秋石斛‘三亞陽(yáng)光’中苗低溫脅迫生理響應(yīng)研究及耐寒指標(biāo)篩選

陸順教 何嘉琦 易雙雙 廖易 李克烈 尹俊梅 楊光穗

摘? 要：對(duì)秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗進(jìn)行15、10和5 ℃脅迫處理，測(cè)定各處理樣品的電導(dǎo)率、可溶性蛋白、可溶性糖、游離脯氨酸、丙二醛、葉綠素含量、恢復(fù)生長(zhǎng)之后的落葉率等耐寒生理指標(biāo)，分析這些耐寒指標(biāo)在脅迫下的變化規(guī)律，篩選出有效的耐寒評(píng)價(jià)生理指標(biāo)。結(jié)果表明，電導(dǎo)率及可溶性蛋白、可溶性糖、游離脯氨酸、丙二醛含量和落葉率均隨著處理溫度的降低和處理時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，而葉綠素含量則呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，可溶性糖、游離脯氨酸、丙二醛、葉綠素含量和落葉率都與半致死溫度有極顯著的相關(guān)性，表明可溶性糖、游離脯氨酸、丙二醛、葉綠素含量和落葉率可作為秋石斛‘三亞陽(yáng)光耐寒性綜合評(píng)價(jià)的有效評(píng)價(jià)指標(biāo)。研究結(jié)果可以為秋石斛種質(zhì)資源的耐寒性評(píng)價(jià)提供了理論依據(jù)和技術(shù)方法。

關(guān)鍵詞：秋石斛;低溫脅迫;生理響應(yīng);耐寒指標(biāo)

中圖分類號(hào)：S682.31? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Abstract： In order to select effective cold-resistant physiological indexes and provide reference for cold tolerance evaluation of germplasm resources of Dendrobium hybrid， the middle age plantlets Dendrbium ‘Sonia Hiasakul were subjected to low temperature stress at 15， 10 and 5 ℃， respectively. And then the electrical conductivity， soluble protein， soluble sugar， free proline， Malondialdehyde （MDA）， chlorophyll content and the rate of defoliation after regrowth were measured， the change rule of the cold-resistance indexes under low temperature stress was analyzed， and the effective cold-resistance evaluation indexes were selected through correlation analysis. The results showed that the electrical conductivity， soluble protein， soluble sugar， free proline， MDA content and defoliation rate were increased with the decrease of treatment temperature. It was indicated that the content of soluble sugar， free extension of treatment time， however， the content of chlorophyll was decreased gradually. The correlation analysis showed that soluble sugar， free proline， Malondialdehyde， chlorophyll content and defoliation rate were significantly correlated with the semi-lethal temperature. Proline， malondialdehyde， chlorophyll and defoliation rate could be used as the effective indexes for the comprehensive assessment of cold tolerance of Dendrbium ‘Sonia Hiasakul. The results could provide a theoretical basis and technical method for the comprehensive assessment of cold tolerance of Dendrobium hybrid.

Keywords： Dendrobium hybrid; low temperature stress; physiological response; cold-resistant index

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.01.017

石斛為蘭科石斛屬（Dendrobium）植物，是重要的藥用植物和觀賞植物[1]。在觀賞應(yīng)用方面，石斛蘭因其花色鮮艷、花形花姿優(yōu)美、花期長(zhǎng)，深受各國(guó)人們的喜愛(ài)，與卡特蘭（Cattleya）、蝴蝶蘭（Phalaenopsis）、萬(wàn)代蘭（Vanda）并列為觀賞價(jià)值最高的“四大觀賞洋蘭”。目前，觀賞石斛蘭主要分為兩大類，一類是金釵型石斛蘭，也就是通常說(shuō)的春石斛，這一類石斛蘭的特點(diǎn)是花序從假鱗莖的結(jié)上長(zhǎng)出，幾乎每個(gè)假鱗莖的結(jié)都可以長(zhǎng)出花序，每個(gè)花序著花3～4朵，這一類石斛蘭喜歡冷涼環(huán)境，花芽分化需要低溫、干旱的刺激，春季開(kāi)花;另一類為蝴蝶型石斛，也就是通常說(shuō)的秋石斛，這一類石斛蘭花序著生于假鱗莖頂部，每個(gè)假鱗莖生長(zhǎng)1～3個(gè)花序，每個(gè)花序著花7～30朵，有的品種可達(dá)40朵以上[2]，這一類石斛蘭喜歡較高溫環(huán)境，開(kāi)花需要短日照刺激。

