EDC 對(duì)牙本質(zhì)即刻及老化微拉伸粘接強(qiáng)度的影響

沙 青, 李 賀, 張 紅, 程博群, 王 瑩, 閆琳琳, 鄒馨穎, 張志民

（吉林大學(xué)口腔醫(yī)院牙體牙髓科，吉林 長(zhǎng)春 130021）

隨著口腔微創(chuàng)理念的發(fā)展，樹(shù)脂粘接修復(fù)技術(shù)已得到廣泛應(yīng)用，其能較好地恢復(fù)患牙的美觀和功能，在牙體硬組織缺損修復(fù)中發(fā)揮重要作用。樹(shù)脂牙本質(zhì)粘接修復(fù)中，由于過(guò)多水分殘留導(dǎo)致粘接樹(shù)脂滲透不全和聚合不全，并且弱酸性環(huán)境激活內(nèi)源性基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs），使膠原和樹(shù)脂發(fā)生降解，粘接修復(fù)失敗。為了提高牙本質(zhì)粘接強(qiáng)度，研究者提出了多種方法和策略。汪文廳等［1］用含15%10-甲基丙烯酰氧癸基磷酸酯和1%苯扎氯銨的新型底涂劑處理牙本質(zhì)，提高了自酸蝕粘接劑和通用型粘接劑的短期和長(zhǎng)期粘接強(qiáng)度；有學(xué)者采用Er，Cr∶YSGG 激光預(yù)處理［2］或在粘接劑中加入聚氨酯［3］，也有部分學(xué)者用乙二胺四乙酸預(yù)處理［4］，但采用膠原交聯(lián)劑預(yù)處理是最常用的方法。朱辭名等［5］研究發(fā)現(xiàn)：用藍(lán)光核黃素預(yù)處理能增強(qiáng)樹(shù)脂牙本質(zhì)粘接耐久性，減緩其老化過(guò)程。1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙 基 碳 二 亞 胺 ［1-ethyl-3 （3-dimethylaminopropyl） carbodiimide，EDC］ 為 一種常見(jiàn)的化學(xué)交聯(lián)劑，不僅能夠促進(jìn)膠原交聯(lián)［6］，而且能夠抑制MMPs 活性［7］。目前研究［8-10］顯示：EDC 作為預(yù)處理劑不僅能夠促進(jìn)脫礦牙本質(zhì)膠原交聯(lián)，使極限拉伸強(qiáng)度、彈性模量、抗酶解能力和熱變性溫度提高，而且能夠抑制或滅活牙本質(zhì)內(nèi)源性MMPs，從而減少納米滲漏，提高樹(shù)脂牙本質(zhì)粘接耐久性。研究［11-13］顯示：用0.3 mol·L－1EDC 預(yù)處理脫礦根管牙本質(zhì)60 s 不影響纖維樁即刻粘接強(qiáng)度，可明顯降低MMPs 活性并改善混合層的彈性模量和老化1 年的粘接強(qiáng)度。本研究將EDC 直接添加到通用型粘接劑Single Bond Universal 中，從細(xì)胞毒性、微拉伸粘接強(qiáng)度和斷裂模式3 個(gè)方面探討EDC 對(duì)通用型粘接劑粘接性能的影響，以期為粘接劑的臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料和儀器

EDC（上海源葉生物科技有限公司），胎牛血清（以色列BI 公司），DMEM 培養(yǎng)基和0.25%胰酶（美國(guó)Hyclone 公司），CCK-8 試劑盒（日本株式會(huì)社同仁化學(xué)研究所），通用型粘接劑Single Bond Universal 和Z350 樹(shù) 脂（美 國(guó)3M 公 司）。SYJ-150A 型低速切割機(jī)和游標(biāo)卡尺（沈陽(yáng)科晶自動(dòng)化設(shè)備有限公司），光固化機(jī)（美國(guó)登士柏公司），AG-XPLUS 萬(wàn)能試驗(yàn)機(jī)（日本島津公司），體式顯微鏡（日本Olympus 公司），5%CO2恒溫培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司），超凈工作臺(tái)（蘇州蘇潔醫(yī)療器械有限公司），酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek 公司）。

1.2 細(xì)胞毒性檢測(cè)

