基于藥材表征和色譜技術(shù)對(duì)鐵棒錘藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升的相關(guān)研究△

林麗，高素芳，陳紅剛，劉立，晉玲，郭玉環(huán)

甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000

鐵棒錘異名烏藥、草烏、鐵牛七、雪上一枝蒿[1]、 八百棒、一枝箭、三轉(zhuǎn)半、榜阿那保[2]等，為毛茛科植物伏毛鐵棒錘AconitumflavumHand.-Mazz.或鐵棒錘A.pendulumBusch.的干燥塊根[3]。其資源分布于甘肅中南大部分地區(qū)，陜西、青海、四川、西藏及寧夏等省、自治區(qū)亦有分布[4-5]。目前，甘肅永登縣武勝驛及天祝縣石門為栽培品基地。鐵棒錘秋末冬初采挖，除去殘莖側(cè)根，削去根頭、側(cè)根，自然干燥。其味苦、辛，性溫[6]，有大毒[7]。鐵棒錘的功效有活血祛瘀、祛風(fēng)濕、消腫敗毒等，治療腰腿疼、牙痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、毒蛇咬傷等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鐵棒錘具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，還具有局部麻醉、解熱、抗炎、致心率失常等作用[8]。根據(jù)文獻(xiàn)記載，鐵棒錘的主要化學(xué)成分為生物堿類成分烏頭堿(aconitine)、新烏頭堿(mesaconitine)、次烏頭堿(hypaconitine)[9]、3-乙酰烏頭堿(acetylaconitine)、脫氧烏頭堿(deoxyaconitine)、苯甲酰烏頭原堿(benzoylaconine)[10]，此類成分既是有效活性成分，也是其毒性成分[11]，其中烏頭堿是鐵棒錘藥材的主要化學(xué)成分。

近年來，隨著鐵棒錘藥用價(jià)值的不斷挖掘，需求量逐年上升，野生資源也遭到不同程度的破壞，導(dǎo)致野生資源量不足。另外，通過第四次全國中藥資源普查發(fā)現(xiàn)，市場(chǎng)上存在來源不清，品種混用的現(xiàn)象。

中藥藥用歷史悠久，幾千年的臨床實(shí)踐表明，中藥在某些疾病的治療上有良好的療效，而且這種療效是多種成分協(xié)同作用的結(jié)果。過去，常以中藥中1～2種成分的含量來評(píng)價(jià)中藥的質(zhì)量，這顯然不能代表中藥真正的質(zhì)量。隨著分析技術(shù)的進(jìn)步，采用多成分含量測(cè)定和指紋圖譜相結(jié)合的方式來評(píng)價(jià)中藥的質(zhì)量已成為一種行之有效的方法。新方法與技術(shù)的運(yùn)用可進(jìn)行定性鑒別，鑒別藥材不同的來源、不同的生長期和產(chǎn)區(qū)，以及中藥成分的組成等；多成分含量測(cè)定則可對(duì)多個(gè)代表性成分進(jìn)行定量研究；定性與定量相結(jié)合能夠較全面地反映中藥的質(zhì)量。基于上述現(xiàn)狀，甘肅省地方藥材標(biāo)準(zhǔn)急需重新提升，以規(guī)范市場(chǎng)、確保臨床用藥安全，保證藥效。本研究以不同批次鐵棒錘為研究對(duì)象，采用植物分類方法進(jìn)行綜合分析，確定鐵棒錘藥材名稱和對(duì)應(yīng)的基原植物，比較其區(qū)別。同時(shí)運(yùn)用薄層色譜及HPLC色譜等技術(shù)，以烏頭堿為檢測(cè)指標(biāo)，建立快速檢測(cè)手段，為規(guī)范藥材質(zhì)量、保證臨床療效提供參考。

1 材料

1.1 儀器

WFH-201B型紫外反射儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；LC-16型高效液相色譜儀島津；UV-2600型微量紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)；KH-5300B型超聲波清洗儀(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；BS 224 S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；101-2型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇金壇市環(huán)宇科技儀器廠)；RE-52AA型自動(dòng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；DJ-02型中藥粉碎機(jī)(上海淀久中藥機(jī)械制造有限公司)。

1.2 試藥

烏頭堿對(duì)照品(上海原葉生物科技有限公司，批號(hào)：P17D7F27141，純度≥98%)；四氫呋喃(天津市大茂化學(xué)試劑廠)和乙腈(賽默飛公司)為色譜純；乙醚、三氯甲烷、氨試液、氫氧化鈉、磷酸二氫鈉、溴麝香草酚藍(lán)均為分析純(天津大茂公司)。