秋石斛為附生蘭，主要生產(chǎn)于熱帶亞熱帶地區(qū)，如泰國(guó)、新加坡、馬來(lái)西亞、印度尼西亞、澳大利亞、夏威夷等。秋石斛已成為這些國(guó)家和地區(qū)花卉產(chǎn)業(yè)的重要組成部分，如世界蘭花出口第二大國(guó)的泰國(guó)，秋石斛是出口創(chuàng)匯的主要花卉，2012年蘭花切花的出口額達(dá)到6360萬(wàn)美元，其中秋石斛切花占到94.73%，盆花出口額達(dá)到1780萬(wàn)美元，秋石斛占到51.40%[3-4]。我國(guó)大陸在改革開(kāi)放之后才開(kāi)始引種秋石斛，主要在海南、廣東、廣西、福建及云南等地栽培，開(kāi)始主要以生產(chǎn)切花為目的，但由于自然環(huán)境等因素，切花產(chǎn)量及質(zhì)量均不如熱帶地區(qū)，因此多數(shù)以失敗而告終。近年來(lái)，根據(jù)自然環(huán)境和市場(chǎng)需求的變化，國(guó)內(nèi)的秋石斛生產(chǎn)主要以盆花為主，并且發(fā)展迅速，年出圃量已經(jīng)超過(guò)1000萬(wàn)株，產(chǎn)值超過(guò)1.5億人民幣，而且?guī)?dòng)了栽培基質(zhì)、物流運(yùn)輸、農(nóng)民就業(yè)等的發(fā)展，是熱區(qū)農(nóng)業(yè)發(fā)展的朝陽(yáng)產(chǎn)業(yè)。

但是我國(guó)秋石斛產(chǎn)業(yè)起步較晚，隨著產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，許多限制產(chǎn)業(yè)發(fā)展的因素開(kāi)始顯現(xiàn)出來(lái)。如缺少自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新品種，缺少種苗繁育技術(shù)等，近年來(lái)雖然育有少量的品種，但主要是以觀賞性狀為主要育種目標(biāo)，極少關(guān)注新品種的耐寒性問(wèn)題，如‘廣林紫嫣[5]、‘廣林紫韻[6]、‘錦云[7]、‘萬(wàn)泉寶石[8]、‘朝陽(yáng)和‘白雪[9]等。秋石斛原產(chǎn)熱帶亞熱帶地區(qū)，適宜的生長(zhǎng)溫度為25～30 ℃，低于15 ℃時(shí)營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)會(huì)全部停止，12 ℃左右的低溫，可使葉片全部脫落，長(zhǎng)時(shí)間7 ℃左右的低溫會(huì)造成深度傷害，很難恢復(fù)[10]。但由于我國(guó)自然環(huán)境與熱帶地區(qū)有明顯的差別，冬季平均氣溫或者極限低溫要低于熱帶地區(qū)，導(dǎo)致很多從國(guó)外引進(jìn)的品種在冬季低溫季節(jié)易受低溫嚴(yán)寒傷害，不僅限制了秋石斛冬季的供花，而且由于低溫傷害還影響了來(lái)年的開(kāi)花質(zhì)量和品質(zhì)[11]。但我國(guó)秋石斛的基礎(chǔ)研究仍然比較薄弱，對(duì)秋石斛的耐寒性研究比較欠缺，僅有少量的文獻(xiàn)報(bào)道，如何嘉琦等[11-12]通過(guò)自然低溫條件下的秋石斛田間表型評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)在13～18 ℃的持續(xù)低溫條件下大部分品種出現(xiàn)嚴(yán)重的黃落葉現(xiàn)象，秋石斛‘三亞陽(yáng)光幼苗在低溫處理?xiàng)l件下可溶性蛋白質(zhì)、葉綠素、丙二醛（MDA）、游離脯氨酸發(fā)生了不同程度的變化，而且出現(xiàn)大量的黃落葉現(xiàn)象等。

