全外顯子組測(cè)序技術(shù)在結(jié)直腸癌研究中的應(yīng)用進(jìn)展

謝承霖，沈鑫，李占武

（大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院 普通外科，遼寧 大連 116001）

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是最常見的消化道惡性腫瘤之一[1]。在中國CRC是目前僅有的發(fā)病率仍在上升的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，且年輕化趨勢(shì)日益明顯[2-3]，不少患者在初次診斷時(shí)已屬晚期，5年生存率偏低[4-6]。目前治療是以手術(shù)切除為主，同時(shí)輔以放化療。近年治療模式已經(jīng)從傳統(tǒng)的基于“群體化”診治進(jìn)入了精準(zhǔn)的“個(gè)體化”醫(yī)療。而精準(zhǔn)醫(yī)療是通過基因組檢測(cè)尋找疾病的原因和治療的靶點(diǎn)，借助癌癥基因組測(cè)序和信息分析，最終形成對(duì)癌癥分子標(biāo)記物篩選、精準(zhǔn)診斷分型及精準(zhǔn)治療。全外顯子組測(cè)序（whole exome sequencing，WES）是一項(xiàng)新的基因測(cè)序技術(shù)，在人類復(fù)雜疾病領(lǐng)域中逐漸被廣泛應(yīng)用。本文就WES技術(shù)以及其在CRC發(fā)病機(jī)制、治療、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、以及預(yù)后判斷方面的研究應(yīng)用進(jìn)行綜述，以期為CRC的靶向治療、基因治療、免疫治療和化療等方面提供更加精準(zhǔn)化的指導(dǎo)。

1 WES 技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)狀

全外顯子組（whole exome）是基因組中所有外顯子區(qū)域的總和，僅含約1.8×105個(gè)外顯子，總長30 Mb，作為蛋白質(zhì)的編碼區(qū)，其是DNA中更具研究潛力的功能序列[7-8]，與全基因組測(cè)序（whole genome sequencing，WGS）需對(duì)整個(gè)基因組的所有堿基進(jìn)行測(cè)序不同。WES 是指針對(duì)基因外顯子區(qū)域即編碼區(qū)進(jìn)行的測(cè)序，大部分基因突變相關(guān)疾病的基因位于編碼區(qū)，相對(duì)全基因組測(cè)序，外顯子測(cè)序技術(shù)專門針對(duì)基因編碼區(qū)進(jìn)行測(cè)序，因其穩(wěn)定性與經(jīng)濟(jì)實(shí)用性被廣泛應(yīng)用于臨床基因相關(guān)疾病的診斷。愛丁堡大學(xué)的學(xué)者們[9]通過對(duì)41例智力發(fā)育障礙和不明原因代謝異常的先證者進(jìn)行WES，發(fā)現(xiàn)了11個(gè)與神經(jīng)代謝疾病相關(guān)的候選基因。近期Rees等[10]利用WES發(fā)現(xiàn)了一類能增加精神分裂癥患病風(fēng)險(xiǎn)的新變異體，也體現(xiàn)了其在探索復(fù)雜疾病易感基因方面的關(guān)鍵作用。目前WES在多種惡性腫瘤方面的研究也逐漸開展。比如學(xué)者[11-13]利用WES探究胃癌的克隆起源、致癌機(jī)制及免疫治療效果等多個(gè)方面。又比如研究人員[14-16]將WES應(yīng)用于肝癌來研究其發(fā)病機(jī)理、診斷篩查及預(yù)后生存。新加坡的學(xué)者[17]利用WES來分析了亞洲EGFR突變型肺腺癌的基因組結(jié)構(gòu)。美國的學(xué) 者[18]將WES運(yùn)用于三陰性乳腺癌小鼠模型，確定了一系列由原癌基因擴(kuò)增和融合驅(qū)動(dòng)的體細(xì)胞遺傳學(xué)改變。Wang等[19]則通過WES揭示了肝細(xì)胞膽管癌的起源和轉(zhuǎn)化。這些研究常通過尋找潛在的原癌基因和抑癌基因來探究未曾報(bào)導(dǎo)的突變，完成更精確的基因分型協(xié)助診斷，以期尋找新的治療靶點(diǎn)，或者嘗試闡明侵襲性、轉(zhuǎn)移機(jī)制用于預(yù)后判斷及精準(zhǔn)個(gè)性化治療。

