和洗脫等傳統(tǒng)SPE步驟,簡化了凈化流程,節(jié)約了時間和成本。因此本實驗選擇使用QuEChERS萃取鹽包提取,dSPE EMR-Lipid 凈化。

    2.2 色譜質譜條件優(yōu)化

    2.2.1 色譜條件優(yōu)化 本實驗被分析的獸藥之間化學性質各異、極性不一,因此,選擇了適用于各種分析物通用的ACQUITY BEH C18超高效色譜柱。正離子模式下,在流動相中添加甲酸能夠提高目標化合物的離子化效率,添加乙酸銨能夠穩(wěn)定水相和改善峰型,因此試驗將乙腈、甲醇、甲酸、乙酸銨、水溶液進行組合,考察分離效果和靈敏度,選擇最佳流動相體系。結果表明,在水相中加入0.1%甲酸和2 mmol/L乙酸銨可以顯著改善峰型、提高靈敏度,在有機相中加入0.1%甲酸可以穩(wěn)定保留時間,提高重復性。最終本實驗采用含0.1%甲酸-2 mmol乙酸銨的水溶液與含0.1%甲酸的乙腈溶液作為流動相。

    2.2.2 質譜條件優(yōu)化 由于被分析獸藥種類眾多,采用MRM采集模式,受循環(huán)時間限,有些獸藥響應低,因此,本研究選擇將檢測獸藥分別配制成單個標準溶液,直接注入質譜儀,在正離子模式下,進行Scan掃描,確定母離子,后進行SIM掃描,選取豐度比最高且相對穩(wěn)定的2個碎片離子分別作為定性離子和定量離子,然后利用MassHunter采集軟件,以手動和自動兩種方式同時優(yōu)化定性和定量離子的碰撞能量、裂解電壓等參數(shù),建立MRM方法,為了建立d-MRM方法,首先在MRM方法下分析混合標樣,得到混合標樣數(shù)據文件,將該采集數(shù)據文件從安捷倫的MassHunter質譜采集工作站軟件導入自動生成d-MRM方法,生成的d-MRM方法包含化合物名稱、MRM離子對、碎裂電壓、碰撞能量、動態(tài)MRM的保留時間和保留時間增量窗口,對于軟件不能自動識別保留時間及保留時間增量窗口的化合物,在安捷倫定性軟件通過提取化合物的離子對手動識別。

    2.3 基質效應 基質效應是基質中除目標物以外的其他成分對目標物分析的影響。由于其成分與目標組分在離子化過程中存在競爭,改變了目標物的電離效率,使目標物的離子響應強度降低或增強,從而影響分析結果的準確性。本文通過考察空白樣品基質中標準溶液的信號強度與純溶劑中相同濃度標準溶液信號強度的比值來評價基質效應。結果顯示,大部分獸藥存在不同程度的基質效應,其中氨基比林、保泰松、羥基甲硝唑、氯硝西泮、諾氟沙星、洛美沙星、硝西泮存在較強的基質抑制效應,檢測響應信號比較弱,而濃度為200 ng/mL的四環(huán)素、土霉素、金霉素、強力霉素樣品基質溶液在質譜上幾乎沒有響應。

    2.4 41種獸藥的總離子流圖 以d-MRM 模式測定41種獸藥的定性和定量離子對色譜圖,共有82個離子監(jiān)測通道。圖1是濃度為30 ng/mL的混合標準品的總離子流圖,各個化合物峰形對稱,響應良好,定量準確可靠。

    圖1 41種獸藥標準品MRM總離子流圖

    2.5 線性關系、檢出限、定量限 取混合標準使用溶液用空白樣品基質溶液稀釋配制成標準曲線點溶液,外標法定量,以X軸為濃度,Y軸為峰面積的響應值,得到各個獸藥的線性回歸方程,用于計算實際樣品中待測物的濃度。取陰性樣品,混合標準使用溶液通過最小添加量,按“1.4.1”項下供試樣品前處理方法同法處理后上機進樣測試,以3 倍信噪比計算各個被分析獸藥的檢出限(LOD),以10倍信噪比計算各個被分析獸藥的定量限(LOQ)。41種獸藥的線性關系、檢出限、定量限見表4。結果顯示,41種獸藥在各自范圍內線性關系良好(R2>0.9917),檢出限范圍為0.1000~3.105 μg/kg,定量限范圍為0.3148~7.532 μg/kg。

