• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    健康與患病大黃魚消化道微生物結(jié)構(gòu)特征分析?

    2021-03-23 07:20:36于超勇徐永江柳學周鄭煒強
    關鍵詞:病魚大黃魚弧菌

    姜 燕, 于超勇, 徐永江, 柳學周??, 鄭煒強, 陳 佳, 劉 瑩, 王 濱, 史 寶

    (1. 大黃魚育種國家重點實驗室 寧德市富發(fā)水產(chǎn)有限公司, 福建 寧德 352103;2. 中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所 青島海洋科學與技術試點國家實驗室海洋漁業(yè)科學與食物產(chǎn)出過程功能實驗室, 山東 青島 266071;3. 山東省海洋生物研究院, 山東 青島 266104)

    大黃魚(Larimichthyscrocea)是中國主要經(jīng)濟魚類之一,其繁育和養(yǎng)殖技術處于世界領先地位,在中國福建、浙江、廣東等沿海省份均有養(yǎng)殖,其中,福建省養(yǎng)殖規(guī)模相對較大,2017年產(chǎn)量占全國大黃魚總產(chǎn)量的84.75%,高達150 542 t,比2016年增長4 028 t[1-2]。養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴大的同時,環(huán)境脅迫、養(yǎng)殖管理不規(guī)范等各種問題不斷涌現(xiàn),導致大黃魚養(yǎng)殖病害頻發(fā),嚴重限制產(chǎn)業(yè)的健康、持續(xù)發(fā)展。據(jù)統(tǒng)計,大黃魚病害種類達30余種,細菌性疾病占據(jù)80%以上,并且,弧菌是大黃魚潰瘍病和腸炎病的主要病原,可以說,弧菌病是危害最為嚴重的細菌性疾病之一[3]。

    腸道中居住著大量微生物,其攜帶的基因被稱為機體的第二套基因組,能夠編碼合成多種消化酶參與消化道內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的降解,并且,腸道微生物能夠通過營養(yǎng)競爭、粘附位點競爭和產(chǎn)物抑制等方式阻止外源微生物在腸道中的定植[4-6]??梢哉f,腸道微生物對宿主的營養(yǎng)、免疫方面均發(fā)揮重要作用。同時,宿主生理階段和環(huán)境因子等能夠不同程度的影響腸道微生物群組成與分布[7-12]。因此,養(yǎng)殖密度、溫度等環(huán)境因子的脅迫極易打破魚類腸道微生物群的平衡狀態(tài),從而導致各種疾病的爆發(fā),造成經(jīng)濟損失。

    本文作者在大黃魚室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖過程中,發(fā)現(xiàn)個別養(yǎng)殖池內(nèi)的大黃魚出現(xiàn)游動緩慢和死亡現(xiàn)象,即刻隨機撈取幾尾瀕臨死亡的患病魚觀察,發(fā)現(xiàn)其消化道內(nèi)無食糜,腸道積存大量淺黃色黏液,類似腸炎的癥狀。為認知大黃魚消化道微生物群結(jié)構(gòu)與病害發(fā)生的關聯(lián)性,本研究以患病魚為對象,比較分析其消化道微生物群結(jié)構(gòu)特征與健康魚體的差異,及其與環(huán)境菌群結(jié)構(gòu)的聯(lián)系,明確主要致病菌,以期為大黃魚養(yǎng)殖過程中消化道生理健康判別及益生菌有效調(diào)控提供參考資料。

    1 材料與方法

    1.1 樣本采集與處理

    試驗所采集大黃魚均來自于寧德富發(fā)水產(chǎn)有限公司的工廠化養(yǎng)殖池中,由同批受精卵孵化而來,養(yǎng)殖密度為60尾·m-3,水溫為13~16 ℃,體重為90~110 g。上午投喂前采集各樣本,患病大黃魚從發(fā)病池中隨機采集游動活力極弱的6尾作為平行樣本;從未出現(xiàn)任何病癥且魚體游動力較強的養(yǎng)殖池中隨機選擇一個作為健康魚樣本采集池,從中隨機撈取6尾作為平行樣本。

    消化道樣本:健康組的試驗魚經(jīng)MS-222 (Fluka, USA)麻醉后,同患病組試驗魚在無菌環(huán)境下采用75%酒精擦拭體表進行解剖,分別剪取大黃魚消化道各組織(胃、幽門盲囊、腸道),去除各組織周圍的脂肪等組織并擠去剩余的內(nèi)容物,采用預冷的生理鹽水沖洗各組織,分裝后保存于液氮中備用。

    水環(huán)境樣本:同一養(yǎng)殖車間的進水口相同,因此,對進水口的水樣采集 3次作為平行樣本,每次3 L,現(xiàn)場經(jīng)0.22 μm的濾膜真空抽濾,濾膜分裝后液氮中保存,用于養(yǎng)殖用水微生物分析。

