基于“脾主運(yùn)化”理論探討肝細(xì)胞自噬與脂質(zhì)代謝的關(guān)系＊

冷 雪，王 瑩，李 陽，宋 囡，賈連群＊＊

（1. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)臟象理論及應(yīng)用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 沈陽 110847；2. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥創(chuàng)新工程技術(shù)中心 沈陽 110847；3. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心 沈陽 110847）

脾位于中焦，主運(yùn)化，如《濟(jì)生方》曰：“脾主運(yùn)化精微?！本哂猩褰禎幔敳季⒌墓δ?。膏脂源于中焦，與脾的關(guān)系最為密切，由脾胃運(yùn)化的水谷精微所化生，類屬津液[1]，而肝臟是體內(nèi)脂質(zhì)代謝的重要樞紐，其脂質(zhì)代謝功能與脾有著密切的聯(lián)系，脾虛生痰，土壅木郁，痰濁淤積于肝，而易導(dǎo)致脂肪肝等疾病的發(fā)生[2]。細(xì)胞自噬是指通過溶酶體清除和降解細(xì)胞內(nèi)一些錯(cuò)誤和發(fā)生受損的組分物質(zhì)，維持細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)能量平衡，使細(xì)胞適應(yīng)不良環(huán)境的一種高度調(diào)節(jié)的分解代謝過程[3]。肝細(xì)胞自噬是維持肝脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)的重要途徑之一，增強(qiáng)和減弱自噬都會(huì)影響肝臟脂肪的變化，分別引起肝臟脂質(zhì)的消耗和積累，從而維持肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝的動(dòng)態(tài)平衡[4]。

課題組前期發(fā)現(xiàn)化瘀祛痰方可改善肝臟脂質(zhì)代謝，同時(shí)發(fā)現(xiàn)其改善脂質(zhì)代謝的作用很可能與調(diào)控肝臟自噬相關(guān)蛋白以及肝臟線粒體自噬相關(guān)蛋白有關(guān)[5-6]。我們認(rèn)為脾失健運(yùn)，則膏脂不能輸布轉(zhuǎn)化，滯留血中，生濕成痰引起痰濁內(nèi)蘊(yùn)，蘊(yùn)結(jié)于肝，進(jìn)而抑制肝細(xì)胞自噬，加深脂質(zhì)在肝臟的累積，形成脂肪肝性等疾病。因此基于脾與肝臟脂質(zhì)代謝的相關(guān)性，我們將“脾主運(yùn)化”與肝細(xì)胞自噬相關(guān)聯(lián)，共同探討脾失健運(yùn)下肝細(xì)胞自噬對脂質(zhì)代謝性疾病的影響，為中西醫(yī)結(jié)合治療脂質(zhì)代謝紊亂相關(guān)疾病提供新的研究思路。

1 脾主運(yùn)化之中醫(yī)學(xué)理論探析

脾者，“倉廩之官”，位居中焦，主運(yùn)化水谷，升清降濁[7]，如《類經(jīng)》曰：“脾主運(yùn)化……通主水谷”；《醫(yī)門棒喝》曰：“脾臟獨(dú)主轉(zhuǎn)運(yùn)而清升降濁”；《景岳全書·飲食門》云：“脾司運(yùn)化，一納一運(yùn)，化生精氣，津液上升，糟粕下降，斯無病也”?？梢娖⒌闹饕δ苁菍嬍车人任镔|(zhì)轉(zhuǎn)化為體內(nèi)所需的水谷精微物質(zhì)，然后轉(zhuǎn)運(yùn)到全身各臟腑和四肢來維持機(jī)體的正常功能[8]，這其中包括“運(yùn)”和“化”兩個(gè)過程，他們既有聯(lián)系又互相包含。一方面脾的“運(yùn)”是指飲食水谷的消化、傳輸以及濁毒物質(zhì)的排泄，是機(jī)體各臟腑以及四肢各部位獲取物質(zhì)及能量的關(guān)鍵步驟，也是將體內(nèi)的濁毒等物質(zhì)排出的關(guān)鍵途徑，為氣機(jī)升降之樞紐[9]，如現(xiàn)代研究中體現(xiàn)的食物中的三大營養(yǎng)物質(zhì)經(jīng)過消化，逐步分解為葡萄糖、乳糜微粒、氨基酸之后被體內(nèi)吸收的過程[10]；另一方面脾的“化”是指脾將體內(nèi)水谷精微等物質(zhì)如精氣血等的氣化，還包括各種精微物質(zhì)之間以及與能量代謝直降的轉(zhuǎn)化、運(yùn)輸，以及對濁毒物質(zhì)的清除過程[11]，如體內(nèi)將吸收的葡萄糖、氨基酸、甘油等或分解產(chǎn)生能量，或合成體內(nèi)所需的蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)[12]。當(dāng)飲食不節(jié)，勞動(dòng)過倦，外感濕邪時(shí)，引起脾氣不足進(jìn)而導(dǎo)致脾運(yùn)化水谷等功能減退，如《素問·至真要大論》云：“諸濕腫滿，皆屬于脾”，脾失健運(yùn)，水谷不化、津液不布、水液聚留，傳輸布散失常，而生“濕”“腫”“滿”；《景岳全書痰飲》曰：脾虛不能運(yùn)化津液而成痰；《脾胃論》云：“百病皆由脾胃衰而生也”，可見脾對于機(jī)體正常生理機(jī)能的重要性，故脾被稱為后天之本，五臟之母。正如《素問·太陰陽明論》曰：“脾者，土也，治中央，常以四時(shí)長四臟，……土者生萬物而法天地”；《素靈微蘊(yùn)·飧泄解》云：“土者，如車之輪，如戶之樞，四象皆賴以為推遷，……五運(yùn)流轉(zhuǎn)，故有輪樞之象焉”。

