麝香不同成熟階段化學(xué)成分變化規(guī)律

竭 航，張承露，曾德軍，趙貴軍，封孝蘭，雷美艷

（重慶市藥物種植研究所，重慶市道地藥材規(guī)范化生產(chǎn)工程技術(shù)研究中心，重慶 408435）

麝香主要由我國(guó)一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)瀕危野生藥用動(dòng)物林麝Moschus berezovskiiFlerov 雄性個(gè)體分泌。據(jù)2020 年版《中國(guó)藥典》 記載，麝香具有開竅醒神、活血通經(jīng)、消腫止痛的功效［1］?，F(xiàn)代研究表明，麝香有抗腫瘤［2-3］、抗炎［4-5］的作用，并對(duì)心腦血管系統(tǒng)［6-7］、中樞神經(jīng)系統(tǒng)［8］等均有顯著的影響。麝香的化學(xué)成分復(fù)雜，但其主要藥用成分為大環(huán)酮類（麝香酮、降麝香酮等）、吡啶類（麝香吡啶、羥基麝香吡啶等）、甾體類（膽甾醇等）［9］。因此，麝香中化學(xué)成分的含量決定了其藥用、經(jīng)濟(jì)價(jià)值。為了探索林麝麝香最佳的采收年限，李碩等［10］采用GC-MS 法探索不同年齡段林麝麝香酮變化規(guī)律，結(jié)果表明，3 歲林麝麝香質(zhì)量最高，達(dá)2.71%。此外，前人還比較了產(chǎn)地和品種對(duì)麝香品質(zhì)的影響，結(jié)果顯示，林麝麝香中麝香酮相對(duì)含量高于馬麝（P＜0.01），而在林麝麝香中以陜西麝香酮含量最高［11］。而在同一年中，隨著麝香的成熟，麝香化學(xué)成分變化規(guī)律尚不得而知。

林麝分泌麝香分為2 個(gè)階段，第一階段在每年5 月下旬前后，林麝睪丸、香腺開始腫大，繼而香腺細(xì)胞分泌的初香液順著導(dǎo)管流入香囊中，大致經(jīng)過4 周時(shí)間，隨著初香液越積越多，林麝睪丸和香腺的腫脹逐漸消退，林麝完成泌香反應(yīng)，此時(shí)香囊中為乳白色極具腥臭味的液體。第二階段為初香液在香囊中經(jīng)過水分的重吸收等生理生化反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為具有濃烈香氣的成熟麝香［12］。鑒于林麝分泌的初香液呈腥臭味，而無麝香特有的香味，提示，在林麝分泌麝香的過程中，麝香中成分種類及含量應(yīng)該發(fā)生了顯著的變化。

本研究首次通過“活麝取香”法采集不同成熟階段麝香，通過GC-MS 法檢測(cè)其成分的含量，以期為林麝產(chǎn)香機(jī)制研究提供理論基礎(chǔ)，也對(duì)其品質(zhì)分級(jí)和質(zhì)量的提高起重要作用。

1 材料

1.1 儀器 QP 2010 plus 型氣相色譜儀-QP 5000型質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津公司）；5415R 型冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf 公司）；BSA124S 型電子分析天平（萬分之一，德國(guó)Sartorius 公司）；JP-100 型超聲波清洗儀（深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司）。

1.2 動(dòng)物 6 頭健康成年雄性林麝（3～5 歲）來源于重慶市藥物種植研究所林麝養(yǎng)殖基地（海拔678 m），平均體質(zhì)量6.9 kg。林麝的飼養(yǎng)采用精飼料和青綠飼料相結(jié)合的方式，青綠飼料采用西南地區(qū)常見的紅薯藤Ipomoea batatas和光葉海桐嫩葉Pittosporum glabratum，自由采食；精飼料包括玉米、豆粕、麥麩、食鹽、維生素、礦物質(zhì)等，2 種飼料混合后于每天17：30 飼喂。每天早上清洗水槽，并注滿干凈飲用水。

1.3 樣品 2016 年6 月28 日（陰）早上7：30，通過活麝取香法采集6 頭成年雄性林麝少許初香液，-80 ℃下保存，用于主要成分含量測(cè)定。同法分別獲取8 月26 日、10 月31 日6 頭林麝成熟中、已成熟的麝香，最低采集量為1.0 g。

