缺血性腦卒中相關(guān)基因檢測的臨床意義

劉夢杰

（山東省新泰市人民醫(yī)院藥學(xué)部，山東新泰 271200）

據(jù)調(diào)查顯示，我國居民死因排名第一位的為腦卒中，且我國腦卒中患者發(fā)病第一年的復(fù)發(fā)率明顯高于西方國家[1]。腦卒中因其發(fā)病原因的不同，分為缺血性腦卒中和出血性腦卒中。缺血性腦卒中的發(fā)病率占60%～70%，明顯高于出血性腦卒中，其發(fā)病的主要原因是腦血管中形成的血栓。據(jù)調(diào)查顯示，通過控制危險(xiǎn)因素，80% 以上的腦卒中可以實(shí)現(xiàn)早期預(yù)防[2]。

目前有研究顯示，與缺血性腦卒中相關(guān)的基因有三種，分別為68MTHFR、187F5、27PAI-1。為此，我們通過分析缺血性腦卒中患者與正常對照人群體內(nèi)27PAI-1(4G/5G)、68MTHFR(C＞T)、187F5(G＞A)的基因型分布與等位基因頻率，進(jìn)一步為預(yù)防中老年人發(fā)生缺血性腦卒中提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 缺血性腦卒中組

選擇2017年1月～2018年12月于我院神經(jīng)內(nèi)科住院的缺血性腦卒中患者共計(jì)92例，其中男性65例，女性27例，以上患者均經(jīng)顱腦CT或MRI檢查確診。診斷標(biāo)準(zhǔn)為中國急性缺血性腦卒中診治指南2019[3]，所選人群均排除患有其他急性或慢性疾病，如：肝腎功能不全，癌癥等。

1.2 對照組

選擇健康體檢者36例，男性25例，女性11例，均經(jīng)體檢排除心腦血管疾病和其他血栓性疾病。

1.3 試驗(yàn)方法

取靜脈血2～3ml置于EDTA抗凝管中，將樣本血樣上下顛倒混勻，移液槍取200μl血液置于裝有1ml 1×NH4Cl處理液的離心管中，靜置5min顏色變?yōu)槌吻宓募t色后，3000～4000r pm離心5min，吸掉上清液留白細(xì)胞，加入35μl核酸純化試劑將白細(xì)胞打勻，靜置20～30min，取1.5μl處理后的白細(xì)胞樣本加入相應(yīng)試劑耀金分中，混勻。采用數(shù)字熒光分子雜交／數(shù)字熒光原位雜交法(DFMH/DFISH Digital Fluorescence Molecule Hybridization/ Digital Fluorescence in situ Hybridization) 以熒光檢測儀（L998A，西安天隆科技有限公司）檢測受試者27PAI-1、68MTHFR、187F5基因型。所有試劑均由北京華夏時(shí)代基因科技發(fā)展有限公司提供。

1.4 觀察指標(biāo)

比較兩組27PAI-1、68MTHFR、187F5基因型分布以及等位基因頻率，探討27PAI-1、68MTHFR、187F5基因多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

所有研究數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析和處理，定性資料組間采用χ2檢驗(yàn)，用百分比（%）表示。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 27PAI-1(4G/5G) 基因分布與等位基因頻率

缺血性腦卒中組基因型4G4G 與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；基因型4G5G與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；基因型5G5G與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。缺血性腦卒中組4G等位基因頻率顯著高于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。4G5G者居于4G與5G之間，含有4G的基因型分布在缺血性腦卒中組顯著多于對照組。結(jié)果見表1：

表1 各組27PAI-1(4G/5G) 基因型分布與等位基因頻率比較 [n(%)]

2.2 68MTHFR(C＞T)基因分布與等位基因頻率

缺血性腦卒中組基因型TT與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；基因型TC與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；基因型CC與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。缺血性腦卒中組T等位基因頻率顯著高于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。TC者居于TT與CC之間，含有T的基因型分布在缺血性腦卒中組顯著多于對照組。結(jié)果見表2：

表2 各組68MTHFR(C＞T) 基因型分布與等位基因頻率比較 [n(%)]

2.3 187F5(G＞A) 基因分布與等位基因頻率

缺血性腦卒中組基因型、等位基因頻率與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表3：

表3 各組187F5(G＞A) 基因型分布與等位基因頻率比較 [n(%)]

2.4 缺血性腦卒中組27PAI-1(4G/5G) 基因合并68MTHFR(C＞T) 基因比較

4G4G基因型合并TT基因型與5G5G基因型合并TT基因型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；4G5G基因型合并TT基因型與5G5G基因型合并TT基因型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。4G4G基因型合并CT基因型與4G5G基因型合并CT基因型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；4G4G基因型合并CT基因型與5G5G基因型合并CT基因型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；4G5G基因型合并CT基因型與5G5G基因型合并CT基因型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果見表4：

