七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道微生物及酶活性的影響

謝果珍 唐圓 吳儀 黃莉莉 譚周進(jìn)

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)，長沙 410208）

腸道微生物是腸道微生態(tài)的重要組成部分，據(jù)統(tǒng)計，哺乳動物腸道中棲息著種類超過1 000種，數(shù)量超過40萬億的微生物［1］。腸道微生物可產(chǎn)生各種代謝酶參與代謝機(jī)體所攝入的食物及藥物，并生成營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性成分影響人體健康，被視為機(jī)體不可或缺的“代謝器官”［2］。研究表明，藥物與腸道微生物間存在復(fù)雜的相互作用：一方面，藥物進(jìn)入體內(nèi)會影響腸道微生物的組成及功能，進(jìn)而導(dǎo)致酶的數(shù)量及活性發(fā)生改變；另一方面，腸道微生物與酶參與藥物的代謝，影響藥物的療效與副作用［3-4］。因此，越來越多的研究者認(rèn)為腸道微生物可能是藥物的作用靶點(diǎn)［5-7］。研究藥物對腸道微生物及酶的影響有助于從腸道微生態(tài)角度評價藥物的療效及探明藥物的作用機(jī)理。

七味白術(shù)散出自北宋錢乙所著的《小兒藥證直訣》，主治脾虛泄瀉，在現(xiàn)代臨床上亦常用于治療多種原因所致的腹瀉［8］。中藥的療效是多成分、多靶點(diǎn)、多途徑共同作用的結(jié)果。課題組前期從腸道微生物及腸道酶活性等角度研究了七味白術(shù)散對菌群失調(diào)腹瀉小鼠的影響，發(fā)現(xiàn)七味白術(shù)散可促進(jìn)乳酸菌（Lactobacilli）、酵母菌（Saccharomyces）和雙歧桿菌（Bifidobacterium）等有益菌的增殖，抑制艱難梭菌（Clostridium difficile）等致病菌和大腸桿菌（Escherichia coli）等條件致病菌的生長，另外提高了淀粉酶、蔗糖酶、纖維素酶及乳糖酶的活性，降低了木聚糖酶及蛋白酶的活性，對腸道微生態(tài)有較好的調(diào)節(jié)作用［9-11］。然而七味白術(shù)散治療腹瀉的物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。

在臨床上七味白術(shù)散以口服為主，其水煎液的主要成分為極性較大的苷類及多糖類。苷類化合物是中藥重要的活性成分之一，在心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等表現(xiàn)出廣泛的藥理活性。研究顯示葛根素改善腹瀉型腸易激綜合征［12］、人參皂苷改善非酒精性脂肪肝［13］、黃芩苷改善結(jié)腸炎［14］及肉蓯蓉總苷抗抑郁［15］的作用與調(diào)節(jié)腸道菌群、恢復(fù)腸道穩(wěn)態(tài)有關(guān)?，F(xiàn)有研究多提取單味中藥的苷類成分進(jìn)行藥效藥理研究，而對中藥復(fù)方總苷類成分的研究較少。為進(jìn)一步揭示七味白術(shù)散治療腹瀉的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究從七味白術(shù)散中提取分離得到總苷類成分，探究七味白術(shù)散總苷對腸道微生物及酶活性的影響，以期為七味白術(shù)散治療菌群失調(diào)腹瀉的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)理提供佐證，為從腸道微生態(tài)角度評價中藥復(fù)方的有效物質(zhì)提供思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 202-2AB型電熱恒溫干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司），都市主婦全能小鋼磨（永康市鉑歐五金制品有限公司），RE-2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器有限公司），KQ5200DE超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（上海亞榮生化儀器有限公司），HA-600三用恒溫水箱（金壇市神科儀器廠），F(xiàn)D5-3真空冷凍干燥機(jī)（金西盟（北京）儀器有限公司），Nano-drop 2000/2000C紫外分光光度計（賽默飛世爾科技有限公司），高速冷凍離心機(jī)1850R（湖南湘儀儀器有限公司），恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱（金壇榮華儀器制造有限公司），電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）。

