口腔清潔護(hù)理用品 牙膏中氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽5種殺菌劑含量的測(cè)定 高效液相色譜法(GB/T 38741-2020)

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)輕工業(yè)聯(lián)合會(huì)提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)口腔護(hù)理用品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(sac/TC492)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：蘇州世譜檢測(cè)技術(shù)有限公司、廣州華鑫檢測(cè)技術(shù)有限公司、蘇州綠葉日用品有限公司、蘇州質(zhì)量檢測(cè)科學(xué)研究院、廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)研究院、黑龍江省輕工科學(xué)研究院、青蛙王子(中國(guó))日化有限公司、無(wú)限極(中國(guó))有限公司、江蘇省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、河北省食品檢驗(yàn)研究院、江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、江蘇省藥品監(jiān)督管理局蘇州檢查分局、蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究中心、常州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)中心、常州檢驗(yàn)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)證研究院。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：尋知慶、宋淑文、葉竹洪、劉冬、代丹、尚維、王景、孟玉、張征、張巖、陳杰峰、孫紅梅、溫文忠、周奇、褚葉果、陳衛(wèi)、李紅玉、李穎怡、施兵、汪晨霞、李冬亮、郭燕華、朱丹丹、郭新東、吳玉鑾、黃志寧、劉群林、高紅影、朱釔蓉、周飛、吳燕鵬、郭夢(mèng)婷、盧劍。

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牙膏中氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽5種殺菌劑含量的測(cè)定高效液相色譜法的原理、試劑或材料、儀器設(shè)備、試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、檢出限與定量限、回收率和精密度。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于牙膏和漱口水中氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽含量的測(cè)定。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

3 原理

試樣經(jīng)甲酸-甲醇-水混合溶液超聲提取后，用高效液相色譜法測(cè)定，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

4 試劑或材料

除另有說(shuō)明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.1甲酸：色譜純。

4.2三氟乙酸：色譜純。

4.3甲醇：色譜級(jí)。

4.40.1%甲酸甲醇溶液：準(zhǔn)確移取1mL甲酸(見(jiàn)4.1)，用甲醇(見(jiàn)4.3)稀釋至1L。

4.50.1%甲酸溶液：準(zhǔn)確移取1mL甲酸(見(jiàn)4.1)，用水稀釋至1L。

4.6甲酸-甲醇-水混合溶液：準(zhǔn)確量取80mL0.1%甲酸甲醇溶液(見(jiàn)4.4)和20mL0.1%甲酸溶液(見(jiàn)4.5)，混勻。

4.70.1%三氟乙酸甲醇溶液：準(zhǔn)確移取1mL三氟乙酸(見(jiàn)4.2)，用甲醇(見(jiàn)4.3)稀釋至1L。

4.80.1%三氟乙酸溶液：準(zhǔn)確移取1mL三氟乙酸(見(jiàn)4.2)，用水稀釋至1L。

4.9標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽，純度≥98%，其中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)式參見(jiàn)附錄A中表A.1。

4.10標(biāo)準(zhǔn)貯備液(各為1000mg/L)：準(zhǔn)確稱取己脒定二(羥乙基磺酸)鹽標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(見(jiàn)4.9)0.1g(精確至0.1mg)，置于100mL棕色容量瓶中，用水溶解并定容。準(zhǔn)確稱取氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(4.9)各0.1g(精確至0.1mg)，分別置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇(見(jiàn)4.3)溶解并定容。于0℃～4℃避光條件下保存，可保存3個(gè)月。

4.11混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作溶液(各為100mg/L)：準(zhǔn)確移取氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸、氯二甲酚和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液(見(jiàn)4.10)各1mL，置于10mL 棕色容量瓶中，用甲醇(4.3)稀釋并定容，現(xiàn)配現(xiàn)用。

4.12濾膜：孔徑為0.22μm的有機(jī)過(guò)濾膜。

5 儀器設(shè)備

5.1高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。

5.2分析天平：感量0.001g和0.0001g。

5.3離心機(jī)：最高轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。

5.4超聲波清洗儀：工作功率不低于40kHz。

5.5漩渦振蕩器。

6 試驗(yàn)步驟

6.1試樣處理

準(zhǔn)確稱取1.0g(精確至0.001g)試樣，置于15mL具塞離心管中，加入5.0mL甲酸-甲醇-水混合溶液(見(jiàn)4.6)，于漩渦振蕩器上振蕩混勻后，超聲提取15min，冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中。用3mL甲酸-甲醇-水混合溶液(見(jiàn)4.6)分2次洗滌離心管，洗滌液轉(zhuǎn)移至容量瓶中，然后用甲酸-甲醇-水混合溶液(見(jiàn)4.6)定容至刻度。取部分溶液于離心管中，10000r/min離心5min，上清液經(jīng)濾膜過(guò)濾后，待高效液相色譜儀測(cè)定。

