五個(gè)產(chǎn)區(qū)蓮子心調(diào)研及其蓮心堿含量分析*

姜濤，劉子禎，姚藝新

(康美藥業(yè)股份有限公司，廣東普寧 515300)

蓮子心為睡蓮科植物蓮NelumbonuciferaGaertn.成熟種子中的干燥幼葉及胚根，具有清心安神、止咳化痰、止血抗炎等功效。研究表明，蓮子心主要含有蓮心堿(liensinine)等生物堿類(lèi)成分[1]。蓮心堿具有抗心律失常、抗癌、抗抑郁等活性[2-8]。《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版(以下簡(jiǎn)稱(chēng)《藥典》)規(guī)定蓮心堿是蓮子心含量測(cè)定的唯一指標(biāo)成分，并規(guī)定蓮心堿含量不得少于0.20%。因此，蓮心堿的含量是影響蓮子心藥材質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一。2018—2019年，蓮子心因含量不合格已被國(guó)內(nèi)食品藥品監(jiān)督管理局公告10次。

因此，研究蓮子心中蓮心堿含量不合格的原因有重要意義。

筆者通過(guò)調(diào)研蓮子心產(chǎn)地江西、湖南、湖北、福建、四川，與農(nóng)戶(hù)咨詢(xún)溝通，現(xiàn)場(chǎng)采樣等方式共收集蓮子心樣品54批，并按《藥典》方法進(jìn)行含量測(cè)定，從產(chǎn)地、蓮成熟度、蓮子飽滿(mǎn)度及栽培品種4個(gè)方面分析市售蓮子心中蓮心堿含量不合格原因，以期為市場(chǎng)尋找含量合格的蓮子心原料藥材提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1260 Infiniy高效液相色譜系統(tǒng)，配置四元泵G1311C、自動(dòng)進(jìn)樣器G1329B、DAD檢測(cè)器、色譜工作站(安捷倫科技有限公司)，F(xiàn)W80型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)，KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，XPE26型微量天平(量程0～22 g，含量：0.001 mg)XS205DU型雙量程電子天平(量程1為0～81 g，感量：0.01 mg；量程2為0～220 g，感量：0.1 mg)購(gòu)自梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易有限公司，Sartorius arium?Pro DI超純水系統(tǒng)(德國(guó)賽多利斯公司)，DZKW-S-6型電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)，Agilent Eclipse Plus C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。

1.2試劑與樣品 蓮心堿高氯酸鹽對(duì)照品(批號(hào)：111696-201703，感量：96.3%)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，乙腈(批號(hào)：380301，色譜純)、甲醇(批號(hào)：380302，色譜純)均購(gòu)自克魯?shù)禄す煞萦邢薰荆兯畞?lái)自超純水系統(tǒng)。十二烷基磺酸鈉(天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20170308)、冰醋酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20171120)、鹽酸(西隴科學(xué)股份有限公司，批號(hào)：1809011)均為分析純。

蓮子心樣品來(lái)自江西、湖南、福建、湖北、四川5省，共54批。其中樣品S1—S4、S5—S7、S8—S10分別來(lái)自福建省武夷山市、福建省三明市建寧縣、福建省南平市建陽(yáng)區(qū)，樣品S11—S13、S14—S16、S17—S20分別來(lái)自湖北省荊州市、湖北省洪湖市、湖北省宜城市，樣品S21—S23、S24—S26、S27—S28、S29—S33分別來(lái)自湖南省益陽(yáng)市、湖南省衡陽(yáng)市、湖南省邵東市，湖南省湘潭市，樣品S34—S37、S38、S39—S41、S42—S44分別來(lái)自江西省撫州市廣昌縣、江西省廣昌縣白蓮研究所、江西省贛州市石城縣、江西省九江市潯陽(yáng)區(qū)，樣品S45—S48、S49—S51、S52—S54分別來(lái)自四川省成都市溫江區(qū)、四川省遂寧市射洪縣、四川省巴中市平昌縣。以上樣品均為產(chǎn)地鮮蓮子經(jīng)取心、曬干而成，經(jīng)康美藥業(yè)股份有限公司質(zhì)量管理中心劉茂貴主任藥師鑒定為為睡蓮科植物蓮NelumbonuciferaGaertn.種子的干燥幼葉及胚根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1蓮子心產(chǎn)地調(diào)研 通過(guò)與蓮子心產(chǎn)地蓮農(nóng)交流及觀察荷塘蓮種植情況，了解蓮的種植及蓮子心采收、加工、產(chǎn)量、運(yùn)輸、儲(chǔ)藏等情況。

2.2蓮子心含量測(cè)定 按《藥典》蓮子心項(xiàng)下蓮心堿含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定[9]。

