電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定三大主產(chǎn)區(qū)金銀花中5種重金屬元素含量△

韓赟，沈夕坤，沈多榮，宋如珺

南京中醫(yī)藥大學(xué) 附屬蘇州市中醫(yī)醫(yī)院 藥學(xué)部，江蘇 蘇州 215009

近年來中藥材重金屬元素超標(biāo)問題備受關(guān)注，中藥材中的重金屬元素及有害元素一般包括鉛(Pb)、汞(Hg)、鎘(Cd)、砷(As)、銅(Cu)等，作用于人體后可對神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、新陳代謝等產(chǎn)生危害。重金屬超標(biāo)已成為影響中藥發(fā)展的主要問題之一，準(zhǔn)確檢測和限定重金屬元素的含量是保障人民用藥安全有效的關(guān)鍵[1-3]。2015年，國家相繼發(fā)布了由中國中醫(yī)科學(xué)院主持制定的《中醫(yī)藥—中藥材重金屬限量》國際標(biāo)準(zhǔn)和國家中醫(yī)藥管理局的《國家中醫(yī)藥管理局關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)中藥飲片處方質(zhì)量管理強(qiáng)化合理使用的通知》，可見國家對中藥材重金屬元素含量的重視。

金銀花為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花[4]，為清熱解毒之良藥，是臨床常用的大宗中藥材之一，尤其在新型冠狀病毒疫情期間，其市場需求量巨大。金銀花是《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)[4]2020年版規(guī)定檢測重金屬元素含量的唯一一種花類藥材，其重金屬元素含量超標(biāo)問題一直廣受關(guān)注。根據(jù)國家商務(wù)部發(fā)布的近6年中藥材流通報告顯示[5]，我國金銀花平均產(chǎn)量為12 493.3 t，平均銷量為4892 t，最大的種植地為河南封丘、山東平邑和河北巨鹿[6]。因此，本研究選取河南、山東和河北產(chǎn)金銀花為調(diào)研對象，在前期研究的基礎(chǔ)上[7-8]，采用微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)，進(jìn)一步比較三大產(chǎn)區(qū)金銀花中5種重金屬元素Pb、Hg、Cd、As、Cu的含量，評價藥材的安全性，為保障金銀花臨床應(yīng)用的安全有效性及提升飲片質(zhì)量提供參考。

1 材料

1.1 儀器

PE350D型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(美國PerkinElmer公司)；BT 125D型十萬分之一電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；工業(yè)高純氬氣(南京天澤氣體有限責(zé)任公司)。

1.2 試劑

Pb、As、Cd、Cu、Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000 mg·L-1，國家有色金屬及電子材料分析測試中心，批號分別為GSB04-1742-2004、GSB04-1714-2004、GSB04-1721-2004、GSB04-1725-2004、GSB04-1729-2004)；內(nèi)標(biāo)溶液為鍺(72Ge)、銦(115In)、鉍(209Bi)，購自美國PerkinElmer公司，質(zhì)量濃度均為10 μg·mL-1；65%硝酸和過氧化氫(優(yōu)級純，德國Merck公司)；去離子水(電阻率≥18.2 MΩ·cm，25 ℃)，實驗室自制。

1.3 藥材

26批次金銀花藥材樣品分別采集于金銀花主產(chǎn)地山東省平邑縣、河南省封丘縣和河北省巨鹿縣金銀花種植基地，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)谷巍教授鑒定，均為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾，具體來源信息見表1，藥材樣本存放于蘇州市中醫(yī)醫(yī)院質(zhì)檢室。

表1 26批次金銀花樣品信息

2 方法

2.1 ICP-MS測定條件

ICP-MS的參數(shù)設(shè)定值分別為射頻功率：1200 W，碰撞氣流量：3 mL·min-1，霧化氣流量：0.85 L·min-1，冷卻氣流量：15 L·min-1，輔助氣流量：1.2 L·min-1，積分時間：1 s，延遲時間：40 s，采樣錐孔徑：1.1 mm，截取錐孔徑：0.9 mm，超級截取錐孔徑：1.0 mm，掃描模式為跳峰，重復(fù)3次[9]。測定時Cu、As以72Ge作為內(nèi)標(biāo)，Cd以115In作為內(nèi)標(biāo)，Hg、Pb以209Bi作為內(nèi)標(biāo)。

2.2 對照品及內(nèi)標(biāo)溶液的制備

按照《中國藥典》2020年版四部通則2321項下方法制備相應(yīng)溶液[9]。

2.2.1對照品儲備溶液的制備 分別精密量取Pb、Cd、As、Hg、Cu單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用10%硝酸溶液稀釋制成Pb、Cd、As、Hg、Cu質(zhì)量濃度分別為1.0、0.5、1.0、1.0、10.0 μg·mL-1的溶液，即得。

2.2.2對照品溶液的制備 精密量取Pb、Cd、As、Hg、Cu對照品儲備液適量，用10%硝酸溶液稀釋制成Pb、As質(zhì)量濃度為0、1、5、10、20 ng·mL-1，Cd質(zhì)量濃度為0、0.5、2.5、5.0、10.0 ng·mL-1，Cu質(zhì)量濃度為0、50、100、200、500 ng·mL-1的系列混合溶液。另精密量取Hg對照品儲備液適量，用10%硝酸溶液稀釋制成質(zhì)量濃度分別為0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 ng·mL-1的溶液(現(xiàn)用現(xiàn)配)。

