• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黃花蒿bZIP轉(zhuǎn)錄因子基因家族及光調(diào)控表達(dá)模式分析*

    2021-04-12 05:35:22王星文師玉華丁丹丹馬婷玉
    關(guān)鍵詞:亞族青蒿素黃花

    王星文,吳 端,師玉華,張 棟,丁丹丹,馬婷玉,向 麗**

    (1. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所/中藥鑒定與安全性評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 北京 100700;2. 北京城市學(xué)院生物醫(yī)藥學(xué)部北京 100083;3. 貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/農(nóng)業(yè)生物工程研究院,山地植物資源保護(hù)與種質(zhì)創(chuàng)新教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山地生態(tài)與農(nóng)業(yè)生物工程協(xié)同創(chuàng)新中心 貴陽 550025)

    中藥青蒿源于菊科植物黃花蒿(Artemisia annua)的干燥地上部分,味苦、辛,性寒;歸肝、膽經(jīng),具有清虛熱,除骨蒸,解暑熱,截瘧,退黃等功效,在中國(guó)具有2000 多年的藥用歷史[1]。研究發(fā)現(xiàn),黃花蒿主要藥用有效成分為倍半萜類物質(zhì),其中青蒿素以極高的抗瘧活性著名,青蒿素聯(lián)合療法(Artemisinin-based combination therapies,ACTs)是目前為止治療瘧疾,尤其是腦瘧和對(duì)氯喹耐藥的瘧疾,最高效快速且無嚴(yán)重副作用的治療手段,此外青蒿素類藥物還具有抗腫瘤、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[2]。青蒿素在野生黃花蒿植物體內(nèi)含量較低,目前對(duì)青蒿素高產(chǎn)的黃花蒿優(yōu)質(zhì)株系培育已有大量研究[3],但其生物合成的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制卻還未完全明晰。因此,深入研究青蒿素合成途徑轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子對(duì)培育高含量植株,促進(jìn)青蒿素生物合成及開發(fā)青蒿素類藥物等具有重要意義。

    轉(zhuǎn)錄因子是影響藥用植物次生代謝物質(zhì)合成和積累的重要調(diào)控因子,其中堿性亮氨酸拉鏈(basic leucine zipper,bZIP)是真核生物轉(zhuǎn)錄因子中分布最廣泛、最保守的轉(zhuǎn)錄因子家族之一,在擬南芥[4]、黃瓜[5]、苦蕎[6]、油菜[7]、水稻[8]等植物中均有報(bào)道,主要參與抵御生物脅迫與非生物脅迫[9,10]、調(diào)控種子休眠萌發(fā)[11,12]、光信號(hào)傳導(dǎo)[13]及組織生長(zhǎng)分化[14]等植物生理過程。

    研究已證明,植物激素對(duì)青蒿素的轉(zhuǎn)錄調(diào)控具有積極作用[15],bZIP轉(zhuǎn)錄因子主要通過參與脫落酸(Abscisic acid,ABA)信號(hào)傳導(dǎo)途徑來影響青蒿素的合成,如AabZIP1 通過結(jié)合ABA 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)響應(yīng)元件ABRE,激活青蒿素合成途徑上關(guān)鍵酶紫杉醇二烯合酶(Amorpha-4,11-diene synthase,ADS)和細(xì)胞色素P450 單加氧酶(CYP71AV1)基因的啟動(dòng)子表達(dá)[16-18],bZIP同時(shí)也部分參與到水楊酸(Salicylic acid,SA)與茉莉酸(Jasmonic acid,JA)對(duì)青蒿素合成的調(diào)控中[19,20]。雖然一些研究表明這與bZIP轉(zhuǎn)錄因子家族特異性識(shí)別A-box(TACGTA),C-box(GACGTC)和Gbox(CACGTG)等核心基序?yàn)椤癆CGT”的順式作用元件密切相關(guān),但具體的分子調(diào)控機(jī)制仍有待進(jìn)一步探索[21-22]。

    光作為必要能量和重要的環(huán)境信號(hào)因子,在藥用植物次生代謝物質(zhì)合成和積累中起重要調(diào)控作用,Hong 等[23]發(fā)現(xiàn)藍(lán)光下過表達(dá)擬南芥隱花色素1(Cryptochrome Circadian Regulator 1,CRY1)基因的黃花蒿植株,青蒿素含量明顯增加;Zhang 等[24]研究發(fā)現(xiàn)紅光和白光脅迫對(duì)青蒿素代謝途徑中關(guān)鍵酶基因具有激活作用;此外,UV-B、UV-C 也對(duì)青蒿素的合成具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)作用[25]。bZIP轉(zhuǎn)錄因子家族作為重要的光信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)控因子,其H 亞族成員HY5 轉(zhuǎn)錄因子(Long hypocotyl 5)可以通過結(jié)合G-box 激活下游許多光誘導(dǎo)基因的表達(dá),如青蒿中的β-pine 烯合酶基因(QH6)及青蒿素正向調(diào)節(jié)因子AaGSW1,對(duì)青蒿素底物法呢基焦磷酸酯(Farnesyl pyrophosphate,F(xiàn)PP)的合成也具有一定影響[13,26,27]。

    隨著Shen 等[28]對(duì)黃花蒿核基因組數(shù)據(jù)測(cè)序的完成,黃花蒿bZIP(AabZIP)基因家族的全面分析及基因功能研究已成為可能。本研究基于黃花蒿基因組及轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),利用生物信息學(xué)手段,通過對(duì)黃花蒿bZIP轉(zhuǎn)錄因子家族成員理化性質(zhì)、系統(tǒng)進(jìn)化分析、基因結(jié)構(gòu)及不同光照條件下基因表達(dá)情況等進(jìn)行研究,以期為后續(xù)深入探索黃花蒿bZIP基因功能,解析青蒿素合成途徑及光信號(hào)網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控機(jī)制,黃花蒿良種選育等工作提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 黃花蒿bZIP家族鑒定和序列檢索