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.015 mol·L-1十二烷基磺酸鈉溶液(取十二烷基磺酸鈉0.41 g，加水100 mL使溶解)-冰醋酸(56：43：1)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)282 nm。理論板數(shù)按蓮心堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。對(duì)照品溶液的制備：取蓮心堿高氯酸鹽對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每毫升含25 μg的溶液，即得(蓮心堿質(zhì)量=蓮心堿高氯酸鹽質(zhì)量/1.358 7)。供試品溶液的制備：取本品粉末[過(guò)四號(hào)篩，篩孔內(nèi)徑(250±9.9) μm]約0.5 g，精密稱(chēng)定，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用2%鹽酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 mL，置10 mL量瓶，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。蓮子心按干燥品計(jì)算，含蓮心堿(C37H42N2O6)不得少于0.20%。

2.3數(shù)據(jù)分析 采用SPSS23.0版統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

2.4產(chǎn)地調(diào)研結(jié)果 栽培品種：據(jù)產(chǎn)地調(diào)研發(fā)現(xiàn)，蓮子心主產(chǎn)區(qū)為江西、湖南、湖北、福建和四川，其中江西省產(chǎn)量最大。江西省主要種植“建選17號(hào)”蓮和“太空蓮36號(hào)”，其中“建選17號(hào)”蓮是以紅花建蓮、寸三蓮65、太空蓮2號(hào)為親本，經(jīng)雜交選育所得，“太空蓮36號(hào)”是福建“西門(mén)蓮”種子通過(guò)太空輻射誘變后再經(jīng)地面選育所得。由于受太空輻射和雜交影響，“建選17號(hào)”和“太空蓮36號(hào)”蓮子心產(chǎn)量較高，分別畝產(chǎn)蓮子心約3，2 kg，而傳統(tǒng)蓮畝產(chǎn)蓮子心僅1 kg。因此，目前市場(chǎng)上大部分蓮子心來(lái)自栽培的太空蓮。

采收加工：根據(jù)產(chǎn)地蓮農(nóng)所述，蓮蓬在七月份、八月份開(kāi)始成熟，在七月中旬開(kāi)始采摘上市，八月底蓮蓬開(kāi)始變老，九月以后蓮蓬會(huì)從鮮嫩的綠色開(kāi)始變黑，完全成熟。隨著蓮蓬的成熟，其中的蓮子由綠色變?yōu)辄S綠色、棕褐色、灰褐色，最后變?yōu)樽虾稚徸佑捕纫仓饾u增大。蓮子中的蓮子心的取心過(guò)程為：用刀割下蓮蓬，手工剝出帶殼蓮子，用全自動(dòng)剝蓮機(jī)劃破蓮子殼，手工剝出白色蓮子，再用不銹鋼絲手工捅出蓮子心。

干燥方式：根據(jù)蓮農(nóng)經(jīng)驗(yàn)，鮮蓮子心必須趁鮮在一天內(nèi)進(jìn)行干燥，否則蓮子心顏色會(huì)變深。蓮子心的干燥方式為太陽(yáng)曬干或柴火爐烘干。

儲(chǔ)存方式：蓮子心在產(chǎn)地干燥后直接裝入聚丙烯塑料編織袋，扎口后置陰涼干燥處。為防止霉變蟲(chóng)蛀，需進(jìn)行不定期晾曬。

2.5不同產(chǎn)地蓮子心中蓮心堿含量 蓮子心供試品與蓮心堿高氯酸鹽對(duì)照品的HPLC色譜圖見(jiàn)圖1。來(lái)自五省的蓮子心樣品中蓮心堿含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。湖北產(chǎn)10批樣品含量均合格，湖南產(chǎn)部分樣品含量合格，其余3省樣品蓮心堿含量均不合格。

2.6影響蓮子心蓮心堿含量的因素分析

2.6.1產(chǎn)地對(duì)蓮子心蓮心堿含量的影響 采用SPSS軟件的Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)法分析5個(gè)省份蓮子心中蓮心堿含量數(shù)據(jù)，設(shè)置95%置信區(qū)間，結(jié)果見(jiàn)圖2，得到P值為3.1×10-5，小于 0.05，說(shuō)明不同省份蓮子心蓮心堿含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步根據(jù)不同產(chǎn)地的成對(duì)比較分析(表2)，發(fā)現(xiàn)湖北省與其他4省蓮子心蓮心堿含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

從氣候看，江西、福建、湖南、湖北、四川雖均處于北緯25°～35°，氣候類(lèi)型均為亞熱帶季風(fēng)氣候，無(wú)明顯差別；從海拔角度看，五省明顯不同：四川、湖南、湖北基本屬于第二階梯(海拔1～2 km)，江西、福建屬于第三階梯(海拔500 m以下)。因此各地海拔與土壤環(huán)境可能是影響蓮子心蓮心堿含量的因素之一。

