核黃素發(fā)酵菌種改造研究進(jìn)展

張兆昆,周文學(xué),李永麗,胡建華*,劉占英

1.內(nèi)蒙古工業(yè)大學(xué)化工學(xué)院, 呼和浩特 010051；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)發(fā)酵產(chǎn)業(yè)節(jié)能減排工程技術(shù)研究中心, 呼和浩特 010051；3.內(nèi)蒙古工業(yè)大學(xué)圖書(shū)館, 呼和浩特 010051

核黃素又名維生素B2， 1879年化學(xué)家Blyth在牛奶上清液中分離出具有黃綠色的熒光物質(zhì)，但這種物質(zhì)不是真正意義的核黃素，他把這種物質(zhì)稱為乳黃素(lactochrome)[1]。1930年Kuhn和Eggersdorfer等分離出核黃素[2-4]。黃素單核苷酸(FMN)和黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)是核黃素在機(jī)體中的常見(jiàn)表現(xiàn)形式，這兩種物質(zhì)在細(xì)胞中可作為氧化還原酶的輔基參與到氧化過(guò)程中傳遞電子[5]。核黃素不能直接參與細(xì)胞代謝，但核黃素的衍生物FMN和FAD能調(diào)節(jié)機(jī)體的多種生理活動(dòng)。如果動(dòng)植物缺少核黃素，其生長(zhǎng)發(fā)育會(huì)相對(duì)減慢。人體核黃素?cái)z入過(guò)少會(huì)產(chǎn)生多種疾病，例如心血管病、口角炎、偏頭痛、心絞痛、白內(nèi)障、瘧疾等，所以核黃素在醫(yī)學(xué)中主要作為輔助藥物參與治療[6-11]。此外，核黃素還可以作為色素、營(yíng)養(yǎng)添加劑等應(yīng)用到食品行業(yè)中。

1 核黃素生產(chǎn)歷史

由于人體自身不能合成核黃素，必須從外界攝取，因此核黃素的生產(chǎn)具有重要意義。生產(chǎn)方法由最初的化學(xué)合成法、化學(xué)半合成法發(fā)展到目前應(yīng)用最為廣泛的微生物發(fā)酵法。1934年Kuhn和Paul通過(guò)化學(xué)合成法合成核黃素，這種生產(chǎn)方法是全球核黃素生產(chǎn)的開(kāi)端，延續(xù)了將近50年。1980年，研究人員發(fā)現(xiàn)可以將化學(xué)合成法與微生物發(fā)酵法結(jié)合來(lái)生產(chǎn)核黃素，首先通過(guò)微生物發(fā)酵生成D-葡萄糖，然后使用化學(xué)合成法合成核黃素[12]。這種方法生產(chǎn)的核黃素雖然純度較高，但后續(xù)步驟與原來(lái)的化學(xué)合成法相同，會(huì)產(chǎn)生大量有毒有害物質(zhì)，而且在生產(chǎn)時(shí)還要控制污水，對(duì)環(huán)境造成極大影響，因此化學(xué)半合成法逐漸被淘汰，目前主要通過(guò)微生物發(fā)酵法來(lái)生產(chǎn)核黃素。1990年，全年生產(chǎn)的核黃素中只有5%是通過(guò)發(fā)酵法生產(chǎn)的，但是到2002年全球已有75%的核黃素是通過(guò)生物發(fā)酵法生產(chǎn)的。與此同時(shí)，核黃素的產(chǎn)量也從1990年的1 600 t提升到2002年的4 000 t。到2015年核黃素產(chǎn)量極大提高，超過(guò)9 000 t的核黃素通過(guò)生物發(fā)酵法生產(chǎn)，基本上已經(jīng)取代了其他合成方法[13]。

2 產(chǎn)核黃素的微生物種類

微生物發(fā)酵法最早開(kāi)始于20世紀(jì)50年代，主要是通過(guò)能積累核黃素的菌種生產(chǎn)核黃素，包括棒狀桿菌[14]和棉囊阿舒氏酵母[15]。1965年多家公司希望發(fā)展核黃素微生物發(fā)酵生產(chǎn)線，但是因?yàn)樯a(chǎn)工藝不成熟而無(wú)法進(jìn)行[16]。隨后微生物育種和基因工程技術(shù)進(jìn)入快速發(fā)展期，枯草芽孢桿菌、假絲酵母、釀酒酵母等菌種被用于核黃素生產(chǎn)中[17]，并且構(gòu)建了各種工程菌，如表1所示，生物發(fā)酵法生產(chǎn)核黃素得到了廣泛關(guān)注。