    飼料樣本:試驗魚的規(guī)格相同,所用配合飼料也完全相同。分別稱取3份0.1 g的配合飼料作為3個平行樣本于液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2 微生物總DNA提取與高通量測序

    將液氮保存的各試驗樣本分別取出,液氮研磨,消化道、飼料樣本通過QIAamp DNA mini kit (QIAGEN, Germany)試劑盒提取微生物總DNA;采用OMEGA Soil DNA kit (Omega Bio-Tek, USA)試劑盒提取水體微生物總DNA。共計提取24個生物樣本(見表1)的微生物總DNA,用于后續(xù)的微生物結(jié)構(gòu)與功能分析。提取的DNA通過濃度和純度檢測后,采用PCR技術擴增16s rDNA V3~V4高變區(qū)的序列,擴增所用引物為338F (5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3’)和806R (5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’),擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測合格后構(gòu)建文庫,采用Illumina MiSeq PE300平臺進行高通量測序。

    表1 高通量測序生物樣本信息

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    將測序所得的原始數(shù)據(jù)通過Trimmomatic (v 0.35)、Flash (v 1.2.11)、Uchime (v 4.2)等軟件進行一系列的去雜、拼接、去嵌合體等處理得到有效序列。依據(jù)序列相似度≥97%的歸為1個可操作分類單元(Operational Taconomic Unit, OTU)的原則對有效序列進行歸類操作,選取各OTU的代表性序列,采用Silva數(shù)據(jù)庫(v 123)對OTUs代表序列進行物種注釋,保留置信區(qū)間大于0.7的注釋結(jié)果。采用tax4fun (0.3.1)對微生物組基因參與的KEGG通路進行比對分析。

    采用單因素方差分析(One-way ANOVA)方法對結(jié)果數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,利用Duncan’s檢驗對同一處理組大黃魚不同消化道組織間的差異性進行多重比較,采用T-test檢驗對不同健康狀態(tài)大黃魚相同消化道組織間進行差異性分析,顯著性水平為P<0.05。所有數(shù)值均采用平均值±標準誤(Means±SE)表示。

    2 結(jié)果

    2.1 大黃魚消化道微生物多樣性

    采集的24個生物樣本經(jīng)高通量測序和數(shù)據(jù)處理,共得到814 494條有效序列,歸類分析后共得到2 239個OTUs。

    在健康大黃魚消化道中,從胃到幽門盲囊直至腸道,其中的微生物群Chao1指數(shù)由812.01下降至311.22;香農(nóng)指數(shù)同樣呈現(xiàn)逐漸下降趨勢,由胃部的7.32下降至6.23,胃中微生物群的多樣性均顯著高于幽門盲囊和腸道中的(P<0.05),但幽門盲囊和腸道中的多樣性指數(shù)差異不顯著(P>0.05) (見表2)。

    表2 兩種健康狀況大黃魚消化道菌群多樣性

    患病大黃魚消化道中微生物群多樣性發(fā)生變化,Chao1指數(shù)呈現(xiàn)先下降后上升趨勢,在腸道中表現(xiàn)出最高值(509.57),顯著高于幽門盲囊中的(P<0.05);香農(nóng)指數(shù)則逐漸升高,但是差異均不顯著(P>0.05)。

    健康大黃魚胃中的多樣性指數(shù)高于病魚,但腸道中的香農(nóng)指數(shù)則顯著低于病魚的(P>0.05)。

    2.2 大黃魚消化道微生物群結(jié)構(gòu)特征

    圖1A顯示了兩種健康狀況大黃魚消化道微生物群門水平分布信息,在健康大黃魚消化道中,從胃到幽門盲囊和腸道,厚壁菌門(Firmicutes)豐度(31.59%~34.84%)波動不明顯,擬桿菌門(Bacteroidetes)(13.40%~39.88%)則呈現(xiàn)下降趨勢,而變形菌門(Proteobacteria)(21.34%~42.92%)則迅速上升并成為最優(yōu)勢菌門。在患病大黃魚胃部,變形菌門優(yōu)勢地位明顯(74.84%),而在幽門盲囊和腸道中則下降至46.72%~51.49%;擬桿菌門相對豐度變化較小;厚壁菌門的豐度則由胃中的5.60%到幽門盲囊和腸道中上升至24.95%~27.62%。

    變形菌門、擬桿菌門和厚壁菌門為兩種健康狀況大黃魚相對豐度較高的物種,三者的豐度之和為85.03%~94.58%,并且幽門盲囊和腸道中的優(yōu)勢菌群組成較為相近(見圖1A)。其中,厚壁菌門和擬桿菌門在健康大黃魚胃中的相對豐度顯著高于病魚的(P<0.05),變形菌門豐度則顯著低于病魚的(P<0.05);厚壁菌門和酸桿菌門(Acidobacteria)在健康大黃魚腸道中的豐度顯著高于病魚的(P<0.05),而變形菌門、疣微菌門(Verrucomicrobia)、芽單胞菌門(Gemmatimona-detes)和酸桿菌門的豐度則顯著低于病魚的(P<0.05) (見圖1B)。