1.蓮心堿。

表1 蓮子心樣品中蓮心堿含量測(cè)定結(jié)果

續(xù)表1 蓮子心樣品中蓮心堿含量測(cè)定結(jié)果

2.6.2蓮子成熟度對(duì)蓮心堿含量的影響 蓮子坐果期內(nèi)，隨其成熟度增加，果皮顏色會(huì)由綠色變?yōu)辄S綠色、棕褐色、灰褐色，最后變?yōu)樽虾稚?。采集同一株蓮的蓮蓬，剝?nèi)∑渖徸?，按成熟度可分為未成?黃綠色)、稍成熟(棕褐色)、成熟(灰褐色)和過(guò)度成熟(紫褐色)4類(lèi)，分別測(cè)定蓮子心中蓮心堿含量。結(jié)果見(jiàn)表3，來(lái)自不同產(chǎn)地蓮子心的蓮心堿含量隨蓮子成熟度增加呈先增高后降低趨勢(shì)，蓮子成熟時(shí)蓮心堿含量最高。

圖2 5個(gè)省份蓮子心蓮心堿含量Kruskal-wallis檢驗(yàn)結(jié)果

表2 產(chǎn)地成對(duì)比較

表3 不同成熟度蓮子中蓮子心的蓮心堿含量

2.6.3蓮子飽滿(mǎn)度對(duì)蓮心堿含量的影響 產(chǎn)地采收的同批蓮子樣品中，部分蓮子較飽滿(mǎn)，呈近球形，另一部分蓮子不飽滿(mǎn)，呈橢球形。將來(lái)自同一池塘且顏色相同的蓮子按質(zhì)量和直徑劃分為2個(gè)等級(jí)：一等蓮子飽滿(mǎn)，近球形，測(cè)得千粒質(zhì)量2 945 g，直徑(1.78±0.12) cm，蓮心堿含量0.36%，為《藥典》含量規(guī)定限度的1.8倍；二等蓮子不飽滿(mǎn)，橢球形，測(cè)得千粒質(zhì)量2 580 g，直徑(1.44±0.07) cm，蓮心堿含量0.07%，屬不合格品(含量低于《藥典》規(guī)定)。一等蓮子的蓮心堿含量遠(yuǎn)高于二等蓮子蓮心堿含量，說(shuō)明蓮子飽滿(mǎn)度會(huì)影響蓮子心蓮心堿含量。其原因在于，飽滿(mǎn)度高的蓮子植物營(yíng)養(yǎng)較充分，次級(jí)代謝產(chǎn)物蓮心堿積累越多。

3 討論

蓮子心主產(chǎn)于江西、湖南、湖北、福建、四川，根據(jù)54批樣品檢測(cè)結(jié)果可知，蓮子心中蓮心堿含量合格率約26.0%，其中湖北地區(qū)10批均合格，湖南地區(qū)合格率約31.0%，其他地區(qū)均不合格。湖北地區(qū)10批蓮子心均合格，其蓮心堿含量均值雖達(dá)到0.28%，但僅比《藥典》規(guī)定限度多0.4倍。

大部分蓮子心含量不合格，其原因可能有3個(gè)方面。產(chǎn)地因素：不同海拔和土壤等會(huì)對(duì)植物的次級(jí)代謝產(chǎn)物積累有影響[10-11]。采收期因素：由于優(yōu)先上市售價(jià)高，蓮農(nóng)為追求經(jīng)濟(jì)效益，在蓮子尚為黃綠色時(shí)即開(kāi)始大量采收，此時(shí)蓮子中蓮子心蓮心堿積累時(shí)間不足，蓮子飽滿(mǎn)比例小，易導(dǎo)致含量不合格。品種因素：我國(guó)從1994年開(kāi)始培育太空輻射誘變蓮，以期提高蓮的生育期、抗性、結(jié)實(shí)率，但太空培育僅以蓮子產(chǎn)量為指標(biāo)，忽視了蓮子心中蓮心堿的含量[12-15]。有研究報(bào)道，太空輻射會(huì)導(dǎo)致部分基因變異及蓮品種退化[16]，品種退化會(huì)影響蓮子心次級(jí)代謝產(chǎn)物的積累。因此，目前蓮子心含量不合格率過(guò)高可能是由產(chǎn)地、采收期、品種等因素綜合導(dǎo)致。

此外，許多中藥材種植戶(hù)追求“個(gè)頭越大越好”、“產(chǎn)量越高越好”，在根和根莖類(lèi)中藥材種植過(guò)程中濫用膨大劑(多效唑、烯效唑、矮壯素、縮節(jié)胺、氯化膽堿、丁酰肼等)，導(dǎo)致如云南文山州三七，河南武陟大封鎮(zhèn)地黃、牛膝和山藥，甘肅岷縣黨參等藥材雖然個(gè)頭變大、產(chǎn)量提高，但質(zhì)量卻越來(lái)越差[17]。因此，為促進(jìn)中藥產(chǎn)業(yè)業(yè)健康發(fā)展，在中藥材種植過(guò)程中應(yīng)加強(qiáng)管控，同時(shí)規(guī)范藥材的道地產(chǎn)區(qū)，規(guī)范采收、加工、運(yùn)輸與存儲(chǔ)等環(huán)節(jié)，加大對(duì)太空輻射、膨大劑等人為因素對(duì)中藥質(zhì)量影響的研究，保證中藥質(zhì)量。