2 WES 技術(shù)在CRC 中的應(yīng)用

2.1 腫瘤異質(zhì)性及克隆起源方面

腫瘤異質(zhì)性分為腫瘤間異質(zhì)性和腫瘤內(nèi)異質(zhì)性（intratumor heterogeneity，ITH），以往關(guān)于CRC腫瘤異質(zhì)性的研究較少。Liu等[20]對(duì)2例相同分子亞型的直腸癌患者進(jìn)行WES，并在多區(qū)域和單細(xì)胞水平上對(duì)其突變譜和體細(xì)胞拷貝數(shù)目變異（somatic copy number variations，SCNV）進(jìn)行分析，2 例患者表現(xiàn)出不同程度的基因異質(zhì)性，單細(xì)胞水平分析顯示腫瘤內(nèi)異質(zhì)性更顯著，說明同一直腸腫瘤中也有很多不同的基因型和細(xì)胞亞群。之后日本學(xué)者Saito等[21]對(duì)包括腺瘤和原位癌在內(nèi)的10例早期CRC腫瘤進(jìn)行了多區(qū)域WES，通過與進(jìn)展期CRC腫瘤測(cè)序數(shù)據(jù)的比較，發(fā)現(xiàn)早期腫瘤積累的亞克隆驅(qū)動(dòng)突變率高于晚期腫瘤，其中KRAS和APC的亞克隆突變尤其明顯。此外，變異等位基因頻率在早期腫瘤中較高，表明亞克隆突變?cè)谀[瘤發(fā)生早期被選擇性清除，而中性進(jìn)化在晚期腫瘤中占主導(dǎo)地位。近年Sato等[22]在構(gòu)建腫瘤動(dòng)物模型后，將其與多區(qū)域WES相結(jié)合，以此來分析CRC的ITH及克隆動(dòng)力學(xué)機(jī)理，發(fā)現(xiàn)CRC的亞克隆結(jié)構(gòu)在動(dòng)物體內(nèi)連續(xù)傳代時(shí)會(huì)發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，環(huán)境選擇性壓力能促進(jìn)次級(jí)亞克隆的擴(kuò)張。上述研究以CRC腫瘤異質(zhì)性為切入點(diǎn)，靈活運(yùn)用多種組合形式的WES技術(shù)，展現(xiàn)出WES不僅可用于發(fā)掘CRC基因分型指標(biāo)，還具有探究克隆起源方面的應(yīng)用潛力。

2.2 散發(fā)性CRC（sporadic colorectal cancer，SCRC）中微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（microsatellite instability，MSI）及染色體不穩(wěn)定性（chromosome instability，CIN）

約15%的SCRC在微衛(wèi)星序列上存在廣泛變異，稱為MSI，是由于錯(cuò)配修復(fù)缺陷（deficient mismatch repair，dMMR）導(dǎo)致單核苷酸水平突變率增加所致，其不僅存在于SCRC，也存在于林奇綜合征（Lynch syndrome，LS）以及其他癌癥中。早期關(guān)于SCRC的研究多是通過WES構(gòu)建MSI的基因組圖譜[23]，而近年Jonchere等[24]開展了一項(xiàng)對(duì)47例MSI-CRC進(jìn)行WES的研究，并在另外53例MSI-CRC獨(dú)立隊(duì)列中進(jìn)行驗(yàn)證測(cè)序，來完成對(duì)CRC的MSI相關(guān)基因突變正、負(fù)選擇驅(qū)動(dòng)因子的鑒定，從而闡明其對(duì)后續(xù)致癌作用及抑癌作用的影響。結(jié)果表明MSI-CRC基因的不穩(wěn)定性在腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化中起著雙重作用，即促進(jìn)致癌作用的同時(shí)抵消抑癌作用，進(jìn)而導(dǎo)致患者預(yù)后更差。另外約85%的SCRC為微衛(wèi)星穩(wěn)定性（microsatellite stability，MSS），表現(xiàn)為CIN，由于染色體片段易位、重排和丟失，產(chǎn)生異倍體細(xì)胞。為探究散發(fā)性CRC中CIN的遺傳原因，同年梅奧醫(yī)學(xué)中心的Druliner等[25]利用WES對(duì)15例錯(cuò)配修復(fù)高效型（proficient mismatch repair，pMMR）患者和24例dMMR患者的外周血、正常結(jié)腸上皮細(xì)胞及腫瘤組織中的雜合缺失情況和SCNV進(jìn)行分析，結(jié)果表明染色體18q上的變異與SCRC的早期發(fā)生相關(guān)，這可作為SCRC檢測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的有效臨床指標(biāo)。