    (A:各部位優(yōu)勢菌群組成特征;B:健康和患病魚消化道差異菌群特征;I1YS、I1YP、I1YG分別表示健康大黃魚胃、幽門盲囊、腸道樣本;I1DYS、I1DYP、I1DYG分別表示患病大黃魚胃、幽門盲囊、腸道樣本;其中,I1YS1、I1YS2、I1YS3、……、I1DYG2和I1DYG3分別表示I1YS、I1YP、……、I1DYG的平行樣本。下同。A represents the composition of dominant microbiota of gastrointestinal tract; B represents the composition of gastrointestinal microbiota with significant differences between healthy and diseased large yellow croaker; I1YS, I1YP and I1YG represent stomach, pyloric caecum and gut of healthy large yellow croaker, while I1DYS, I1DYP and I1DYG represent those of diseased large yellow croaker; I1YS1, I1YS2, I1YS3, ……, I1DYG2 and I1DYG3 represent the parallel samples of I1YS, I1YP, ……, I1DYP and I1DYG. The same as below.)

    圖2A顯示了每個樣本中相對豐度排列前十的菌屬,可以看出,在健康大黃魚胃中擬桿菌屬(Bacteroides)的相對豐度最高(23.70%),到幽門盲囊和腸道下降至1.16%~1.32%;幽門盲囊和腸道中的乳桿菌屬(Lactobacillus)的相對豐度由胃中的5.84%上升至15.75%~17.04%。在患病大黃魚胃中,Aliivibrio的相對豐度最高(33.68%),弧菌屬(Vibrio)的豐度(20.21%)次之,隨著消化道的延伸豐度分別下降至5.98%和3.69%;乳桿菌屬的豐度在胃中為6.72%,到幽門盲囊和腸道中則上升至11.99%~12.51%。

    圖2B顯示了兩種健康狀況大黃魚消化道各部分差異均屬的組成情況,可以看出,健康魚胃中Alii-vibrio的相對豐度顯著低于病魚(P<0.05),擬桿菌屬、普氏菌屬(Prevotella)、Parabacteroides、Blautia和Faecalibacterium等的相對豐度則顯著低于病魚胃中的(P<0.05);健康魚幽門盲囊中,僅Aliivibrio的相對豐度顯著低于病魚的 (P<0.05);健康魚腸道中,Aliivibrio和鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)的相對豐度顯著低于病魚的(P<0.05),而乳桿菌屬、芽孢桿菌屬(Bacillus)、擬桿菌屬等的相對豐度則顯著高于病魚的(P<0.05)。

    (A:各部位優(yōu)勢菌群分布特征;B:健康與患病魚體消化道差異菌群特征。A represents the distribution of dominant microbiota of gastrointestinal tract; B represents the composition of gastrointestinal microbiota with significant differences between healthy and diseased large yellow croaker.)

    2.3 大黃魚消化道微生物群功能特征

    大黃魚消化道各部分微生物參與KEGG通路的基因數(shù)目分布情況基本相近,主要集中于新陳代謝和環(huán)境信息處理中(見圖3)。其中,在二級水平下,兩種健康狀況大黃魚胃中的微生物參與神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)方面基因數(shù)目差異顯著(P<0.05);在幽門盲囊中,參與異源物質(zhì)生物降解于代謝、萜類和聚酮化合物代謝、脂類代謝、其他次級代謝物生物合成通路的基因數(shù)目差異顯著(P<0.05);腸道中,則參與核苷酸代謝和膜轉(zhuǎn)運通路等的基因數(shù)目差異顯著(P<0.05)。

    (*:差異顯著。*:Represents significant difference.)

    2.4 大黃魚消化道微生物與環(huán)境微生物的相似性

    分別對兩種健康狀況大黃魚消化道各部分與環(huán)境樣品進行主成分分析(Principal components analysis, PCA),從圖4中可以看出,健康大黃魚胃、幽門盲囊和腸道樣品分別相對比較聚集,與病魚消化道各部分之間形成一定的距離,說明病魚消化道各部分中的微生物組成與健康個體消化道各部分的微生物組成存在一定的差異。結(jié)合PC1和PC2的貢獻率,可以得出,兩種大黃魚消化道各部分與飼料樣品間的距離相對較近,說明消化道微生物組成與飼料微生物組成相近。

    (A:大黃魚胃部菌群與環(huán)境菌群;B:大黃魚幽門盲囊菌群與環(huán)境菌群;C:大黃魚腸道菌群與環(huán)境菌群。IYW1、IYW2、……、s1YF3分別表示水環(huán)境樣本、飼料樣本的三個平行樣本。A: represents microbiota in large yellow croaker stomach and environment; B: represents microbiota in large yellow croaker pyloric caecum and environment; C: represents microbiota in large yellow croaker gut and environment. IYW1, ITW2, ……, s1YF3 represent parallel samples of water and feed.)