目前常用于生產(chǎn)核黃素的工程菌有棉囊阿舒氏酵母和枯草芽孢桿菌兩種[18]，因?yàn)檫@兩種菌具有核黃素兩種重要的合成前體：核糖5-磷酸和鳥(niǎo)苷三磷酸(GTP)，核糖5-磷酸來(lái)自戊糖磷酸(PP)途徑，而鳥(niǎo)苷三磷酸(GTP)則來(lái)自嘌呤生物合成[19]，兩種菌株經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可提高戊糖磷酸途徑和嘌呤生物合成途徑的通量[13]。

表1 核黃素主要生產(chǎn)菌株Table 1 The main strains of riboflavin production

棉囊阿舒氏酵母的優(yōu)勢(shì)在于能夠天然積累核黃素，枯黃芽孢桿菌的優(yōu)點(diǎn)是生長(zhǎng)期短，產(chǎn)能高。我國(guó)湖北廣濟(jì)藥業(yè)股份有限公司利用枯草芽孢桿菌生產(chǎn)核黃素產(chǎn)率可達(dá)26.5 g·L-1[20]。但是，通過(guò)微生物法生產(chǎn)核黃素也存在一些不足，主要有以下兩方面：第一，下游分離和提純技術(shù)比較滯后，使得核黃素純度不高；第二，目前越來(lái)越多的工業(yè)菌株是通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建的，生產(chǎn)過(guò)程中經(jīng)常添加抗生素，容易出現(xiàn)抗生素濫用或者攜帶未知突變基因，尤其是當(dāng)后期滅菌工藝處理不當(dāng)時(shí)，對(duì)環(huán)境及人類健康會(huì)造成一定的影響。2015年，歐盟海關(guān)在由中國(guó)出口至歐洲的食品級(jí)核黃素中分離得到1株未被授權(quán)的重組枯草芽孢桿菌DNA，導(dǎo)致產(chǎn)品全部被退回[21]。2018年，F(xiàn)EEDAP專家組認(rèn)為使用枯草桿菌菌株KKCM-10445生產(chǎn)的核黃素(80%)存在遺傳修飾菌株攜帶編碼抗菌藥物耐藥性基因的活細(xì)胞和DNA擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)目標(biāo)物種、消費(fèi)者、使用者和環(huán)境構(gòu)成了風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致廣濟(jì)藥業(yè)核黃素出口歐盟受阻[22]，這也給使用基因重組微生物的生產(chǎn)提出警示。

3 枯草芽孢桿菌合成核黃素的代謝途徑

在細(xì)菌中，核黃素的生物合成是通過(guò)一系列酶促步驟進(jìn)行的?？莶菅挎邨U菌屬于革蘭氏陽(yáng)性菌，被認(rèn)為是“安全菌種”，經(jīng)常被當(dāng)作“平臺(tái)菌種”[21]。目前我們對(duì)枯草芽孢桿菌核黃素合成代謝途徑認(rèn)識(shí)比較清晰，枯草芽孢桿菌從吸收葡萄糖開(kāi)始合成核黃素，經(jīng)過(guò)戊糖磷酸途徑和嘌呤合成途徑生成的核酮糖-5-磷酸(Ru-5-P)和鳥(niǎo)苷三磷酸(GTP)，在核黃素操縱子所編碼的相關(guān)功能酶的催化作用下合成核黃素，合成途徑如圖1所示。

枯草芽孢桿菌不能天然積累核黃素，是在ribC基因編碼的核黃素酶和FAD合成酶的催化下形成核黃素的下游產(chǎn)物FMN和FAD。Bresler等[24]利用ribC的突變基因讓枯草芽孢桿菌積累核黃素，推測(cè)得出以下結(jié)論：第一，突變基因能減少核黃素激酶和FAD的活性，降低FMN和FAD的產(chǎn)量，在枯草芽孢桿菌內(nèi)積累核黃素；第二，F(xiàn)MN和FAD含量降低之后，它們對(duì)核黃素的負(fù)反饋降低，核黃素大量增加。