    表4 41種獸藥的線性關系、檢出限、定量限、回收率及精密度(n=3)

    2.6 回收率及精密度考察 在空白地龍樣品中分別添加混合標準中間溶液,低、中、高3個加標量分別為30.0、80.0、200.0 μg/kg,每個添加水平平行制備3份樣,每份樣重復測定3次,經提取凈化后進行測定,計算回收率和相對標準偏差(RSD)。結果顯示,41種獸藥的回收率為62.8% ~ 112.3%,精密度為1.1% ~ 8.9%。結果表明,該方法的準確度良好,符合定量檢測要求。

    2.7 樣品的測定 為驗證方法的可行性,將市售的10批地龍樣品作為測試樣品,應用該方法測定樣品中7大類41種獸藥殘留,均未檢出上述被分析目標化合物。

    3 討論與結論

    動物源性中藥材富含蛋白質和脂肪,測定獸藥殘留時,蛋白質和脂肪去除不干凈或不徹底會產生基質效應,甚至會堵塞色譜柱,因此,前處理方法的選擇是此類樣品測試的關鍵。同時,動物在養(yǎng)殖整個生命周期中,不僅是動物出現(xiàn)病患違規(guī)使用獸藥,而是將獸藥作為動物產品違法獲取經濟利益的促進劑,使用獸藥時多是一種藥物產生耐藥性后,便換成另一種,甚至多種藥物同時使用,因此,獸藥殘留檢測只測定一類藥物有可能漏檢,達不到全面評價動物源性中藥質量安全的目的。目前, 一針進樣同時測定多獸藥殘留是當前一個研究熱點,這樣可以節(jié)約成本、提高效率。本文采用QuEChERS、dSPE相結合的提取凈化方法,建立了超高效液相色譜串聯(lián)質譜法同時測定中藥材地龍中7大類41種獸藥殘留的方法。以儀器方法為基礎,結合地龍樣品基質的特點,從提取方法、凈化技術、色譜質譜條件等多個方面進行研究和優(yōu)化,對建立的方法進行了方法學考察,結果表明,該方法各項指標均能滿足分析檢測的要求,與目前報道的文獻和國家標準方法相比,該方法簡化了復雜的前處理,實現(xiàn)了多類別多組分獸藥殘留同時測定,提高了檢測效率,對動物源性中藥材中多類別多組分獸藥殘留分析監(jiān)測、快速篩查具有參考意義。