1.2.1 實(shí)驗(yàn)性粘接劑的制備 將EDC 添加到通用型粘接劑Single Bond Universal 中配制成分別含0.1、0.2 和0.3 mol·L－1EDC 的實(shí)驗(yàn)性粘接劑，用攪拌機(jī)混合均勻后，4℃避光條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 粘接劑浸提液的制備 依據(jù)粘接劑使用說(shuō)明，取60 μL 粘接劑使用聚四氟乙烯模具光照固化80 s 制備1.5 cm×2.0 cm 粘接劑膜，紫外線(xiàn)照射4 h，正反各2 h，以浸提液量與試樣表面積比為2.5 mL·cm－2加入10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)液，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，0.22 μm微濾器過(guò)濾，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 CCK-8 法檢測(cè) 取第3 代呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的L-929 成纖維細(xì)胞（吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院提供），調(diào)整細(xì)胞密度為3×104mL－1，加入96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100 μL，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中24 h，待細(xì)胞貼壁后，分為陰性對(duì)照組及0、0.1、0.2 和0.3 mol·L－1EDC 組，棄去原液，分別加入含10% 胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)液及含0、0.1、0.2 和0.3 mol·L－1EDC 的 實(shí) 驗(yàn) 性 粘 接 劑 浸 提 液100 μL，每組5 孔，并設(shè)置空白對(duì)照組（10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)液），置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中，分別于24、48 和72 h 隨機(jī)取出一塊96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加入10 μL CCK-8 溶液，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育1.5 h，采用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)450 nm 處測(cè)定其吸光度（A）值，并計(jì)算各組細(xì)胞相對(duì)增殖率（relative growth rate，RGR），RGR=（實(shí)驗(yàn)組A 值－空白對(duì)照組A 值） / （陰性對(duì)照組A 值－空白對(duì)照組A 值） ×100%。按照《美國(guó)藥典》，根據(jù)RGR 采用5 分制法進(jìn)行細(xì)胞毒性分級(jí)（CTS）：0 級(jí)，RGR≥100%；1 級(jí)，RGR 為75%～99%；2 級(jí)，RGR 為50%～74%；3 級(jí)，RGR 為25%～49%； 4 級(jí)，RGR 為1%～24%； 5 級(jí)，RGR＜1%；0 和1 級(jí)為合格，2 級(jí)應(yīng)該結(jié)合細(xì)胞形態(tài)綜合評(píng)價(jià)，3～5 級(jí)為不合格。

1.3 微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試

在吉林大學(xué)口腔醫(yī)院頜面外科收集新鮮拔除的無(wú)齲、無(wú)牙體缺損和發(fā)育正常的第三磨牙28 顆，去除牙石及軟組織，保存于4℃、0.5%氯胺T 溶液中備用，每周換液1 次，1 個(gè)月內(nèi)用完。

1.3.1 即刻微拉伸試件的制備和即刻微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試 在水冷卻下用低速切割機(jī)垂直于牙體長(zhǎng)軸去除牙齒面釉質(zhì)，體式顯微鏡下觀察暴露淺層牙本質(zhì)，流水下用600 目水砂紙打磨牙本質(zhì)表面1 min，將16 顆牙隨機(jī)分為4 組，分別為對(duì)照組及0.1、0.2 和0.3 mol·L－1EDC 組，每組4 顆。在牙本質(zhì)表面涂布粘接劑60 s，輕吹10 s，光照固化20 s，然后分層堆塑Z350 光固化復(fù)合樹(shù)脂，每層1 mm 光照固化20 s，最后形成4 mm 厚樹(shù)脂，置于37℃去離子水中儲(chǔ)存24 h，用低速切割機(jī)沿與粘接界面垂直的方向進(jìn)行切割，制備1 mm×1 mm×8 mm 長(zhǎng)條形試件。

在體式顯微鏡觀察，每組選取15 個(gè)無(wú)裂紋的完整試件，將試件用水草膠粘接于夾具上，用萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)測(cè)試微拉伸粘接強(qiáng)度，加載速率為1.0 mm·min－1，記錄試件斷裂載荷（N） 最大值，用游標(biāo)卡尺測(cè)量并計(jì)算每個(gè)試件實(shí)際粘接面積（mm2），計(jì)算微拉伸粘接強(qiáng)度。微拉伸粘接強(qiáng)度（MPa）=斷裂載荷（N）/粘接面積。

1.3.2 老化微拉伸試件的制備和老化微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試 根據(jù)即刻微拉伸粘接強(qiáng)度結(jié)果，將12 顆牙隨機(jī)分為對(duì)照組及0.1 和0.2 mol·L－1EDC組，每組4 顆，進(jìn)行冷熱循環(huán)實(shí)驗(yàn)，牙齒處理及樹(shù)脂堆塑見(jiàn)“1.3.1”。將堆塑完成的牙齒在37℃去離子水中保存24 h 后進(jìn)行冷熱循環(huán)老化，冷熱循環(huán)采用55℃和5℃，往復(fù)循環(huán)5 000 次，每次在高溫或低溫中停留30 s，間隔時(shí)間2～3 s。冷熱循環(huán)結(jié)束后用低速切割機(jī)制備微拉伸試件，每組選取15 個(gè)無(wú)裂紋的完整試件，并進(jìn)行微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試，方法見(jiàn)“1.3.1”。

