豬圓環(huán)病毒2型基因工程亞單位疫苗的安全性與生產(chǎn)性能評(píng)價(jià)

王世旗，胡歡鑫，阮坤祥，田克恭

(1.普萊柯生物工程股份有限公司，河南 洛陽(yáng) 471000；2.國(guó)家獸用藥品工程技術(shù)研究中心，河南 洛陽(yáng) 471000)

1990年在加拿大首次報(bào)道了豬圓環(huán)病毒病，它是由豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus type 2，PCV2)感染引起，隨后在美國(guó)、中國(guó)和其他國(guó)家的豬群中陸續(xù)發(fā)生[1]，嚴(yán)重影響了全世界生豬生產(chǎn)。病毒分類學(xué)上，PCV2屬于圓環(huán)病毒科[2]，近年來發(fā)現(xiàn)PCV3與豬皮炎腎病綜合征以及繁殖障礙等有關(guān)[3]。

由PCV2開放閱讀框2編碼的PCV2衣殼蛋白能夠自組裝成病毒樣顆粒(virus-like particle，VLP)，類似于天然PCV2病毒粒子的二十面體[4]。血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，使用體外組裝的PCV2 VLP免疫仔豬后，在仔豬體內(nèi)產(chǎn)生的高滴度中和抗體可為仔豬提供強(qiáng)大的免疫保護(hù)，使其免受同源基因型PCV2的感染[5]。已有研究表明，由PCV2衣殼蛋白自組裝成的VLP基因工程疫苗較全病毒滅活疫苗具有更好的預(yù)防效果[6, 7]。PCV2基因工程亞單位疫苗圓柯欣由PCV2 VLP組裝而成，蛋白純度高，輔以水佐劑用于免疫。

在臨床生產(chǎn)中，為研究圓柯欣免疫后的安全性和對(duì)生產(chǎn)性能的影響，本研究將圓柯欣單次免疫和將全病毒滅活疫苗進(jìn)行常規(guī)兩次免疫，之后評(píng)估豬群在這兩種免疫方式下的應(yīng)激率(包括：嘔吐、發(fā)燒、死亡、精神沉郁、不食)、死淘率(包括保育和育肥階段試驗(yàn)豬的死亡與淘汰)和日增重指標(biāo)(保育豬和育肥豬)，旨在為養(yǎng)殖場(chǎng)PCV2疫苗的選擇和免疫程序的優(yōu)化提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 疫苗

PCV2基因工程疫苗(圓柯欣，250 mL/瓶)和PCV2滅活疫苗(圓健，250 mL/瓶)均由普萊柯生物工程股份有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

本試驗(yàn)在國(guó)內(nèi)6個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行(河南開封、河南洛陽(yáng)、湖北安陸、山東壽光、福建龍巖和四川綿陽(yáng)，以下標(biāo)記為豬場(chǎng)A、B、C、D、E和F)。共選取14～19日齡待免疫仔豬20770頭，分為組1和組2，組1為豬圓環(huán)病毒2型基因工程疫苗(圓柯欣)免疫組，共13680頭；組2為豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗(圓健)免疫組，共7090頭。

1.3 疫苗免疫

本試驗(yàn)中，圓柯欣疫苗對(duì)單次免疫進(jìn)行評(píng)價(jià)，圓健疫苗以兩次免疫進(jìn)行評(píng)價(jià)。圓柯欣和圓健疫苗免疫的試驗(yàn)豬來源和數(shù)量如表1所示。組1試驗(yàn)豬每頭免疫PCV2亞單位疫苗圓柯欣1.0 mL，頸部肌肉注射。組2試驗(yàn)豬每頭免疫PCV2全病毒滅活疫苗1.0 mL，頸部肌肉注射，間隔2周后進(jìn)行二次免疫。

表1 試驗(yàn)豬來源與免疫數(shù)量

1.4 數(shù)據(jù)采集與分析

本試驗(yàn)所采集數(shù)據(jù)包括：試驗(yàn)豬在試驗(yàn)期的免疫應(yīng)激率、死淘率、日增重，并對(duì)圓柯欣和圓健免疫組的組間數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析。