16批次鐵棒錘樣品分別采購于甘肅天祝、永登，陜西寶雞、太白山，寧夏六盤山，四川阿壩州，貴州凱里等地和四川荷花池、河北安國、廣西玉林藥市。具體信息見表1。經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)晉玲教授鑒定為毛茛科植物伏毛鐵棒錘AconitumflavumHand.-Mazz.或鐵棒錘A.pendulumBusch.的干燥塊根的干燥塊根。

表1 鐵棒錘藥材樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀及顯微鑒定

采用植物分類方法進(jìn)行綜合分析，確定鐵棒錘藥材名稱和對(duì)應(yīng)的基原植物，比較其區(qū)別。

2.1.1性狀 本品母根呈圓錐形或圓柱形，兩端微尖，長1.5～8.0 cm，直徑0.5～1.5 cm；表面灰褐色，有稍扭曲的縱溝紋，有時(shí)粗皮脫落露出淺黃色內(nèi)皮；頂端有莖痕及側(cè)根痕；質(zhì)輕，斷面常有裂隙，可見類圓形或多角形的環(huán)紋。子根長紡錘形，長2.0～5.5 cm，直徑0.6～2.0 cm；表面有細(xì)縱紋及明顯的須根痕，飽滿；頂端有芽痕及主根痕；斷面粉性，亦有角質(zhì)者。氣微，味澀、苦而麻舌。褐色，子根較多(2～4個(gè))，見表2。

表2 鐵棒錘藥材栽培品與野生品性狀比較

2.1.2橫切面 伏毛鐵棒錘：后生皮層為1～2列切向延長形狀不規(guī)則的黃棕色細(xì)胞，微木栓化。皮層較窄，由4～8列切向延長的類長方形薄壁細(xì)胞組成，內(nèi)皮層清晰可見。韌皮部寬廣，約占橫切片的2/3，由類圓形或多角形的薄壁細(xì)胞組成，薄壁細(xì)胞中含有大量淀粉粒，篩管群散布其中，周圍具有韌皮纖維，近形成層較密集。形成層由1～2列細(xì)胞構(gòu)成，為五邊或多邊形的星狀，有時(shí)環(huán)形，細(xì)胞呈類長方形或多角形，切向延長。木質(zhì)部的導(dǎo)管位于形成層角隅的內(nèi)側(cè)，維管束排列成U字形或輻射狀，中央時(shí)有中空。鐵棒錘子根形成層環(huán)通常呈圓形，韌皮部有石細(xì)胞。母根形成層環(huán)通常為5～6邊形，韌皮部有少量石細(xì)胞或無。見圖1。

野生品：同栽培品，形成層褐色，有時(shí)斷裂，中央常形成空洞。見圖2。

2.1.3粉末 栽培品：灰白色，淀粉粒眾多，單粒主要為類圓形、多角形或盔帽狀，直徑約2～6 μm，復(fù)粒多由 2～7 粒組成。臍點(diǎn)明顯，多呈叉狀。導(dǎo)管多為網(wǎng)紋導(dǎo)管，稀環(huán)紋，螺紋，直徑 10～36 μm。纖維呈線形，兩端稍尖，壁孔明顯。后生皮層細(xì)胞呈棕色或棕黃色，表面觀呈類方形或長多角形，垂周壁稍厚，呈不規(guī)則波狀彎曲。石細(xì)胞未見，并可見少量棕色團(tuán)塊。

野生品：灰白色發(fā)黃，淀粉粒眾多，單粒主要為類圓形、多角形或盔帽狀，直徑約2～6 μm，復(fù)粒多由 2～5粒組成。臍點(diǎn)明顯，點(diǎn)狀或叉狀。導(dǎo)管多為網(wǎng)紋導(dǎo)管，稀環(huán)紋，螺紋，直徑 20～36 μm。纖維呈線形，兩端稍尖，壁孔明顯。后生皮層細(xì)胞呈棕色或棕黃色，表面觀呈類方形或長多角形，垂周壁稍厚，呈不規(guī)則波狀彎曲。石細(xì)胞少見，并可見少量棕色團(tuán)塊。見圖3。

注：1.后生皮層；2.皮層；3.內(nèi)皮層；4.韌皮部；5.木質(zhì)部；6.形成層；7.髓部；8.篩管群。圖1 鐵棒錘栽培品橫切面

注：1.后生皮層；2.皮層；3.內(nèi)皮層；4.篩管群；5.韌皮部；6.木質(zhì)部；7.髓部。圖2 鐵棒錘野生品橫切面

注：1.淀粉粒；2.導(dǎo)管；3.石細(xì)胞；4.薄壁細(xì)胞(內(nèi)含淀粉粒)；5.后生皮層；6.棕色塊。圖3 鐵棒錘(根)粉末圖(10×40)