秋石斛‘三亞陽(yáng)光是目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上流通最為廣泛、最受歡迎的品種，何嘉琦等[12]對(duì)‘三亞陽(yáng)光幼苗在不同程度低溫脅迫下的生理響應(yīng)進(jìn)行了研究，為‘三亞陽(yáng)光幼苗在冬季嚴(yán)寒傷害的防治方面提供了理論指導(dǎo)。但同一品種不同苗齡的植物對(duì)低溫脅迫的抗性及生理響應(yīng)是不一致的，本研究以秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗為研究對(duì)象，分析其耐寒生理指標(biāo)在不同程度低溫脅迫下的變化規(guī)律，探索其對(duì)不同程度低溫的耐受時(shí)間，為秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗低溫傷害防治提供參考。

1? 材料與方法

1.1? 材料

用于試驗(yàn)的秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗栽植于中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所熱帶蘭花資源圃內(nèi)。挑選移栽6個(gè)月，植株高約20～25 cm，葉片6～8片，生長(zhǎng)狀態(tài)較為一致的植株，分別置于15、10和5 ℃的人工氣候箱中進(jìn)行低溫處理，每個(gè)溫度分別處理0（CK）、1、2、4、8 h和1、2、4、8、16 d，每個(gè)處理20株，重復(fù)3次。氣候箱的光照時(shí)間設(shè)為光照/黑暗=14 h/10 h，光照強(qiáng)度為20 000 lx，空氣相對(duì)濕度為85%。

1.2? 方法

1.2.1? 生理指標(biāo)的測(cè)定? 隨機(jī)剪取各處理3株的頂端全展葉片用于可溶性蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）、游離脯氨酸、葉綠素、電導(dǎo)率等生理指標(biāo)測(cè)定，測(cè)定方法參考李合生《植物生理生化實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)》[13]，每個(gè)指標(biāo)重復(fù)測(cè)定3次。

1.2.2? 相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定? 將供試的秋石斛植株放人工氣候箱中，設(shè)置溫度梯度10、5、0、?5 ℃，分別低溫處理12 h，光照時(shí)間設(shè)為光照/黑暗= 14 h/10 h，光照強(qiáng)度為20 000 lx，空氣相對(duì)濕度為85%。隨機(jī)剪取3株頂端新鮮全展葉片用于相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定，每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.2.3? 形態(tài)學(xué)指標(biāo)的測(cè)定? 每個(gè)處理在采集用于測(cè)定生理指標(biāo)的葉片后立即移出人工氣候箱，置于大棚中進(jìn)行常規(guī)栽培，10 d后觀察恢復(fù)情況和統(tǒng)計(jì)落葉率（落葉率=掉落葉片數(shù)/總?cè)~片數(shù)×100%）。

1.3? 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)的平均值、標(biāo)準(zhǔn)差、顯著性分析、相關(guān)性分析及主成分分析通過(guò)SPSS 20.0（SPSS Inc.， Chicago， Illinois）軟件進(jìn)行。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 不同低溫脅迫對(duì)秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗生理指標(biāo)的影響

2.1.1? 不同低溫脅迫對(duì)秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗可溶性蛋白含量影響? 可溶性蛋白是植物抵抗低溫脅迫的重要物質(zhì)。由圖1A可見(jiàn)，秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗葉片的可溶性蛋白含量在15、10、5 ℃低溫脅迫下均呈現(xiàn)出下降?上升?下降?上升的變化趨勢(shì)。在低溫脅迫條件下，可溶性蛋白含量在處理開(kāi)始后顯著下降，1 h之后顯著上升，15 ℃和10 ℃處理的到2h之后又開(kāi)始下降，而5 ℃處理繼續(xù)顯著上升，至4 h之后才開(kāi)始又顯著下降。15 ℃和10 ℃在處理4 d時(shí)達(dá)到最低點(diǎn)，5 ℃處理的則是在處理1 d后達(dá)到最低點(diǎn)之后又開(kāi)始上升，10 ℃和5 ℃處理的在4 d之后含量顯著上升，而15 ℃的則在8 d之后才開(kāi)始顯著上升。