6.2液相色譜參考工作條件

液相色譜參考工作條件如下：

a)色譜柱：C18柱，5μm，150mm×4.6mm(內(nèi)徑)；

b)流動(dòng)相：A：0.1%三氟乙酸甲醇溶液(見(jiàn)4.7)，B：0.1%三氟乙酸溶液(見(jiàn)4.8)，梯度洗脫條件見(jiàn)表1；

c)流量：1.0mL/min；

d)柱溫：30℃；

e)進(jìn)樣量：20μL；

f)波長(zhǎng)：280nm。

表1 梯度洗脫條件

6.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作

用甲酸-甲醇-水混合溶液(見(jiàn)4.6)逐級(jí)稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作溶液(見(jiàn)4.11)，得到質(zhì)量濃度為0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按色譜條件(見(jiàn)6.2)進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖，制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見(jiàn)附錄B中圖B.1。

6.4試樣測(cè)定

按色譜條件(見(jiàn)6.2)測(cè)定試樣溶液(見(jiàn)6.1)，如果檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的一致，并且在扣除背景后的樣品色譜圖中，該物質(zhì)的光譜圖與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的一致(參見(jiàn)圖B.2)，可初步認(rèn)定樣品為陽(yáng)性樣品。記錄色譜峰的峰面積，以外標(biāo)法定量。試樣溶液中被測(cè)物的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的線性范圍之內(nèi)，超出線性范圍的試樣溶液可用甲酸-甲醇-水混合溶液(見(jiàn)4.6)稀釋后進(jìn)行測(cè)定。需要時(shí)，可采用高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)(參見(jiàn)附錄C)。

6.5空白試驗(yàn)

除不稱取試樣外，均按6.1～6.4進(jìn)行測(cè)定。

7 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

試樣中各待測(cè)組分的含量，計(jì)算見(jiàn)公式(1)計(jì)算：

(1)

式中：Xi──試樣中被測(cè)組分的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；

ρi──試樣溶液中被測(cè)組分的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L)；

ρ0──空白試驗(yàn)溶液中被測(cè)組分的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L)；

V──定容體積，單位為毫升(mL)；

m──試樣質(zhì)量，單位為克(g);

f──試樣稀釋倍數(shù)。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

8 檢出限與定量限

氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽的方法檢出限均為2.50mg/kg，定量下限均為5.00mg/kg。氯二甲酚的方法檢出限為5.00mg/kg，定量下限為10.0mg/kg。

9 回收率

氯己定、呋喃西林、雙氯芬酸和己脒定二(羥乙基磺酸)鹽在添加濃度5.00mg/kg～50.0mg/kg范圍內(nèi)，氯二甲酚在添加濃度10.0mg/kg～100mg/kg范圍內(nèi)，回收率均在80%～110%之間。

10 精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

附 錄A

(規(guī)范性附錄)

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量及化學(xué)結(jié)構(gòu)式，見(jiàn)表A.1。

表A.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量及化學(xué)結(jié)構(gòu)式

附 錄B

(資料性附錄)

標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖及光譜圖

標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜見(jiàn)圖B.1。

圖B.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖

5種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的紫外光譜見(jiàn)圖B.2。

圖B.2 5種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的紫外光譜圖

附 錄 C

(資料性附錄)

確證試驗(yàn)

C.1 液相色譜參考工作條件

液相色譜參考工作條件如下：

a)色譜柱：C18柱，1.7μm，50mm×2.1mm(內(nèi)徑)；

b)流動(dòng)相：A為0.1%三氟乙酸乙腈溶液，B為0.1%三氟乙酸水溶液，梯度洗脫程序：0min～2.0min，20% A；2.0min～7.0min，20%～80% A；7.0min～9.0min，80% A；9.0min～9.1min，80% A～20% A；9.1min～12.0min，20% A；

c)流速：0.3mL/min；

d)柱溫：30℃；

e)進(jìn)樣量：5μL。

C.2 質(zhì)譜參考工作條件

質(zhì)譜參考工作條件如下：

a)離子源：電噴霧離子源(ESI)；

b)掃描方式：正離子和負(fù)離子掃描；

c)電噴霧電壓：4500V；

d)離子源溫度：500℃；

e)氣簾氣：氮?dú)猓?.207MPa；

f)碰撞氣：氮?dú)猓?.055MPa；

g)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；5種殺菌劑的采集模式、母離子、子離子、去簇電壓和碰撞電壓見(jiàn)表C.1；提取離子色譜圖，見(jiàn)圖C.1。

表C.1 5種殺菌劑的質(zhì)譜MRM模式優(yōu)化參數(shù)

圖C.1 5種殺菌劑的提取離子色譜圖

C.3定性測(cè)定

進(jìn)行試樣測(cè)定時(shí)，將試樣適當(dāng)稀釋，按液相色譜參考工作條件(見(jiàn)C.1)和質(zhì)譜參考工作條件(見(jiàn)C.2)測(cè)定樣液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果檢出色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且選擇離子的相對(duì)豐度與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的進(jìn)行比較，相對(duì)偏差不超過(guò)規(guī)定的范圍(見(jiàn)表C.2)，則可判斷該樣品為陽(yáng)性樣品。

表C.2 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差