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1供試液的制備 取不同批次藥材，粉碎，過80目篩，精密稱取5 g，置100 mL具塞三角瓶中，加乙醚-三氯甲烷(3∶1)混合溶液35 mL，使之潤濕，混勻，再加入氨試液3 mL，搖勻，低溫(低于40 ℃)超聲提取1 h，靜置10 min，濾過，棄去藥渣，濾液低于40 ℃回收溶劑，殘?jiān)眉状家浦?0 mL量瓶中定容，濃縮至 1 mL，作為供試品溶液。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備 烏頭堿對(duì)照品分別加甲醇制成3 mg·mL-1的烏頭堿溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3薄層色譜條件 用0.03 mm的毛細(xì)管吸取供試品溶液與烏頭堿對(duì)照品溶液各5 μL，點(diǎn)于同一氨氣飽和后的硅膠GF254(20 cm×10 cm)薄層板上，使用環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺(8∶1.5∶1)為展開系統(tǒng)，展開，取出，晾干，在254 nm紫外燈下觀察。

2.2.4薄層色譜鑒定結(jié)果 從圖4可以看出，14批次不同產(chǎn)地鐵棒錘與對(duì)照品在相同位置上顯相同顏色(深鉛灰色)的斑點(diǎn)，計(jì)算其比移值(Rf)。得出該系統(tǒng)可穩(wěn)定分離鐵棒錘中的成分，比較不同產(chǎn)地樣品在相同Rf部位的斑點(diǎn)大小，顏色深淺，表現(xiàn)不一，在點(diǎn)樣量一致的條件下可反映出不同產(chǎn)地間各類成分含量有差異，故通過薄層色譜可以快速地鑒別。

注：S1～S14.14批次鐵棒錘樣品；a.烏頭堿對(duì)照品。圖4 14批次鐵棒錘薄層色譜圖

展距為7.7 cm，Rf對(duì)照品=0.376。

Rf1=0.376 Rf2=0.364 Rf3=0.364 Rf4=0.357 Rf5=0.355 Rf6=0.361 Rf7=0.364

Rf8=0.364 Rf9=0.365 Rf10=0.364 Rf11=0.370 Rf12=0.370 Rf13=0.376 Rf14=0.370

2.3 紫外-可見分光光度法含量測(cè)定

2.3.1緩沖溶液的配制 pH 7.6緩沖溶液的配制：取0.l mol·L-1的NaOH溶液427.4 mL和0.1 mol·L-1的NaH2PO4溶液500 mL置于1000 mL量瓶中，加蒸餾水至刻度。

pH 7.6的0.000 2 mol·L-1溴麝香草酚藍(lán)緩沖溶液的配制：精密稱取0.062 5 g溴麝香草酚藍(lán)加pH 7.6緩沖溶液500 mL使溶解，即得。

2.3.2烏頭堿對(duì)照品溶液的配制 精密稱取烏頭堿對(duì)照品3.6 mg，置50 mL量瓶中，用三氯甲烷溶解并定容至刻度，備用。

2.3.3供試液的制備 分別精密稱取16批次鐵棒錘粉末1.000 g，置于具塞三角燒瓶中，分別加1 mL氨水，搖勻，放置30 min，再加20 mL三氯甲烷，放置過夜，濾過，藥渣用三氯甲烷洗3次(每次5 mL)，濾液合并，濃縮，定容于25 mL量瓶中，即得。

2.3.4含量測(cè)定方法 精密吸取2.3.3項(xiàng)下供試液6 mL于分液漏斗中，加6 mL溴麝香草酚藍(lán)緩沖溶液用力振搖1 min，傾入分液漏斗中，放置30 min，取三氯甲烷層，在415 nm處測(cè)定吸光度。

2.3.5專屬性 按照2.3.4項(xiàng)下含量測(cè)定方法對(duì)供試液、對(duì)照品及空白對(duì)照品分別進(jìn)行萃取，所得三氯甲烷層溶液在190～800 nm進(jìn)行掃描，專屬性良好，結(jié)果見圖5。