1—6-磷酸葡萄糖脫氫酶；2—6-磷酸葡萄糖內(nèi)酯酶；3—6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶；4—磷酸核糖焦磷酸合成酶；5、6—相關(guān)酶促反應(yīng)；7：GTP環(huán)水解酶Ⅱ；8—脫氨酶；9—還原酶；10—未知磷酸酶；11—3,4-二羥基-2-丁酮-4-磷酸合成酶；12—二氧四氫喋啶合成酶；13—核黃素合成酶；Glucose—葡萄糖；Glucose-6-P—6-磷酸葡萄糖；Glucose-6-P-lactone—6-磷酸-葡萄糖酸內(nèi)酯；6-P-gluconate—6-磷酸-葡萄糖酸；Ru-5-P—5-磷酸核酮糖；Ribo-5P—5-磷酸核糖； PRPP—5-核糖磷酸焦磷酸；IMP—次黃嘌呤核苷單磷酸；GTP—鳥(niǎo)苷三磷酸；DARPP—2，5-二氨基-6-核糖氨基-4(3H)-嘧啶酮-5-磷酸；ARPP—5-氨基-6-核糖氨基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮-5-磷酸；ArPP—5-氨基-6-核糖醇氨基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮-5-磷酸；ArP—5-氨基-6-核糖醇氨基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮；DHBP—3，4-二羥基-2-丁酮-4-磷酸；DEL—6，7-二甲基-8-核糖醇基-2，4-二氧四氫喋啶。圖1 枯草芽孢桿菌核黃素合成圖[23]Fig.1 The riboflavin biosynthesis pathway of B. subtilis[23]

4 菌種選育方法

4.1 誘變育種

誘變篩選是目前最常用的產(chǎn)核黃素菌種提高產(chǎn)量的選育方式，主要分為物理誘變和化學(xué)誘變。物理誘變通常是指采用各種高能射線穿透或者破壞遺傳物質(zhì)引起基因位點(diǎn)突變，從而篩選出需要的菌株性狀。魏士平等[25]利用紫外誘變對(duì)棉阿舒囊霉(Ashbyagossypii)3#進(jìn)行誘變, 得到 331#突變株，極大提高了核黃素合成速率，優(yōu)化后核黃素產(chǎn)量為5 512 μg·mL-1。2020年，祝金山等[26]以枯草芽孢桿菌QJVB-1為出發(fā)菌株,采用常壓室溫等離子體誘變技術(shù),得到1株核黃素產(chǎn)量高、遺傳性狀穩(wěn)定的突變株QJVB-2-91。突變株核黃素最高產(chǎn)量達(dá)到9.447 g·L-1，較出發(fā)菌株提高16.8%，發(fā)酵周期縮短6 h?；瘜W(xué)誘變?cè)诤它S素的菌種選育過(guò)程中較少看到文獻(xiàn)報(bào)道，但是往往把經(jīng)過(guò)誘變的菌種用嘌呤或類嘌呤物質(zhì)誘導(dǎo)，篩選出體內(nèi)含有嘌呤合成和核黃素合成的工程菌。這種菌自身具有核黃素表達(dá)的基因，因此核黃素產(chǎn)量較高。Lee等[20]使用這種方法，將蘇氨酸和脯氨酸的結(jié)構(gòu)類似物作為生產(chǎn)工程菌的篩選條件，獲得工程菌B.subtilisAS5，核黃素合成能力顯著提高，可以在70 h生產(chǎn)26 g·L-1的核黃素。2019年，郭佳欣等[27]以BS120作為出發(fā)菌株，通過(guò)常壓室溫等離子體誘變處理，以8-氮鳥(niǎo)嘌呤為篩選拮抗物進(jìn)行篩選，得到菌株BSG1，核黃素產(chǎn)量比出發(fā)菌株提高61.60%。