2.3 結(jié)直腸腺瘤及其發(fā)生發(fā)展過程

Wu等[26]應(yīng)用單細(xì)胞全外顯子組測(cè)序（singlecell whole-exome sequencing，scWES）和WES對(duì)2例CRC患者的腫瘤組織和腺瘤性息肉進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸腺瘤和CRC都是單克隆起源的，但CRC能通過GPCR、PI3K-Akt和FGFR信號(hào)通路積累異質(zhì)性突變，從而進(jìn)一步分化成不同的亞克隆。這種scWES與WES聯(lián)合分析的方法幫助識(shí)別出主要的癌癥亞克隆，這種亞克隆將成為定義癌癥的關(guān)鍵特征，而隨著測(cè)序成本的降低，對(duì)癌癥亞克隆進(jìn)行全面分類的大規(guī)模分析也將實(shí)現(xiàn)。之后一項(xiàng)來自安德森癌癥中心的研究，利用149例腺瘤標(biāo)本及配對(duì)外周血進(jìn)行WES和靶向測(cè)序，獲得了20個(gè)新的驅(qū)動(dòng)基因突變，可作為指導(dǎo)CRC早期診斷和預(yù)防新的靶點(diǎn)[27]。不久泰國一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，將5例CRC和6例結(jié)直腸腺瘤分成兩組進(jìn)行WES分析，結(jié)果提示APC和TP53可作為結(jié)直腸腺瘤和早期CRC的篩查指標(biāo)，有利于鑒別這兩類患者，從而制定預(yù)防和監(jiān)測(cè)策略，以降低CRC的發(fā)病率[28]。而另一項(xiàng)研究，對(duì)來自美國18組結(jié)腸癌、結(jié)腸腺瘤和結(jié)腸正常組織的WES數(shù)據(jù)進(jìn)行基因突變率評(píng)估，不僅證實(shí)了以往研究發(fā)現(xiàn)的候選基因，還成功將結(jié)腸癌發(fā)生過程中不同階段的潛在驅(qū)動(dòng)基因進(jìn)行分類，這有利于剖析腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的相關(guān)途徑[29]。

2.4 遺傳性CRC 方面

LS是最常見的遺傳性CRC，也是最近WES在遺傳性CRC研究中的熱點(diǎn)[30-34]。Liu等[35]利用WES比較LS與散發(fā)性dMMR腫瘤之間的異質(zhì)性，發(fā)現(xiàn)LS比散發(fā)性dMMR患者生存預(yù)后好的關(guān)鍵在于其具有更多的體細(xì)胞突變及腫瘤抗原，從而導(dǎo)致更強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。而另一項(xiàng)研究[36]通過對(duì)134例 LS患者進(jìn)行大規(guī)模的WES檢測(cè)分析后，發(fā)現(xiàn)了一類能導(dǎo)致LS提早發(fā)展為CRC的基因修飾物。近期Golubicki等[37]通過對(duì)15例早發(fā)性CRC的LS患者進(jìn)行WES并分析他們的腫瘤突變負(fù)荷（tumor mutation burden，TMB）及突變特征，發(fā)現(xiàn)了 一組與DNA修復(fù)及早發(fā)性相關(guān)的易感候選基因。

家族性腺瘤性息肉病（familial adenomatous polyposis，F(xiàn)AP）主要由APC基因突變引起。Borras等[38]應(yīng)用WES分析了12例家族性腺瘤性息肉病患者的25例腺瘤及其鄰近黏膜組織的突變譜和SCNV，并用SNP陣列對(duì)等位基因進(jìn)行了驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)反復(fù)突變的基因都與WNT途徑有關(guān)，證實(shí)APC突變可促進(jìn)腺瘤早期生長。另外一項(xiàng)研究[39]對(duì)6例FAP患者和1例MUTYH相關(guān)性息肉病患者進(jìn)行WES、WGS和單細(xì)胞RNA測(cè)序，全面探索腺癌發(fā)生過程中基因組的改變、克隆結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄組動(dòng)態(tài)變化，結(jié)果顯示，來自同一FAP患者的癌旁病變可起源于同一腫瘤細(xì)胞，這項(xiàng)研究準(zhǔn)確描繪了一個(gè)遺傳性CRC發(fā)生發(fā)展，尤其是從腺瘤到癌轉(zhuǎn)變過程中的基因組和轉(zhuǎn)錄組景象。