1.1.2 藥材與試劑 土炒白術(shù)（湖南，批號：20201014）、人參（東北，批號：20200610）、木香（云南，批號：20201011）、甘草（內(nèi)蒙古，批號：20200610）、廣藿香（廣東，批號：20200816）、葛根（湖南，批號：20201020）、茯苓（湖南，批號：20201109）購于湖南省弘華中藥飲片有限公司，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)潘清平教授鑒定為正品。

頭孢拉定膠囊（06200502，通化萬通藥業(yè)股份有限公司），硫酸慶大霉素注射液（01Y07011A2，宜昌人福藥業(yè)）。無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、3，5-二硝基水楊酸（3，5-dinitrosalicylic acid，DNS）均為分析純，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，熒光素二乙酸（fluorescein diacetate，F(xiàn)DA）、鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷（o-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside，ONPG），購于上海源葉生物科技有限公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動物 無特定病原體（specific pathogen free，SPF）級雄性昆明（KM）小鼠30只，體重為（20±2）g，購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司［SCXK（湘）2019-0004］。小鼠購回后于室溫20-22℃，相對濕度50%-70%環(huán)境下分籠飼養(yǎng)，自由取食及飲水。小鼠普通維持飼料由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供。本研究通過湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)福利倫理審查（LL2020071001）。

1.2 方法

1.2.1 七味白術(shù)散水煎液的制備 按七味白術(shù)散處方用量［16］稱取各藥飲片，加10倍量蒸餾水浸泡30 min，武火煮沸后小火煎煮30 min，紗布過濾，煎煮2次，合并水煎液，濃縮至生藥濃度為0.34 g/mL，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 七味白術(shù)散總苷的制備 七味白術(shù)散總苷按課題組優(yōu)化的提取工藝制備，即按比例稱取七味白術(shù)散各味藥粉碎后過60目篩的粉末，加14倍量的蒸餾水，煎煮2次，每次煎煮53 min，合并水煎液，濃縮至一定體積后加無水乙醇，使乙醇終濃度為75%，攪拌均勻后4℃靜置過夜。乙醇提取液濃縮后依次用石油醚脫脂3次，水飽和正丁醇萃取3次。正丁醇萃取液減壓濃縮至一定體積后水浴蒸干，再冷凍干燥后得到七味白術(shù)散總苷粉末。七味白術(shù)散總苷的提取率為1.48%。

七味白術(shù)散總苷提取率（%）=七味白術(shù)散總苷粉末量（g）/七味白術(shù)散全方粉末量（g）× 100%。

1.2.3 FDA的制備 稱取6 mg FDA，加3 mL丙酮，制得2 mg/mL的FDA儲備液，置于棕色瓶中避光保存［17］。

1.2.4 動物分組及造模 小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后隨機(jī)分成正常組（5只，N）和模型組（25只）。模型組小鼠灌胃混合抗生素，即取6支硫酸慶大霉素注射液（2 mL/支）及3粒頭孢拉定膠囊（0.25 g/粒），配成濃度為62.5 g/L的抗生素混合液，0.4 mL/只/次，每天2次，共5 d，模型組小鼠糞便變得稀濕，即為造模成功。正常組小鼠給予等體積無菌水［11］。