    本研究以黃花蒿(Artemisia annua)基因組數(shù)據(jù)庫(登錄號(hào):PRJNA416223)為研究對(duì)象,對(duì)應(yīng)基因組數(shù)據(jù)獲取自NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/datasets/genomes/?txid= 35608),對(duì)應(yīng)的擬南芥bZIP轉(zhuǎn)錄因子序列獲取自TAIR 數(shù)據(jù)庫(http://www.arabidopsis.org/)。通過構(gòu)建本地黃花蒿全基因組序列數(shù)據(jù)庫,利用Wang 等[29]報(bào)道的71 條擬南芥(Arabidopsis thaliana)bZIP轉(zhuǎn)錄因子序列執(zhí)行本地BLAST 搜索(E-value =1e- 10);同時(shí)利用Pfam 數(shù)據(jù)庫(http://pfam.xfam.org/)下載的bZIP轉(zhuǎn)錄因子隱馬爾可夫模型(Hidden Markov Model,HMM)矩 陣 文 件bZIP_1(PF00170)、bZIP_2(PF07716)、bZIP_C(PF12498)、bZIP_Maf(PF03131)對(duì)黃花蒿基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選鑒定,合并2次鑒定結(jié)果,去除重復(fù)序列并將所得候選AabZIP蛋白序列提交Pfam 數(shù)據(jù)庫(http://pfam.sanger.ac.uk/search)進(jìn)行進(jìn)一步鑒定,以明確黃花蒿bZIP轉(zhuǎn)錄因子家族成員。此外利用在線工具ExPASy(http://expasy.org/tools/protparam.html)對(duì)AabZIP蛋白質(zhì)分子量、理論等電點(diǎn)、總平均親水性等蛋白質(zhì)理化性質(zhì)進(jìn)行預(yù)測(cè),并通過在線 軟 件Cell-PLoc 2.0(http://www.csbio sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/)對(duì)AabZIP蛋白質(zhì)進(jìn)行亞細(xì)胞定位及分析。

    1.2 多序列比對(duì)及進(jìn)化分析

    利用MEGA7.0 軟件的MUSCLE 工具進(jìn)行多重序列聯(lián)配比對(duì)分析,利用鄰接法(Neighbor-Joining,NJ)構(gòu)建擬南芥-黃花蒿bZIP基因系統(tǒng)發(fā)育樹,并使用Pairwise Deletion 處理缺失數(shù)據(jù),P-distance 模型,校驗(yàn)參數(shù)Bootstrap 重復(fù)次數(shù)設(shè)置為1000 次。利用在線軟件 EvolView (https://www. evolgenius. info/evolview/#login)對(duì)系統(tǒng)發(fā)育樹進(jìn)行可視化修飾。

    1.3 進(jìn)化壓力分析

    利用BLAST 軟件對(duì)黃花蒿bZIP 蛋白序列進(jìn)行比對(duì),利用軟件TBtools 中KaKs_Calculator 工具計(jì)算基因同義替換率(Ks)與非同義替換率(Ka),獲得基因Ka/Ks 比率。當(dāng)Ka/Ks 大于1 時(shí)認(rèn)為基因存在正向選擇效應(yīng),當(dāng)Ka/Ks 小于1 時(shí)則認(rèn)為存在純化選擇響應(yīng)。通過計(jì)算Ka/Ks之間的比率判斷是否有選擇壓力作用于黃花蒿bZIP基因家族。

    1.4 基因結(jié)構(gòu)及保守motif分析

    利用在線工具meme(http://meme-suite.org/tools/meme)對(duì)黃花蒿bZIP家族成員蛋白保守結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)測(cè)分析。使用在線工具Gene Structure Display Sever(http://gsds.cbi.pku.edu.cn/index.php)繪制AabZIP基因結(jié)構(gòu)圖并進(jìn)行可視化分析。

    1.5 光調(diào)控下基因表達(dá)分析

    黃花蒿轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)下載于NCBI 數(shù)據(jù)庫(登錄號(hào):SRP133983),利用perl 腳本解析不同光照處理下黃花蒿基因轉(zhuǎn)錄數(shù)據(jù),獲?。↙ED)藍(lán)光(470 nm)、紅光(670 nm)、遠(yuǎn)紅光(735 nm)、白光及黑暗處理下黃花蒿bZIP轉(zhuǎn)錄因子FPKM 值(Fragments per kilobase of transcript per million mapped reads),利用TBtools 軟件對(duì)其進(jìn)行聚類及可視化分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 黃花蒿bZIP基因家族的篩選與鑒定

    表1 黃花蒿bZIP轉(zhuǎn)錄因子家族信息

    全基因組水平中初步篩選得到的144 條AabZIP候選蛋白序列,后經(jīng)Pfam 在線數(shù)據(jù)庫進(jìn)行鑒定,去除假陽性及結(jié)構(gòu)域極不完整的序列后(表1),最終得到78 條黃花蒿bZIP 蛋白序列作為后續(xù)分析對(duì)象。氨基酸理化性質(zhì)分析表明,78 條AabZIP 蛋白氨基酸長(zhǎng)度范圍為119 aa(AabZIP61)-649 aa(AabZIP8),對(duì)應(yīng)的分子量大小范圍為13.459(AabZIP61)-72.525(AabZIP78)KDa,其中S 亞族氨基酸長(zhǎng)度大部分小于200 aa;理論等電點(diǎn)變化范圍在10.27(AabZIP5)-4.86(AabZIP17)之間,A 亞族與H 亞族理論等電點(diǎn)多為8-10,顯堿性,而G與I亞族多為5-7,偏酸性,F(xiàn)亞家族成員及AabZIP4、AabZIP66蛋白較為穩(wěn)定。所有蛋白亞細(xì)胞定位分布于細(xì)胞核上且均表現(xiàn)為親水性(GRAVY<0),這與Zhang 等[18]、Shen 等[22]及Zhong 等[30]的報(bào)道結(jié)果相一致。