    2.5 大黃魚消化道主要微生物群在各樣品中分布特征

    大黃魚胃、幽門盲囊和腸道中相對豐度高于5%的微生物群在生物樣本中的分布特征如圖5所示,在健康魚消化道中Aliivibrio的相對豐度分別為0.020%、0.001%、0.005%,病魚消化道Aliivibrio的相對豐度則是健康魚的1 702.83~10 957.55倍,弧菌屬的相對豐度是健康魚的19.10~66.10倍;而健康魚胃中擬桿菌屬的豐度則是病魚胃中的80.59倍。這些主要菌屬在大黃魚攝食飼料中的相對豐度均高于水環(huán)境中的,其中,乳桿菌屬在飼料中的豐度(8.02%)相對較高,但僅為水環(huán)境中6.72倍;飼料中弧菌屬的豐度雖然僅為1.19%,但卻是水環(huán)境中的78.02倍。

    圖5 大黃魚主要微生物在消化道各部位和環(huán)境樣品中的分布

    3 討論

    3.1 患病對消化道菌群結(jié)構(gòu)的影響

    在健康大黃魚消化道/腸道中,變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門為主要的優(yōu)勢物種[13]。本研究中,兩種健康狀態(tài)大黃魚消化道中主要優(yōu)勢菌門依然為變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門,但是其相對豐度存在顯著性差異,說明這些菌門始終存在于大黃魚消化道中,并且伴隨著發(fā)病的過程其結(jié)構(gòu)也發(fā)生了較大的改變[14]。擬桿菌屬、乳桿菌屬、Aliivibrio和弧菌屬為主要的優(yōu)勢菌屬,其中,Aliivibrio在病魚整個消化道中的豐度顯著高于健康魚消化道中的,且差異懸殊;弧菌屬在病魚整個消化道中的豐度與健康魚中的相比,雖然差異不顯著,但也是健康魚中的19.10~66.10倍;并且Alii-vibrio和弧菌屬在病魚胃中的豐度均最高,隨著消化道的延伸,二者的豐度均呈現(xiàn)下降趨勢,在幽門盲囊和腸道中失去最優(yōu)勢地位。推測Aliivibrio和弧菌屬是本研究中大黃魚的主要病原菌,在消化道中從胃部開始逐漸向下游感染,并引起疾病爆發(fā)。Aliivibrio和弧菌屬的豐度在胃中急劇上升可能也是導致病魚胃中微生物多樣性下降的一個主要原因。Aliivibrio和弧菌屬在健康魚消化道中也存在[12,15-16],但是豐度均較低,說明二者的豐度均在健康范圍內(nèi)。

    擬桿菌屬在健康魚胃中的豐度是病魚胃中的81倍,推測Aliivibrio和弧菌屬豐度的迅速上升突破了擬桿菌屬的屏障作用,持續(xù)侵入到幽門盲囊和腸道,并降低了幽門盲囊和腸道中的乳桿菌屬的豐度,同時有助于Brevinema的快速生長繁殖,也彰顯了擬桿菌屬和乳桿菌屬在維持消化道微生物群平衡中的重要作用。有研究顯示,通過實時熒光定量PCR法將結(jié)直腸癌、潰瘍性腸炎患者糞便中的部分菌群數(shù)量同健康人群的進行對比分析,發(fā)現(xiàn)疾病的發(fā)生可能與菌群失衡有關[17-18],說明維持消化道菌群的平衡狀態(tài)至關重要。

    弧菌是弧菌病的主要病原菌,而且弧菌病也是大黃魚細菌性疾病中危害最嚴重的疾病之一,溶藻弧菌(V.algiolyticus)、哈維弧菌(V.harveyi)和副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)是具有代表性的3株病原菌[3,19-20]。Urbanczyk等[21]將V.fischeri,V.logei,V.salmonicida和V.wodanis4株菌同弧菌科其他物種進行系統(tǒng)發(fā)育和表型差異性分析,提出將這4株菌歸為一個新的屬-Aliivibrio,由此Aliivibrio包含了A.fischeri、A.salmonicida、A.wodanis和A.logei4株菌。之后,通過實驗研究又分離出A.finisterrensis[22]、A.sifiae[23]等,使Aliivibrio屬的細菌種類不斷增多。在大西洋鮭(Salmosalar)、虹鱒魚(Oncorhynchusmykiss)等研究中發(fā)現(xiàn)Aliivibrio(以前為Vibrio)是弧菌病的主要病原菌[24-25]。從本研究角度推斷,Aliivibrio是本次大黃魚發(fā)病的主要病原菌。

    另外,在對消化酶分布與活性的研究中發(fā)現(xiàn),大菱鲆對蛋白質(zhì)的消化主要集中在胃和腸道中,對淀粉的消化則主要依靠幽門盲囊和腸道,對脂肪的消化主要集中在腸道中[26]。消化酶活性的不同將導致消化道各部位食糜的營養(yǎng)水平的差異,而營養(yǎng)水平的不同將顯著影響定植菌群的組成結(jié)構(gòu)[27]。因此,本研究中,通過對健康大黃魚消化道微生物群門和屬水平的組成結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),幽門盲囊和腸道中優(yōu)勢菌群的種類和相對豐度相近,二者與胃中的存在一定差異。