1.2.5 給藥 造模成功后將模型組小鼠隨機(jī)分為自然恢復(fù)組（R）、七味白術(shù)散水煎液組（TW）、七味白術(shù)散總苷低劑量組（TL）、七味白術(shù)散總苷中劑量組（TM）、七味白術(shù)散總苷高劑量組（TH），每組各5只。治療期間正常組及自然恢復(fù)組小鼠灌胃無菌水，其余各組分別給予七味白術(shù)散水煎液及低、中、高劑量七味白術(shù)散總苷。根據(jù)臨床等效劑量換算，七味白術(shù)散水煎液的給藥劑量為9.945 g/kg/d，七味白術(shù)散水煎液給藥劑量乘以提取率的1、2、4倍量分別為七味白術(shù)散總苷低（147.2 mg/kg/d）、中（294.4 mg/kg/d）、高劑量（588.8 mg/kg/d），灌胃量為 0.4 mL/只/次，每天2次，連續(xù)給藥3 d。

1.2.6 檢測指標(biāo)

1.2.6.1 攝食量、體重及臟器指數(shù)測定 觀察小鼠糞便及一般行為狀態(tài)，分不同階段記錄小鼠的攝食量。分別在小鼠購回當(dāng)天、適應(yīng)期結(jié)束、造模期結(jié)束、治療期結(jié)束稱取每只小鼠的體重，在小鼠處死解剖后取出脾臟、胸腺及肝臟，濾紙吸干血液后稱重，計算脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及肝臟指數(shù)等臟器指數(shù)。臟器指數(shù)（%）= 臟器重量（g）/小鼠體重（g）×100%。

1.2.6.2 腸道微生物培養(yǎng) 治療結(jié)束后頸椎脫臼處死小鼠，無菌環(huán)境下收集小鼠腸道內(nèi)容物，同組樣品混勻后放入裝有無菌水及玻璃珠的錐形瓶中，120 r/min震蕩30 min后涂布平板后培養(yǎng)計數(shù)。細(xì)菌總數(shù)用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，大腸桿菌用伊紅美藍(lán)瓊脂（Eosin methylene blue，EMB）培養(yǎng)基，雙歧桿菌用BBL瓊脂培養(yǎng)基；乳酸菌用MRS瓊脂培養(yǎng)基。采用混菌法計數(shù)，每個稀釋度做3次重復(fù)，計算每克腸道內(nèi)容物所含的菌數(shù)［9］。

1.2.6.3 腸道微生物活度測定 取材方法同1.3.2。吸取2.5 mL FDA儲備液加入pH 7.6已滅菌的磷酸緩沖液中（A液），取干燥無菌試管，加入2 mL A液、50 μL待測液置于24℃搖床反應(yīng)90 min后加2 mL丙酮終止反應(yīng)?？瞻讓φ諡? mL A液中依次加入50 μL待測液及2 mL丙酮，24℃搖床反應(yīng)90 min取出。在490 nm下測定吸光值，每個樣品平行測定3次，以A490值表示單位質(zhì)量樣品的微生物活度［17］。

1.2.6.4 腸道酶活性測定 取材方法同1.3.2。將各組小鼠腸道內(nèi)容物樣品分別放入裝有無菌水及玻璃珠的離心管中，震蕩2 min后3 000 r/min離心10 min，取上清液。乳糖酶活性測定用ONPG法，蔗糖酶活性測定用DNS比色法［10-11］。

1.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 21.0軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果用平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠糞便及攝食量的影響

正常組小鼠的糞便為黑色，圓柱狀，按壓后不黏手?；旌峡股毓辔负笮∈笈疟愦螖?shù)明顯增多，糞便為黃色、稀濕、松軟，按壓后黏手，能看見未完全消化的食物。經(jīng)治療后七味白術(shù)散水煎液組小鼠的糞便逐漸好轉(zhuǎn)，治療3 d后接近正常糞便。不同劑量七味白術(shù)散總苷組的小鼠糞便由黃轉(zhuǎn)黑，但糞便仍較稀濕。各組小鼠的精神狀態(tài)在造模及治療期間無明顯差異?；旌峡股厥剐∈蟮臄z食量減少，而七味白術(shù)散水煎液及不同劑量的七味白術(shù)散總苷可使菌群失調(diào)腹瀉小鼠的攝食量恢復(fù)（圖1）。