注：1.烏頭堿對(duì)照品；2.鐵棒錘樣品(S2)；3.空白溶劑。圖5 烏頭堿對(duì)照品、供試品、空白對(duì)照品UV圖

2.3.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取2.3.2項(xiàng)下烏頭堿對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分別置于25 mL的具塞試管中，分別加溴麝香草酚藍(lán)緩沖溶液和6.0、5.0、4.0、3.0、2.0、1.0、0.0 mL三氯甲烷6 mL，用力振搖1 min，傾入分液漏斗中，放置30 min，取三氯甲烷層，以0號(hào)為空白，在415 nm處測(cè)定吸光度，以烏頭堿含量為橫坐標(biāo)(X)，吸光度為縱坐標(biāo)(Y)得烏頭堿回歸方程為Y=20.957X+ 0.254 5，r=0.999。結(jié)果表明，烏頭堿在0.012～0.072 mg·mL-1呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.3.7方法學(xué)考察

2.3.7.1精密度試驗(yàn) 取同一供試品(S2)溶液6 mL，采用2.3.4項(xiàng)下的含量測(cè)定方法連續(xù)測(cè)定吸光度6次，測(cè)得總生物堿吸光度的RSD為0.37%，表明儀器精密度良好。

2.3.7.2重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品(S2)6份，各1 g精密稱定，按2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，采用2.3.4項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，測(cè)得總生物堿吸光度的RSD為0.37%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.7.3穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品(S2)溶液，采用2.3.4項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，分別于0、10、20、30、40、50 、60 min測(cè)定，測(cè)得總生物堿吸光度的RSD為0.26%，表明供試品溶液在1 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.7.4加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的鐵棒錘粉末約1 g，共5份，精密稱定，按照2.3.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法操作，精密量取4 mL，分別加入2.3.2項(xiàng)下烏頭堿對(duì)照品溶液2 mL(0.072 mg·mL-1)和溴麝香草酚藍(lán)緩沖溶液6 mL，用力振搖1 min，傾入分液漏斗中，放置30 min，取三氯甲烷層在415 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算平均加樣回收率為99.57%，RSD為1.65%。結(jié)果見表3。

表3 烏頭堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.3.8樣品含量測(cè)定 取16批鐵棒錘藥材各3份，按2.3.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，運(yùn)用2.3.4項(xiàng)下的含量測(cè)定方法測(cè)定吸光度。測(cè)定結(jié)果見表4。

表4 16批次鐵棒錘樣品中總生物堿含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

2.4 HPLC含量測(cè)定

2.4.1色譜條件 色譜柱為ZORBAX Edipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙睛-四氫呋喃(25∶15)為流動(dòng)相A，0.1 mol· L-1乙酸銨溶液(每1000 mL加冰乙酸0.5 mL)為流動(dòng)相B，梯度洗脫(0～48 min，15%～26%A；48～48.1 min，26%～35%A；48.1～58 min，35%A；58～65 min，35%～15%A)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量10 μL；檢測(cè)波長為235 nm；理論塔板數(shù)≥4000。烏頭堿與相鄰峰分離度均大于1.5，分離度良好。

2.4.2對(duì)照品溶液制備 精密稱取烏頭堿對(duì)照品5 mg，置于10 mL量瓶中，加少量甲醇溶解，待完全溶解后定容，搖勻。其烏頭堿質(zhì)量濃度為0.5 mg·mL-1。

2.4.3供試品溶液制備 取16批次鐵棒錘樣品粉末，過80目篩。各精密稱取2.5 g，置于100 mL具塞錐形瓶中，加35 mL乙醚-三氯甲烷(3∶1)混合溶劑及3 mL氨試液，搖勻，低于40 ℃超聲提取1 h，靜置10 min，取上清液，過濾，低于40 ℃回收溶劑，殘?jiān)眉状家浦?0 mL量瓶中定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.4.4線性關(guān)系考察 取2.4.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，分別吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL于10 mL量瓶中，分別用甲醇定容，搖勻，配制成系列質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，按2.4.1色譜條件測(cè)定，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，得烏頭堿回歸方程Y=1×107X-47 616(r=0.999 9)結(jié)果表明，烏頭堿在0.025～0.500 mg·mL-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4.5方法學(xué)考察

2.4.5.1精密度試驗(yàn) 取同一供試品(S2)溶液，在2.4.1項(xiàng)色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得烏頭堿峰面積的RSD為2.28%，表明儀器精密度良好。

2.4.5.2重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次樣品(S2)6份，各2.5 g精密稱定，按2.4.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在2.4.1項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)得烏頭堿峰面積的RSD為2.53 %，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.5.3穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，在2.4.1項(xiàng)下色譜條件中，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣6次，測(cè)得烏頭堿峰面積的RSD為2.43 %，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5.4加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的鐵棒錘粉末約2.5 g，共6份，精密稱定，分別加入等量的對(duì)照品，按2.4.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在2.4.1項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表5。

表5 鐵棒錘中烏頭堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4.6樣品含量測(cè)定 取16批次樣品各3份，按2.4.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表6，HPLC圖見圖6。