    但是,由于受測序片段長度的限制,高通量測序技術不能鑒定到消化道菌群的具體菌種;同時,本研究由于受當時條件限制未及時將消化道菌群進行分離培養(yǎng),不能對疑似病原菌進行種類的鑒定,今后應該結(jié)合對消化道的疑似致病菌進行分離、培養(yǎng)、生理生化特征分析等研究,通過雙向判斷得出具體病原菌種類,可能更為準確。

    3.2 患病對消化道菌群功能的影響

    消化道作為營養(yǎng)消化吸收的主要場所,其內(nèi)部定植著數(shù)以萬億計的微生物,其攜帶的基因數(shù)量龐大[28],被稱為機體的第二套基因組,參與宿主營養(yǎng)、免疫等多方面的生理功能[29-32]。目前,關于消化道菌群功能方面的前沿性研究主要集中在人和畜牧動物方面,由于受養(yǎng)殖環(huán)境、養(yǎng)殖動物自身等方面的影響,有關水產(chǎn)動物消化道功能方面的研究相對較少。研究發(fā)現(xiàn),反芻動物能量的吸收依賴于腸道菌群[9],且在極端環(huán)境下,腸道菌群能通過調(diào)整自身結(jié)構(gòu)以協(xié)同宿主更好的獲取能量適應極端環(huán)境[10]。但是,當環(huán)境因子脅迫超過一定界限時,魚體消化道微生物群平衡狀態(tài)極易被打破,微生物群基因富集的代謝通路情況也隨之改變,從而通過某一表型體現(xiàn)出來。本研究中,與健康魚相比,病魚消化道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了顯著的變化,其菌群基因富集的代謝通路也發(fā)生了較大改變,其中消化道菌群參與的大部分代謝通路的基因數(shù)目明顯低于健康魚的,可能受Aliivibrio和弧菌屬豐度大幅增加的影響比較明顯。也反映了微生物群結(jié)構(gòu)與功能的統(tǒng)一。

    3.3 大黃魚消化道菌群與環(huán)境菌群關系分析

    水產(chǎn)養(yǎng)殖動物由于特殊的生活環(huán)境,外源微生物主要以水和飼料為載體對其進行生理影響。本研究中,飼料菌群對大黃魚消化道這些主要微生物群的貢獻相對較大,這與不同模式養(yǎng)殖大黃魚[6,15]、早期發(fā)育階段的牙鲆[12]和許氏平鲉[33]等研究結(jié)果相似。然而,本研究中的健康和患病大黃魚攝食飼料完全相同,說明大黃魚之所以出現(xiàn)消化道微生物群結(jié)構(gòu)明顯改變,可能是由于環(huán)境微生物群效應長期累積的結(jié)果,也有可能是溫度、壓力或外源物質(zhì)介入等環(huán)境因子突變打破消化道菌群動態(tài)平衡狀態(tài)[11],致使免疫水平較低的魚體發(fā)生病變。尤其是在苗種繁育時期,仔稚魚免疫器官發(fā)育不完全,免疫水平低下,極易受到病原微生物的侵染,一旦爆發(fā)疾病,將嚴重影響下游產(chǎn)業(yè)鏈的可持續(xù)發(fā)展??梢姡WC養(yǎng)殖魚類生長發(fā)育過程中良好的環(huán)境和飼料微生物衛(wèi)生質(zhì)量是綠色、安全養(yǎng)殖的關鍵措施之一。

    4 結(jié)語

    本研究條件下,與健康大黃魚相比,病魚消化道微生物群結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變;推斷Aliivibrio和弧菌屬為主要病原菌,由胃部逐漸向幽門盲囊和腸道侵染并引發(fā)疾病。規(guī)?;B(yǎng)殖過程中,除了要有規(guī)范的操作技術外,養(yǎng)殖環(huán)境的微生物衛(wèi)生質(zhì)量也不容忽視。