圖1 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠攝食量的影響Fig. 1 Effects of total glycosides of QWBZP on the food intake of mice with dysbacteria-diarrhea

2.2 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠體重的影響

體重是評價機(jī)體生長發(fā)育與健康情況的直觀指標(biāo)。從表1可知各組小鼠的初始體重及適應(yīng)期增重率較接近，造模期間混合抗生素使小鼠的增重率降低，但與正常組相比無顯著差異，說明混合抗生素抑制了小鼠體重增長。在治療期間，自然恢復(fù)組小鼠的增重率高于正常組，差異極顯著（P＜0.01），其余各組小鼠的增重率與正常組相比提高，但無顯著差異，說明七味白術(shù)散水煎液及總苷有利于體重的恢復(fù)。

表1 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠體重的影響Table 1 Effects of total glycosides of QWBZP on the body weight of mice with dysbacteria-diarrhea（n = 5）

2.3 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠臟器指數(shù)的影響

與正常組相比，其他各組小鼠的脾臟指數(shù)有不同程度的提高，且高劑量組小鼠的脾臟指數(shù)與正常組小鼠差異顯著（P＜0.01）。經(jīng)過3 d治療，水煎液組及中劑量總苷組小鼠的脾臟指數(shù)逐漸回到正常水平。與自然恢復(fù)組相比，低、高劑量的七味白術(shù)散總苷組小鼠的脾臟指數(shù)增加，中劑量的七味白術(shù)散總苷組小鼠的脾臟指數(shù)降低，但差異不顯著。各組小鼠的胸腺指數(shù)及肝臟指數(shù)均無顯著差異（表2）。

表2 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠臟器指數(shù)的影響Table 2 Effects of total glycosides of QWBZP on the visceral index of mice with dysbacteria-diarrhea（n = 5）

2.4 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道微生物的影響

從表3可知，混合抗生素增加了小鼠腸道細(xì)菌（P＜0.01）及大腸桿菌（P＜0.05）的數(shù)量，降低了雙歧桿菌及乳酸菌的數(shù)量（P＜0.05）。七味白術(shù)散水煎液顯著降低了菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道中細(xì)菌及大腸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），同時提高了雙歧桿菌及乳酸菌的數(shù)量，但無顯著差異。低劑量的七味白術(shù)散總苷提高了菌群失調(diào)腹瀉小鼠大腸桿菌（P＜0.01）、雙歧桿菌（P＜0.01）及乳酸菌（P＜0.05）的數(shù)量，降低了細(xì)菌的數(shù)量（P＜0.01）；中劑量的七味白術(shù)散總苷提高了菌群失調(diào)腹瀉小鼠細(xì)菌、大腸桿菌及乳酸菌的數(shù)量，差異極顯著（P＜0.01）；高劑量的七味白術(shù)散總苷顯著提高了菌群失調(diào)腹瀉小鼠大腸桿菌（P＜0.05）及乳酸菌（P＜0.01）的數(shù)量?？傮w而言，不同劑量的七味白術(shù)散總苷均提高了菌群失調(diào)腹瀉小鼠大腸桿菌、雙歧桿菌及乳酸菌的數(shù)量，但作用強(qiáng)度不一，低劑量七味白術(shù)散總苷對雙歧桿菌及乳酸菌的增殖效果顯著。

表3 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道微生物的影響Table 3 Effects of total glycosides of QWBZP on the intestinal microbiota of mice with dysbacteria-diarrhea（n = 3）

2.5 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道微生物活度的影響

從圖2可知，混合抗生素使小鼠腸道微生物活度極顯著下降，經(jīng)3 d的自然恢復(fù)仍未回到正常水平（P＜0.01）。七味白術(shù)散水煎液及不同劑量的七味白術(shù)散總苷均可提高菌群失調(diào)腹瀉小鼠的腸道微生物活度（P＜0.01或P＜0.05）。經(jīng)過3 d的治療，低劑量組小鼠的腸道微生物活度與正常組接近?？傮w而言，不同劑量的七味白術(shù)散總苷可提高菌群失調(diào)腹瀉小鼠的腸道微生物活度，且表現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)。