    猜你喜歡
    源性中藥材獸藥
    獸藥殘留檢測中的優(yōu)化與應用
    夏季中藥材田間管理做好這五點
    中藥材促農增收
    宋四清:種植中藥材 托起致富夢
    后溪穴治療脊柱源性疼痛的研究進展
    中獸藥在家禽養(yǎng)殖中的作用與應用
    DNA提取4種中藥材方法的篩選
    中成藥(2016年8期)2016-05-17 06:08:28
    獸藥
    雄激素源性禿發(fā)家系調查
    健康教育對治療空氣源性接觸性皮炎的干預作用
    亚洲午夜理论影院| 久久av网站| 亚洲九九香蕉| 成人国产av品久久久| 999精品在线视频| 日本欧美视频一区| 国产免费福利视频在线观看| 精品久久蜜臀av无| 一本大道久久a久久精品| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲国产欧美在线一区| 手机成人av网站| 亚洲精品在线观看二区| 成在线人永久免费视频| 99热网站在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲伊人色综图| 大香蕉久久网| 精品一区二区三区四区五区乱码| 丰满少妇做爰视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美激情高清一区二区三区| 国产亚洲欧美精品永久| av免费在线观看网站| 免费少妇av软件| 久久中文字幕人妻熟女| 国产单亲对白刺激| 激情在线观看视频在线高清 | 国产av精品麻豆| bbb黄色大片| 日日夜夜操网爽| 欧美亚洲日本最大视频资源| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 中文字幕最新亚洲高清| 999久久久精品免费观看国产| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 国产av又大| 国产在线精品亚洲第一网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 一本久久精品| 极品少妇高潮喷水抽搐| 中文字幕人妻丝袜制服| 最新在线观看一区二区三区| 老汉色∧v一级毛片| 欧美午夜高清在线| 久久久国产成人免费| 免费在线观看日本一区| 午夜精品国产一区二区电影| 国产在线免费精品| 女人精品久久久久毛片| 色老头精品视频在线观看| 少妇精品久久久久久久| 日韩人妻精品一区2区三区| 夫妻午夜视频| 在线观看66精品国产| 久久久精品免费免费高清| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲精品在线美女| 精品久久久久久久毛片微露脸| 精品一区二区三区四区五区乱码| 757午夜福利合集在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 男女免费视频国产| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品98久久久久久宅男小说| 午夜福利,免费看| 欧美日韩视频精品一区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产精品影院久久| 高清黄色对白视频在线免费看| 色综合欧美亚洲国产小说| a级毛片黄视频| 两个人免费观看高清视频| 中亚洲国语对白在线视频| 伦理电影免费视频| 中文字幕制服av| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美日韩一级在线毛片| 一本久久精品| 精品一区二区三卡| 大香蕉久久成人网| 亚洲国产欧美网| 精品人妻1区二区| 大陆偷拍与自拍| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 高清欧美精品videossex| 免费少妇av软件| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 正在播放国产对白刺激| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产精品二区激情视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产成人精品久久二区二区免费| 成年动漫av网址| 99riav亚洲国产免费| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 蜜桃国产av成人99| 国产有黄有色有爽视频| 久久影院123| 久久婷婷成人综合色麻豆| av有码第一页| www.精华液| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品久久久久久电影网| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 99精品在免费线老司机午夜| 国产成人系列免费观看| 大香蕉久久成人网| 美国免费a级毛片| 亚洲第一av免费看| 亚洲精华国产精华精| 精品第一国产精品| 99久久人妻综合| 国产亚洲精品久久久久5区| 一级片'在线观看视频| 麻豆成人av在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 精品国产乱码久久久久久小说| 丝袜美足系列| 久久久精品免费免费高清| 国产色视频综合| 国产免费视频播放在线视频| 国产不卡一卡二| 久久精品成人免费网站| 久久99热这里只频精品6学生| 自线自在国产av| 久久中文字幕人妻熟女| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 涩涩av久久男人的天堂| a在线观看视频网站| 国精品久久久久久国模美| 热re99久久精品国产66热6| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 少妇的丰满在线观看| 高清av免费在线| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 搡老岳熟女国产| 天堂动漫精品| 久久精品91无色码中文字幕| 久久久久视频综合| 99九九在线精品视频| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲,欧美精品.| 在线观看免费日韩欧美大片| 美女扒开内裤让男人捅视频| netflix在线观看网站| 动漫黄色视频在线观看| 久久狼人影院| 在线天堂中文资源库| 老司机影院毛片| 99热网站在线观看| 国产精品久久电影中文字幕 | 香蕉国产在线看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久人妻av系列| 国产精品98久久久久久宅男小说| 老熟女久久久| 午夜福利在线免费观看网站| 免费在线观看黄色视频的| 丁香六月欧美| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 妹子高潮喷水视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产欧美日韩一区二区三| 又大又爽又粗| 2018国产大陆天天弄谢| 精品一区二区三区av网在线观看 | 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 成年动漫av网址| 满18在线观看网站| 老司机福利观看| 午夜91福利影院| 久久久精品区二区三区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 午夜免费成人在线视频| kizo精华| 色精品久久人妻99蜜桃| 视频区图区小说| 色综合欧美亚洲国产小说| 黑人操中国人逼视频| 国产在线一区二区三区精| 99精品欧美一区二区三区四区| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久九九热精品免费| 亚洲avbb在线观看| 精品第一国产精品| 日韩一区二区三区影片| 男女午夜视频在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲成国产人片在线观看| 国产在视频线精品| 热re99久久精品国产66热6| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精华国产精华精| 