4.2 基因重組育種

基因重組是利用原生質(zhì)體融合等方式將親本中的基因重排得到良好的性狀整合，然后篩選得到目的菌株[28]。和以往菌株進(jìn)化策略相比，這種方式的目的性更強(qiáng)，更容易得到目的菌種。因?yàn)榫曜陨韼в杏欣蛔儯阅茉谝欢ǔ潭壬蠝p少不利突變的產(chǎn)生幾率，克服傳統(tǒng)育種周期長(zhǎng)、隨機(jī)性強(qiáng)、效果差等缺陷，所以基因重組育種不論是在現(xiàn)在還是未來(lái)都是一個(gè)很好的研究方向。對(duì)于產(chǎn)核黃素的菌種基因工程改造主要針對(duì)提高核黃素操縱子過(guò)表達(dá)和提高Ru5P和GTP兩種前體供應(yīng)量合成途徑通量?jī)蓚€(gè)方向以外，還有一些新的手段被用于產(chǎn)核黃素菌種的育種過(guò)程。

4.2.1提高核黃素操縱子表達(dá) 枯草芽孢桿菌核黃素操縱子長(zhǎng)約4.3 kb，共包含5個(gè)基因，這些基因與核黃素合成途徑緊密相關(guān)，這些操縱子上的基因所控制和表達(dá)的酶共同催化促進(jìn)核黃素的形成與積累，相關(guān)基因所表達(dá)的酶如表2所示。

表2 枯草芽孢桿菌中與核黃素合成相關(guān)調(diào)控基因[29]Table 2 Regulatory genes of riboflavin synthesis in B. subtilis[29]

ribT基因功能尚無(wú)相關(guān)報(bào)道，但Perkins等[17]發(fā)現(xiàn)缺失ribT的突變株合成核黃素的能力會(huì)有所減弱，由此可推測(cè)ribT與核黃素的合成有關(guān)。

核黃素操縱子內(nèi)部基因受一個(gè)一級(jí)啟動(dòng)子P1(ribG上游)和兩個(gè)二級(jí)啟動(dòng)子P2(ribE編碼區(qū)內(nèi))和P3(ribT上游)控制，P1與P2由σA因子識(shí)別，且受細(xì)胞內(nèi)核黃素負(fù)反饋抑制，核黃素濃度過(guò)高會(huì)削弱啟動(dòng)子表達(dá)強(qiáng)度[30]。 Li等[31]通過(guò)把枯草芽孢桿菌的操縱子P1替換為組成型強(qiáng)啟動(dòng)子P43，過(guò)量表達(dá)核黃素合成基因，并解除細(xì)胞內(nèi)核黃素水平對(duì)基因的負(fù)反饋抑制作用，從而極大地提高了核黃素產(chǎn)量。Duan等[32]將含有蠟樣芽孢桿菌(B.cereusATCC 14579)核黃素操縱子的片段整合至B.subtilisRH33基因組得到工程菌株B.subtilisPY，過(guò)表達(dá)核黃素操縱子，核黃素產(chǎn)量達(dá)到4.3 g·L-1。2014年，Shi等[33]將枯草芽孢桿菌168的強(qiáng)組成型啟動(dòng)子P43插入菌株BS77ribA的上游，以產(chǎn)生突變株BS89，突變型BS89中ribA的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致核黃素產(chǎn)量提高了約1.4倍，同時(shí)比核黃素的特定生產(chǎn)速率顯著提高。

隨著CRISPR/Cas9n的多重基因組編輯系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，多重基因組編輯技術(shù)得到了飛速發(fā)展,其優(yōu)勢(shì)在于可直接在基因組上對(duì)DNA序列進(jìn)行定點(diǎn)突變、插入、敲除、組合編輯等，并且在多個(gè)物種中已經(jīng)實(shí)現(xiàn)多重基因編輯；利用CRISPR/Cas9n的多重基因組編輯系統(tǒng)構(gòu)建核黃素高產(chǎn)菌株具有廣闊的發(fā)展前景，也為構(gòu)建更安全、更高效的工業(yè)生產(chǎn)菌株提供了方向。2019年，劉定宇等[34]利用CRISPR/Cas9n的多重基因組編輯系統(tǒng)對(duì)枯草芽孢桿菌核黃素操縱子中的3個(gè)基因(ribB、ribA和ribH)進(jìn)行了微調(diào),將質(zhì)粒pBSCas9n-gRNArib和pDonor-ribRBSLib(來(lái)自質(zhì)粒庫(kù))導(dǎo)入刪除ligD基因的BS89中以啟動(dòng)同源重組，并取代ribB、ribA和ribH的天然RBS區(qū)域，發(fā)酵驗(yàn)證后依據(jù)核黃素產(chǎn)量選擇具有3個(gè)調(diào)節(jié)基因的11個(gè)菌株以及具有2個(gè)調(diào)節(jié)基因的3個(gè)菌株。與BS89相比，最佳菌株CY46產(chǎn)生了1.39 g·L-1的核黃素，數(shù)據(jù)證明在單個(gè)周期內(nèi)核黃素的產(chǎn)量顯著提高，也表明操縱子的優(yōu)化表達(dá)取決于各種基因的平衡表達(dá)，而不是單調(diào)地過(guò)表達(dá)每個(gè)基因。