圖2 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道微生物活度的影響Fig. 2 Effects of total glycosides of QWBZP on the intestinal microbial activities of mice with dysbacteriadiarrhea（n=3）

2.6 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道乳糖酶活性的影響

與正常組相比，混合抗生素大大降低了小鼠腸道乳糖酶的活性（P＜0.01）。經(jīng)過3 d的治療，七味白術(shù)散水煎液及總苷極顯著提高了菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道乳糖酶活性（P＜0.01），且高于正常組（P＜0.01）。七味白術(shù)散總苷對乳糖酶活性的影響表現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)（圖3）。

圖3 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道乳糖酶活性的影響Fig. 3 Effects of total glycosides of QWBZP on the lactase activities of mice with dysbacteria-diarrhea（n=3）

2.7 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道蔗糖酶活性的影響

抗生素及七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道蔗糖酶活性的影響與乳糖酶相似，混合抗生素顯著降低了小鼠腸道蔗糖酶的活性（P＜0.05），七味白術(shù)散水煎液及總苷均提高了菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道蔗糖酶活性（P＜0.01或P＜0.05）。低、中劑量的七味白術(shù)散總苷對蔗糖酶的作用強(qiáng)度與七味白術(shù)散水煎液接近，而高劑量的七味白術(shù)散總苷使蔗糖酶活性更趨于正常組（圖4）。

圖4 七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道蔗糖酶活性的影響Fig.4 Effects of total glycosides of QWBZP on the sucrase activities of mice with dysbacteria-diarrhea（n=3）

3 討論

在正常狀態(tài)下，機(jī)體的腸道微生物保持著動態(tài)平衡，共同參與機(jī)體的代謝及免疫。腸道微生態(tài)失衡是疾病的主要觸發(fā)因素，中藥復(fù)方可將腸道微生態(tài)從病理狀態(tài)調(diào)至生理狀態(tài)而發(fā)揮療效。課題組前期的研究顯示了七味白術(shù)散通過對腸道微生物的促抑作用使腸道微生態(tài)恢復(fù)平衡而治療菌群失調(diào)腹瀉，但其調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)的物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。本研究以七味白術(shù)散水煎液為參照，探討了七味白術(shù)散總苷成分對腸道微生態(tài)的調(diào)節(jié)作用。通過傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)技術(shù)發(fā)現(xiàn)七味白術(shù)散總苷可促進(jìn)菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道中雙歧桿菌及乳酸菌增殖，且效果優(yōu)于七味白術(shù)散水煎液。同時，七味白術(shù)散總苷還提高了菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道中大腸桿菌的數(shù)量，與七味白術(shù)散水煎液的作用趨勢相反。雙歧桿菌與乳酸菌被認(rèn)為是有益菌，二者可通過抑制致病菌感染，改善腸黏膜屏障，抑制促炎因子產(chǎn)生，改變樹突細(xì)胞功能等途徑調(diào)節(jié)腸道穩(wěn)態(tài)［18］。大腸桿菌為條件性致病菌，與腹瀉、炎癥有關(guān)［9］。結(jié)果表明苷類成分是七味白術(shù)散復(fù)方調(diào)節(jié)雙歧桿菌及乳酸菌的主要成分，低劑量的七味白術(shù)散總苷可更好促進(jìn)有益菌的增殖，而總苷類成分促進(jìn)大腸桿菌的增殖可能是其改善糞便含水量方面不及七味白術(shù)散水煎液的原因。然而，腸道環(huán)境中微生物的變化十分復(fù)雜，體外培養(yǎng)僅能反映腸道微生物變化的冰山一角，仍需利用高通量測序技術(shù)進(jìn)一步研究七味白術(shù)散總苷對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道微生態(tài)的影響。