午夜久久久在线观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 午夜精品国产一区二区电影| 久久av网站| 1024视频免费在线观看| 最新美女视频免费是黄的| 成年版毛片免费区| 精品国产一区二区三区四区第35| 精品福利永久在线观看| 国产单亲对白刺激| 国产成+人综合+亚洲专区| 啦啦啦免费观看视频1| 黄色视频不卡| 中文字幕人妻熟女乱码| 我的亚洲天堂| 欧美大码av| 久久香蕉激情| 黄色片一级片一级黄色片| e午夜精品久久久久久久| 国产欧美日韩一区二区精品| 最近最新中文字幕大全免费视频| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久中文字幕人妻熟女| 满18在线观看网站| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产成人精品在线电影| 大香蕉久久成人网| 青草久久国产| 啦啦啦 在线观看视频| 深夜精品福利| 少妇被粗大的猛进出69影院| 在线看a的网站| 亚洲avbb在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产xxxxx性猛交| 欧美精品一区二区大全| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美日韩精品网址| 欧美午夜高清在线| 精品福利永久在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲国产欧美网| 999久久久国产精品视频| 国产精品一区二区在线观看99| 国产高清国产精品国产三级| 免费少妇av软件| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 一本久久精品| 日韩视频一区二区在线观看| 人人澡人人妻人| 久久狼人影院| 大码成人一级视频| 午夜免费成人在线视频| 无人区码免费观看不卡 | 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品久久久久久精品电影小说| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 9色porny在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 免费av中文字幕在线| 97在线人人人人妻| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产高清视频在线播放一区| 成人黄色视频免费在线看| 国产精品99久久99久久久不卡| 免费高清在线观看日韩| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久中文看片网| 国产亚洲欧美精品永久| 天天影视国产精品| 国产97色在线日韩免费| 日本五十路高清| 日本av免费视频播放| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 一夜夜www| 国产1区2区3区精品| 国产精品免费一区二区三区在线 | 日本av手机在线免费观看| 丁香欧美五月| 日韩中文字幕视频在线看片| 91成人精品电影| 在线观看免费午夜福利视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| cao死你这个sao货| 五月天丁香电影| 极品教师在线免费播放| 99精品在免费线老司机午夜| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 一级毛片电影观看| 成年动漫av网址| 亚洲精品乱久久久久久| 男女午夜视频在线观看| 女人精品久久久久毛片| 男女午夜视频在线观看| e午夜精品久久久久久久| 午夜精品国产一区二区电影| 日韩有码中文字幕| 欧美日韩亚洲高清精品| 99香蕉大伊视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产男女超爽视频在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产精品九九99| 啪啪无遮挡十八禁网站| 久久久国产一区二区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲国产av影院在线观看| 免费日韩欧美在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 两性夫妻黄色片| 中文字幕最新亚洲高清| 日韩一区二区三区影片| 深夜精品福利| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 欧美精品亚洲一区二区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 操美女的视频在线观看| 国产精品免费视频内射| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 午夜免费成人在线视频| 亚洲av国产av综合av卡| 午夜日韩欧美国产| 国产av一区二区精品久久| 在线观看免费午夜福利视频| 五月天丁香电影| 99re6热这里在线精品视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 又紧又爽又黄一区二区| 国产免费现黄频在线看| 黄色怎么调成土黄色| 精品乱码久久久久久99久播| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产在线视频一区二区| 色视频在线一区二区三区| 人妻一区二区av| 国产高清videossex| 在线观看免费视频网站a站| 色综合欧美亚洲国产小说| 搡老岳熟女国产| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲,欧美精品.| 搡老乐熟女国产| 少妇被粗大的猛进出69影院| 久久人妻av系列| 精品乱码久久久久久99久播| 怎么达到女性高潮| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲av成人一区二区三| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产激情久久老熟女| 午夜福利欧美成人| 国产成人啪精品午夜网站| 午夜福利乱码中文字幕| av一本久久久久| 一进一出好大好爽视频| 国产一区二区 视频在线| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 热99久久久久精品小说推荐| 久久久久久久久免费视频了| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 窝窝影院91人妻| av有码第一页| 精品久久久精品久久久| 久久99一区二区三区| 激情在线观看视频在线高清 | 高清在线国产一区| 午夜福利一区二区在线看| av一本久久久久| 国产不卡av网站在线观看| 国产高清videossex| 18禁国产床啪视频网站| 脱女人内裤的视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| netflix在线观看网站| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲七黄色美女视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产成人精品久久二区二区91| 9热在线视频观看99| av有码第一页| 成人精品一区二区免费| 91av网站免费观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 欧美 日韩 精品 国产| 国产极品粉嫩免费观看在线| 午夜免费成人在线视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产高清激情床上av| www.