1.4 斷裂模式觀察

收集微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試完成后所有試件牙本質(zhì)斷端，在體式顯微鏡下觀察斷裂部位確定斷裂模式。斷裂模式分為3 種：①界面破壞，斷裂發(fā)生于粘接劑與牙本質(zhì)界面或粘接劑與復(fù)合樹(shù)脂界面，包括粘接劑內(nèi)聚破壞；②混合破壞，部分為界面破壞，部分為牙本質(zhì)或樹(shù)脂破壞；③內(nèi)聚破壞，斷裂發(fā)生于復(fù)合樹(shù)脂內(nèi)或牙本質(zhì)內(nèi)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用GraphPad Prism 5 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組細(xì)胞RGR 和各組試件微拉伸粘接強(qiáng)度均符合正態(tài)分布，以表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間樣本均數(shù)兩兩比較采用Tukey 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組細(xì)胞RGR 和毒性分級(jí)不同時(shí)間點(diǎn)各組粘接劑浸提液與細(xì)胞共培養(yǎng)后的RGR 和毒性分級(jí)見(jiàn)表1。與陰性對(duì)照組比較，不同濃度粘接劑浸提液組隨著共培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，各組細(xì)胞RGR 下降，細(xì)胞毒性增加，但組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。相同時(shí)間點(diǎn)，隨著EDC 濃度增加，各組細(xì)胞RGR 逐漸下降，細(xì)胞毒性增加，但差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同時(shí)間點(diǎn)不同濃度粘接劑浸提液細(xì)胞毒性均較輕，均為1 級(jí)，合格。

2.2 各組試件微拉伸粘接強(qiáng)度即刻微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試中，與對(duì)照組比較，0.1 mol·L－1EDC 組試件粘接強(qiáng)度提高28.33%，0.2和0.3 mol·L－1EDC組試件粘接強(qiáng)度分別降低13.68%和39.60%。與對(duì)照組比較，0.1和0.3 mol·L－1EDC組試件粘接強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與0.1 mol·L－1EDC組比較，0.2 和0.3 mol·L－1EDC 組試件粘接強(qiáng)度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與0.2 mol·L－1EDC組比較，0.3 mol·L－1EDC 組試件粘接強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞RGRTab.1 RGR of cells in various groups

表1 不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞RGRTab.1 RGR of cells in various groups

Group Negative control EDC(mol·L－1)0.0 0.1 0.2 0.3 RGR(t/h) 24 100.00±1.81 48 100.00±0.01 72 100.00±2.66 87.46±1.39 86.80±0.50 86.68±9.98 85.12±0.87 83.44±0.53 84.63±8.72 84.01±1.64 82.99±2.31 83.36±0.16 79.69±4.18 82.73±2.83 82.80±3.20

老化微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試中，與對(duì)照組比較，0.1 mol·L－1EDC 組 試 件 粘 接 強(qiáng) 度 提 高66.43%，0.2 mol·L－1EDC 組 試 件 粘 接 強(qiáng) 度 降 低24.29%。與對(duì)照組比較，0.1 和0.2 mol·L－1EDC 組試件粘接強(qiáng)度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）； 與0.1 mol·L－1EDC 組比較，0.2 mol·L－1EDC 組試件粘接強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

與即刻微拉伸粘接強(qiáng)度比較，老化微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試中各組試件粘接強(qiáng)度均下降，對(duì)照組和0.2 mol·L－1EDC 組試件粘接強(qiáng)度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組試件即刻和老化微拉伸粘接強(qiáng)度Tab. 2 Immediate and aging micro-tensile bonding strengths of specimens in various groups

表2 各組試件即刻和老化微拉伸粘接強(qiáng)度Tab. 2 Immediate and aging micro-tensile bonding strengths of specimens in various groups

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with 0.1 mol·L－1EDC group；#P＜0.05 compared with 0.2 mol·L－1 EDC group；○P＜0.05 compared with immediate group.“－”：No data.

