金芩藍口服液對雞風熱犯肺證的療效研究

鄧銳涵，周紫沖，楊艷艷，吳雪旖，馮靜，張露萍，李亦奇，冉蓉，陳洪亮，徐美榮，王林*

(1.濟南億民動物藥業(yè)有限公司，濟南 250105；2.萊州市畜牧獸醫(yī)站，山東煙臺 261400)

雞風熱犯肺證屬溫熱病范疇，是因氣溫驟變、季節(jié)交替，再加之流感、低致病性新城疫、傳支、傳喉等病毒混合感染細菌、支原體或寄生蟲等復雜因素所造成的病證[1-3]。證見發(fā)熱、咳嗽、甩鼻、咽喉腫脹、眼睛變形結膜充血、腹瀉、精神沉郁、食欲減退、扎堆、口渴等；本證在三焦辨證中屬上焦病證，在衛(wèi)氣營血辨證中則屬衛(wèi)分證；本證為肺失宣清所致，因此治療原則為清熱解毒、涼血利咽。

金芩藍口服液是以金銀花、連翹這經典藥對共為君藥，有加強清熱解毒、疏散風熱之功效[4-5]；黃芩、板藍根二者共為臣藥：黃芩常作清熱解毒之用，有瀉肺火、解肌熱之功[6-7]，板藍根清熱降火、涼血利咽，善于治療風熱上攻所致咽喉腫痛、口舌生瘡[6,9-10]，二者既能起到涼血瀉火、消腫止痛的功效，又能加強君藥透熱降溫的效果；諸藥共奏清熱解毒、涼血利咽之功效，用于治療和預防風熱之毒侵襲機體引起的雞風熱犯肺證。本研究旨在考察金芩藍口服液對雞風熱犯肺證的療效，為本品臨床用藥推廣提供有效依據，為因此證造成的養(yǎng)禽業(yè)產肉率和產蛋率下降提供新的解決方案。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 1日齡白羽肉雞，飼養(yǎng)于控溫控濕半封閉動物房中，專人飼養(yǎng)管理至14日齡，飼喂小雞全價糧。山東某蛋雞場中自然發(fā)病的蛋雞，本場標準免疫程序及飼養(yǎng)管理，飼喂產蛋期雞飼料，200日齡相繼發(fā)病。

1.1.2 受試藥物 金芩藍口服液，批號：20051001，由濟南億民動物藥業(yè)有限公司提供；雙黃連口服液，批號：20052801，由濟南億民動物藥業(yè)有限公司提供。

1.1.3 主要試劑和毒株 H9N2AIV(EID=10E-6.5,0.1 mL)，編號：HNAU0037，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；脂多糖(LPS標準品)，編號：L8880，購于SOLARBIO 公司。

1.2 方法

1.2.1 金芩藍口服液對人工雞感染風熱犯肺證的治療試驗

1.2.1.1 動物模型的建立 將60只14日齡的健康雞隨機分為3組，分別為模型A組、模型B組和模型C組；模型A組用0.1 mL H9N2AIV液點眼滴鼻，模型B組腹腔注射80 μg/kg LPS，模型C組采用0.1 mL H9N2AIV點眼滴鼻和腹腔注射80 μg/kg LPS混合感染的方法進行攻毒，將各組一同轉移至溫度10±2 ℃的密閉房間內，持續(xù)冷風吹4 h，隨后再轉移至42±2 ℃的密閉房間內，持續(xù)熱風吹4 h，然后移入標準飼養(yǎng)環(huán)境中；8 h后按上述步驟重復操作一次后，觀察記錄發(fā)病情況并進行中獸醫(yī)辨證診斷。

1.2.1.2 藥物治療試驗

1.2.1.2.1 病例納入標準 (1)主癥：發(fā)熱，咳嗽，甩鼻，咽喉腫脹。(2)次癥：眼睛變形結膜充血，腹瀉，精神沉郁，食欲減退，扎堆，口渴。(3)符合2～3項主癥，1～2項次癥的病雞，可用于進行雞風熱犯肺證療效試驗的評價。

1.2.1.2.2 分組及給藥方案 選取建模成功的病雞100只，隨機分為5組，分別為金芩藍高劑量組、金芩藍中劑量組、金芩藍低劑量組、藥物對照組、模型對照組；再隨機選取20只健康雞設立健康對照組，單獨專人飼養(yǎng)。具體給藥方案見表1；試驗期給藥5 d，停藥觀察7 d，共12 d；每天測定肛溫并觀察記錄雞只情況，試驗結束后計算治愈率、有效率和無效率。