    續(xù)表

    2.2 進(jìn)化壓力分析

    對(duì)黃花蒿bZIP家族成員進(jìn)化選擇壓力進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),14 組同源基因序列中AabZIP21與AabZIP25存在非同義替換而無同義替換(表2)。而AabZIP75與AabZIP55僅存在同義替換,除AabZIP33/AabZIP38的KA/KS 值為0.915,AabZIP72/AabZIP58為0.610 外,其余11組序列Ka/Ks值均小于0.5,這表明大部分黃花蒿bZIP基因經(jīng)歷了強(qiáng)烈的純化選擇[29]。

    表2 黃花蒿bZIP基因進(jìn)化壓力分析

    2.3 基因進(jìn)化分析

    為研究黃花蒿bZIP基因的進(jìn)化關(guān)系,在多序列聯(lián)配的基礎(chǔ)上,利用MAGA7.0軟件構(gòu)建黃花蒿與擬南芥bZIP轉(zhuǎn)錄因子家族系統(tǒng)發(fā)育樹(圖1)。兩者bZIP轉(zhuǎn)錄因子家族成員在進(jìn)化上高度保守。依據(jù)Jakoby 等[4]對(duì)擬南芥的分類方法將黃花蒿bZIP基因家族分為A、B、C、D、E、F、G、H、I、S 等10 個(gè)亞家族,并根據(jù)分組情況依次進(jìn)行重命名(AabZIP1-AabZIP78),同亞家族成員功能推測(cè)存在相似性。

    10 個(gè)亞家族中,S 亞族的AabZIP成員數(shù)量最多,有22 條(28.2%);B 與D 亞族數(shù)量最少,均只有1 條。研究表明D 亞族成員在植物防御病害和生理生長(zhǎng)環(huán)節(jié)中扮演著重要角色,可以與NPR1相互作用,或結(jié)合SA 誘導(dǎo)元件激活SA 介導(dǎo)的植物病原體防御機(jī)制[10],相比擬南芥中10 條[4],毛竹中16 條[31],黃花蒿bZIP家族轉(zhuǎn)錄因子可能在抵抗病原體侵染方面參與較少。G亞族與H 亞族成員數(shù)量分別為12 和2 條,其均可以特異性結(jié)合光誘導(dǎo)基因重要順式元件G-box[13,32],在光形態(tài)發(fā)生和光信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要的作用。這也表明這2個(gè)亞族成員很可能參與到光調(diào)控下青蒿素合成途徑之中,其生物學(xué)功能具有進(jìn)一步研究意義。此外AabZIP78未與其他任何序列聚類,推測(cè)可能是其基因結(jié)構(gòu)在進(jìn)化中出現(xiàn)了較大的差異,或與擬南芥中bZIP家族序列出現(xiàn)不同的進(jìn)化方向,具體的基因結(jié)構(gòu)及功能需要繼續(xù)深入探索。

    2.4 基因結(jié)構(gòu)分析

    為進(jìn)一步分析黃花蒿bZIP基因之間的進(jìn)化關(guān)系,利用在線工具GSDS 構(gòu)建黃花蒿bZIP基因的外顯子-內(nèi)含子結(jié)構(gòu)圖(圖2),結(jié)果顯示,AabZIP亞家族與外顯子關(guān)聯(lián)明顯,同一亞家族成員基因結(jié)構(gòu)(外顯子的數(shù)量、長(zhǎng)度和位置)大多相似,而不同亞家族間表現(xiàn)出高度特異性。黃花蒿78個(gè)AabZIP基因外顯子數(shù)在1-18(AabZIP20)間分布,其中16 個(gè)(20.5%)AabZIP基因無內(nèi)含子結(jié)構(gòu)且大部分集中在S 亞族。除AabZIP70外(含9 個(gè)),S 與F 亞族AabZIP序列外顯子數(shù)均為1-2個(gè);A 與I 亞族外顯子數(shù)大多為4 個(gè),而G 亞族AabZIP結(jié)構(gòu)最為復(fù)雜,其外顯子數(shù)在10-16 之間(大多為12個(gè));C 亞族中AabZIP17的外顯子數(shù)量(11 個(gè))幾乎是AabZIP15(6 個(gè))、AabZIP16(5 個(gè))的2 倍;E 亞族的2 條基因AabZIP19(4 個(gè))、AabZIP20(18 個(gè))間差異也較大。保守的基因結(jié)構(gòu)變化很有可能是進(jìn)化中關(guān)鍵事件的記錄,而這些外顯子-內(nèi)含子位置與數(shù)量的差異或許會(huì)導(dǎo)致特殊的基因功能及進(jìn)化方向[33]。

    2.5 蛋白保守結(jié)構(gòu)域及保守基序分析

    利用Pfam 數(shù)據(jù)庫及在線軟件meme 對(duì)黃花蒿78個(gè)AabZIP蛋白保守結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)(圖3)。同亞家族的AabZIP蛋白含有的保守結(jié)構(gòu)類別及位置相似,不同亞家族間差異較大。各亞家族的保守基序均與擬南芥中報(bào)道相似,說明在功能方面擬南芥bZIP序列具有很大參考作用。