    猜你喜歡
    病魚大黃魚弧菌
    銷量增長200倍!“弧菌克星”風靡行業(yè),3天殺滅98%弧菌
    加州鱸常見疾病及防治方法
    副溶血弧菌檢測方法的研究進展
    28元/斤的輝煌不再!如今大黃魚深陷價格“泥沼”,休漁期或初現(xiàn)曙光
    如何有效防控對蝦養(yǎng)殖中的弧菌病
    寧德迎來大黃魚豐收季
    裂唇魚
    四招防止金魚長寄生蟲
    中老年健康(2016年8期)2016-10-17 01:57:25
    膳食鋅對飼料引起的大黃魚銅中毒癥的保護作用
    飼料博覽(2016年5期)2016-04-05 14:30:30
    副溶血弧菌噬菌體微膠囊的制備及在餌料中的應用
    国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 成人国产麻豆网| 久久精品人人爽人人爽视色| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产黄片视频在线免费观看| 亚洲欧洲国产日韩| 99精国产麻豆久久婷婷| 伊人久久国产一区二区| 一本一本综合久久| 国产视频首页在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 欧美+日韩+精品| 欧美成人午夜免费资源| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产成人精品久久久久久| 日日啪夜夜爽| 最近中文字幕高清免费大全6| 桃花免费在线播放| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久毛片免费看一区二区三区| 欧美成人精品欧美一级黄| 插阴视频在线观看视频| 夫妻午夜视频| 成人手机av| 久久女婷五月综合色啪小说| 丰满少妇做爰视频| 26uuu在线亚洲综合色| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜免费男女啪啪视频观看| 成人二区视频| av女优亚洲男人天堂| 成年人午夜在线观看视频| av天堂久久9| 国产精品国产三级专区第一集| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久久欧美国产精品| 亚洲欧美色中文字幕在线| 新久久久久国产一级毛片| 少妇精品久久久久久久| 免费人成在线观看视频色| 精品人妻一区二区三区麻豆| 另类精品久久| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚州av有码| 欧美精品一区二区免费开放| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产色婷婷99| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久精品国产自在天天线| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲丝袜综合中文字幕| 另类精品久久| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久影院123| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲国产精品999| 久久久国产欧美日韩av| 免费黄频网站在线观看国产| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲欧美清纯卡通| 中国国产av一级| 有码 亚洲区| 久久久久久久久大av| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 人妻少妇偷人精品九色| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲精品色激情综合| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲天堂av无毛| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 欧美日韩国产mv在线观看视频| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲国产av影院在线观看| 免费观看a级毛片全部| 熟女电影av网| 亚洲国产精品999| 久久这里有精品视频免费| 欧美成人午夜免费资源| 国产视频内射| 51国产日韩欧美| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲,一卡二卡三卡| 观看av在线不卡| 伦理电影大哥的女人| av黄色大香蕉| 新久久久久国产一级毛片| 日本欧美视频一区| 三级国产精品欧美在线观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 大香蕉97超碰在线| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产色爽女视频免费观看| 韩国高清视频一区二区三区| 午夜老司机福利剧场| 婷婷色综合www| 九色亚洲精品在线播放| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产精品人妻久久久影院| 黄片无遮挡物在线观看| 全区人妻精品视频| 久久久久久久久久成人| 人妻 亚洲 视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 简卡轻食公司| 国产精品久久久久久av不卡| 成人漫画全彩无遮挡| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲怡红院男人天堂| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产高清不卡午夜福利| 91精品一卡2卡3卡4卡| 久久久久久久亚洲中文字幕| 如何舔出高潮| 在线免费观看不下载黄p国产| 丰满少妇做爰视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久综合国产亚洲精品| 国精品久久久久久国模美| 日本爱情动作片www.在线观看| 色哟哟·www| 我的女老师完整版在线观看| 女人精品久久久久毛片| 桃花免费在线播放| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产视频首页在线观看| 欧美另类一区| 大片电影免费在线观看免费| 精品久久蜜臀av无| 一级片'在线观看视频| 九色成人免费人妻av| 七月丁香在线播放| 美女国产视频在线观看| 国产精品无大码| 这个男人来自地球电影免费观看 | 我要看黄色一级片免费的| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产熟女午夜一区二区三区 | 精品人妻熟女av久视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产片内射在线| 简卡轻食公司| 一级,二级,三级黄色视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 热99久久久久精品小说推荐| 国产免费又黄又爽又色| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲图色成人| 中文字幕亚洲精品专区| 中文字幕亚洲精品专区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产精品三级大全| 少妇的逼好多水| 午夜激情久久久久久久| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲av.av天堂| 精品国产一区二区久久| 少妇丰满av| 免费观看a级毛片全部| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产永久视频网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 我的老师免费观看完整版| 两个人的视频大全免费| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产免费一级a男人的天堂| 我的老师免费观看完整版| 成人毛片60女人毛片免费| 边亲边吃奶的免费视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产精品 国内视频| 这个男人来自地球电影免费观看 | 交换朋友夫妻互换小说| 母亲3免费完整高清在线观看 | 精品久久蜜臀av无| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 新久久久久国产一级毛片| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 赤兔流量卡办理| 人妻制服诱惑在线中文字幕| www.av在线官网国产| .