表1 分組及給藥方案

1.2.1.2.3 療效評價 (1)治愈：用藥后主癥、次癥消失，且不復發(fā)判為治愈，計算治愈率。(2)有效：用藥后主要癥狀有所改善，精神食欲明顯改善，判為有效計算有效率?？傆行?= 治愈率 + 有效率。(3)無效：在用藥后病證無改善或加重、死亡或在停藥觀察期內復發(fā)，判為無效。

1.2.2 金芩藍口服液對自然發(fā)病的雞風熱犯肺證的臨床治療試驗

1.2.2.1 病例確診 山東某蛋雞養(yǎng)殖場蛋雞群于200日齡左右開始陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、甩鼻、咽喉腫脹、眼睛變形結膜充血、腹瀉、精神沉郁、食欲減退、被毛粗亂、口渴等癥狀；剖檢可見喉頭彌漫性出血，氣管環(huán)狀出血，氣管內黃色干酪樣分泌物或黃紅色粘稠分泌物；治療前死亡率達到5%，整體產蛋率下降18%左右。經中獸醫(yī)辨證為風熱之毒引起的的風熱犯肺證，故采用金芩藍口服液進行臨床治療試驗。

1.2.2.2 病例納入標準 同本文“1.2.1.2.1”。

1.2.2.3 分組及處理方案 根據“1.2.2.2”中的納入標準，選取600只病雞單獨飼養(yǎng)于另一消毒后的雞舍，隨機分為兩組，每組300只，金芩藍口服液組和雙黃連口服液組。根據推薦劑量，金芩藍口服液組用量按2 mL/L水，混飲，連用5 d；雙黃連口服液組用量按2.5 mL/L水，混飲，連用5 d。試驗期給藥5 d，用藥結束后觀察7 d；試驗期內觀察記錄病程發(fā)展及死亡情況，試驗結束后統(tǒng)計治愈率、有效率和無效率。

1.2.2.4 療效評價 同本文“1.2.1.2.3”。

1.2.3 數(shù)據分析 利用spss22.0軟件進行顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 金芩藍口服液對人工感染雞風熱犯肺證的治療試驗

2.1.1 雞風熱犯肺證模型的建立

2.1.1.1 臨床發(fā)病情況及剖檢變化 由表2可知，模型A組試驗期發(fā)病率為50%，無死亡情況；模型B組試驗期發(fā)病率為70%，死亡率為5%；模型C組試驗期內發(fā)病率為85%，死亡率為10%。病雞主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、甩鼻、咽喉腫脹、眼睛變形結膜充血、腹瀉、精神沉郁、食欲減退、扎堆、口渴等癥狀，具體見表3。試驗結束后剖檢處死病雞及病死雞均可見喉頭彌漫性出血，氣管環(huán)狀出血，氣管內黃色干酪樣分泌物或黃紅色粘稠分泌物，如圖1所示。

表2 發(fā)病率、死亡率情況

表3 臨床發(fā)病癥狀

A 喉頭彌漫性出血；B 氣管環(huán)狀出血；C1 黃色干酪樣分泌物；C2 黃紅色粘稠分泌物。

2.1.1.2 中獸醫(yī)辨證及模型的確立 在《獸藥研究技術指導原則匯編》的指導下，確定以模型C組的方法建立模型，并根據剖檢變化和其主要癥狀(表3)經中獸醫(yī)辨證符合風熱犯肺證癥狀，此方法建立模型可供評價金芩藍口服液藥效試驗用。

2.1.2 藥物治療試驗 由圖2可知，給藥期間，金芩藍高、中劑量組解熱效果優(yōu)于金芩藍低劑量組和藥物對照組；觀察期內，金芩藍高、中、低劑量組和藥物對照組解熱效果皆為良好。

圖2 試驗期間雞肛溫變化情況折線圖(n=20)

由表4可知，金芩藍高劑量組治愈率為90%；金芩藍中劑量組治愈率為85%；金芩藍低劑量組治愈率為75%；藥物對照組治愈率為80%。金芩藍高、中、低劑量組和藥物對照組與模型對照組相比，治愈率差異極顯著(P<0.01)；金芩藍高、中劑量組與模型對照組相比，總有效率差異極顯著(P<0.01)；金芩藍低劑量組和藥物對照組與模型對照組相比，總有效率差異顯著(P<0.05)。結果表明，金芩藍高劑量組治愈率最高；金芩藍高、中劑量組總體療效要優(yōu)于金芩藍低劑量組和藥物對照組。

表4 藥物對雞風熱犯肺證的治療效果

2.2 金芩藍口服液對自然發(fā)病的雞風熱犯肺證的治療試驗 由圖3可知，經過治療，金芩藍口服液組的食欲恢復情況要優(yōu)于雙黃連口服液組。由圖4可知，給藥期內，金芩藍口服液組與雙黃連口服液組的產蛋率都在穩(wěn)定恢復；觀察期內，金芩藍口服液組產蛋能力恢復優(yōu)于雙黃連口服液組。