表4 缺血性腦卒中組27PAI-1(4G/5G) 基因合并68MTHFR(C＞T) 基因比較 [n(%)]

3 討論

基于腦卒中的高發(fā)病率、死亡率、致殘率，因其缺乏有效的治療手段，目前認(rèn)為最好的措施即為預(yù)防。本研究通過熒光染色原位雜交染色體核型分析技術(shù)檢測缺血性腦卒中相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)基因：68MTHFR、187F5、27PAI-1基因型，對其結(jié)果進(jìn)行分析，判斷其發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)率，從而起到預(yù)防缺血性腦卒中的作用。

PAI-1是纖溶系統(tǒng)中的主要成分，對調(diào)節(jié)纖溶系統(tǒng)的平衡起著重要作用。PAI-1基因啟動子序列中存在多個(gè)基因多態(tài)性，其中有一個(gè)4G/5G多態(tài)性，即鳥苷酸插入或缺失的基因多態(tài)性，其調(diào)控著PAI-1的表達(dá)水平[4]。研究者證實(shí)，PAI-1轉(zhuǎn)錄基因增加與4G等位基因有很大相關(guān)性，4G4G純合子血漿PAI-1水平顯著高于雜合子4G5G和5G5G純合子，且雜合子4G5G血漿PAI-1水平明顯高于5G5G純合子[5]。PAI-1基因4G/5G基因多態(tài)性可能影響纖溶系統(tǒng)導(dǎo)致缺血性腦卒中的發(fā)生[6]。有外國學(xué)者對印度人缺血性腦卒中患者血漿PAI-1水平和4G/5G基因多態(tài)性的關(guān)系做了研究，發(fā)現(xiàn)缺血性腦卒中患者血漿PAI-1水平高于正常組，且4G4G患者血漿PAI-1水平最高，其次是4G5G基因型者，5G5G基因型者血漿PAI-1水平最低[7]。本研究結(jié)果顯示，缺血性腦卒中組攜帶PAI-1基因4G4G基因型與4G5G基因型的患者明顯高于正常組，4G5G者居于4G與5G之間，4G等位基因頻率顯著高于正常對照組。

MTHFR基因多態(tài)性存在種族和地域的差異，我國人群TT基因型的攜帶率遠(yuǎn)高于西方國家[8]。Li等[9]通過Meta分析證實(shí)了MTHFR C677T基因可能是腦卒中的易感基因。在對中國人群進(jìn)行的研究中發(fā)現(xiàn)，MTHFR基因C677T位點(diǎn)的T等位基因是腦卒中發(fā)生的危險(xiǎn)因素[10]。中國人群MTHFR C677T的高遺傳突變率是導(dǎo)致血漿同型半胱氨酸HCY水平和腦卒中發(fā)生率顯著高于歐洲人群的主要危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果顯示，缺血性腦卒中組攜帶MTHFR基因TT型與TC型的患者高于正常對照組，T等位基因頻率顯著高于正常對照組。攜帶TC基因者居于TT與CC之間，含T的基因型分布在缺血性腦卒中組顯著多于對照組。

F5基因是一種V因子的單核苷酸多態(tài)性，攜帶者凝血活性正常，但是對活性蛋白C抵抗從而導(dǎo)致相應(yīng)的血液高凝狀態(tài)[11]。187F5的A基因型與G基因型比，發(fā)生缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)比為1.33。然而，此基因型在亞洲人群中突變的幾率不大。本研究結(jié)果顯示，缺血性腦卒中組和正常對照組中187F5基因型都沒有突變。

綜上所述，PAI-1基因在缺血性腦卒中的發(fā)病中起著關(guān)鍵作用，攜帶4G4G基因型的患者發(fā)生卒中的風(fēng)險(xiǎn)明顯高于攜帶5G5G基因型的患者，其次是攜帶4G5G基因型者。MTHFR基因TT基因型突變者發(fā)生缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)高于CC基因型，其次是CT基因型。同一患者PAI-1基因與MTHFR基因同時(shí)突變，發(fā)生缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)提高，尤其以4G5G合并CT、TT者居多。187F5基因型無突變，此基因不作為缺血性腦卒中發(fā)病的重要基因。以上統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示與前人研究一致，說明通過個(gè)體化治療基因檢測技術(shù)提前檢測基因型可以預(yù)防缺血性腦卒中的發(fā)生。這將為今后高危因素人群預(yù)防缺血性腦卒中起到重要作用，從而降低死亡率與致殘率，提高中老年人生活質(zhì)量。