2.1.2? 不同低溫脅迫對(duì)秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗可溶性糖含量的影響? 在植物的抗寒生理中，可溶性糖通過(guò)提高細(xì)胞的滲透濃度、降低水勢(shì)，從而降低植物的冰點(diǎn)。由圖1B可見(jiàn)，秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗葉片的可溶性糖含量在15、10、5 ℃低溫脅迫開(kāi)始時(shí)均呈現(xiàn)略微的下降，在15 ℃條件下處理1 d時(shí)降到最低，之后開(kāi)始顯著上升，而10、5 ℃條件下均是在處理8 h后開(kāi)始顯著上升。

2.1.3? 不同低溫脅迫對(duì)秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗游離脯氨酸和MDA含量的影響? 對(duì)低溫脅迫下秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗葉片的游離脯氨酸和MDA含量的測(cè)定表明，秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗葉片的游離脯氨酸和MDA含量均隨著低溫處理時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)逐步上升的趨勢(shì)（圖1C、圖1D）。由圖1C可見(jiàn)，15、10、5 ℃低溫脅迫下，秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗葉片的游離脯氨酸含量先出現(xiàn)略微的下降之后就一直呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，其中，15 ℃處理在8 h之后開(kāi)始呈顯著性上升，而10、5 ℃則在4 h之后開(kāi)始呈顯著性上升。由圖1D可見(jiàn)，MDA的含量在15 ℃處理時(shí)呈現(xiàn)的趨勢(shì)是升-降-升-降-升，但每個(gè)處理時(shí)間點(diǎn)的含量均顯著高于對(duì)照，而10、5 ℃處理的MDA含量則一直呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，且每個(gè)處理的含量也顯著高于對(duì)照。

2.1.4? 不同低溫脅迫對(duì)秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗葉片葉綠素含量的影響? 由圖1E可見(jiàn)，在不同低溫脅迫下，秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗葉片葉綠素含量隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降，其中15 ℃處理的下降趨勢(shì)比較緩慢，在處理16 d的時(shí)候葉片的葉綠素含量仍有0.30 mg/g以上，但仍顯著低于對(duì)照。10 ℃處理1 d以前葉綠素含量與15 ℃處理的下降幅度基本一致，但處理1 d后下降幅度開(kāi)始增大，在處理16 d時(shí)葉綠素含量降低到0.25 mg/g。5 ℃處理的葉綠素含量在處理2 h之前與10 ℃處理的降低程度一致，但在2 h之后含量迅速下降，在處理16 d時(shí)含量?jī)H有0.21 mg/g，是3個(gè)處理溫度中含量最低的。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，3個(gè)處理溫度的每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的葉綠素含量均顯著低于對(duì)照。

2.1.5? 不同低溫脅迫下秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗葉片相對(duì)電導(dǎo)率及半致死溫度? 隨著處理溫度的降低，秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗葉片的相對(duì)電導(dǎo)率逐漸升高，在15、10、5、0 ℃時(shí)電導(dǎo)率分別為19.88%、（24.29±3.03）%、（57.20±5.53）%、（71.18±7.65）%，在?5 ℃時(shí)達(dá)到（98.20±1.35）%。根據(jù)不同溫度處理下的相對(duì)電導(dǎo)率，擬合Logistic方程，求得‘三亞陽(yáng)光中苗的半致死溫度（LT50）為5.67 ℃。

2.2? 不同低溫脅迫對(duì)秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗落葉的影響

植物在受到低溫脅迫時(shí)葉片會(huì)受到損傷并脫落，因此落葉率能夠直觀反應(yīng)出植物受脅迫的程度。由圖1F可見(jiàn)，秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗的落葉率隨著處理溫度的降低和處理時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高。在15 ℃處理?xiàng)l件下，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，落葉率上升比較緩慢，在16 d時(shí)僅為20.83%（圖2）。在10 ℃條件下，處理8 h以前的落葉率雖有上升，但不明顯，在處理1 d后落葉率開(kāi)始上升明顯，而處理4 d之后落葉率急劇上升，16 d時(shí)達(dá)到44%（圖3）。5 ℃處理前4 h落葉率上升不明顯，4 h之后落葉開(kāi)始增多，處理4 d之后則開(kāi)始大量落葉，在16 d時(shí)落葉率達(dá)到96.55%，葉片幾乎落光（圖4）。