圖3 試驗期間兩組雞日均采食量情況折線圖(n=300)

圖4 試驗期間兩組雞日產蛋率情況折線圖(n=300)

由表5、表6可知，金芩藍口服液組治愈率為89%，總有效率為96.3%，死亡率為3%；雙黃連口服液組治愈率為86.7%，總有效率為94.4%，死亡率為5%。結果表明，金芩藍口服液與雙黃連口服液相比，具有更好的治療效果。

表5 藥物對自然感染雞風熱犯肺證的治療效果

3 討論與結論

3.1 雞風熱犯肺證模型的建立 中獸醫(yī)認為，新城疫病毒、流感病毒、傳染性支氣管炎病毒、傳染性喉氣管炎病毒等為“疫氣”，也就是古文資料中所指的“瘟疫”，其皆屬于“熱毒”范疇；風熱之毒可侵犯各日齡的肉雞、蛋雞，造成雞的風熱犯肺證；多發(fā)于季節(jié)交替和溫度驟變期，而相關的研究報道多是理論研究或人用中藥研究[1-2]，或者采用自然發(fā)病雞只進行試驗[11]，尚未見雞風熱犯肺證模型的有關報道；因此，本研究旨在建立雞風熱犯肺證模型，以期可評價藥物療效。

周萌等人[12]發(fā)現(xiàn)，采用低致病性的H9亞型AIV對SPF雞攻毒時，發(fā)病癥狀非常輕微，臨床上表現(xiàn)不出明顯的癥狀；采用高致病性H5亞型AIV攻毒時，由于毒力過強，發(fā)病雞幾乎100%死亡。郭群等人[13]發(fā)現(xiàn)，利用LPS誘導可穩(wěn)定建立雞發(fā)熱模型。因此，本研究采用人工模擬熱應激環(huán)境配合病毒以及內毒素感染，綜合考察雞風熱犯肺證模型。

根據《獸藥研究技術指導原則匯編》的指導，人工建立病理動物模型的標準是發(fā)病率80%以上，有一定死亡率，病雞具有一定采食和飲水能力，能保證給藥的正常進行。據此，本試驗發(fā)現(xiàn)當采用AI H9V與LPS混合感染配合熱應激的方式進行建模時，試驗雞發(fā)病率為85%、死亡率為10%且病雞發(fā)病期可進行采食飲水，符合《獸藥研究技術指導原則匯編》相關要求。因此，研究成功建立雞風熱犯肺證的動物模型。

3.2 金芩藍口服液對人工感染雞風熱犯肺證的治療試驗 金芩藍口服液具有清熱解毒、涼血利咽之功效，金銀花、連翹二者配合具有良好的清表熱作用[4-5]；加之黃芩、板藍根二味藥材組方而成，亦具有良好的清里熱作用[6-10]；因此，金芩藍口服液對于風熱犯肺證具有良好的治療效果。

試驗結果表明，金芩藍高、中、低劑量組以及藥物對照組對于人工誘導的雞風熱犯肺證具有良好的療效，且治愈率與模型對照組相比，均具有極顯著的統(tǒng)計學意義；而金芩藍高、中劑量組的綜合療效均優(yōu)于雙黃連口服液且具有良好的解熱作用。

因此，金芩藍口服液可臨床上用于雞的風熱犯肺證，其推薦用量為2 mL/L水，混飲，連用5 d。

3.2 金芩藍口服液對自然發(fā)病的雞風熱犯肺證的臨床療效試驗 在自然發(fā)病的雞風熱犯肺證治療試驗中，通過《獸藥研究指導原則匯編》、《獸用中藥、天然藥物臨床試驗技術指導原則》的指導，經中獸醫(yī)辨證，選取符合納入標準的病雞進行試驗；結果表明，金芩藍口服液可有效的恢復病雞日采食量和日產蛋率，并且可有效的控制死亡率，其總有效率達到96.3%；因此，金芩藍口服液在推薦劑量下可有效的控制雞風熱犯肺證。

3.3 結論 中獸醫(yī)辨證雞風熱犯肺證制約著養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，如不加以控制，發(fā)展到溫熱病營、血分證，將會給養(yǎng)殖戶造成重大經濟損失。研究通過人工建立動物模型以及自然發(fā)病病例考察了金芩藍口服液的治療效果，結果顯示，金芩藍口服液可有效的治療雞風熱犯肺證，推薦使用劑量為2 mL/L水，混飲，連用5 d。