2 方法

2.1 樣品干燥 對(duì)18 份樣品含水量進(jìn)行檢測(cè)，每份精密稱量300 mg，置于五氧化二磷干燥器中干燥，每隔30 min 精密稱定1 次，直至質(zhì)量恒定。

2.2 樣品提取 對(duì)18 份樣品進(jìn)行提取，每份精密稱量100 mg，分別溶于2.5 mL 無水乙醇（純度＞99.7%）、2.5 mL 乙醚（純度＞99.5%）中，超聲振蕩提取2 h，13 000 r／min 冷凍離心5 min，上清液用于上機(jī)檢測(cè)。

2.3 色譜條件 DB5-MS 石英毛細(xì)管柱（0.25 mm×30 m，0.25 μm）；載氣高純度氦氣（純度≥99.99%）；柱壓49.5 kPa；體積流量0.9 mL／min；進(jìn)樣量1.0 μL；乙醚、乙醇提取物分流比5∶1、10∶ 1；進(jìn)樣口溫度280 ℃；接口溫度290 ℃；程序升溫（柱溫60 ℃保持5 min，10 ℃／min 升至150 ℃并保持5 min，5 ℃／min 升至280 ℃）。

2.4 質(zhì)譜條件 EI 電離源；電子能量70 eV；離子源溫度230 ℃；四級(jí)桿溫度150 ℃；掃描范圍m／z35～1 000。

2.5 數(shù)據(jù)分析 通過儀器所配置的NIST 08.LIB譜庫進(jìn)行自動(dòng)檢索，結(jié)合相似度并參考有關(guān)文獻(xiàn)色譜保留指數(shù)，進(jìn)行定性。采用Chroma TOF4.3X 軟件（LECO Corporation）和LECO-Fiehn Rtx5 數(shù)據(jù)庫分析處理峰圖，各物質(zhì)相對(duì)含量為其峰面積與總峰面積的比值。采用SPSS 22.0 軟件中的ANOVA過程，進(jìn)行差異顯著性分析。

3 結(jié)果

3.1 樣品采集 通過人工活麝取香的方法共無菌采集到18 份樣品，6 月底呈白色或乳白色豆腐渣狀，并散發(fā)出腥臭（酸臭／尿騷）味，取香時(shí)稍用力可被擠出香囊（初香麝香）；8 月底已變?yōu)樯钭厣腆w，多呈塊狀，散發(fā)濃郁香氣（成熟過程中的麝香）；10 月底為棕褐色固體，主要呈粉末狀，也見部分當(dāng)門子、塊狀、銀皮，油性較重，亦散發(fā)濃郁香氣（成熟品）。

3.2 含水量 6 月底采集的白香平均含水量為55.921%，8 月底、10 月底分別為 46.856%、36.029%，見表1。方差分析表明，6 月底麝香含水量高于10 月底（P＜0.05）與8 月底比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；8 月底與10 月底比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 不同成熟階段麝香含水量（，%）Tab.1 Moisture of musk harvested at different maturity stages（，%）

表1 不同成熟階段麝香含水量（，%）Tab.1 Moisture of musk harvested at different maturity stages（，%）

注：不同小寫字母之間代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3.3 成分?jǐn)?shù)量 GC-MS 數(shù)據(jù)下機(jī)后，通過NIST 08.LIB 譜庫進(jìn)行自動(dòng)檢索。結(jié)果表明，6 月底采集的白香中檢測(cè)到55 種成分，8 月底、10 月底分別有83.67、69.67 種，見圖1。方差分析表明，隨著麝香的成熟，其成分種類呈先升后降的趨勢(shì)，其中8 月底高于6 月底（P＜0.05），而6 月底與8 月底比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖1 不同成熟階段麝香化學(xué)成分?jǐn)?shù)量Fig.1 Chemical constituent quantities of musk harvested at different maturity stages