2.3? 秋石斛‘三亞陽(yáng)光耐寒性指標(biāo)的相關(guān)性分析

通過(guò)耐寒性指標(biāo)的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)（表1），可溶性糖、游離脯氨酸、MDA含量和落葉率均與LT50有極顯著的正相關(guān)，而葉綠素含量與LT50呈極顯著的負(fù)相關(guān)?？扇苄蕴呛颗c游離脯氨酸、MDA含量和落葉率呈極顯著的正相關(guān)，與葉綠素含量呈極顯著的負(fù)相關(guān)。葉綠素含量與可溶性糖、游離脯氨酸、MDA含量和落葉率呈顯著或極顯著的負(fù)相關(guān)。而可溶性蛋白與其他耐寒性指標(biāo)均沒(méi)有顯著的相關(guān)性。

3? 討論

低溫脅迫是影響植物生長(zhǎng)發(fā)育、地理分布等方面的主要環(huán)境因素，低溫脅迫會(huì)造成植物膜系統(tǒng)、生理指標(biāo)、酶活性、形態(tài)指標(biāo)等方面的改變，從而抵抗低溫的脅迫。在生理指標(biāo)方面，主要的耐寒性指標(biāo)有相對(duì)電導(dǎo)率、可溶性蛋白、可溶性糖、游離脯氨酸、丙二醛、葉綠素、酶活性等，這些指標(biāo)都與植物的耐寒性有密切的關(guān)系。

植物對(duì)低溫的敏感程度與其起源地密切相關(guān)，溫帶或者寒帶起源的植物經(jīng)過(guò)漫長(zhǎng)的低溫馴化，對(duì)低溫的敏感程度較低，耐寒性較高，如小麥、擬南芥等。而起源于熱帶、亞熱帶地區(qū)的植物對(duì)低溫的敏感程度高，耐寒性較低，如水稻、大豆等。

本研究發(fā)現(xiàn)，在低溫脅迫條件，秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗葉片的電導(dǎo)率隨著處理溫度的降低而上升，尤其是在低于10 ℃時(shí)電導(dǎo)率迅速上升，表明在溫度低于10 ℃時(shí)，秋石斛‘三亞陽(yáng)光葉片的受傷害程度加劇。這個(gè)結(jié)果與熱帶、亞熱帶起源的植物果蔗[14]、藍(lán)花楹[15]、柱花草[16]、甜椒[17]、望天樹(shù)[18]等結(jié)果一致，也與溫帶和寒帶起源的植物歐洲冬青[19]、楨楠[20]、北美海棠[21]、羽衣甘藍(lán)[22]等一致，表明無(wú)論是熱帶亞熱帶起源植物，還是溫帶寒帶起源植物，在遭受低溫脅迫時(shí)均會(huì)導(dǎo)致膜透性的降低，電導(dǎo)率的升高。

在低溫脅迫下，秋石斛‘三亞陽(yáng)光葉片的可溶性蛋白、可溶性糖、游離脯氨酸、丙二醛含量總體上呈現(xiàn)出上升的趨勢(shì)，其中可溶性蛋白、可溶性糖和游離脯氨酸含量的變化與熱帶亞熱帶起源的植物果蔗[14]一致，可溶性糖和游離脯氨酸含量變化也與熱帶地區(qū)的海巴戟一致[23]。但溫帶起源的北美海棠的可溶性糖和可溶性蛋白在低溫條件下呈現(xiàn)的是變化是先升高后降低的趨勢(shì)[21]，而溫帶起源的歐洲冬青的可溶性糖含量也是呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)[19]。秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗在低溫脅迫下，MDA含量總體呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，與海巴戟、木本曼陀羅、金邊假連翹和雙莢決明的變化趨勢(shì)一致[23-24]，但與同樣起源于熱帶亞熱帶地區(qū)的望天樹(shù)在低溫脅迫下MDA含量持續(xù)下降不一致[18， 25]。研究發(fā)現(xiàn)，在3個(gè)不同溫度低溫脅迫下，秋石斛‘三亞陽(yáng)光葉片的葉綠素含量隨處理溫度的降低和處理時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)持續(xù)下降的趨勢(shì)，表明在低溫脅迫下，秋石斛‘三亞陽(yáng)光葉片的葉綠素合成受到抑制，而降解卻加速，最終導(dǎo)致總體葉綠素含量的下降，這與熱帶亞熱帶起源的柱花草[16]、閩楠[26]以及寒溫帶起源的歐洲冬青[19]一致，但與高海拔植物垂穗披堿草[27]、綠絨蒿[28]等葉綠素含量先降低后增加的變化趨勢(shì)不一致。說(shuō)明植物的低溫脅迫生理指標(biāo)的變化不僅與起源地的緯度有關(guān)，可能還與起源地的海拔有關(guān)，同時(shí)也與栽培馴化的程度有關(guān)。