FDA可被存在于細(xì)菌及真菌中的酯酶、蛋白酶、脂肪酶等非專一性酶催化水解產(chǎn)生熒光素，且FDA水解酶活性與微生物活性成正比［19］。以往研究多用于評價土壤微生物活性及土壤質(zhì)量。考慮到腸道菌群亦可分泌大量的水解酶，從而實(shí)現(xiàn)FDA的高效水解，而水解是腸道微生物代謝食物和藥物的主要途徑，F(xiàn)DA水解酶活性在一定程度可反映腸道微生物的代謝能力，因此本課題組將FDA水解法應(yīng)用腸道微生物，以反映腸道微生物活性及功能的變化［17，20］。研究結(jié)果顯示不同處理對小鼠腸道微生物活度、乳糖酶及蔗糖酶活性的影響高度一致，可進(jìn)一步證明用FDA水解法評價動物或人體腸道微生物活度及功能具有可靠性。在本研究中，七味白術(shù)散水煎液及總苷都可提高菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道的微生物活度，且不同劑量的七味白術(shù)散總苷表現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)，低劑量的七味白術(shù)散總苷對腸道微生物活度的影響與水煎液相當(dāng)，接近正常水平。提高菌群失調(diào)腹瀉小鼠的腸道微生物活度，增強(qiáng)腸道微生物的代謝能力，是七味白術(shù)散減輕腹瀉的機(jī)制之一。苷類化合物的極性大，生物利用度低，大多需要進(jìn)入腸道后被糖苷水解酶水解為次級苷或苷元才發(fā)揮藥效［4］。因此，腸道微生物活度及水解酶活性的提高，也有利于七味白術(shù)散總苷的代謝，釋放出真正的藥效成分。結(jié)合七味白術(shù)散總苷在菌群失調(diào)小鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)化情況，建立藥物與腸道微生物的互作網(wǎng)絡(luò)，將更有利于闡述七味白術(shù)散治療菌群失調(diào)腹瀉的機(jī)制。

乳糖酶及蔗糖酶是存在于小腸壁刷狀邊緣的雙糖酶，可將膳食中的雙糖分解為單糖，與腹瀉密切相關(guān)。如乳糖酶及蔗糖酶缺乏會導(dǎo)致過量的碳水化合物在小腸堆積，增加腸道滲透負(fù)荷，導(dǎo)致腸腔液增加，引發(fā)滲透性腹瀉。而過量的發(fā)酵產(chǎn)物使得腸內(nèi)氣壓增高，小腸膨脹導(dǎo)致腹脹和腹痛［21］。研究還發(fā)現(xiàn)雙糖酶水平與炎癥呈負(fù)相關(guān)，因此雙糖酶缺乏還多與炎癥性腸病、腹腔疾病、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎等胃腸道疾病共存［22］。課題組前期發(fā)現(xiàn)七味白術(shù)散治療菌群失調(diào)腹瀉與乳糖酶及蔗糖酶活性的提高有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)不同劑量的七味白術(shù)散總苷均可使菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道乳糖酶及蔗糖酶活性提高，與全方對菌群失調(diào)腹瀉小鼠腸道乳糖酶及蔗糖酶活性的影響趨勢一致，苷類成分是七味白術(shù)散調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)、治療菌群失調(diào)腹瀉的重要藥效成分。

4 結(jié)論

七味白術(shù)散總苷可促進(jìn)雙歧桿菌及乳酸菌的增殖，提高腸道微生物活度及乳糖酶、蔗糖酶的活性，作用趨勢與七味白術(shù)散水煎液一致，但程度有異。腸道微生態(tài)為揭示苷類成分在七味白術(shù)散治療菌群失調(diào)腹瀉中的作用提供了有力證據(jù)，可作為評價中藥復(fù)方有效物質(zhì)的切入點(diǎn)之一。