    AabZIP蛋白主要含有bZIP1、bZIP2和bZIPC這3種bZIP結(jié)構(gòu)域,其中大部分為bZIP1結(jié)構(gòu)域,少部分為bZIP2結(jié)構(gòu)域,且主要集中在F 亞族,bZIPC結(jié)構(gòu)域僅有一條,為C 亞族成員。除AabZIP62外,黃花蒿中bZIP家族成員均搜索到motif1(圖3b),該基序在多種植物[5-7]中均有報(bào)道,推測(cè)為黃花蒿bZIP轉(zhuǎn)錄因子的保守基序。而與其他物種bZIP保守基序相比,AabZIP62存在擬南芥bZIP保守基序(N-X7-R/K-X9-L-X6-LX6-L),其功能是否具有特異性有待進(jìn)一步深入研究。AabZIP78的保守基序中-10 位由R/K 變?yōu)镮,其結(jié)構(gòu)變化與茄科植物番茄中報(bào)道的bZIP結(jié)構(gòu)域變化相吻合,推測(cè)二者親緣關(guān)系較近[34],這與Shen 等[28]進(jìn)化分析結(jié)果一致,同樣的變化在擬南芥、水稻、葡萄、蓖麻、玉米等植物[4,8,29,35-37]中均有發(fā)現(xiàn)。I 亞族成員在-10 位均存在K 而無R,與擬南芥中報(bào)道吻合,可能與其影響維管束發(fā)育的功能有關(guān)[4],同時(shí)也有研究表明I亞族參與植物組織分化過程[14],Gibalová 等[38,39]等的研究發(fā)現(xiàn)擬南芥 中E 亞 族AtbZIP34、AtbZIP61可 以 與I 亞 族AtbZIP18、AtbZIP52一同參與調(diào)控花粉的發(fā)育過程。

    圖1 擬南芥與黃花蒿bZIP轉(zhuǎn)錄因子系統(tǒng)發(fā)育樹

    除bZIP保守基序外,AabZIP蛋白還含有其他保守的功能基序。其中,除AabZIP29外,G 亞家族成員均含有多功能鑲嵌區(qū)MFMR,其可以識(shí)別并結(jié)合順式作用元件G-box,在光調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與種子成熟中發(fā)揮重要的作用,同時(shí)G 亞族成員與A 亞族AabZIP3、AabZIP9及I 亞族的AabZIP42、AabZIP52序列N 端均還發(fā)現(xiàn)了富含脯氨酸的結(jié)構(gòu)域,這種結(jié)構(gòu)在G 亞族GBF 類轉(zhuǎn)錄因子中推測(cè)具有轉(zhuǎn)錄激活或抑制作用[32]。AabZIP29含有結(jié)構(gòu)域Mito_carr,為線粒體載體蛋白標(biāo)志。D 亞家族AabZIP18中存在DOG1 結(jié)構(gòu)域,其在擬南芥中具有控制種子休眠相關(guān)的功能[40]。A 亞族AabZIP8含有Retrotran_gag_2(逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子病毒gag蛋白)結(jié)構(gòu)域,推測(cè)可能與其特殊調(diào)控功能有關(guān)。同時(shí),通過對(duì)AabZIP蛋白保守基序的研究還發(fā)現(xiàn)其存在Ca2+依賴性蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)(R/KxxS/T)及酪蛋白激酶Ⅱ(Casein kinase II,CKII)磷酸化位點(diǎn)(S/TxxD/E),后者與光信號(hào)傳導(dǎo)緊密相關(guān),表現(xiàn)為復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制,而提高CKII活性很可能會(huì)使GBF轉(zhuǎn)錄因子功能增強(qiáng),HY5轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平降低[32,41]。而在F亞族的AabZIP22、AabZIP23、AabZIP24、AabZIP26、AabZIP27序列中發(fā)現(xiàn)的萜類合酶含有的典型保守結(jié)構(gòu)(DDxxD),其功能可能是通過結(jié)合金屬離子對(duì)底物催化過程產(chǎn)生影響[42]。

    圖2 AabZIP基因結(jié)構(gòu)圖

    圖3 黃花蒿bZIP蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析

    圖4 光調(diào)控下AabZIP基因表達(dá)特征分析

    2.6 光調(diào)控下基因表達(dá)分析

    通過解析黃花蒿在光調(diào)控下轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),獲取藍(lán)光、黑暗、紅光、遠(yuǎn)紅光、白光處理下AabZIP基因表達(dá)數(shù)據(jù)并進(jìn)行聚類分析(圖4),其中,71 條AabZIP序列注釋到基因表達(dá)數(shù)據(jù),而除AabZIP24外,AabZIP6(AabZIP7) ,AabZIP30、AabZIP32 (AabZIP31),AabZIP36 (AabZIP35) ,AabZIP47 (AabZIP48) ,AabZIP53(AabZIP54)序列均具有相同的轉(zhuǎn)錄本信息,因此無注釋內(nèi)容,AabZIP24缺失可能與基因組數(shù)據(jù)拼裝有關(guān)。

    此外,除AabZIP72、AabZIP26、AabZIP58基因外,其他AabZIP基因均響應(yīng)光照脅迫,同一基因?qū)Σ煌庹彰{迫響應(yīng)水平存在較大差異。其中A 亞族、S 亞族與I亞族中的大部分基因及C亞族中的AabZIP16基因與未分組的AabZIP78基因,在藍(lán)光和紅光脅迫下高表達(dá),S 亞族中的AabZIP70、AabZIP73基因在白光下高表達(dá),AabZIP57、AabZIP71基因與A 亞族AabZIP12、AabZIP15基因相比黑暗在白光、藍(lán)光與紅光下的表達(dá)量均有明顯提升。E 亞族成員在遠(yuǎn)紅光中高表達(dá)。G亞 族 中AabZIP28、AabZIP29、AabZIP33、AabZIP38、AabZIP35基因在藍(lán)光下高表達(dá),但剩下的AabZIP31、AabZIP34、AabZIP39 與AabZIP37基 因,包 括D 亞 族AabZIP18與S 亞族中的AabZIP63、AabZIP67基因,在三種中低表達(dá),并在遠(yuǎn)紅外中有較高表達(dá)。H 亞族AabZIP40在除黑暗外的其他光脅迫中均有較高表達(dá),但同AabZIP41基因一樣對(duì)藍(lán)光的響應(yīng)最為顯著,F(xiàn) 亞族的AabZIP22、AabZIP27基因也在藍(lán)光下高表達(dá)。I亞族表達(dá)模式不明,其成員分別對(duì)不同光脅迫處理均有較高表達(dá)。