4.2.2提高Ru5P和GTP兩種前體供應(yīng)量合成途徑通量 除了增加核黃素合成途徑相關(guān)基因的過(guò)表達(dá)外，提高Ru5P和GTP兩種前體供應(yīng)量合成途徑通量，同樣是提高核黃素產(chǎn)量的有效策略。以枯草芽孢桿菌合成核黃素途徑為例，增加核黃素產(chǎn)量主要有提高嘌呤生物合成途徑和戊糖磷酸兩個(gè)途徑。

從戊糖磷酸途徑的核糖-5-磷酸開(kāi)始，在多種酶的催化反應(yīng)下，生成一系列嘌呤代謝物的過(guò)程稱為嘌呤生物合成。這些嘌呤代謝物包括IMP、AMP、ADP、ATP、GMP、GDP和GTP等。在枯草芽孢桿菌中，嘌呤操縱子是這一生物合成途徑的關(guān)鍵，主要包含12個(gè)編碼基因的基因簇，編碼酶如表3所示，除表格所列之外，還有purA、guaA、purB、guaB和guaC等一系列基因。

表3 嘌呤操縱子編碼基因及表達(dá)酶Table 3 The code gene and expression enzyme of purine operon

枯草芽孢桿菌的嘌呤合成途徑受到細(xì)胞內(nèi)多種機(jī)制調(diào)控，主要包括鳥(niǎo)嘌呤介導(dǎo)的前導(dǎo)mRNA轉(zhuǎn)錄衰減機(jī)制、腺嘌呤介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄起始阻遏機(jī)制和酶水平的負(fù)反饋抑制機(jī)制,通過(guò)對(duì)嘌呤生物合成途徑的改造，來(lái)抑制或消除這種嚴(yán)格的調(diào)控機(jī)制，從而提高核黃素的產(chǎn)量。2014年，Shi等[33]對(duì)嘌呤生物合成途徑進(jìn)行了代謝工程改造，敲除了PurR阻遏蛋白、嘌呤操縱子5′-UTR的鳥(niǎo)嘌呤核糖開(kāi)關(guān)，定量RT-PCR分析顯示嘌呤基因的相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)了約380倍，使得核黃素產(chǎn)量極大提高。

戊糖磷酸途徑作為糖酵解途徑和嘌吟合成途徑的關(guān)鍵中間代謝途徑，其中間代謝物Ru5P和R5P分別是核黃素和嘌呤合成的前體物之一。由此可知，在枯草芽孢桿菌中，戊糖磷酸途徑對(duì)核黃素的合成具有決定作用[35]。Duan等[36]通過(guò)在宿主菌B.subtilisPY中過(guò)表達(dá)zwf(6-磷酸葡萄糖脫氫酶基因)，使戊糖磷酸途徑通量增加，從而使胞內(nèi)Ru5P濃度提高了4倍，最終核黃素的產(chǎn)量提高近25%。2015年，程毅鵬等[23]運(yùn)用自主構(gòu)建的新型抗性質(zhì)粒在宿主菌內(nèi)過(guò)量表達(dá)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶得到重組菌B.subtilisRF1/pMA5-sat-zwf，重組菌胞內(nèi)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活力比原始菌提高了近50倍，發(fā)酵60 h核黃素產(chǎn)量達(dá)到13.5 g·L-1，相比原始菌核黃素產(chǎn)量提高了32.3%。