2.5 長期炎癥相關(guān)性CRC 方面

WES等測(cè)序技術(shù)的發(fā)展及癌癥分子遺傳學(xué)進(jìn)步使得許多腫瘤類型基因圖譜得到完善，從早期單個(gè)基因測(cè)序來進(jìn)行突變分析到如今成對(duì)組織的WES，越來越多的證據(jù)顯示炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD）相關(guān)CRC與SCRC之間的遺傳異質(zhì)性。美國學(xué)者[40]通過對(duì)31例同時(shí)患有IBD的CRC病例，包括15例潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）、14例克羅恩病、2 例不確定結(jié)腸炎的腫瘤組織和非腫瘤組織進(jìn)行WES分析，并與SCRC常見高頻突變基因?qū)Ρ?。發(fā)現(xiàn)慢性炎癥導(dǎo)致的CRC中存在有與SCRC明顯差異的遺傳特征，其可作為疾病特異性標(biāo)志物，用于IBD和CRC患者的診斷和治療。之后Yan等[41]通過對(duì)10例UC相關(guān)的CRC患者的腫瘤組織和鄰近的穩(wěn)定黏膜組織進(jìn)行全外顯子組測(cè)序，鑒定出25個(gè)有害突變，將癌癥基因組圖譜（The Cancer Genome Atlas，TCGA）作為SCRC對(duì)照，發(fā)現(xiàn)其中11個(gè)突變?cè)赨C相關(guān)的CRC與SCRC之間存在顯著差異。對(duì)主要突變基因進(jìn)行薈萃分析，顯示UC相關(guān)CRC中NF-кB途徑和表觀遺傳調(diào)控因子如KMT2D和NCOA6的突變比SCRC更常見，這項(xiàng)研究首次向我們展現(xiàn)了結(jié)腸炎相關(guān)癌在中國人群中的表觀遺傳病理機(jī)制，還揭示了UC相關(guān)CRC與SCRC，甚至與克羅恩病相關(guān)CRC之間不同的突變特征。

2.6 在放、化療及免疫治療方面

在基因組引導(dǎo)的個(gè)體化癌癥治療時(shí)代，還可以利用測(cè)序技術(shù)了解化療誘導(dǎo)的腫瘤基因組變化的情況。FOLFOX是一種在全球范圍內(nèi)被廣泛使用于III、IV期經(jīng)手術(shù)切除后CRC的標(biāo)準(zhǔn)輔助化療方案，近年一項(xiàng)對(duì)4例原發(fā)性CRC腫瘤、未經(jīng)治療的轉(zhuǎn)移性腫瘤及FOLFOX輔助化療后復(fù)發(fā)腫瘤共三類標(biāo)本進(jìn)行WES的研究[42]，結(jié)果顯示無論是否接受過FOLFOX治療，三類標(biāo)本突變率、突變譜和拷貝數(shù)變異幾乎相同，這些發(fā)現(xiàn)可能會(huì)作為更大規(guī)模測(cè)序研究的先導(dǎo)數(shù)據(jù)，幫助闡明FOLFOX輔助化療引起的突變景觀變化。術(shù)前新輔助放化療（neoadjuvant chemoradiotherapy，nCRT）是治療中低位局部進(jìn)展期直腸癌（locally advanced rectal cancer，LARC）的金標(biāo)準(zhǔn)[43]，Bettoni等[44]也利用WES進(jìn)行了一項(xiàng)探索性研究，首先對(duì)79例來自TCGA的CRC的測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并在后期通過WES檢驗(yàn)nCRT的醫(yī)源性效應(yīng)及nCRT對(duì)ITH的影響，結(jié)論證實(shí)nCRT可使腫瘤內(nèi)異質(zhì)性增加，并可能導(dǎo)致殘余腫瘤中耐藥細(xì)胞數(shù)增多。