2 肝臟脂質(zhì)代謝與脾主運(yùn)化

肝臟是人體重要的脂質(zhì)代謝器官，在脂質(zhì)的消化、吸收、分解、運(yùn)輸?shù)冗^程中發(fā)揮著重要的作用，肝臟脂質(zhì)代謝與“脾”有一定的關(guān)聯(lián)，脾為氣血生化之源，食物的消化與吸收、津液的生成與輸布都由脾主運(yùn)化來主導(dǎo)[13]。飲食不節(jié)、勞逸過度等皆可導(dǎo)致脾失健運(yùn)。脾失健運(yùn)則痰濕內(nèi)生，痰阻氣滯，氣不行血，氣滯血瘀，痰濁與氣血瘀滯互結(jié)，水谷難以化生精微滋養(yǎng)脈道，胞脈壅塞，導(dǎo)致痰濁等病理產(chǎn)物的積聚，形成粥樣斑塊，肝失疏泄，進(jìn)一步加重脾失運(yùn)化，最終導(dǎo)致非酒精性脂肪肝、冠心病等疾病的形成[14-15]。如《金匱要略心典》云：“食積太陰，敦阜之氣，抑遏肝氣，故病在脅下”，《金匱要略》中指出：“夫治未病者，見肝之病，知肝傳脾，當(dāng)先實(shí)脾?！睆堝a純在《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》中主張：“欲治肝者，原當(dāng)升脾降胃，培養(yǎng)中宮，俾中宮氣化敦厚，以聽肝木之自理”[16]。課題組前期發(fā)現(xiàn)[17-18]與高脂血癥組大鼠相比，脾虛高脂血癥組大鼠肝臟脂質(zhì)沉積進(jìn)一步加重，肝細(xì)胞脂肪空泡增多，肝臟膽固醇相關(guān)基因肝脂酶（Hepaticlipase，HL）、膽固醇7-羥化酶（Cholesterol 7-alpha hydroxy-lase，CYP7A1）顯著降低，可見肝臟脂質(zhì)代謝與脾虛密切相關(guān)，兩者在生理病理上有著緊密的聯(lián)系，脾失健運(yùn)，可導(dǎo)致肝失疏泄，氣機(jī)郁滯，形成“土壅木郁”之證，其為引起肝臟脂質(zhì)代謝紊亂的基本病機(jī)，故多用益氣健脾化痰法來進(jìn)行肝臟脂質(zhì)代謝紊亂的治療。課題組研制多年的專利方化瘀祛痰方（專利號(hào)：ZL200710010845.9）具有健脾益氣化瘀祛痰的功效，其可已改善AopE-/-小鼠肝臟脂質(zhì)沉積情況，增加脂質(zhì)代謝相關(guān)通路PPARγ/LXR-α/ABCG1 蛋白的表達(dá)[19]；減少肝臟脂質(zhì)過氧化現(xiàn)象[20]；此外化瘀祛痰方可以增加脾虛高脂血癥大鼠肝臟SREBP-2 通路蛋白表達(dá)，改善肝臟脂質(zhì)沉積情況，增加肝臟膽固醇代謝相關(guān)基因的表達(dá)[17，18]。此外陳絲等人發(fā)現(xiàn)香砂六君子湯可以干預(yù)脾虛高脂血癥大鼠肝臟脂質(zhì)代謝紊亂，其可能與調(diào)控dy HDL 相關(guān)mRNA 及蛋白[21]及調(diào)控膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)[22]有關(guān)?？梢娖⒅鬟\(yùn)化，為后天之本，氣血生化之源；肝主疏泄，調(diào)暢氣機(jī)，可促進(jìn)精血津液的運(yùn)行輸布，二者在生理病理上存在著緊密的聯(lián)系。

