馮久芳,梅 芊
(1.商丘市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心,河南 商丘 476000;2.河南省食品藥品檢驗(yàn)所,鄭州450018)
谷維素片為鎮(zhèn)靜助眠類(lèi)非處方藥品,研究[1-2]顯示,其具有調(diào)節(jié)自主神經(jīng)功能及內(nèi)分泌平衡障礙的作用,在神經(jīng)官能癥、經(jīng)前期緊張綜合征、更年期綜合征等疾病的臨床治療中被廣泛應(yīng)用。查閱相關(guān)資料[3-5]發(fā)現(xiàn),谷維素及谷維素片的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》,且本品多從米糠油、胚芽油等谷物油脂中提取,并以混合物形式存在,組分組成及含量可受提取物產(chǎn)地、季節(jié)變化及提取工藝影響,故實(shí)行全面質(zhì)控的難度大。本研究基于高效液相色譜分析技術(shù),對(duì)國(guó)內(nèi)外谷維素片樣本的高效液相特征峰及主要成分含量的進(jìn)行對(duì)比分析,比較不同廠家生產(chǎn)的谷維素片成分含量,旨在為谷維素及其片劑的質(zhì)量控制提供參考,總結(jié)如下。
1.1 檢測(cè)儀器 本次選用美國(guó)安捷倫公司生產(chǎn)的Agilent 1200高效液相色譜儀,梅特勒托利多儀器有限公司生產(chǎn)的XS205DU電子天平,昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)的KQ-600VDB型三品數(shù)控超聲波清洗器。
1.2 谷維素片樣品 此次所用的純度99.53%γ-谷維素標(biāo)準(zhǔn)品由Stanford Analytical Chemicals Inc.提供,國(guó)產(chǎn)谷維素片樣品為2014年全國(guó)評(píng)價(jià)性抽樣檢驗(yàn)樣品,涉及山西云鵬制藥有限公司、上海玉瑞生物科技藥業(yè)有限公司、天津力生制藥股份有限公司3家企業(yè)共30批次,規(guī)格均為每片10 mg。
2.1 色譜條件 色譜柱為Innoval C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動(dòng)相:乙腈-甲醇(甲酸銨含量5 mmol·L-1)=50∶50,1 mL·min-1;柱溫設(shè)定35 ℃,進(jìn)樣體積為20 μL,DAD檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng)326 nm。
2.2 溶液的制備 對(duì)照品溶液制備:稱(chēng)取谷維素對(duì)照品約10 mg,精密稱(chēng)定,置于100 mL量瓶中,加入適量無(wú)水乙醇,超聲處理使溶解后,冷置,加無(wú)水乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品溶液。供試品溶液制備:取供試品10片,精密稱(chēng)定,研細(xì),取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于1片量),精密稱(chēng)定,置于100 mL量瓶,同法處理后冷置、搖勻、濾過(guò)后取濾液,作為供試品溶液。陰性對(duì)照溶液的制備:選取處方量的輔料混合均勻,制備缺谷維素陰性樣品,制成陰性對(duì)照溶液,方法同上。
2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液分別進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖,結(jié)果在谷維素主峰位置無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。
2.4 線性關(guān)系考察 取谷維素對(duì)照品約10 mg,精密稱(chēng)定,置于100 mL量瓶中,加無(wú)水乙醇適量,超聲處理使完全溶解后,冷置,加無(wú)水乙醇至刻度,搖勻,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、3、5、10、15、20 mL,分別置于25 mL量瓶中,加無(wú)水乙醇至刻度,搖勻。分別精密量取上述溶液各20 μL,注入高效液相色譜儀,測(cè)定峰面積,以峰面積積分值為縱坐標(biāo),樣品濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,回歸方程為:Y=164.23X+0.17(r=0.999 9),表明谷維素濃度在4.104~82.080 mg·mL-1范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。