PD-1抑制劑已成為治療CRC的有效靶向治療藥物[45]，目前PD-1抑制劑多用于dMMR轉(zhuǎn)移性CRC的治療。早期Le等[46]對(duì)41例屬于dMMR的晚期轉(zhuǎn)移癌患者進(jìn)行WES分析，結(jié)果提示錯(cuò)配修復(fù)狀態(tài)可用于預(yù)測(cè)帕博利珠單抗（pembrolizumab）阻斷免疫檢查點(diǎn)的效果及臨床療效，即dMMR型CRC比錯(cuò)配修復(fù)高效型（proficient mismatch repair，pMMR）CRC對(duì)PD-1抑制劑的效果更敏感。納武單抗（nivolumab）已被用作部分dMMR型LARC患者的新輔助治療方案，一項(xiàng)對(duì)2例免疫治療后臨床完全緩解的患者進(jìn)行WES及多重免疫熒光分析的研究，WES結(jié)果顯示患者腫瘤細(xì)胞內(nèi)存在較高TMB，多重免疫熒光分析顯示治療前后免疫微環(huán)境發(fā)生變化，說明免疫治療可能成為dMMR直腸癌新輔助治療的另一種替代方案[47]。近年一項(xiàng)涉及 1 000多例中國癌癥患者的大樣本研究[48]選用WES作為測(cè)序手段，對(duì)這些患者的腫瘤及血液標(biāo)本中包括TMB、錯(cuò)配修復(fù)狀態(tài)、MSI和PD-L1擴(kuò)增情況進(jìn)行分析后，揭示了這些生物標(biāo)志物在CRC等不同癌癥中頻率及分布，結(jié)果提示TMB升高與CRC中的dMMR顯著相關(guān)，這項(xiàng)研究對(duì)我國癌癥患者使用PD-1/PD-L1阻滯劑也有潛在的指導(dǎo)意義。

2.7 在CRC 轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方面

利用WES了解CRC轉(zhuǎn)移過程中表型演變的分子學(xué)遺傳機(jī)制，對(duì)于降低CRC的轉(zhuǎn)移率和病死率至關(guān)重要。肝轉(zhuǎn)移是CRC最為常見的轉(zhuǎn)移，一項(xiàng)關(guān)于CRC肝轉(zhuǎn)移中體細(xì)胞突變及途徑的研究，通過收集8例CRC肝轉(zhuǎn)移患者的原發(fā)腫瘤組織和血樣進(jìn)行WES檢測(cè)基因組變異，再對(duì)腫瘤突變負(fù)荷差異、信號(hào)傳導(dǎo)途徑等進(jìn)行綜合分析，結(jié)果顯示突變頻率最高的前三位基因是TP53、APC和KRAS，這有助于我們了解CRC肝轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因范圍及調(diào)控通路途徑[49]。Kim等[50]先建立3對(duì)原發(fā)性CRC和相應(yīng)的腹膜轉(zhuǎn)移細(xì)胞系，再利用WES檢測(cè)腹膜轉(zhuǎn)移瘤中特殊基因的表達(dá)及異常信號(hào)通路，發(fā)現(xiàn)CYP2A7基因突變只在腹膜轉(zhuǎn)移細(xì)胞系中存在，腹膜轉(zhuǎn)移細(xì)胞中CNN3的表達(dá)在mRNA和蛋白水平上均顯著增強(qiáng)，提示這兩種基因的檢測(cè)和分布可為預(yù)測(cè)原發(fā)性CRC腹膜種植轉(zhuǎn)移提供線索。Sun等[51]對(duì)19組匹配的腦轉(zhuǎn)移瘤（brain metastases，BM）、原發(fā)性CRC和鄰近正常組織的WES和WGS數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)與原發(fā)性CRC相比，轉(zhuǎn)移瘤表現(xiàn)出同源重組缺陷（homologous recombination deficiency，HRD）和dMMR的高突變特征。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，2個(gè)DNA損傷反應(yīng)（DNA damage response，DDR）信號(hào)可能早期出現(xiàn)，并在轉(zhuǎn)移瘤組織中增強(qiáng)，但最終在原發(fā)性CRC組織中消失。同時(shí)還鑒定出了一些BM相關(guān)高頻特異突變，這為從基因?qū)用嫣骄緾RC腦轉(zhuǎn)移提供參考。初始轉(zhuǎn)移細(xì)胞群體大小是轉(zhuǎn)移動(dòng)力學(xué)最重要的參數(shù)之一，為了研究CRC轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞群體的起源，近期日本的研究人員對(duì)原發(fā)CRC腫瘤及轉(zhuǎn)移瘤進(jìn)行成對(duì)WES,并開發(fā)了一種可量化初始轉(zhuǎn)移細(xì)胞群體大小的方法，并將此方法應(yīng)用于4例CRC患者，結(jié)果顯示每例患者的初始轉(zhuǎn)移細(xì)胞群體數(shù)量范圍從3～17個(gè)不等，所有樣本均支持原發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移是多細(xì)胞起源的觀點(diǎn)，表明在同一個(gè)體中，原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移腫瘤之間遺傳相似性存在顯著差異[52]。