    3 討論

    隨著對(duì)中藥有效成分研究的不斷深入,越來越多具有生物活性的次生代謝產(chǎn)物被發(fā)現(xiàn),包括萜類、黃酮類、生物堿類等等,這些次生代謝產(chǎn)物在植物中大部分都含量極低且存在化學(xué)合成困難,生物合成途徑復(fù)雜的問題,而通過轉(zhuǎn)錄因子間接調(diào)控其合成途徑中一系列關(guān)鍵酶基因的表達(dá)是現(xiàn)在較常用的一種解決方法[43]。bZIP轉(zhuǎn)錄因子參與調(diào)控多種次生代謝產(chǎn)物的生物合成,但在中藥植物中報(bào)道較少。除黃花蒿中發(fā)現(xiàn)的4 個(gè)[18,19,22,30]青蒿素正向調(diào)控因子外,丹參中SmbZIP7和SmbZIP20也被發(fā)現(xiàn)可能對(duì)丹參酮的生物合成具有調(diào)控功能[44],Sibéril? 等[45]報(bào)道長(zhǎng)春花bZIP家族GBF 轉(zhuǎn)錄因子可以通過結(jié)合萜類吲哚生物堿合成途徑中關(guān)鍵酶基因,丁硫醇合酶啟動(dòng)子上G-box 元件來抑制其表達(dá),D 亞族TGA 轉(zhuǎn)錄因子對(duì)阻礙單萜類吲哚生物堿合成的C2H2 型鋅指蛋白也很可能具有激活作用[46]。

    黃花蒿屬菊科植物,基因組較大且存在大量重復(fù)序列,目前還不能將轉(zhuǎn)錄因子準(zhǔn)確定位到黃花蒿基因組上。這種高雜合性同樣也影響了黃花蒿品種選育,使品系的不穩(wěn)定性增高[3]。本文基于Shen 等[28]黃花蒿全基因組數(shù)據(jù),利用生物信息學(xué)方法對(duì)黃花蒿bZIP 轉(zhuǎn)錄因子家族進(jìn)行全面分析,共鑒定出78 條AabZIP家族成員,并將其分為10 個(gè)亞族和1 個(gè)未分組成員(AabZIP78)。蛋白理化性質(zhì)分析表明AabZIP 氨基酸長(zhǎng)度、理論等電點(diǎn)、分子量大小間差異較大,但所有序列均為親水蛋白,且亞細(xì)胞定位于細(xì)胞核。基因進(jìn)化方面較為穩(wěn)定,除了AabZIP23與AabZIP27基因?qū)ν?,黃花蒿中的復(fù)制基因均經(jīng)歷了純化選擇壓力。結(jié)構(gòu)方面相對(duì)保守,同一亞家族成員具有高度特異性,但特殊序列如AabZIP70、AabZIP45、AabZIP19/AabZIP20等在基因結(jié)構(gòu)方面存在較大差異,AabZIP78 蛋白的bZIP 保守基序也與其他AabZIP 明顯不同,更接近番茄[34]中 報(bào) 道 的N-X9-R/KR/K-X6-L-X6-L-X6-L 結(jié)構(gòu),這些差異都預(yù)示著該轉(zhuǎn)錄因子出現(xiàn)新的特異性結(jié)合或進(jìn)化的可能,需要進(jìn)一步挖掘。

    青蒿素的生物合成途徑由甲羥戊酸(Mevalonic acid,MVA)途徑與2-C-甲基-D-赤蘚糖醇4-磷酸(2-methyl-D-erythritol-4-phosphate,MEP)途徑共同生成FPP,后經(jīng)過關(guān)鍵酶ADS,CYP71AV1,DBR2 和ALDH1等調(diào)控與非酶反應(yīng)最終完成[3]。Zhang 等[24]的研究表明,光照處理,尤其是白光可以增加FPP 的合成,而單色光中,排除可能會(huì)給植物造成較大損害的UV,除遠(yuǎn)紅光起抑制作用外,紅光、白光和藍(lán)光均可導(dǎo)致ADS與CYP71AV1基因過表達(dá),因此推測(cè)藍(lán)光、紅光與白光是正向調(diào)控青蒿素合成的重要光質(zhì),并且藍(lán)光對(duì)ALDH1和DBR2基因也具有誘導(dǎo)作用,同時(shí)還可以抑制競(jìng)爭(zhēng)途徑中合成酶的表達(dá),因此探究這3種光質(zhì),尤其是藍(lán)光調(diào)控下黃花蒿基因表達(dá)模式對(duì)于促進(jìn)青蒿素合成具有重要意義。

    bZIP 轉(zhuǎn)錄因子可以通過結(jié)合光或植物激素誘導(dǎo)基因的啟動(dòng)子區(qū)“ACGT”元件來激活相關(guān)基因表達(dá),進(jìn)而參與青蒿素的合成過程。其中A 亞族可以通過與ABRE 元件(ACGTG)相互作用繼而誘導(dǎo)下游相關(guān)基因的表達(dá),是ABA 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中重要的響應(yīng)因子,在植物非生物脅迫信號(hào)調(diào)控系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用[9],其參與青蒿素的合成,除AabZIP1可以激活A(yù)DS與CYP71AV1外[18],AaABF3(與A 亞族AabZIP11有2 個(gè)氨基酸差異)也可以通過激活醛脫氫酶(ALDH1)進(jìn)而起到積極作用[30,47]。這與A 亞族主要響應(yīng)紅光與藍(lán)光脅迫相吻合。C亞族參與植物蛋白儲(chǔ)存過程并響應(yīng)光調(diào)控[12,48],Shen 等[22]對(duì)AabZIP9(與C 亞族AabZIP16有3個(gè)氨基酸差異)的研究發(fā)現(xiàn)其可以激活A(yù)DS基因,而AabZIP16在藍(lán)光下高表達(dá),因此推測(cè)其功能應(yīng)與AabZIP9一致。