2.2.3內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密量取72Ge、115In、209Bi單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用水稀釋制成質(zhì)量濃度分別為1 μg·mL-1的混合溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取各樣品粉末(過四號篩)0.200 g，置50 mL 聚四氟乙烯消解罐中，加入5.0 mL濃硝酸，室溫下放置過夜(12 h)，再加入2.0 mL H2O2，待反應(yīng)緩和加蓋，消解(程序：5 min升溫至100 ℃，保持5 min；5 min升溫至130 ℃，保持5 min；5 min升溫至160 ℃，保持5 min；10 min升溫至190 ℃，保持20 min)；冷卻后轉(zhuǎn)入50 mL聚四氟乙烯量瓶中，用超純水定容，即得待測溶液[10]。以等量濃硝酸和過氧化氫作空白對照。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢測限 標(biāo)準(zhǔn)曲線以對照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，對照品分析峰響應(yīng)值與內(nèi)標(biāo)元素參比峰響應(yīng)值比值為縱坐標(biāo)(Y)繪制，按2.1項下測定條件，連續(xù)檢測11份空白樣品溶液，以響應(yīng)值的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差所對應(yīng)的質(zhì)量濃度為該元素的檢測限，見表2。

表2 線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢測限

2.4.2精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及加樣回收率考察 根據(jù)林麗等[11]方法學(xué)考察辦法，分別取內(nèi)標(biāo)溶液和金銀花供試品溶液，按2.1項下條件考察方法的重復(fù)性，結(jié)果顯示，每種元素每個項目的RSD均小于10%，且各元素的回收率均在80%～120%。

3 結(jié)果與分析

26批金銀花樣品中5種重金屬元素含量測定結(jié)果見表3和圖1。由表3可知，取自山東、河北和河南的26批金銀花樣品中Pb、Cd、As、Hg、Cu質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.176～4.059、0.037～0.238、0.076～0.471、0.003～0.068、6.154～10.192 mg·kg-1。所有樣品的重金屬元素含量均符合《中國藥典》2020年版規(guī)定和《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》。

表3 26批金銀花樣品中5種重金屬元素含量測定結(jié)果(n=3) mg·kg-1

圖1 不同產(chǎn)區(qū)及河南產(chǎn)不同茬次金銀花樣品中5種重金屬含量

由圖1可知，3個產(chǎn)地金銀花樣品中，Pb含量以河南產(chǎn)最低，山東和河北產(chǎn)含量相近；Cd、As和Hg含量3個產(chǎn)地樣品基本相近；Cu含量以山東產(chǎn)樣品最低，河南產(chǎn)樣品最高，但3個產(chǎn)地間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。河南產(chǎn)4個茬次的金銀花樣品中，頭茬花Pb含量最高，其余3個茬次相近；頭茬花Cu含量最低，其余3個茬次相近；Cd、As和Hg含量4個茬次相近。

4 結(jié)論與討論

ICP-MS技術(shù)為《中國藥典》2020年版規(guī)定的測定中藥材中重金屬及有害元素含量的技術(shù)之一，與傳統(tǒng)技術(shù)相比，其具有靈敏度、精密度和分析效率均較高的優(yōu)點，被廣泛用于中藥材重金屬及有害元素含量的測定[11-16]。因此，本研究選用ICP-MS技術(shù)測定比較三大主產(chǎn)地金銀花藥材的重金屬含量。結(jié)果顯示，山東、河南和河北三大主產(chǎn)地26個金銀花樣品的Pb、Cd、Hg、As、Cu含量均未超過《中國藥典》2020年版及《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》的規(guī)定，尤其是Hg、As和Cu的含量均遠(yuǎn)低于國家限量標(biāo)準(zhǔn)。不同產(chǎn)地、不同茬次的金銀花樣品Pb和Cu的含量存在不同程度的差異，而Cd、Hg和As的含量在產(chǎn)地和采收茬次間均未體現(xiàn)差異。土壤和水質(zhì)重金屬污染是造成中藥材重金屬超標(biāo)的主要原因。趙連華等[3]統(tǒng)計了全國30個省、自治區(qū)、直轄市中藥材中5種重金屬的污染情況，結(jié)果顯示不同省份的中藥材重金屬超標(biāo)率差異較大。因此，在醫(yī)院飲片采購中一定要明確產(chǎn)地來源，做到可追溯，以確保臨床用藥安全。

蘇州地區(qū)，古稱“吳中”，地處東南卑濕之地，是瘟疫、溫病的屢發(fā)地區(qū)，以吳有性、葉天士等為代表的一批吳中名醫(yī)，在大量的臨床實踐基礎(chǔ)上，創(chuàng)立戾氣學(xué)說與溫病學(xué)說，形成了“吳門醫(yī)派”，在診治急性傳染病、危重感染性疾病方面頗具特色。以金銀花為主藥的“抗病毒顆?！笔怯蓞情T醫(yī)派的代表方開發(fā)制成的，為蘇州市中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，臨床應(yīng)用廣泛，在本次蘇州地區(qū)新型冠狀病毒肺炎的預(yù)防與治療中發(fā)揮了重要的作用。本研究在前期比較三大主產(chǎn)區(qū)金銀花有效成分含量的基礎(chǔ)上[7]，對金銀花重金屬含量進(jìn)行測定與比較，提高了臨床用藥的安全性，為金銀花的優(yōu)質(zhì)優(yōu)價采購提供了數(shù)據(jù)參考。