表6 16批鐵棒錘樣品中烏頭堿含量測(cè)定結(jié)果(n=3) mg·g-1

以烏頭堿為參照物，確定了5個(gè)特征峰，方法學(xué)精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)詳實(shí)度偏差均小于3%，16批藥材特征圖譜相似度均大于0.95。烏頭堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥0.5%。

注：S1～S16.16批鐵棒錘樣品；對(duì)照品為0.5 mg·mL-1烏頭堿溶液；空白為甲醇。圖6 16批鐵棒錘樣品HPLC圖

3 結(jié)論與討論

《甘肅省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2009年版只是在鐵棒錘藥材基原、性狀、顯微及水分、灰分上做了要求。隨著鐵棒錘藥用價(jià)值的不斷發(fā)現(xiàn)及臨床產(chǎn)品開發(fā)的需要，僅限于簡(jiǎn)單的標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)無法滿足市場(chǎng)及其質(zhì)量評(píng)價(jià)需求，因此，展開鐵棒錘質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升勢(shì)在必行。其中，在新的標(biāo)準(zhǔn)中加入了薄層色譜方法、紫外分光光度法、以烏頭堿為主成分指標(biāo)的HPLC及指紋圖譜，為今后其質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)比16批鐵棒錘藥材性狀表征，發(fā)現(xiàn)野生鐵棒錘整體子根個(gè)體偏小、塊根干癟、栽培個(gè)體較大，斷面形成層五角>90°或圓形。

HPLC分析顯示，16批鐵棒錘藥材中都含有烏頭堿。S9的烏頭堿含量明顯高于其他批次，S9的藥用部位為子根，而其他批次的藥用部位為塊根。另外是否與其為主產(chǎn)區(qū)域有關(guān)，有待于后期進(jìn)一步探討。不同產(chǎn)地批次、不同資源類型的總生物堿含量差異較大，其中S1、S11、S12、S13樣品為野生品，其總生物堿含量明顯高于其他12批栽培品的含量，也同時(shí)驗(yàn)證了在環(huán)境脅迫下代謝產(chǎn)物累積的增加。建議在炮制鐵棒錘藥材時(shí)應(yīng)區(qū)分用藥部位和藥材資源類型，塊根與子根分別炮制，野生品與栽培品分別炮制。

薄層色譜條件的選擇：烏頭堿薄層鑒別時(shí)曾用乙醚-乙酸乙酯(氨蒸氣飽和)、環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺、乙酸乙酯-正己烷-95%乙醇等不同比例的展開系統(tǒng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺(8∶1.5∶1)為展開劑，點(diǎn)樣前用濃氨氣飽和硅膠GF254板薄層板30 min，再置254 nm紫外燈下觀察，斑點(diǎn)顯色清晰，此方法簡(jiǎn)便易行、斑點(diǎn)分離度好、清晰，可用于鐵棒錘藥材的快速定性鑒別。

紫外-可見分光光度法條件的選擇：經(jīng)過反復(fù)條件探索2.3.3項(xiàng)下的供試品溶液制備方法簡(jiǎn)單易行，全波長掃描后確定415 nm為總生物堿的最大吸收波長。此方法具有簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好、設(shè)備操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，可用于其快速含量測(cè)定。

含量限度確定：考察了16批鐵棒錘藥材，烏頭堿和總生物堿含量差異較大，烏頭堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.575～1.830 mg·g-1，平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.956 mg·g-1；總生物堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.268～12.071 mg·g-1，平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)4.728 mg·g-1。故應(yīng)以最低測(cè)定值設(shè)限，可確定鐵棒錘中烏頭堿限度應(yīng)≥0.575 mg·g-1，總生物堿限度應(yīng)≥1.268 mg·g-1，用于控制該藥材質(zhì)量。

HPLC色譜條件的選擇：考察了乙腈-水(0.2%二乙胺)、乙睛-四氫呋喃(25∶15)-水(0.1 mol·L-1醋酸銨溶液，1000 mL加冰醋酸0.5 mL)不同檢測(cè)波長對(duì)HPLC圖的影響，結(jié)果表明，以乙睛-四氫呋喃(25∶15)為流動(dòng)相A，以0.1 mol·L-1乙酸銨溶液(每1000 mL加冰乙酸0.5 mL)為流動(dòng)相B為最優(yōu)流動(dòng)相，在2.4.1項(xiàng)色譜條件下，化合物分離效果最好。

在市場(chǎng)調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)，有很多烏頭類藥材相互混用，如工布烏頭、高烏頭、短柄烏頭、祁連山烏頭和黃花烏頭，因此在基原上要注意鑒別。