    H 亞族與G 亞族均可能通過結(jié)合G-box 參與調(diào)控。其中G 亞族部分基因表現(xiàn)為對(duì)藍(lán)光的高響應(yīng),剩余G 亞族,包括D 亞族AabZIP18、E 亞族AabZIP19、AabZIP20及部分S 亞族,在除遠(yuǎn)紅光處理外其他光照處理下均表現(xiàn)為低表達(dá)的基因,基于Zhang 等[24]研究推測(cè)其可能不參與調(diào)控或?qū)η噍锼氐暮铣善鹨种谱饔?。而Lv 等[19]的研究也表明AaTGA2(與D 亞族AabZIP18 有1 個(gè)氨基酸差異)在幼葉與嫩芽中表達(dá)量均極低,符合對(duì)AabZIP18功能的推測(cè)。HY5轉(zhuǎn)錄因子在黃花蒿光調(diào)控途徑中具有關(guān)鍵作用,實(shí)驗(yàn)證明AaHY5 可以通過G-box 調(diào)控AaGSW1,增加CYP71AV1與AaORA的表達(dá)[27],且AaORA也是青蒿素合成途徑中的重要轉(zhuǎn)錄因子,對(duì)CYP71AV1,ADS,DBR2及AaERF1均有激活作用[49]。H 亞族的2 個(gè)成員AabZIP40、AabZIP41注釋為HY5 轉(zhuǎn)錄因子,且均在藍(lán)光下高表達(dá),其功能極可能對(duì)光誘導(dǎo)的青蒿素生物合成途徑起正向調(diào)節(jié)作用。

    探索青蒿素的光調(diào)控機(jī)制對(duì)繼續(xù)青蒿素合成研究具有重要意義,本文通過對(duì)黃花蒿bZIP 基因家族進(jìn)行綜合分析,挖掘AabZIP在青蒿素合成途徑中重要作用,期望能為黃花蒿bZIP基因功能與轉(zhuǎn)錄調(diào)控的進(jìn)一步研究提供數(shù)據(jù)支持。