4.2.3其他基因重組育種方法 除上述兩種主要途徑以外，近些年還有研究者從不同的角度出發(fā)，進(jìn)行了其他基因育種方法的研究。2016年，徐志博等[37]利用PCR技術(shù)從Bacillussubtilis168中擴(kuò)增出3.5 kb的核黃素操縱子,將其分別連接到不同拷貝數(shù)的表達(dá)載體pSC101、p15A、pBR322，得到重組載體pSC101-BSrib、p15A-BSrib和pBR322-BSrib，并分別轉(zhuǎn)化到大腸桿菌(E.coliK-12 MG1655)，搖瓶發(fā)酵結(jié)果表明：其核黃素合成能力隨著質(zhì)?？截悢?shù)的增加而增強(qiáng)。最后，通過(guò)無(wú)痕基因操作技術(shù)，減弱工程菌株ECX3ribF基因的表達(dá)以減少核黃素轉(zhuǎn)化為FMN和FAD，搖瓶發(fā)酵表明ECX4的核黃素產(chǎn)量提高到292.3 mg·L-1。黃燦等[38]以B.subtilis120 spc為出發(fā)菌株，在染色體上表達(dá)糞堆梭菌的xyn10B基因和月形單胞菌GA192的xsa基因，并過(guò)表達(dá)大腸桿菌的糖異構(gòu)酶基因xylA、木酮糖激酶基因xylB、B.subtilis內(nèi)源木糖運(yùn)輸?shù)鞍妆磉_(dá)基因araE，得到以木聚糖為碳源生產(chǎn)核黃素的菌株E2X6PAB，發(fā)酵結(jié)果表明核黃素產(chǎn)量為(2 484.303±25.9) mg·L-1，核黃素得率約為(49.67±0.5) mg·g-1葡萄糖，并由此證實(shí)了利用木聚糖生產(chǎn)核黃素的可行性。2019年，Wang等[39]將Geobacillus和Parageobacillus的熱休克蛋白(HSP)基因?qū)氘a(chǎn)生核黃素的B.subtilis446菌株中，在強(qiáng)大的組成型啟動(dòng)子P43的控制下，B.subtilis446中異源表達(dá)了12種HSP基因及其2種組合(PtdnaK-PtdnaJ-PtgrpE和PtgroeL-PtgroeS)。其中菌株B.s446-HSP20-3，B.s446-HSP20-2和B.s446-PtDnaK-PtDnaJ-PtGrpE在44～48 ℃時(shí)其細(xì)胞密度增加了25%以上，在39和43 ℃的較高溫度下發(fā)酵顯示核黃素效價(jià)提高了23%～66%，發(fā)酵時(shí)間縮短24 h。由此可知，將嗜熱菌中的HSP植入B.subtilis446不僅提高了其耐熱性，也提高了核黃素生成速率。

5 展望

通過(guò)分析前人對(duì)核黃素的研究可知，核黃素是一種和生物生長(zhǎng)密切相關(guān)的物質(zhì)，可作為輔助藥物、添加劑等在治療和生產(chǎn)中使用。核黃素的生產(chǎn)從過(guò)去的化學(xué)合成法與化學(xué)半合成法逐漸被微生物發(fā)酵法所取代，微生物發(fā)酵法符合社會(huì)發(fā)展的趨勢(shì)，相對(duì)于傳統(tǒng)方法不僅能提高產(chǎn)量、降低成本，還能保護(hù)環(huán)境、防止污染。發(fā)酵法雖然使得核黃素產(chǎn)量極大提高，但依然無(wú)法滿足市場(chǎng)上對(duì)核黃素的需求缺口，因此生產(chǎn)菌種、發(fā)酵工藝及分離純化技術(shù)仍在不斷的改進(jìn)。其中發(fā)酵菌種的改造一直是關(guān)注的重點(diǎn)，通過(guò)傳統(tǒng)的化學(xué)及物理誘變方式，取得產(chǎn)量的大幅提高，而隨著如重離子輻照誘變、常壓室溫等離子體(ARTP)、合成生物學(xué)等新型誘變育種方法的出現(xiàn)，為工業(yè)生產(chǎn)提供了更多高產(chǎn)能力的菌種，且利用多重基因組編輯技術(shù)構(gòu)建的工業(yè)菌也將會(huì)成為研究熱點(diǎn)，未來(lái)我們?nèi)孕璨粩嗵綄ば碌挠N方法，進(jìn)一步提高核黃素產(chǎn)量，滿足市場(chǎng)需求。