數(shù)據(jù)采集時(shí)間自免疫后開始計(jì)算(開始統(tǒng)計(jì)免疫應(yīng)激情況、死淘率和日增重)，至保育結(jié)束(部分試驗(yàn)只涉及保育階段)或者育肥豬出欄(部分試驗(yàn)只涉及育肥階段)為止。

2 結(jié)果

2.1 免疫應(yīng)激

如表2所示，圓柯欣免疫組只有1頭仔豬出現(xiàn)應(yīng)激，應(yīng)激率為0.0073%，明顯低于全病毒滅活疫苗免疫組的應(yīng)激率(0.212%，共15頭仔豬出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng))，安全性良好。

表2 免疫后應(yīng)激率統(tǒng)計(jì)

2.2 生產(chǎn)性能

死淘率包括豬群在保育和育肥這兩個(gè)階段的試驗(yàn)豬死亡率和未死亡帶來的淘汰率。本試驗(yàn)中，如表3所示，圓柯欣免疫組死淘率為2.12%，低于全病毒滅活疫苗免疫組3.31%的死淘率。

表3 免疫后死淘率統(tǒng)計(jì)

從日增重方面來看，如表4所示，在統(tǒng)計(jì)的保育豬中，圓柯欣免疫組仔豬平均日增重(342克),較全病毒滅活疫苗免疫組平均日增重(317克)增加25克。另外，在統(tǒng)計(jì)的育肥豬中，圓柯欣免疫組仔豬平均日增重(1985克),較全病毒滅活疫苗免疫組平均日增重(1968克)增加17克，經(jīng)濟(jì)效益明顯。

表4 免疫后日增重指標(biāo)統(tǒng)計(jì)

3 討論

PCV2衣殼蛋白可組裝成VLP[8]，圓柯欣即由大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的PCV2衣殼蛋白組裝成的VLP制備而成。衣殼蛋白是PCV2的主要免疫原性蛋白，刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)[5]，從而達(dá)到保護(hù)動(dòng)物免受PCV2感染的目的?；赑CV2衣殼蛋白構(gòu)建而成的亞單位疫苗成分純度高，較全病毒滅活疫苗而言，免疫成分更單一純凈，安全性更高。

在整個(gè)試驗(yàn)期間，從免疫應(yīng)激和死淘率方面來看，圓柯欣免疫組應(yīng)激率僅為0.0073%，明顯低于全病毒滅活疫苗免疫組的應(yīng)激率，表明其具有良好安全性，且同時(shí)具有較全病毒滅活疫苗免疫組更低的死淘率，這可為豬場(chǎng)帶來明顯的經(jīng)濟(jì)效益。從平均日增重來看，在疫苗免疫后，無論是保育期間還是保育轉(zhuǎn)育肥期間，圓柯欣免疫組比全病毒滅活疫苗免疫組平均日增重均顯著增加，此可為豬場(chǎng)帶來巨大收益，圓柯欣的使用可具有較高的投入產(chǎn)出比。

已有研究表明，免疫PCV2疫苗能夠增強(qiáng)豬瘟疫苗的免疫效果[9]，這兩種疫苗聯(lián)合免疫可產(chǎn)生針對(duì)兩種病原的免疫抗體[10]。PCV2疫苗與豬肺炎支原體疫苗聯(lián)合免疫具有與兩種疫苗單獨(dú)免疫相同的效果[11]。圓柯欣也同樣適合聯(lián)合免疫，如聯(lián)合豬瘟活疫苗和豬肺炎支原體滅活疫苗的三疫苗一次性注射聯(lián)合免疫，各疫苗的免疫效力均不受影響[12, 13]。聯(lián)合免疫的應(yīng)用在非洲豬瘟威脅下實(shí)用性強(qiáng)，可減少動(dòng)物接觸和應(yīng)激，從而降低發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并轉(zhuǎn)化為實(shí)際經(jīng)濟(jì)效益。