    猜你喜歡
    亞族青蒿素黃花
    二穗短柄草CYP72A亞族成員表達(dá)分析及亞細(xì)胞定位
    云小萱:助大同黃花飄香
    三利黃花:三代人專注59年
    苦蕎蛋白磷酸酶2C家族的鑒定及表達(dá)分析
    黃花梁啊黃花香
    黃河之聲(2020年16期)2020-11-05 01:57:46
    路邊種黃花“一種三得”
    辣椒HD-Zip基因家族鑒定、系統(tǒng)進(jìn)化及表達(dá)分析
    Ataxonomic study of the Subtribe Lathrobiina(Coleoptera,Staphylinidae) in Shanghai
    切莫盲信所謂的“青蒿素食品”
    一種新型的倍半萜內(nèi)酯
    ——青蒿素
    亚洲成色77777| 精品午夜福利在线看| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 国产精品99久久99久久久不卡 | 黄频高清免费视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 韩国av在线不卡| h视频一区二区三区| 制服诱惑二区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲精品视频女| 好男人视频免费观看在线| 国产淫语在线视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 嫩草影院入口| 日韩电影二区| 婷婷色麻豆天堂久久| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲国产看品久久| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看 | 久久久久久人妻| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 精品一区二区三区av网在线观看 | 人人妻人人澡人人看| 亚洲,欧美,日韩| 丝袜在线中文字幕| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 国产精品国产av在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 一二三四在线观看免费中文在| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久精品久久精品一区二区三区| 日本欧美视频一区| 国产精品久久久久久精品电影小说| 黄片播放在线免费| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产xxxxx性猛交| 久久99热这里只频精品6学生| 看非洲黑人一级黄片| 国产日韩欧美视频二区| 日韩欧美一区视频在线观看| 麻豆av在线久日| 好男人视频免费观看在线| 九草在线视频观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美日韩亚洲高清精品| 男女之事视频高清在线观看 | 乱人伦中国视频| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品女同一区二区软件| 国产成人系列免费观看| 中文欧美无线码| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美精品av麻豆av| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲国产精品一区二区三区在线| av不卡在线播放| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产日韩欧美在线精品| 免费不卡黄色视频| av女优亚洲男人天堂| 精品免费久久久久久久清纯 | 99热国产这里只有精品6| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 精品免费久久久久久久清纯 | 赤兔流量卡办理| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美在线黄色| 久久久久国产一级毛片高清牌| tube8黄色片| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产一区有黄有色的免费视频| 十分钟在线观看高清视频www| 999久久久国产精品视频| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜激情av网站| 男女免费视频国产| 无限看片的www在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 在线观看免费高清a一片| 美女中出高潮动态图| av又黄又爽大尺度在线免费看| av在线老鸭窝| e午夜精品久久久久久久| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日本一区二区免费在线视频| 悠悠久久av| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲精品,欧美精品| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 人体艺术视频欧美日本| 黄色视频不卡| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲中文av在线| 毛片一级片免费看久久久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 在线 av 中文字幕| 国产视频首页在线观看| 男人操女人黄网站| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 国产99久久九九免费精品| 看十八女毛片水多多多| 午夜福利影视在线免费观看| 国产伦人伦偷精品视频| av电影中文网址| av在线观看视频网站免费| 91精品三级在线观看| 老熟女久久久| 久久久久久久久免费视频了| 波多野结衣一区麻豆| 国产淫语在线视频| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲久久久国产精品| 亚洲欧美一区二区三区久久| 人成视频在线观看免费观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲欧洲日产国产| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲国产最新在线播放| 欧美在线一区亚洲| 亚洲熟女毛片儿| 国产一区二区三区av在线| 午夜精品国产一区二区电影| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 久久狼人影院| 国产片内射在线| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 中文字幕av电影在线播放| 最近中文字幕2019免费版| 国产老妇伦熟女老妇高清| 又大又爽又粗| 美女视频免费永久观看网站| 少妇人妻久久综合中文| 热99久久久久精品小说推荐| 国精品久久久久久国模美| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久久久精品性色| 男人操女人黄网站| 日本91视频免费播放| 一级片'在线观看视频| 亚洲,欧美,日韩| 在线观看www视频免费| 制服人妻中文乱码| 国产极品天堂在线| 日韩一区二区视频免费看| 黄色怎么调成土黄色| 欧美日韩综合久久久久久| 美国免费a级毛片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 最近的中文字幕免费完整| 免费高清在线观看视频在线观看| 超碰97精品在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 制服诱惑二区| 国产av码专区亚洲av| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久人妻熟女aⅴ| 久久精品久久久久久久性| av在线观看视频网站免费| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美日韩一级在线毛片| avwww免费| 国产1区2区3区精品| 精品福利永久在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲久久久国产精品| 五月天丁香电影| 哪个播放器可以免费观看大片| 涩涩av久久男人的天堂| 国产一区二区 视频在线| 精品国产露脸久久av麻豆| 97精品久久久久久久久久精品| 成人国产麻豆网| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日韩成人av中文字幕在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲熟女毛片儿| 七月丁香在线播放| 亚洲,欧美,日韩| 五月天丁香电影| 人人妻人人澡人人看| 欧美97在线视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 视频在线观看一区二区三区| 国产免费现黄频在线看| 精品国产乱码久久久久久男人| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 最近最新中文字幕免费大全7| 尾随美女入室| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| av视频免费观看在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 黄片无遮挡物在线观看| 午夜免费观看性视频| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲成人手机| 韩国高清视频一区二区三区| 久久婷婷青草| 国产免费现黄频在线看| 亚洲av电影在线进入| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 午夜91福利影院| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久久精品免费免费高清| 黄片无遮挡物在线观看| 搡老乐熟女国产| 国产日韩欧美视频二区| 国产一卡二卡三卡精品 | 桃花免费在线播放| 99久久综合免费| www.自偷自拍.com| 精品人妻在线不人妻| 老鸭窝网址在线观看| www.精华液| 欧美日韩精品网址| 深夜精品福利| 最新的欧美精品一区二区| 国产亚洲最大av| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 午夜免费男女啪啪视频观看| 香蕉国产在线看| 毛片一级片免费看久久久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 人成视频在线观看免费观看| 一级毛片电影观看| 亚洲精品国产区一区二| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 少妇人妻 视频| 美女福利国产在线| 搡老岳熟女国产| 欧美精品一区二区大全| 久久热在线av| 免费黄色在线免费观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 老司机靠b影院| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品国产三级专区第一集| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产不卡av网站在线观看| 久久免费观看电影| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲精品在线美女| 亚洲精品美女久久av网站| 看非洲黑人一级黄片| 午夜日韩欧美国产| av线在线观看网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 黄片无遮挡物在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 色网站视频免费| 一级毛片 在线播放| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲精品在线美女| 久久毛片免费看一区二区三区| 欧美精品一区二区免费开放| 国产免费视频播放在线视频| 尾随美女入室| 国产精品三级大全| 亚洲欧美色中文字幕在线| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲精品在线美女| 亚洲精品自拍成人| 国产精品嫩草影院av在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品女同一区二区软件| 考比视频在线观看| 精品久久蜜臀av无| 男女午夜视频在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 十分钟在线观看高清视频www| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 91国产中文字幕| 亚洲综合精品二区| 国产精品.