国产精品久久| 国产精品一区二区在线观看99| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 五月开心婷婷网| 看十八女毛片水多多多| av有码第一页| 色网站视频免费| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 久久久精品免费免费高清| 女性生殖器流出的白浆| 国产高清不卡午夜福利| 两个人的视频大全免费| 一区在线观看完整版| 亚洲国产精品专区欧美| 中国国产av一级| videossex国产| 国产在视频线精品| av女优亚洲男人天堂| 国产日韩欧美视频二区| 日日啪夜夜爽| 18+在线观看网站| 国产精品99久久久久久久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品.久久久| 国产免费福利视频在线观看| av网站免费在线观看视频| 街头女战士在线观看网站| 亚洲综合色惰| 伦理电影免费视频| 国产在视频线精品| 日本黄色片子视频| 国产一级毛片在线| 久久精品国产a三级三级三级| 国产色爽女视频免费观看| 高清视频免费观看一区二区| 久久热精品热| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 免费观看无遮挡的男女| 热re99久久国产66热| 狂野欧美激情性bbbbbb| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 91成人精品电影| av线在线观看网站| 热99久久久久精品小说推荐| 一级爰片在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 男女无遮挡免费网站观看| 免费大片黄手机在线观看| 两个人的视频大全免费| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 天天操日日干夜夜撸| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲内射少妇av| 大片免费播放器 马上看| 人妻系列 视频| 免费黄色在线免费观看| 免费黄色在线免费观看| 国产深夜福利视频在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品一区二区在线观看99| 两个人的视频大全免费| 日本av免费视频播放| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 丰满乱子伦码专区| 大片免费播放器 马上看| 丝袜脚勾引网站| 婷婷成人精品国产| 亚洲欧美色中文字幕在线| 18+在线观看网站| 99精国产麻豆久久婷婷| 只有这里有精品99| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲精品国产色婷婷电影| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲精品第二区| 十八禁高潮呻吟视频| 在线播放无遮挡| 黄色一级大片看看| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美bdsm另类| 欧美另类一区| 精品久久久精品久久久| 久久99热6这里只有精品| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲欧美成人精品一区二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产极品天堂在线| 久久久久久久久大av| 搡老乐熟女国产| 一本久久精品| 热re99久久精品国产66热6| 国产成人精品一,二区| 亚洲国产日韩一区二区| 男的添女的下面高潮视频| 成人国产麻豆网| 午夜久久久在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 国产视频内射| 日本91视频免费播放| 亚洲在久久综合| 制服丝袜香蕉在线| 美女主播在线视频| 精品午夜福利在线看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 少妇 在线观看| 国产高清三级在线| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产永久视频网站| 十分钟在线观看高清视频www| 99九九线精品视频在线观看视频| 一本久久精品| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产成人午夜福利电影在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 制服诱惑二区| 欧美另类一区| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久久久久久国产电影| 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美xxⅹ黑人| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 春色校园在线视频观看| 国产爽快片一区二区三区| 国产午夜精品一二区理论片| 高清午夜精品一区二区三区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 青春草亚洲视频在线观看| 国内精品宾馆在线| 国产在线一区二区三区精| 亚洲性久久影院| 午夜日本视频在线| 少妇被粗大猛烈的视频| 少妇丰满av| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 久久久久国产精品人妻一区二区| 999精品在线视频| 国产乱人偷精品视频| 青春草视频在线免费观看| 国产有黄有色有爽视频| 69精品国产乱码久久久| 久久久精品94久久精品| 曰老女人黄片| 91成人精品电影| 亚洲经典国产精华液单| 最黄视频免费看| 成年av动漫网址| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲成色77777| 国产一区二区在线观看日韩| 9色porny在线观看| 韩国av在线不卡| 男人添女人高潮全过程视频| 国产av精品麻豆| 啦啦啦在线观看免费高清www| 精品一区二区三区视频在线| 日本黄色片子视频| 久久狼人影院| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 一级黄片播放器| 两个人免费观看高清视频| 三级国产精品欧美在线观看| 一级毛片 在线播放| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产精品久久久久久精品古装| 国产又色又爽无遮挡免| 成人毛片a级毛片在线播放| 在线观看三级黄色| 2021少妇久久久久久久久久久| 新久久久久国产一级毛片| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲美女视频黄频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产精品久久久久久久久免| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲精品,欧美精品| 中国国产av一级| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产精品久久久久久久电影| 多毛熟女@视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 老司机亚洲免费影院| 欧美成人精品欧美一级黄| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| freevideosex欧美| 91久久精品国产一区二区三区| 女性被躁到高潮视频| tube8黄色片| 中文字幕人妻丝袜制服| 女人精品久久久久毛片| 亚洲,一卡二卡三卡| 18禁动态无遮挡网站| 成年人免费黄色播放视频| 婷婷色综合大香蕉| 久久青草综合色| 久久精品国产亚洲网站| 另类亚洲欧美激情| 国产精品 国内视频| 多毛熟女@视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 人妻 亚洲 