注:1為谷維素色譜主峰
2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 隨機(jī)選取同一批次谷維素片,依照上述方法平行制備6份供試品溶液,進(jìn)樣測(cè)定,谷維素平均含量約為97.54%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)為0.60%,證實(shí)重復(fù)性良好。
2.6 回收率試驗(yàn) 稱(chēng)取適量陰性樣品置于200 mL量瓶中,分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備溶液4、5、6 mL,依照供試品溶液制備方法配置為80%、100%、120%的回收率溶液,每個(gè)濃度3份,進(jìn)樣測(cè)定后計(jì)算回收率,平均回收率達(dá)101.20%(RSD為0.40%)。
3.1 樣品測(cè)定結(jié)果 3家國(guó)有企業(yè)的30批次谷維素片樣品含量介于95.00%~105.00%,其中含量95.00%~96.99%占11批次,97.00%~98.99%占19批次,99.00%~100.99%占16批次,101.00%~105.00%占14批次。
3.2 國(guó)產(chǎn)谷維素片及相對(duì)成分含量 3家國(guó)有企業(yè)中不同企業(yè)及不同批次生產(chǎn)的谷維素片色譜圖中存在色譜峰差異,依照峰面積歸一化方法計(jì)算得出各色譜峰相對(duì)含量。見(jiàn)表1。
表1 國(guó)產(chǎn)谷維素片相對(duì)成分含量比較
4.1 測(cè)定方法選擇 谷維素片臨床廣泛應(yīng)用于調(diào)節(jié)自主神經(jīng)功能及糾正內(nèi)分泌平衡障礙,考慮其提取物來(lái)源及混合物存在形式,現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)下的谷維素片劑中亦可能存在元素雜質(zhì),可能影響藥物安全性[6]。市場(chǎng)現(xiàn)有的谷維素片中各組分存在差異性,有研究[7]采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng),對(duì)不同廠家生產(chǎn)的谷維素片特征譜圖相似的評(píng)價(jià)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),我國(guó)企業(yè)生產(chǎn)的谷維素片含量范圍存在一定差異,且與谷維素原研發(fā)國(guó)日本企業(yè)生產(chǎn)的谷維素片存在一定差異性,因此國(guó)產(chǎn)谷維素片的質(zhì)量控制尤為重要。近紅外漫反射光譜分析技術(shù)、改變?nèi)軇┑腢V法均為目前進(jìn)行谷維素含量測(cè)定的常用方法,但是其測(cè)定過(guò)程較為繁瑣,并不能滿(mǎn)足目前制藥企業(yè)實(shí)施在線質(zhì)控的需求[8]。依照谷維素的化學(xué)性質(zhì)特點(diǎn),本文采用高效液相色譜技術(shù)分析不同廠家生產(chǎn)谷維素片的含量,方法準(zhǔn)確,簡(jiǎn)便易行。
4.2 溶劑的選擇 本研究表明,谷維素可在氯仿、二氯甲烷中溶解,在乙醇及正庚烷中微溶,但不溶于水,此次分別選取二氯甲烷、乙醇及正庚烷三種溶劑溶解,以考量最適用于谷維素的溶劑。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,用無(wú)水乙醇作為溶劑,溶解充分且環(huán)境污染小。
4.3 色譜條件優(yōu)化 色譜條件優(yōu)化處理及重復(fù)率實(shí)驗(yàn)、回收率實(shí)驗(yàn),符合方法學(xué)要求,為谷維素片生產(chǎn)的質(zhì)量控制及含量測(cè)定提供有效參考。但本次研究仍存在一定不足之處,如未對(duì)谷維素片元素雜質(zhì)含量進(jìn)行細(xì)致分析,未明確組分及相對(duì)含量對(duì)谷維素片療效差異性的影響,后續(xù)將加強(qiáng)對(duì)此方面的深入研究。
綜上,基于高效液相色譜技術(shù)分析不同廠家生產(chǎn)谷維素片成分的方法準(zhǔn)確可靠,可用于谷維素片組分及相對(duì)含量的測(cè)定,亦可為后續(xù)的谷維素片組分及療效相關(guān)性分析奠定基礎(chǔ)。