久久久| 亚洲国产精品一区三区| avwww免费| 日韩大片免费观看网站| 成年av动漫网址| 亚洲人成电影观看| 老司机在亚洲福利影院| 大陆偷拍与自拍| 一二三四中文在线观看免费高清| 十八禁网站网址无遮挡| 久久影院123| 男女无遮挡免费网站观看| 一级毛片 在线播放| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 91aial.com中文字幕在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 五月开心婷婷网| 久久久久久久精品精品| 久久亚洲国产成人精品v| 国产精品欧美亚洲77777| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲伊人久久精品综合| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 一区在线观看完整版| 一级黄片播放器| 日韩人妻精品一区2区三区| www日本在线高清视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久青草综合色| 宅男免费午夜| 国产视频首页在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 大片电影免费在线观看免费| 天天影视国产精品| 成人国语在线视频| 在线观看人妻少妇| 性少妇av在线| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久这里只有精品19| 国产爽快片一区二区三区| 男人操女人黄网站| 国产一级毛片在线| 午夜av观看不卡| 秋霞在线观看毛片| 18在线观看网站| 少妇 在线观看| 伊人亚洲综合成人网| 成年人午夜在线观看视频| 欧美xxⅹ黑人| 在线 av 中文字幕| 精品福利永久在线观看| av不卡在线播放| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品久久久精品久久久| 在线天堂最新版资源| 一级毛片我不卡| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲综合精品二区| 国产伦人伦偷精品视频| www日本在线高清视频| 男女免费视频国产| 下体分泌物呈黄色| a级毛片在线看网站| 亚洲精品日本国产第一区| 国产伦人伦偷精品视频| 老司机深夜福利视频在线观看 | 精品酒店卫生间| 亚洲 欧美一区二区三区| 日本黄色日本黄色录像| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲中文av在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 女人久久www免费人成看片| 天美传媒精品一区二区| 黄色一级大片看看| 国产成人免费无遮挡视频| av有码第一页| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲成色77777| 国产免费一区二区三区四区乱码| 成人免费观看视频高清| 午夜日韩欧美国产| 精品国产乱码久久久久久男人| 丰满少妇做爰视频| 欧美日韩综合久久久久久| 人妻人人澡人人爽人人| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 99久国产av精品国产电影| 国产熟女欧美一区二区| 老司机影院成人| 亚洲av日韩在线播放| 毛片一级片免费看久久久久| videosex国产| 久久韩国三级中文字幕| 成人亚洲精品一区在线观看| netflix在线观看网站| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲成色77777| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲av电影在线进入| 在线观看免费高清a一片| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 97在线人人人人妻| 国产在视频线精品| tube8黄色片| 亚洲天堂av无毛| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产av码专区亚洲av| 国产成人av激情在线播放| 国产免费又黄又爽又色| 1024视频免费在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲三区欧美一区| 久久99一区二区三区| 久久 成人 亚洲| 免费在线观看完整版高清| 最新在线观看一区二区三区 | 久久久久精品久久久久真实原创| 久久这里只有精品19| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 美女高潮到喷水免费观看| 精品午夜福利在线看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美最新免费一区二区三区| 国产成人免费无遮挡视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲五月色婷婷综合| 高清黄色对白视频在线免费看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲中文av在线| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲欧美成人精品一区二区| svipshipincom国产片| 欧美97在线视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲av欧美aⅴ国产| 免费高清在线观看日韩| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产又爽黄色视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 三上悠亚av全集在线观看| 一区二区三区精品91| 久久人人爽人人片av| 日本色播在线视频| 免费黄频网站在线观看国产| www.熟女人妻精品国产| 高清视频免费观看一区二区| 久久99热这里只频精品6学生| www.av在线官网国产| 日日摸夜夜添夜夜爱| 午夜福利免费观看在线| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品99久久99久久久不卡 | 97精品久久久久久久久久精品| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲国产av新网站| 十八禁高潮呻吟视频| 国产成人免费观看mmmm| 午夜影院在线不卡| 欧美中文综合在线视频| 久久久精品免费免费高清| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久亚洲国产成人精品v| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 又大又黄又爽视频免费| 日本91视频免费播放| 欧美中文综合在线视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 咕卡用的链子| 日韩一本色道免费dvd| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产成人欧美在线观看 | 大陆偷拍与自拍| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久性视频一级片| 国产日韩欧美亚洲二区| 中文字幕最新亚洲高清| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 99热国产这里只有精品6| 免费少妇av软件| 成人影院久久| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲精品第二区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 精品一区二区三卡| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 欧美在线黄色| 日本爱情动作片www.在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 夜夜骑夜夜射夜夜干| 日韩大码丰满熟妇| av在线app专区| 男女国产视频网站| 免费高清在线观看日韩| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 在线观看免费视频网站a站| 一区二区三区四区激情视频| 永久免费av网站大全| 飞空精品影院首页| 国产亚洲欧美精品永久| www.av在线官网国产| 亚洲精品日本国产第一区| 波多野结衣一区麻豆| 高清在线视频一区二区三区| 黑人猛操日本美女一级片| 久久久国产精品麻豆| 亚洲一区中文字幕在线| 国产熟女午夜一区二区三区| 在线观看一区二区三区激情| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产亚洲一区二区精品| 桃花免费在线播放| 国产毛片在线视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 嫩草影视91久久| 黑人猛操日本美女一级片| 久久精品人人爽人人爽视色| 少妇人妻精品综合一区二区| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲,欧美精品.| 高清欧美精品videossex| 一区二区三区精品91| 免费黄网站久久成人精品| 极品人妻少妇av视频| 激情视频va一区二区三区| 91成人精品电影| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 女人精品久久久久毛片| 国产xxxxx性猛交| 国产片内射在线| 亚洲在久久综合| 高清不卡的av网站| 性高湖久久久久久久久免费观看| 99九九在线精品视频| 亚洲七黄色美女视频| 少妇 在线观看| 国产 一区精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 女人精品久久久久毛片| 日本欧美视频一区| www.熟女人妻精品国产| 尾随美女入室| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 老汉色av国产亚洲站长工具| 校园人妻丝袜中文字幕| 九草在线视频观看| 咕卡用的链子| 男的添女的下面高潮视频| a 毛片基地| 青草久久国产| 九九爱精品视频在线观看| 国产97色在线日韩免费| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 伦理电影免费视频| 九草在线视频观看| 最近手机中文字幕大全| 亚洲第一区二区三区不卡| 不卡av一区二区三区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 日韩大码丰满熟妇| 国产一级毛片在线| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 欧美av亚洲av综合av国产av | 国产一级毛片在线| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品三级大全| 国产精品二区激情视频| 亚洲成人手机| 男女下面插进去视频免费观看| 国产乱来视频区| 成人国产麻豆网| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 一级毛片电影观看| 黄色一级大片看看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲精品aⅴ在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日韩伦理黄色片| 欧美精品高潮呻吟av久久| 中文字幕最新亚洲高清| 大香蕉久久网| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久亚洲精品成人影院| 在线观看www视频免费| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 水蜜桃什么品种好| 国产成人欧美在线观看 | 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 久久久久视频综合| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲欧美激情在线|