Group Control EDC(mol·L－1)0.1 0.2 0.3 Bonding strength Immediate 30.71±4.36 Aging 21.45±1.60○39.41±6.72*26.51±9.54△18.55±5.37*△#35.70±1.17*16.24±1.58*△○—

2.3 各組試件斷裂模式在即刻斷裂模式中，對(duì)照組、0.2 和0.3 mol·L－1EDC 組試件均以界面破壞為主，0.3 mol·L－1EDC 組幾乎全部為界面破壞，0.1 mol·L－1EDC 組試件以混合破壞為主。在老化斷裂模式中，對(duì)照組試件以界面破壞為主，0.1 mol·L－1EDC 組試件以混合破壞為主，但界面破壞百分率增加，0.2 mol·L－1EDC 組試件幾乎全部為界面破壞。見(jiàn)表3 和4。

表3 各組試件即刻斷裂模式Tab. 3 Immediate fracture mode of specimens in various groups [n=15，n（η/%）］

表4 各組試件老化斷裂模式Tab.4 Aging fracture mode of specimens in various groups

3 討 論

在牙本質(zhì)粘接中，由于粘接樹(shù)脂滲透不全，導(dǎo)致膠原纖維裸露，并且為了增加粘接劑滲透性，親水性單體所占的比例增加，高濃度的親水性單體使揮發(fā)性溶劑蒸氣壓降低，影響水分蒸發(fā)，殘留水分影響單體聚合，聚合不全的樹(shù)脂又容易發(fā)生水解，使膠原纖維進(jìn)一步裸露，裸露的膠原纖維易受水、酶、細(xì)菌、溫度和應(yīng)力等因素的作用發(fā)生降解，最終導(dǎo)致樹(shù)脂粘接修復(fù)的失敗。自酸蝕粘接系統(tǒng)中的弱酸性單體形成的局部弱酸環(huán)境可激活酶原形式的MMPs，活化的MMPs 能夠降解混合層的膠原纖維進(jìn)而導(dǎo)致粘接修復(fù)失?。?4］。研究［15］顯示：交聯(lián)劑不僅能誘導(dǎo)膠原纖維發(fā)生分子間或者分子內(nèi)的交聯(lián)反應(yīng)，而且能夠使MMPs 催化位點(diǎn)內(nèi)的氨基酸之間產(chǎn)生多個(gè)交聯(lián)，不可逆地改變催化結(jié)構(gòu)域的空間構(gòu)象，防止其與Ⅰ型膠原的識(shí)別和結(jié)合，從而提高粘接的耐久性。ALONSO 等［16］研究發(fā)現(xiàn)：用0.5 mol·L－1EDC、5%原花青素和5%戊二醛預(yù)處理脫礦根管牙本質(zhì)60 s，與對(duì)照組比較，纖維樁頸1/3 粘接耐久性提高，并且抑制了蛋白水解活性。

交聯(lián)劑分為天然交聯(lián)劑和人工合成交聯(lián)劑，碳二亞胺作為一種人工合成交聯(lián)劑，由于其具有交聯(lián)效果明顯、生物相容性較好［17］、價(jià)格低廉和方便易得等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用。EDC 為一種液態(tài)的碳二亞胺，在國(guó)外研究中常用0.3 mol·L－1EDC 水溶液預(yù)處理脫礦牙本質(zhì)30 或60 s，以提高牙本質(zhì)粘接強(qiáng)度。

本實(shí)驗(yàn)采用CCK-8 法測(cè)定加入含不同濃度EDC 的粘接劑浸提液后各組細(xì)胞RGR，雖然隨著共培養(yǎng)時(shí)間或EDC 添加量增加毒性有所增強(qiáng)，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，細(xì)胞RGR 均在75%以上，細(xì)胞毒性分級(jí)為1 級(jí)，均為合格，符合生物材料使用標(biāo)準(zhǔn)。生物材料應(yīng)用于人體時(shí)必須有較好的生物相容性，根據(jù)以上細(xì)胞毒性結(jié)果，本研究中制備的實(shí)驗(yàn)性粘接劑可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

評(píng)價(jià)粘接強(qiáng)度的測(cè)試方法主要有微拉伸、微剪切、拉伸和剪切，其中微拉伸測(cè)試方法以較小的粘接面積使應(yīng)力分布均勻且斷裂模式主要發(fā)生在粘接界面，能夠更加真實(shí)地反映粘接效果，為最常用的牙本質(zhì)粘接強(qiáng)度測(cè)試方法［18］。本實(shí)驗(yàn)采用微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試評(píng)價(jià)粘接系統(tǒng)性能，在即刻微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試中，與對(duì)照組比較，0.3 mol·L－1EDC組試件粘接強(qiáng)度明顯降低，可能由于加入EDC 較多影響粘接劑光固化，也有可能是EDC 與粘接劑中酸性功能單體的羧酸基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)使酸性減弱，牙本質(zhì)脫礦深度減小，樹(shù)脂滲透不足，混合層微機(jī)械固位作用減弱所致；0.1 mol·L－1EDC 組試件粘接強(qiáng)度明顯升高，可能由于牙本質(zhì)膠原在EDC 作用下交聯(lián)程度增加，機(jī)械性能增強(qiáng)，從而粘接性能有所改善。研究［19］顯示：與對(duì)照組和80%乙醇預(yù)處理組比較，0.01～0.50 mol·L－1EDC 預(yù)處理組脫礦牙本質(zhì)膠原交聯(lián)度和熱變性溫度明顯升高。