植物對(duì)低溫脅迫的耐受是一系列分子及生理的響應(yīng)過(guò)程，單個(gè)指標(biāo)可以在一定程度上體現(xiàn)植物對(duì)低溫脅迫的耐受程度，但存在一定的片面性。因此，對(duì)植物的耐寒性指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)篩選，利用篩選的指標(biāo)對(duì)植物的耐寒性進(jìn)行綜合性分析才能更好地對(duì)植物進(jìn)行耐寒性評(píng)價(jià)。本研究發(fā)現(xiàn)，可溶性糖、游離脯氨酸、MDA含量和落葉率都與LT50有極顯著的正相關(guān)，而葉綠素含量與LT50呈極顯著的負(fù)相關(guān)，可以作為秋石斛‘三亞陽(yáng)光的耐寒性綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，MDA含量在很多植物中與LT50有顯著的相關(guān)性，如熱帶亞熱帶起源的果蔗幼苗[14]、菠蘿幼苗[29]、烤煙[30]以及寒溫帶起源的葡萄[31]、芍藥[32]、華中冬青[33]、紫薇[34]、毛桃[35]等。在蘭科植物方面，田丹青等[36]研究發(fā)現(xiàn)，保護(hù)酶活性和丙二醛含量與蝴蝶蘭抗寒性關(guān)聯(lián)度較大，可以作為評(píng)價(jià)抗寒性的主要指標(biāo)，高冬冬等[37]研究也發(fā)現(xiàn)MDA含量可作為蝴蝶蘭耐寒性鑒定的指標(biāo)之一;而周桂英等[38]研究發(fā)現(xiàn)大花惠蘭的MDA含量與寒害指數(shù)呈極顯著的相關(guān)性，是大花惠蘭抗寒性篩選的可靠指標(biāo)之一;文心蘭的MDA含量在低溫脅迫過(guò)程中呈規(guī)律性變化，可作為文心蘭耐寒性鑒定關(guān)鍵指標(biāo)[25]，這與秋石斛的研究結(jié)果一致。

可溶性糖、游離脯氨酸、葉綠素含量則是不同的植物不一樣，有些植物中與LT50有顯著相關(guān)性，而有些植物則沒(méi)有顯著相關(guān)性，如可溶性糖在葡萄[31]、芍藥[32]、果蔗幼苗[14]、毛桃[35]中顯示與LT50有極顯著或顯著相關(guān)性，而在菠蘿幼苗[29]、杜鵑花[39]、華中冬青[33]、紫薇[34]中則與LT50沒(méi)有顯著相關(guān)性，說(shuō)明不同植物的耐寒關(guān)鍵指標(biāo)上存在一定的差異，進(jìn)行耐寒性評(píng)價(jià)時(shí)需要先進(jìn)行指標(biāo)的篩選才能更加準(zhǔn)確。

本研究表明測(cè)定的幾個(gè)秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗的耐寒指標(biāo)均對(duì)低溫脅迫有響應(yīng)，而關(guān)聯(lián)分析表明可溶性糖、游離脯氨酸、MDA、葉綠素含量和落葉率均可以作為秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗的耐寒性綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)。通過(guò)生理和形態(tài)指標(biāo)分析發(fā)現(xiàn)，秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗可以耐受10 ℃低溫4 d時(shí)間和5 ℃低溫2 d時(shí)間，為秋石斛‘三亞陽(yáng)光中苗實(shí)際生產(chǎn)提供了耐寒防控依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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