3 細(xì)胞自噬在肝臟脂質(zhì)代謝調(diào)控中發(fā)揮重要作用

自噬是體內(nèi)降解大分子物質(zhì)或者老化損壞的細(xì)胞器的重要代謝過程，自噬可以分為三種類別：小自噬、巨自噬和分子伴侶介導(dǎo)的自噬[23]。細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)通常以脂滴的形式存在，脂質(zhì)可通過自噬的過程轉(zhuǎn)變?yōu)橹舅?，為機(jī)體提供能量，這一過程又被稱為“噬脂”[24]，是自噬調(diào)控脂質(zhì)代謝的重要途徑。肝臟是機(jī)體脂質(zhì)代謝的重要器官，也是脂肪酸合成、分解的主要部位，自噬主要通過作用于肝臟的脂質(zhì)代謝起到調(diào)節(jié)肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)動(dòng)態(tài)平衡的作用，是維持脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵途徑，增強(qiáng)自噬可增加肝臟脂肪消耗，減少肝臟脂質(zhì)積累，抑制自噬會(huì)引起肝臟脂質(zhì)積累，嚴(yán)重會(huì)引起疾病的發(fā)生。肝臟長期脂質(zhì)的沉積會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞自噬降低，抑制自噬小體與溶酶體結(jié)合，降低自噬水平，進(jìn)一步促進(jìn)脂滴的形成，日久可導(dǎo)致非酒精性脂肪性肝病[25]。目前研究表明，肝臟內(nèi)的自噬包括AMPK 途徑、mTOR 途徑、PPARα途徑、SIRT1 途徑、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等多種途徑[4]，此外FOXO1 是介導(dǎo)調(diào)節(jié)肝臟自噬的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，其可參與對自噬基因ATG14 的調(diào)控[26]。細(xì)胞激活自噬作用可以減少M(fèi)allory-Denk Bodies（MDBs）小體的形成，通過抑制凋亡基因BAX 等，抑制非酒精性脂肪肝過程中脂質(zhì)代謝紊亂造成的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象[27，28]。此外研究發(fā)現(xiàn)某些藥物可以通過激活自噬途徑來改善肝臟脂質(zhì)代謝紊亂的現(xiàn)象，如姜黃素可通過激活自噬作用，來調(diào)節(jié)改善非酒精性脂肪肝病大鼠脂肪變性[29]；二苯乙烯苷可通過激活PPARα途徑，來激活肝臟細(xì)胞自噬，從而促進(jìn)脂滴的降解，改善肝臟脂質(zhì)紊亂的現(xiàn)象[30]?？梢娂?xì)胞自噬可以通過調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝，降低肝細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)脂滴降解等過程，來維持肝臟脂質(zhì)代謝的動(dòng)態(tài)平衡。因此細(xì)胞自噬在調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝中發(fā)揮著重要作用。