2.8 在CRC 預(yù)后評(píng)估方面

Yu等[53]先應(yīng)用WES對(duì)22例CRC患者腫瘤組織進(jìn)行測(cè)序，然后再對(duì)另外160例患者使用靶向捕獲測(cè)序驗(yàn)證復(fù)發(fā)相關(guān)的通路和基因，最終發(fā)現(xiàn)3個(gè)突變基因及1個(gè)可用于評(píng)估CRC預(yù)后情況的突變標(biāo)志物，而此標(biāo)志物可獨(dú)立于TNM分期。Sho等[54]從腫瘤基因組圖譜中獲取207例II/III期CRC患者的WES資料并進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)了5 個(gè)與預(yù)后相關(guān)的基因（APAF1、DIAPH2、NTNG1、USP7和VAV2），而這些基因經(jīng)過數(shù)據(jù)分析及整合可構(gòu)成一個(gè)用于評(píng)估預(yù)后的突變模板。Shia等[55]為了探究腫瘤形態(tài)學(xué)及基因組突變特征之間的相關(guān)性，利用腫瘤基因組圖譜中270例CRC的WES數(shù)據(jù)，得出與免疫檢查點(diǎn)基因變異相關(guān)的形態(tài)學(xué)模式，此模式可用于CRC免疫檢查點(diǎn)臨床試驗(yàn)患者的篩選。一項(xiàng)以中國人群中50例直腸癌患者進(jìn)行WES 的研究[56]，結(jié)果檢測(cè)到1個(gè)新的基因PCDHB 3，其突變頻率較高，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)PCDHB3是一種通過抑制NF-κB通路的抑癌基因，其表達(dá)和定位可作為評(píng)估CRC晚期預(yù)后的指標(biāo)。另外一項(xiàng)對(duì)63例中國CRC患者進(jìn)行WES分析的研究[57]中發(fā)現(xiàn)，CRC驅(qū)動(dòng)基因FCGBP和NBPF1的缺失可促進(jìn)CRC的進(jìn)展，并導(dǎo)致患者生存率降低，認(rèn)為其可作為中國人群中新的CRC相關(guān)調(diào)控因子及用于預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物。

3 展 望

WES技術(shù)的發(fā)展使得在分子水平上對(duì)腫瘤進(jìn)行更準(zhǔn)確的研究成為可能，外顯子獲得的分子譜數(shù)據(jù)促進(jìn)了對(duì)腫瘤基因突變、染色體變異、轉(zhuǎn)錄改變及表觀遺傳紊亂的了解，增加了對(duì)腫瘤潛在驅(qū)動(dòng)變異的識(shí)別。在CRC方面的研究，如發(fā)現(xiàn)腫瘤的體細(xì)胞突變，找尋新的易感基因，比較分析基因異質(zhì)性，有助于在分子生物學(xué)層面闡明發(fā)病機(jī)理，又可作為診斷篩查的標(biāo)志物或者判斷預(yù)后以及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的參考指標(biāo)，從而在整體層面提高生存率,同時(shí)為局部晚期或者部分類型轉(zhuǎn)移患者創(chuàng)造更多備選治療方案。隨著測(cè)序技術(shù)的進(jìn)一步完善，通過該研究策略對(duì)CRC進(jìn)行基因水平的診斷、分型，確定治療靶點(diǎn)及預(yù)后判斷等，將成為CRC分子生物學(xué)及精準(zhǔn)個(gè)體化治療的有效手段。