熟女人妻精品国产| 人妻 亚洲 视频| 久久ye,这里只有精品| 欧美黄色片欧美黄色片| 日日夜夜操网爽| 91成年电影在线观看| 午夜91福利影院| 一夜夜www| 97人妻天天添夜夜摸| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 日本黄色日本黄色录像| 9191精品国产免费久久| 亚洲av第一区精品v没综合| 手机成人av网站| 又大又爽又粗| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产成人免费观看mmmm| 精品一品国产午夜福利视频| 91老司机精品| 精品久久久久久久毛片微露脸| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产精品 国内视频| 国产日韩欧美视频二区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲欧美色中文字幕在线| 午夜成年电影在线免费观看| 高清视频免费观看一区二区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产成人精品无人区| 黄色成人免费大全| 中文欧美无线码| 久久久久久久国产电影| 亚洲成国产人片在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美精品亚洲一区二区| 国产熟女午夜一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产免费视频播放在线视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产亚洲av高清不卡| 99精品久久久久人妻精品| 国产野战对白在线观看| 高清在线国产一区| 国产一区二区激情短视频| 成人永久免费在线观看视频 | 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产区一区二久久| 国产精品国产av在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 久久久国产精品麻豆| 不卡av一区二区三区| 国产精品 国内视频| 婷婷成人精品国产| 在线 av 中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产单亲对白刺激| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 大片免费播放器 马上看| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲国产av新网站| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日韩视频一区二区在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 成人黄色视频免费在线看| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久久精品94久久精品| 欧美日本中文国产一区发布| 不卡av一区二区三区| 嫁个100分男人电影在线观看| 18禁观看日本| 亚洲avbb在线观看| 在线天堂中文资源库| 超碰成人久久| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 久久ye,这里只有精品| 国产精品.久久久| 岛国在线观看网站| 久9热在线精品视频| tube8黄色片| av天堂久久9| 露出奶头的视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 午夜福利欧美成人| av国产精品久久久久影院| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产日韩欧美视频二区| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久天堂一区二区三区四区| 丝袜美足系列| 免费看十八禁软件| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产高清videossex| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美日韩精品网址| 黄色片一级片一级黄色片| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 免费在线观看日本一区| 满18在线观看网站| 少妇粗大呻吟视频| 2018国产大陆天天弄谢| 国产在线免费精品| 水蜜桃什么品种好| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 人妻 亚洲 视频| 99国产精品99久久久久| 男女边摸边吃奶| 国产深夜福利视频在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| videosex国产| 九色亚洲精品在线播放| 日本一区二区免费在线视频| 精品视频人人做人人爽| 国产1区2区3区精品| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 好男人电影高清在线观看| 多毛熟女@视频| 国产免费现黄频在线看| 亚洲五月色婷婷综合| 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产亚洲精品一区二区www | 精品国内亚洲2022精品成人 | 欧美精品一区二区免费开放| 久久久国产欧美日韩av| 天堂8中文在线网| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 在线观看www视频免费| 少妇的丰满在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 不卡av一区二区三区| 久9热在线精品视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久国产亚洲av麻豆专区| av超薄肉色丝袜交足视频| 嫩草影视91久久| 欧美精品av麻豆av| 欧美激情高清一区二区三区| 999精品在线视频| 2018国产大陆天天弄谢| 久久精品人人爽人人爽视色| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品亚洲av一区麻豆| 天堂动漫精品| 成年版毛片免费区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲,欧美精品.| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久精品成人免费网站| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲中文字幕日韩| 人成视频在线观看免费观看| 久热爱精品视频在线9| 亚洲精华国产精华精| 国产精品免费视频内射| 亚洲一区二区三区欧美精品| 动漫黄色视频在线观看| 1024视频免费在线观看| 蜜桃国产av成人99| 视频区图区小说| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲天堂av无毛| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产一区二区在线观看av| 国产成人系列免费观看| 成人18禁在线播放| www.999成人在线观看| 午夜日韩欧美国产| 久久精品国产亚洲av高清一级| 在线观看66精品国产| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产精品影院久久| 色综合欧美亚洲国产小说| 蜜桃在线观看..| 黄色毛片三级朝国网站| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 乱人伦中国视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 制服人妻中文乱码| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一本综合久久免费| 国产精品 国内视频| 老汉色∧v一级毛片| 99热网站在线观看| 久热这里只有精品99| 一级毛片女人18水好多| 18禁美女被吸乳视频| 嫩草影视91久久| 精品一区二区三区av网在线观看 | 一本大道久久a久久精品| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产一卡二卡三卡精品| 欧美激情久久久久久爽电影 | 精品福利永久在线观看| 国产男靠女视频免费网站|