4 脾主運(yùn)化對肝細(xì)胞自噬的主導(dǎo)作用

細(xì)胞自噬是體內(nèi)維持細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡，形成穩(wěn)態(tài)的重要途徑，在免疫、營養(yǎng)調(diào)節(jié)、生長發(fā)育等生理活動(dòng)中發(fā)揮著重要的作用，這與脾的運(yùn)化功能具有一定的關(guān)聯(lián)，同時(shí)自噬失調(diào)引起的機(jī)體物質(zhì)代謝紊亂與脾失健運(yùn)引起的代謝失調(diào)也具有一定的相關(guān)性[31]。中醫(yī)認(rèn)為，脾主運(yùn)化，可運(yùn)化谷物及水飲，《素問·經(jīng)脈別論》云：“飲入于胃，游溢精氣，上輸于脾，脾氣散精……”，繼而將水谷精微輸布至五臟六腑、四肢百骸，以化生氣血、營養(yǎng)全身?？梢娖⒆鳛楹筇熘?、氣血生化之源，承載著機(jī)體正常生命活動(dòng)所需的物質(zhì)及能量，來維持機(jī)體的正常功能，在微觀層面體現(xiàn)在細(xì)胞對營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收、轉(zhuǎn)輸?shù)任镔|(zhì)能量代謝過程，這也與細(xì)胞自噬維持細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)能量代謝的穩(wěn)態(tài)，從而保證細(xì)胞功能的正常發(fā)揮相一致，體現(xiàn)了脾“中央土以灌四傍”的特性。脾失健運(yùn)，則水精不布，精微、水液停聚，聚而生痰濕，痰阻氣滯，氣滯血瘀，痰濁與氣血瘀滯互結(jié)，胞脈壅塞，致肝失疏泄，繼而引起膏脂淤積于肝內(nèi)，此過程與病理狀態(tài)下肝細(xì)胞自噬功能受阻，胞內(nèi)異常脂質(zhì)沉積具有一定的關(guān)聯(lián)，其自噬功能受抑產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物如脂質(zhì)、氧自由基等在胞內(nèi)的異常積累可看作為是脾失健運(yùn)肝失疏泄下生成的痰濕瘀毒等物質(zhì)，這也體現(xiàn)了脾失健運(yùn)，肝失疏泄的微觀表現(xiàn)，而在這個(gè)過程中脾失健運(yùn)是關(guān)鍵的主導(dǎo)過程。研究顯示脾虛證大鼠肝臟線粒體發(fā)生自噬[32]，進(jìn)一步引起細(xì)胞凋亡，自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比值、Parkin蛋白水平顯著降低，而脾虛程度與自噬紊亂呈現(xiàn)正相關(guān)，此外研究證實(shí)肝臟線粒體自噬途徑與PINK1/Parkin介導(dǎo)的通路有關(guān)[33]，說明“脾失健運(yùn)”可引起肝細(xì)胞發(fā)生自噬，自噬的程度與脾虛程度相關(guān)聯(lián)，證實(shí)了“脾”與肝細(xì)胞自噬之間的相關(guān)性。李長新[34]等人發(fā)現(xiàn)應(yīng)用調(diào)肝理脾法可改善非酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂質(zhì)代謝紊亂現(xiàn)象，其可能與增強(qiáng)肝臟自噬作用有關(guān)，可見促進(jìn)脾主運(yùn)化功能可以增強(qiáng)肝細(xì)胞自噬變化，通過自噬途徑降解肝臟內(nèi)異常代謝產(chǎn)物—脂質(zhì)（痰濁），給邪氣已出路[35]。綜上可見，脾主運(yùn)化功能在生理和病理上均在肝細(xì)胞自噬過程中起到了主導(dǎo)的作用（圖1）。

圖1 脾主運(yùn)化與肝細(xì)胞自噬及脂質(zhì)代謝關(guān)系圖

5 小結(jié)

綜上，脾為后天之本，主運(yùn)化水谷精微。前期課題組一直致力于脾失健運(yùn)膏脂轉(zhuǎn)輸障礙的相關(guān)研究，我們發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞自噬在維持肝臟內(nèi)相關(guān)代謝穩(wěn)態(tài)形成中發(fā)揮著重要的作用，這與脾的運(yùn)化功能具有一定的關(guān)聯(lián)，同時(shí)肝細(xì)胞自噬失調(diào)引起的肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂也與脾失健運(yùn)引起的代謝失調(diào)具有一定的相關(guān)性。脾氣健運(yùn)，水谷精微等物質(zhì)吸收后轉(zhuǎn)化布散全身，為機(jī)體提供所需營養(yǎng)。脾失健運(yùn)，痰濕內(nèi)生，土壅木郁，痰濁淤積于肝，引起膏脂轉(zhuǎn)輸障礙，脂質(zhì)異常累積，微觀層面肝細(xì)胞自噬受到抑制，降低了對脂質(zhì)代謝的降解能力，日久形成肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂情況，引發(fā)血脂異常、脂肪肝等脂質(zhì)代謝性疾病。課題組前期通過對家兔、大鼠、小鼠等動(dòng)物的研究發(fā)現(xiàn)，脾虛狀態(tài)下脂質(zhì)代謝異常，膽固醇相關(guān)蛋白發(fā)生改變，肝臟線粒體自噬相關(guān)蛋白以及肝臟自噬相關(guān)蛋白均發(fā)生顯著變化，因此，我們認(rèn)為脾運(yùn)化與肝細(xì)胞自噬具有一定的關(guān)聯(lián)，未來我們將進(jìn)一步深入研究。