3.4 成分相對(duì)含量 6 月底、8 月底、10 月底麝香成分相對(duì)含量前20 位的分別占73.92%、85.58%、81.82%，對(duì)其作進(jìn)一步整理分析，結(jié)果見表2。由此可知，不同成熟階段麝香成分變化較大，僅檢測(cè)到1 種同時(shí)存在于3 個(gè)階段中，為2，2′-亞甲基雙-（4-甲基-6-叔丁基苯酚）；只在10 月底檢測(cè)到的成分有11 種，其中烷烴類有8 種；只在6 月底檢測(cè)到的成分有17 種，包括酯類、酸類等。作為麝香標(biāo)志性物質(zhì)的麝香酮，在6 月底麝香中沒有檢測(cè)到，而在8 月底、10 月底其相對(duì)含量分別為1.39%、1.21%。此外，在6 月底麝香中沒有檢測(cè)到8-環(huán)十六烯-1-酮，而在8 月底、10 月底其相對(duì)含量分別達(dá)到48.93%、31.87%。

3.5 成分類別 圖2 顯示，麝香成分主要包括酮類、烷烴類、酯類、酚類、酸類、醇類；6 月底分布較為均衡，8 月底麝香酮類占大多數(shù)，10 月底烷烴類、酮類較多；6 月底僅檢測(cè)到1.75%的酮類，低于8 月底的62.44%、10 月底的38.24%（P＜0.01）；10 月底烷烴類成分相對(duì)含量為31.69%，高于6 月底的9.85%、8 月底的11.81%；酯類、酸類、醇類成分相對(duì)含量隨著時(shí)間的推移而降低。

圖2 不同成熟階段麝香中前20 位化學(xué)成分類別Fig.2 Categories of top twenty chemical constituents in musk harvested at different maturity stages

4 討論

麝香中的含水量受遺傳、環(huán)境及生理階段的影響較大。根據(jù)泌香的生理過程，在泌香期水分含量應(yīng)最大，隨著水分的重吸收及麝香的發(fā)酵，到秋冬季節(jié)麝香應(yīng)為最干燥的時(shí)間［13］。本研究中3～5 歲

林麝10 月底麝香的平均含水量為36.03%，基本達(dá)到2020 年版《中國(guó)藥典》 對(duì)麝香含水量的要求，且遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于文獻(xiàn)［14］的研究結(jié)果，由于文獻(xiàn)中麝香樣品來源于陜西鳳縣，本研究麝香樣品來源于重慶南川，這與課題組前期觀察比較發(fā)現(xiàn)的陜西鳳縣麝香通常較濕的現(xiàn)象一致。本研究結(jié)果表明隨著時(shí)間的推移，麝香含水量逐漸下降，這與林麝的泌香生理過程相吻合。

表2 不同成熟階段麝香中前20 位化學(xué)成分相對(duì)含量Tab.2 Relative contents of top twenty chemical constituents in musk harvested at different maturity stages

麝香名字的由來為“香氣如射”，在雄性林麝交配期起到吸引異性和標(biāo)記領(lǐng)域的作用［15-16］，主要成分包括大環(huán)酮類、甾體類、多肽類、酸類、酯類等，其中麝香酮為其重要活性成分及香氣來源［17-18］。據(jù)惠岑懌［19］的檢測(cè)結(jié)果表明，相對(duì)于成熟馬麝麝香1.31% 的麝香酮含量而言，未成熟馬麝麝香中麝香酮含量只有0.76%，這個(gè)結(jié)果與麝類的泌香規(guī)律相符合。課題組推測(cè)，麝香酮及8-環(huán)十六烯-1-酮的生成很有可能是在林麝分泌香液后的成熟過程中產(chǎn)生，也就是這個(gè)原因，造成了在初香液并不具備麝香特有的香味，而是具有濃烈的腥臭味。

由于林麝屬于國(guó)家一級(jí)保護(hù)野生動(dòng)物，生性膽小，應(yīng)激性很強(qiáng)，本研究只采集了6 頭林麝的麝香樣品，且試驗(yàn)林麝無法避免在遺傳上的差異性，再加之麝香樣品具有一定的黏滯性，不能完全混合均勻，這對(duì)樣品的代表性具有一定的影響。另外，麝香成分復(fù)雜，6 月份麝香中的化學(xué)成分是通過哪些代謝通路最后變成成熟麝香，在初香液分泌后，是否還有其他化學(xué)成分分泌，有待進(jìn)一步深入研究。