视频| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲欧洲日产国产| 最近的中文字幕免费完整| 久久这里有精品视频免费| 久久免费观看电影| 国国产精品蜜臀av免费| 久久国内精品自在自线图片| 午夜影院在线不卡| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 欧美 日韩 精品 国产| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 观看av在线不卡| 久久国产亚洲av麻豆专区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 色5月婷婷丁香| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 五月开心婷婷网| 少妇丰满av| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 午夜视频国产福利| 日韩精品有码人妻一区| 免费观看的影片在线观看| 另类亚洲欧美激情| 国产成人91sexporn| 在现免费观看毛片| 国产日韩欧美亚洲二区| 大香蕉久久网| 亚洲美女黄色视频免费看| 嫩草影院入口| 久久久国产欧美日韩av| 成人毛片60女人毛片免费| 桃花免费在线播放| 精品人妻熟女av久视频| 在线观看免费视频网站a站| 满18在线观看网站| 夫妻午夜视频| 少妇熟女欧美另类| 欧美激情 高清一区二区三区| 看非洲黑人一级黄片| 大香蕉97超碰在线| 亚洲国产精品999| 免费观看a级毛片全部| av国产久精品久网站免费入址| 精品亚洲成a人片在线观看| 免费观看在线日韩| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产精品 国内视频| 一区二区三区免费毛片| 日本欧美视频一区| 婷婷色麻豆天堂久久| 视频中文字幕在线观看| 欧美成人午夜免费资源| 美女大奶头黄色视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 高清不卡的av网站| 18禁动态无遮挡网站| 日韩成人伦理影院| 国产精品.久久久| 日韩精品有码人妻一区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产成人精品一,二区| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲国产最新在线播放| 国产淫语在线视频| 午夜日本视频在线| 青青草视频在线视频观看| 国产日韩欧美视频二区| 乱人伦中国视频| 欧美精品亚洲一区二区| 免费大片黄手机在线观看| 97超视频在线观看视频| 少妇 在线观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产亚洲欧美精品永久| 国产亚洲一区二区精品| 黑丝袜美女国产一区| 精品一区在线观看国产| 欧美成人午夜免费资源| 久久久久久久久久久久大奶| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 午夜影院在线不卡| 男人操女人黄网站| 五月天丁香电影| 欧美日本中文国产一区发布| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 天堂俺去俺来也www色官网| 熟女电影av网| 免费大片18禁| 一级爰片在线观看| 日本午夜av视频| 美女国产高潮福利片在线看| 黄色配什么色好看| 精品久久国产蜜桃| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲av中文av极速乱| av不卡在线播放| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产成人av激情在线播放 | 最后的刺客免费高清国语| 国产不卡av网站在线观看| 极品人妻少妇av视频| 免费黄色在线免费观看| 亚洲人成77777在线视频| 男女国产视频网站| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲精品自拍成人| 成人无遮挡网站| 热99久久久久精品小说推荐| 国产成人91sexporn| 99热这里只有是精品在线观看| 少妇高潮的动态图| 亚洲内射少妇av| 九九爱精品视频在线观看| 午夜日本视频在线| 日韩免费高清中文字幕av| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 在线观看三级黄色| 纯流量卡能插随身wifi吗| 边亲边吃奶的免费视频| 国产精品久久久久久av不卡| 国产精品国产av在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲av综合色区一区| 中文天堂在线官网| 午夜91福利影院| 亚洲国产精品999| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲人成网站在线播| freevideosex欧美| 热99国产精品久久久久久7| 伦理电影大哥的女人| 青春草亚洲视频在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 51国产日韩欧美| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲无线观看免费| 在线观看三级黄色| 高清在线视频一区二区三区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 国产毛片在线视频| 有码 亚洲区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 青春草国产在线视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产片特级美女逼逼视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日日爽夜夜爽网站| 在线精品无人区一区二区三| 一边亲一边摸免费视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 999精品在线视频| 只有这里有精品99| 99热6这里只有精品| 久久久久久久久久久久大奶| 99久久精品国产国产毛片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 精品久久国产蜜桃| 国产免费又黄又爽又色| 精品国产一区二区久久| av线在线观看网站| 国产男人的电影天堂91| 18+在线观看网站| 精品一区在线观看国产| 免费看光身美女| 久久99热这里只频精品6学生| 日韩视频在线欧美| 十分钟在线观看高清视频www| 丝瓜视频免费看黄片| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产视频内射| 2022亚洲国产成人精品| 51国产日韩欧美| 亚洲av中文av极速乱| 插阴视频在线观看视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 精品一区二区免费观看| 国产深夜福利视频在线观看| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 如何舔出高潮| 亚洲av中文av极速乱| 美女福利国产在线| 久久久久久久久久成人| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲人成网站在线播| 亚洲av国产av综合av卡| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产精品久久久久久精品电影小说| 日本黄大片高清| 亚洲av免费高清在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 伊人久久精品亚洲午夜| 色视频在线一区二区三区| 中国美白少妇内射xxxbb| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久精品国产亚洲网站| 婷婷色麻豆天堂久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 婷婷色麻豆天堂久久| 久久人人爽人人片av| 久久免费观看电影| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产黄色视频一区二区在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 秋霞在线观看毛片| 最新的欧美精品一区二区| 人妻系列 视频| 观看av在线不卡|