模擬老化的方法有多種，目前常用的有水存老化、冷熱循環(huán)老化、化學(xué)試劑浸泡和應(yīng)力加載等方法［20］，本實(shí)驗(yàn)采用冷熱循環(huán)法模擬了人體口腔環(huán)境變化。國(guó)外研究［21-24］顯示：用0.3 mol·L－1EDC溶液預(yù)處理脫礦的牙本質(zhì)60 s，不影響即刻微拉伸粘接強(qiáng)度，可提高人工唾液中老化6 個(gè)月或1 年的微拉伸粘接強(qiáng)度，并且抑制了MMPs 活性。本研究結(jié)果顯示：與即刻微拉伸粘接強(qiáng)度比較，冷熱循環(huán)老化后各組試件粘接強(qiáng)度均下降，且與對(duì)照組比較，0.1 mol·L－1EDC 組試件粘接強(qiáng)度明顯提高，0.2 mol·L－1EDC 組試件粘接強(qiáng)度明顯降低。分析其原因：0.1 mol·L－1EDC 可能通過(guò)促進(jìn)牙本質(zhì)膠原使即刻粘接強(qiáng)度提高，同時(shí)冷熱循環(huán)過(guò)程中使酶降解作用也減弱，從而使冷熱循壞后試件粘接強(qiáng)度的 升 高 更 加 明 顯；0.2 mol·L－1EDC 組 可 能 加 入EDC 較多影響粘接劑固化，試件粘接完成時(shí)即存在粘接薄弱區(qū)域，即刻粘接強(qiáng)度下降，經(jīng)過(guò)冷熱循環(huán)后，粘接劑及膠原更易發(fā)生水解和酶解，從而明顯降低了冷熱循環(huán)后粘接強(qiáng)度。

斷裂模式主要分為界面破壞、混合破壞和內(nèi)聚破壞（樹(shù)脂和牙本質(zhì)）［25］，當(dāng)發(fā)生界面破壞時(shí)，粘接強(qiáng)度取決于粘接力的大??；當(dāng)發(fā)生混合破壞時(shí)，三者內(nèi)聚力基本相等；當(dāng)發(fā)生內(nèi)聚破壞時(shí)，內(nèi)聚力小于粘接力。發(fā)生界面破壞時(shí)最為理想，最能反映粘接劑的粘接強(qiáng)度大小。本研究中，即刻微拉伸粘接強(qiáng)度測(cè)試中，對(duì)照組及0.2 和0.3 mol·L－1EDC組試件均以界面斷裂為主，其中0.3 mol·L－1EDC組試件幾乎全部為界面斷裂，而0.1 mol·L－1EDC組試件則以混合斷裂為主，可能是由于0.1 mol·L－1EDC 使 試 件 粘 接 強(qiáng) 度 提 高 而0.2 和0.3 mol·L－1EDC 使試件粘接強(qiáng)度降低。當(dāng)粘接力小于內(nèi)聚力時(shí)，以界面斷裂為主，當(dāng)粘接力進(jìn)一步提高時(shí)，粘接力和內(nèi)聚力基本一致時(shí)，以混合斷裂為主，斷裂模式與粘接強(qiáng)度結(jié)果相一致，0.1 mol·L－1EDC 組混合斷裂百分率大于對(duì)照組及0.2 和0.3 mol·L－1EDC 組。冷熱循環(huán)老化后各組試件主要斷裂模式并未發(fā)生明顯變化，但由于粘接強(qiáng)度下降，因此界面斷裂所占比例有所增加。

綜上所述，將EDC 添加到通用型粘接劑Single Bond Universal 中 配 制 成 含 0.1～0.3 mol·L－1EDC的實(shí)驗(yàn)性粘接劑，均無(wú)明顯細(xì)胞毒性；含0.1 mol·L－1EDC 的實(shí)驗(yàn)性粘接劑通過(guò)提高脫礦牙本質(zhì)膠原交聯(lián)程度和抑制MMPs 活性，不僅不影響即刻粘接強(qiáng)度，從而提高了即刻及老化微拉伸強(qiáng)度，并延長(zhǎng)了樹(shù)脂粘接修復(fù)的使用壽命。